核呼吸因子-1在正常发育和视觉剥夺大鼠视皮层内的表达

目的:观察核呼吸因子-1(NRF-1)在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的表达.方法:构建视觉剥夺大鼠模型,利用半定量:PCR、Western blot及免疫组织化学的方法检测NRF-1在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的差异表达.结果:通过以上方法均可检测到视觉剥夺大鼠视皮层内NRF-1表达明显降低.结论:NRF-1的基因转录及蛋白表达水平依赖于正常视觉信号的刺激,异常的视觉经验使视皮层神经元兴奋性降低,造成NRF-1表达的明显下调.     

蛋白激酶α和β在视觉剥夺性大鼠视皮层中表达变化的初步研究

目的　检测蛋白激酶α和 β(PKCα、PKCβ)在正常大鼠视皮层及视觉剥夺性视皮层中的蛋白表达情况 ,为探讨视觉发育可塑性提供分子基础。方法　采用剥夺性弱视大鼠模型 ,用特异的PKCα和PKCβ抗体对脑切片进行免疫组化。 结果　正常视皮层中 ,这两种PKC同工酶在除Ⅰ层外的其余各层均有显著表达。视觉剥夺的视皮层缺乏正常视皮层那样的清晰分层。与正常视皮层比较 ,弱视眼对侧视皮层中PKCα在Ⅱ～Ⅳ层的蛋白表达广泛减少 ,PKCβ在Ⅱ～Ⅴ层的表达强度明显减弱。结论　PKCα、PKCβ的蛋白表达水平在剥夺性视皮层发育障碍过程中发生了显著改变 ,它们可能参与视皮层发育可塑性的分子机制。     

细胞外信号调节激酶系统(ERKs)在正常发育和单眼剥夺大鼠视皮层蛋白表达的研究

为了研究正常发育和单眼视觉剥夺大鼠视皮层 ERK1/ ERK2基因蛋白质表达的变化 ,本研究建立了 SD大鼠单眼视觉剥夺模型 ,以多克隆抗 ERK1/ ERK2抗体和单克隆抗双磷酸化 ERK抗体检测出生后第 1、14、2 1、2 8、45 d和成年 (90 d)正常发育和单眼视觉剥夺 (14～ 45 d)视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达和活性改变。结果表明 ,出生后大鼠视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达逐渐增加 ,至 45 d达到高峰 ,此后下降至成年达稳定水平。磷酸化 ERK蛋白表达仅见于成年大鼠视皮层。单眼视觉剥夺导致ERK1/ ERK2蛋白表达减少。提示 ERK的蛋白表达依赖于正常的视觉输入信号的刺激 ,异常的视觉经验造成表达的明显下调 ,阻断正常的发育进程。说明 ERK1和 ERK2可能参与发育敏感期视皮层神经元可塑性的调节     

HIF-1α和HIF-2α在胃癌中的表达及意义

目的 探讨胃癌中低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α的表达及其临床意义。方法 用免疫组化SP法检测组织中HIF-1α、HIF-2α及VEGF的表达;用Western blot法检测组织中HIF-1α、HIF-2α的表达。结果 胃癌中HIF-1α、HIF-2α和VEGF的阳性表达率分别为61.5%、36.5%和61.5%,均显著高于正常对照组的11.1％、0和0;HIF-1α表达与VEGF及胃癌的淋巴结转移密切相关。胃癌组织中HIF-1α和HIF-2α蛋白的表达显著高于癌旁正常胃黏膜组织。结论 低氧诱导因子的表达可能在胃癌的发生、发展中具有重要作用。     

NF-κB 在TNF-α抗体治疗大鼠肝肺综合征中的作用

 目的：探讨 TNF-α单克隆抗体（TNF-αMcAb）对肝肺综合征（HPS）大鼠NF-κB表达的影响及NF-κB在TNF-α单克隆抗体治疗大鼠肝肺综合症中的作用。方法: 采用胆总管结扎（CBDL）建立大鼠HPS模型,通过腹腔注射抗TNF-αMcAb（0.1mg/kg.2d）治疗HPS,观察肺组织病理变化;检测血浆TNF-α、内毒素水平及肺组织NF-κB蛋白表达;进行血气分析,计算肺泡-动脉氧分压梯度差;结果：TNF-αMcAb干预后肺组织的炎症和毛细血管扩张明显减轻,肺泡-动脉氧分压梯度差明显减少（P<0.05）,血浆内毒素、TNF-α的水平较胆总管结扎组明显减低（P<0.05）。肺组织NF-κB 蛋白表达水平显著下降（P<0.05）。 结论： TNF-α单克隆抗体可部分改善大鼠肝肺综合征的严重程度并抑制NF-κB的表达,TNF-α单克隆抗体可能通过抑制NF-κB的表达治疗肝肺综合症。     

cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在单眼剥夺弱视大鼠视皮层中的表达研究

目前已对突触可塑性的基本特性有了相当程度的认识 ,但对其发育中神经元可塑性的内在分子机制尚待进一步阐明。不少研究提示 ,c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)在学习、记忆和长时程增强 ( LTP)过程中参与长时程突触的可塑性调节 ,推测其在视觉系统可塑性中也发挥着重要作用。本研究通过建立幼年大鼠单眼剥夺弱视模型 ,应用免疫组织化学方法 ,对视觉发育关键期末 ( P45 )大鼠和成年 ( P90 )大鼠视皮层中 CREB和 p CREB的免疫反应性进行观察、比较和分析。结果 :视觉发育关键期内进行单眼视觉剥夺对大鼠视皮层内总 CREB的蛋白表达没有产生显著影响 ,而 p CREB在 P45大鼠的剥夺眼对侧视皮层单眼反应区的 / 、 层中的蛋白表达较剥夺眼同侧视皮层的相应区域弱 ,该差异在该年龄大鼠的双眼反应区及成年后大鼠视皮层内不存在。结论 :CREB可能通过该磷酸化形式在视觉系统可塑性中发挥作用     

HIF-1α和MMP-2在大鼠脑出血灶周脑组织中的表达

目的：通过动态观察脑出血灶周脑组织中缺氧诱导因子(HIF)-1α和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达,探讨HIF-1α和MMP-2表达之间的联系。方法：50只SD大鼠随机分成假手术组和脑出血模型组,分别于术后6 h,24 h,72 h,7 d,21 d处死大鼠。RT-PCR方法检测脑出血灶周组织HIF-1α和MMP-2 mRNA的表达及免疫组织化学方法检测HIF-1α和MMP-2蛋白的表达,并对HIF-1α和MMP-2的表达进行相关分析。结果：模型组术后灶周组织出现HIF-1α, MMP-2 mRNA表达上调和大量黄色的HIF-1α,MMP-2蛋白阳性细胞,于24~72 h达高峰。HIF-1α mRNA及其蛋白表达分别与MMP-2 mRNA及其蛋白表达呈正相关(分别r=0.588, P=0.002; r=0.765, P＜0.001)。结论：脑出血灶周脑组织中HIF-1α和MMP-2的表达上调,且HIF-1α可能调控MMP-2的表达。     

筋脉通胶囊通过增强背根神经节Nrf2和HO-1的表达改善糖尿病大鼠的周围神经痛简

 目的观察中药筋脉通胶囊对链尿佐菌素（STZ）诱导的糖尿病（DM）大鼠背根神经节（DRG）的核因子E2相关因子2（Nrf2）和血红素加氧酶-1（HO-1）的表达以及血浆一氧化碳（CO）含量的影响。 方法腹腔内注射STZ诱导建立DM大鼠模型,随机分为模型组、筋脉通小、中和大剂量组及硫辛酸组,并设对照组。成模后每天1次灌胃给药,持续12周。电子Von Frey仪检测机械痛阈值,免疫组化法及Rt-PCR检测DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达,并检测血浆一氧化碳血红蛋白（COHb）含量。 结果与对照组相比,糖尿病大鼠的机械痛阈值、血浆COHb含量以及DRG的Nrf2和HO-1蛋白及mRNA表达水平均明显下降（P＜0.01）;各治疗组的上述指标均显著回升（P＜0.01或P＜0.05）。在提高DRG的HO-1蛋白表达上,筋脉通中剂量组疗效显著优于硫辛酸组（P＜0.05）。 结论筋脉通胶囊可通过增强DRG的Nrf2、HO-1和CO表达来改善糖尿病大鼠的周围神经痛。     

IFN-γ对流产大鼠视上核、弓状核、室旁核TNF-α表达的影响

为了探讨γ-干扰素(IFN-γ)对流产大鼠视上核(SON)、弓状核(AN)、室旁核(PVN)内肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,将20只孕SD大鼠随机分为A、B、C、D组。A组为对照组;B组为流产模型组;C、D组分别为流产模型+1IU/gIFN-γ组和流产模型+10IU/gIFN-γ组。妊娠13d灌注取材,并观察妊娠结局;采用免疫组化SP法对每组SON、AN、PVN中TNF-α的表达进行检测。结果显示:B、C、D组三个核团内TNF-α免疫阳性产物的灰度值均较A组降低,而阳性细胞数均较A组增高;C组SON、AN内TNF-α的阳性灰度值均高于B组,而SON、AN、PVN阳性细胞数均低于B组;D组TNF-α免疫阳性产物的灰度值均较B、C组低,阳性细胞数均较B、C组高;C组平均胚胎数较B、D组显著增高。以上结果表明IU/gIFN-γ对妊娠有利,这种作用可能与其参与SON、AN和PVN中TNF-α表达的调节有关。     

α-突触核蛋白与Nurr1相互作用增强致小鼠小胶质细胞系肿瘤坏死因子α表达增多

 目的 在BV2细胞中,探讨?-突触核蛋白( ?-Syn)与Nurr1之间是否存在相互作用及其对肿瘤坏死因子?( TNF-?)分泌的影响。方法 用蛋白质免疫共沉淀（Co-IP）和免疫组织化学染色观察?-Syn和Nurr1之间是否存在相互作用,用免疫组织化学和蛋白印迹观察Nurr1核转位,用酶联免疫技术（Elisa）检测TNF-?的释放量。结果 ?-Syn和Nurr1存在共定位,?-Syn和Nurr1可能存在相互作用。 过表达?-Syn时Nurr1的核转位减少,单独过表达?-syn使得TNF-?分泌增加;而同时过表达Nurr1可以明显抑制TNF-?产生。结论 ?-Syn可能通过与Nurr1相互作用从而减少其核转位,导致TNF-?产生增多,这可能是?-Syn介导胶质细胞活化引起炎症的机制之一。     

大鼠脑出血后V1αR和AQP4表达升高与脑水肿的形成相关

 目的 研究精氨酸加压素1α受体（V1αR）和水通道蛋白4（AQP4）在SD大鼠脑出血（ICH）脑组织中的表达变化及两者在脑水肿形成中的作用。方法 将自体血注入大鼠尾状核建立脑出血模型,分别于术后6、12、24和48h运用干湿重法、免疫荧光和Western blot检测脑含水量(BWC)、V1αR和AQP4蛋白的表达。结果 脑出血后6h,V1αR和AQP4的表达开始增加,至48h达到高峰分别为（21.88±0.44和23.16±0.67）,显著高于假手术组（14.32±0.55和13.90±0.40）。与脑含水量呈正相关（P＜0.05）。结论 V1aR介导的AQP4表达升高是脑出血后脑水肿形成的主要原因。     

基质细胞衍生因子-1α在皮质发育畸形大鼠海马中的表达

目的 了解基质细胞衍生因子-1α(SDF-1α)在皮质发育畸形(MCD)大鼠海马中的表达,探讨其在皮质发育畸形异常局部神经回路中的作用.方法 通过腹部X射线照射孕16dSD大鼠构建子代MCD模型,对30、60d对照组与实验组子鼠(P30、P60)行HE、Timm染色以检测其组织学改变,免疫组化、RT-PCR及Weste...     

TNF-α在热疗降低胶质瘤侵袭性过程中的作用

 目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在热疗抑制肿瘤侵袭性过程中的作用。方法 热处理大鼠恶性胶质瘤细胞(C6细胞)和胶质瘤大鼠后,放射免疫法监测培养液和脑胶质瘤组织内TNF-α的浓度;免疫组化法检测经热疗/ TNF-α/生理盐水处理过的胶质瘤组织内增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的表达。利用Transwell构建肿瘤侵袭模型,通过结晶紫染色法检测肿瘤侵袭性。电镜观察C6恶性胶质瘤大鼠肿瘤血管内皮细胞的凋亡。结果 热疗可增加C6细胞培养液和胶质瘤大鼠肿瘤组织内的TNF-α含量及降低胶质瘤侵袭性,均于热疗后120min时达高峰(P＜0.01)。热疗与TNF-α单独作用于胶质瘤大鼠后,均可引起胶质瘤大鼠肿瘤血管内皮细胞的凋亡。且TNF-α引起内皮细胞的凋亡水平与热处理后C6细胞培养液中TNF-α含量一致。结论 热疗可能是通过增加TNF-α引起肿瘤血管内皮细胞凋亡而抑制了肿瘤侵袭性。     

NF-κB和AP-1在胶原性关节炎小鼠滑膜组织中的表达及活性升高

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以累及周围关节为主要表现的系统性自身免疫病.炎性细胞因子过度表达是导致RA滑膜炎症和骨质破坏的重要因素.而在炎性介质的表达调节中,核转录因子Kappa B(nuclear factor κB,NF-κB)和激活蛋白1(activator protein-1,AP-1)被认为是最重要的转录调控分子,它们的表达和活性增加可促进炎性细胞因子的生成[1-2].本研究观察了胶原性关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)小鼠滑膜中NF-κB和AP-1表达及活性变化,以探讨RA病变的机制.     

川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型NF-kB及I-kBα表达的影响

 【摘要】 目的：观察川芎嗪对大鼠急性脊髓损伤模型损伤段NF-kB及I-kBα表达的影响。方法：SD大鼠110只,随机分正常对照组、单纯脊髓损伤组和川芎嗪处理组。采用改良ALLEN氏打击法建立大鼠急性脊髓损伤模型。采用改良Rivlin斜板实验、BBB(Basso,Beattie,Bresnahan)及CBS（Combine Behavior Score）评分对大鼠脊髓功能进行行为学评分。在建模后1h、3h、6h、12h、1d、3d、5d、7d、14d和21d获取损伤段脊髓标本,HE染色观察其组织病理变化;免疫组织化学染色检测NF-kB及I-kBα表达。结果：随着时间推移,术后斜板临界度数和BBB评分值均逐渐升高,CBS评分值逐渐降低,且术后7、14和21d川芎嗪处理组斜板临界角度数均较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）,术后5、7、14和21d实验组BBB评分值均较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）,而术后5、7、14和21d,川芎嗪处理组CBS评分值均较对照组低（P＜0.05）。术后1、3、5和7d,川芎嗪处理组NF-kB阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组低（P＜0.05）,I-kBα阳性细胞表达数较单纯脊髓损伤组高（P＜0.05）。结论：川芎嗪能够促进大鼠急性继发性损伤后脊髓组织中I-kBα的表达,抑制NF-kB的表达,从而起到促进脊髓功能恢复的作用。     

睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2及神经丝蛋白的表达变化

目的探讨睡眠剥夺后大鼠皮质、海马和杏仁核微管相关蛋白-2(MAP-2)及神经丝蛋白(NF-200)表达的变化。方法采用改良小平台水环境法制作大鼠睡眠剥夺模型,大鼠随机分为睡眠剥夺组(SD组)、环境对照组(TC组)和空白对照组(CC组)。SD组包括睡眠剥夺6h、12h、1d、2d、3d、5d、7d共7个时点,每个时间点5只大鼠,CC组5只。免疫组织化学法观察MAP-2和NF-200阳性表达。结果睡眠剥夺5d和7d时,皮质、CA1、CA2、CA3、齿状回和杏仁核MAP-2和NF-200阳性表达减少(P0.05,P0.01)。结论睡眠剥夺可导致脑组织MAP-2和NF-200表达减少。     

KIF2A及HIF-1α在胃癌组织的表达及其意义

目的探讨KIF2A与HIF-1α在胃癌组织中表达及意义。方法免疫组化法检测72例胃癌组织及20例正常胃组织中KIF2A和HIF-1α的表达情况;Western blot检测1%O下敲除HIF-1α对胃癌MKN-28细胞2KIF2A表达的影响。结果胃癌组织中KIF2A与HIF-1α阳性表达率分别为62.50%和76.39%,显著高于正常胃组织(5.00%和10.00%,P0.05);胃癌组织中KIF2A与HIF-1α表达水平无相关性(P0.05);KIF2A及HIF-1α均与临床分期和淋巴结转移有关(P0.05);KIF2A与浸润程度有关(P0.05)。敲除HIF-1α对缺氧环境下MKN-28细胞中KIF2A的表达水平无影响(P0.05)。结论 KIF2A与HIF-1α在胃癌组织中高表达,与胃癌发生进展相关。     

PGC1α协同PPARγ调节CIDEC基因在小鼠脂肪细胞系中表达

 目的 鉴定CIDEC的表达能够被PPARγ和PGC1α共激活, 检测其在脂肪代谢中的重要调控作用。方法 构建5’删切和顺式原件突变的启动子,运用HepG2细胞中双荧光报告基因实验检测PPARγ和PGC1α对CIDEC的共激活作用并确定顺式作用原件。运用PPARγ特异激动剂pioglitazone刺激3T3-L1细胞检测CIDEC的mRNA水平。在3T3-L1细胞系中,过表达CIDEC,检测脂肪合成及能量代谢相关基因的mRNA水平。通过腺病毒感染在小鼠肝原代细胞中过表达CIDEC,检测肝脏细胞中脂肪变化。结果 PPARγ和PGC1α能够显著激活CIDEC的启动子。过表达CIDEC后在脂肪细胞中脂类合成相关基因FAS上调3.47±0.17倍（p<0.05）,ACC上调3.95±0.57倍（p<0.05）,在肝原代细胞中CIDEC促进脂滴的生成。结论 CIDEC过表达能够被PPARγ促进并且被PGC1α共激活,在体内起到促进脂肪积累的作用。     

血脑屏障氧糖剥夺体外模型中缺氧诱导因子-1α的表达及血脑屏障通透性的变化

目的研究血脑屏障氧糖剥夺体外模型中缺氧诱导因子-1α和紧密连接相关蛋白claudin-5的表达及血脑屏障通透性变化。方法提取纯化大鼠脑微血管内皮细胞,建立血脑屏障氧糖剥夺模型,模拟在体缺血,在氧糖剥夺不同时间点(0、30、60、120、240min),应用EVOM测定仪测定培养的脑微血管跨内皮细胞内皮阻抗值,分析血脑屏障的通透性;应用辣根过氧化物酶渗漏实验分析血脑屏障的通透性;应用Westernblot法分析大鼠脑微血管内皮细胞的缺氧诱导因子-1α和紧密连接相关蛋白claudin-5的表达。结果与正常对照组相比,氧糖剥夺30min,缺氧诱导因子-1α表达增加,辣根过氧化物酶流量升高;氧糖剥夺60min达峰值;氧糖剥夺120min、240min,逐渐降低,但仍高于正常对照组。氧糖剥夺30min,跨内皮阻抗值降低,claudin-5表达减少,在60min最低;120min、240min表达逐渐升高,但仍低于正常对照组。结论氧糖剥夺30min至240min,缺氧诱导因子-1α和claudin-5表达及血脑屏障通透性改变明显,氧糖剥夺60min达峰值。     

大鼠肝纤维化组织内ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697和α-SMA表达增强

 目的 探讨ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白及其mRNA在实验性大鼠肝纤维化形成过程中的动态表达及肌动蛋白细胞骨架的变化。方法 结扎胆总管制备肝纤维化模型,用免疫组织化学、Western blot与RT-PCR检测ROCK-I、α-SMA蛋白及其mRNA的表达,用特异性荧光染色检测肌动蛋白细胞骨架。结果 随着肝纤维化的发展,大鼠肝脏中ROCK-I及α-SMA阳性细胞明显增多;造模1~4周肝组织ROCK-I、α-SMA的阳性面积及ROCK-I、磷酸化MBS Thr-697、α-SMA蛋白表达显著性高于正常组（P<0.05）;ROCK-I基因表达与α-SMA表达呈正相关(r=0.718,P<0.05);随着造模时间延长,肝组织肌动蛋白荧光信号增强。结论 ROCK-I在肝纤维化发生过程中有表达上调和功能活化,可能通过诱导肌成纤维细胞表型形成而参与肝纤维化的发生。