核呼吸因子-1在正常发育和视觉剥夺大鼠视皮层内的表达

目的:观察核呼吸因子-1(NRF-1)在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的表达.方法:构建视觉剥夺大鼠模型,利用半定量:PCR、Western blot及免疫组织化学的方法检测NRF-1在正常发育及视觉剥夺大鼠视皮层内的差异表达.结果:通过以上方法均可检测到视觉剥夺大鼠视皮层内NRF-1表达明显降低.结论:NRF-1的基因转录及蛋白表达水平依赖于正常视觉信号的刺激,异常的视觉经验使视皮层神经元兴奋性降低,造成NRF-1表达的明显下调.     

PGC-1β调节大鼠ALAS-1基因表达机制的初步探讨

目的 检测PGC-1β在人肝癌细胞（Hep G2）和大鼠肝原代细胞中调节大鼠ALAS-1基因表达。方法 在Hep G2细胞中瞬时转染PGC-1β,用双荧光报告系统,检测过表达PGC-1β时,大鼠ALAS-1启动子报告基因的活性变化。同时构建了5'端顺式元件系列截短和突变的ALAS-1启动子报告基因,检测并分析介导PGC-1β作用的转录因子结合元件。分离肝原代细胞并检测PGC-1β对ALAS-1转录的影响。构建干扰NRF-1基因的siRNA腺病毒,证明,NRF-1介导PGC-1β激活ALAS-1启动子转录的作用。结果 在Hep G2细胞中,过表达PGC-1β显著促进ALAS-1表达。分别构建了FoxA2和NRF1结合元件突变的ALAS-1启动子,发现PGC-1β对NRF1突变的ALAS-1启动子的激活作用显著下降,而FoxA2作用不明显。在肝原代细胞中过表达PGC-1β促进了ALAS-1的转录。当用小RNA干扰NRF-1的表达后,则抑制了PGC-1β对ALAS-1转录的促进作用。结论 在Hep G2 和大鼠肝原代细胞中,PGC-1β能够促进ALAS-1基因的表达,并且这种作用是通过NRF-1介导完成的。     

细胞外信号调节激酶系统(ERKs)在正常发育和单眼剥夺大鼠视皮层蛋白表达的研究

为了研究正常发育和单眼视觉剥夺大鼠视皮层 ERK1/ ERK2基因蛋白质表达的变化 ,本研究建立了 SD大鼠单眼视觉剥夺模型 ,以多克隆抗 ERK1/ ERK2抗体和单克隆抗双磷酸化 ERK抗体检测出生后第 1、14、2 1、2 8、45 d和成年 (90 d)正常发育和单眼视觉剥夺 (14～ 45 d)视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达和活性改变。结果表明 ,出生后大鼠视皮层 ERK1/ ERK2蛋白表达逐渐增加 ,至 45 d达到高峰 ,此后下降至成年达稳定水平。磷酸化 ERK蛋白表达仅见于成年大鼠视皮层。单眼视觉剥夺导致ERK1/ ERK2蛋白表达减少。提示 ERK的蛋白表达依赖于正常的视觉输入信号的刺激 ,异常的视觉经验造成表达的明显下调 ,阻断正常的发育进程。说明 ERK1和 ERK2可能参与发育敏感期视皮层神经元可塑性的调节     

乳腺癌组织中血管内皮生长因子与转录因子共活化物PGC-1α的表达

目的探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和转录因子共活化物过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达情况及其与癌组织生长、浸润及转移的关系。方法应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测26例乳腺浸润性导管癌和9例正常乳腺组织中VEGF、线粒体DNA(mtDNA)水平及转录因子共活化物PGC-1α的表达。结果乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达水平明显高于正常乳腺组织,而线粒体及转录因子共活化物PGC-1α的mRNA的表达水平则低于正常乳腺组织。结论乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达显著上调,而PGC-1α mRNA表达显著下调。乳腺浸润性导管癌组织生长、浸润及转移可能与VEGF表达上调及PGC-1α表达降低有关。     

乳腺癌组织中血管内皮生长因子与转录因子共活化物PGC-1α的表达

目的 探讨乳腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和转录因子共活化物过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子-1α(PGC-1α)的表达情况及其与癌组织生长、浸润及转移的关系.方法 应用免疫组织化学和RT-PCR技术检测26例乳腺浸润性导管癌和9例正常乳腺组织中VEGF、线粒体DNA(mtDNA)水平及转录因子共活化物PGC-1α的表达.结果 乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达水平明显高于正常乳腺组织,而线粒体及转录因子共活化物PGC-1α的mRNA的表达水平则低于正常乳腺组织.结论 乳腺癌组织中VEGF蛋白及mRNA表达显著上调,而PGC-1αmRNA表达显著下调.乳腺浸润性导管癌组织生长、浸润及转移可能与VEGF表达上调及PGC-1α表达降低有关.     

蛋白激酶α和β在视觉剥夺性大鼠视皮层中表达变化的初步研究

目的　检测蛋白激酶α和 β(PKCα、PKCβ)在正常大鼠视皮层及视觉剥夺性视皮层中的蛋白表达情况 ,为探讨视觉发育可塑性提供分子基础。方法　采用剥夺性弱视大鼠模型 ,用特异的PKCα和PKCβ抗体对脑切片进行免疫组化。 结果　正常视皮层中 ,这两种PKC同工酶在除Ⅰ层外的其余各层均有显著表达。视觉剥夺的视皮层缺乏正常视皮层那样的清晰分层。与正常视皮层比较 ,弱视眼对侧视皮层中PKCα在Ⅱ～Ⅳ层的蛋白表达广泛减少 ,PKCβ在Ⅱ～Ⅴ层的表达强度明显减弱。结论　PKCα、PKCβ的蛋白表达水平在剥夺性视皮层发育障碍过程中发生了显著改变 ,它们可能参与视皮层发育可塑性的分子机制。     

CTRP3经AMPK/PGC-1α通路促进心肌细胞线粒体生物生成

目的:C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白-3(CTRP3)是一种脂肪细胞因子,它与多种代谢性及心血管疾病密切相关,但CTRP3对线粒体生物生成的影响尚不清楚。本研究主要探讨CTRP3对心肌细胞线粒体生物生成的影响及相关机制。方法:原代培养乳大鼠心肌细胞并给予CTRP3处理。使用PCR、Western blot和免疫共沉淀等方法分别检测线粒体生物生成相关蛋白、线粒体DNA拷贝数、ATP含量和sirtuin 1(SIRT1)活性的变化。结果:CTRP3显著增加过氧化物酶体增殖激活受体共激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子1(NRF-1)、线粒体转录因子A(TFAM)、线粒体氧化磷酸化复合物Ⅲ和V的表达。CTRP3显著升高心肌线粒体DNA拷贝数和ATP含量,而在心肌细胞中敲低PGC-1α可使上述效应减弱。预孵育腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)的抑制剂Ara A可以逆转由CTRP3引起的NRF-1、TFAM和复合物Ⅲ、V的表达升高。CTRP3可上调SIRT1的表达和活性,SIRT1抑制剂EX-527可阻断CTRP3对PGC-1α的去乙酰化调节作用。此外,CTRP3对SIRT1表达和活性的促进作用也可被Ara A所阻断。结论:CTRP3通过AMPK/PGC-1α通路促进心肌细胞线粒体生物生成。     

视觉刺激诱导c-Fos在弱视成年大鼠视皮质神经元表达的研究

目的： 研究光刺激诱导双眼形觉剥夺性弱视成年大鼠视皮质神经元c-Fos表达情况。方法： 缝合14 d龄SD大鼠双侧眼睑建立双眼形觉剥夺性弱视模型，无光照弱视组8只，光照弱视组8只。饲养至100 d龄时剪开眼睑，光照弱视组暴露于外界光线中0.5 h，无光照弱视组不接触光线。取材后对两组视皮质组织进行Nissle染色和c-Fos蛋白免疫组化染色，并对染色结果进行计算机图像分析。结果: 光照弱视组视皮质表达c-Fos蛋白阳性神经元显著多于无光照弱视组（P<0.05）。结论: 双眼形觉剥夺弱视成年大鼠视皮质内经光刺激诱导c-Fos表达增加，提示已过视觉发育敏感期成年大鼠的视皮质仍存留一定程度的视觉可塑性。     

PPARα/PGC-1α在阿霉素扩张型心肌病小鼠心肌组织中的表达及作用

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptorsα,PPARα)及过氧化物酶体增殖物活化受体协同刺激因子1α(peroxisome proliferator activated receptor coactivator 1 alpha,PGC-1α)在阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导扩张型心肌病小鼠心肌中的变化及其对心肌能量代谢及心功能的影响。方法:选取小鼠40只,分为正常对照组、单纯阿霉素模型组、PPARα抑制剂组和PPARα激动剂组。除正常对照组外,其余小鼠采用阿霉素诱导建立扩张型心肌病模型,检测其中PPARα及PGC-1α蛋白的表达,PPARα抑制剂组和PPARα激动剂组在造模前分别采用PPARα抑制剂及激动剂对小鼠预处理2周,高效液相层析法(high-performance liquid chromatography,HPLC)测量线粒体内腺苷酸含量,[3H]-ADP(氚标记二磷酸腺苷)掺入法检测线粒体膜腺苷酸转运体(adenine nucleotide translocator,ANT)转运活性,并利用超声心动图检测各组心脏结构及心功能。结果:成功建立阿霉素诱导的扩张型心肌病模型,PPARα及PGC-1α蛋白在模型组中表达明显低于正常组(P0.05),线粒体内高能磷酸盐含量和线粒体转运活性明显降低(P0.05),心功能显著下降,血流动力学指标紊乱(P0.05);与模型组比较,PPARα抑制剂预处理2周后,可显著降低PPARα/PGC-1α表达,线粒体内高能磷酸盐含量及线粒体ANT转运活性显著降低(P0.05),心功能恶化;而予PPARα激动剂预处理干预2周,上调PPARα/PGC-1α蛋白表达同时,虽然线粒体内高能磷酸盐含量未发现有显著变化,但其可改善阿霉素心肌病大鼠线粒体ANT转运活性,超声心动图显示对心腔大小及心功能有改善作用(P0.05)。结论:在阿霉素诱导扩张性心肌病中,PPARα/PGC-1α对ANT的活性起重要调控作用,激活PPARα/PGC-1α可减轻阿霉素心肌损伤。     

过表达PGC-1α抑制高糖条件下小鼠视网膜感光细胞凋亡

目的:探讨过表达过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)对高糖条件下视网膜感光细胞凋亡的影响及其相关机制。方法:本研究建立小鼠视网膜感光细胞株RGC-5高糖模型,将细胞分为4组:正常组、高糖组、空载组和PGC-1α过表达组。MTT检测各组细胞的活力;Hoechst 33258染色和流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;Western blot检测各组细胞Bax、p53、Bcl-2、神经生长因子(NGF)、血管内皮生长因子(VEGF)、PGC-1α、线粒体转录因子A(TFAM)、DNA聚合酶γ(POLG)、ATP合酶O亚基(ATP5O)、细胞色素C氧化酶5b亚基(COX5b)、超氧化物歧化酶(SOD)1和SOD2蛋白的表达量。结果:与空载组相比,过表达PGC-1α组细胞的活力增强,凋亡率降低,Bax和p53蛋白的表达量显著降低,Bcl-2、NGF、VEGF、PGC-1α、TFAM、POLG、ATP5O、COX5b、SOD1和SOD2蛋白的表达量显著升高(P0.05)。结论:过表达PGC-1α可促进高糖条件下RGC-5细胞活力,抑制其凋亡,减轻氧化应激及线粒体损伤。     

内源性一氧化氮合酶抑制物上调4周运动大鼠骨骼肌收缩功能和线粒体生物合成

目的:观察内源性一氧化氮合酶(NOS)抑制物非对称性二甲基精氨酸(ADMA)及其信号通路在4周运动大鼠NO水平及骨骼肌收缩功能与线粒体生物合成中的调节作用。方法:建立4周运动大鼠模型,检测离体比目鱼肌对电刺激的单次、强直和疲劳收缩的最大张力;并检测骨骼肌中ATP和线粒体DNA含量以及过氧化物酶增殖体受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)、核呼吸因子(NRF)mRNA的表达以反映线粒体生物合成及功能;用高效液相色谱测定血清ADMA浓度;用Western blot法检测骨骼肌中内源性ADMA生成酶PRMT1和ADMA代谢酶DDAH2种亚型以及NOS 3种亚型蛋白的表达;用比色法测定NOS活性及一氧化氮(NO)含量等。结果:与正常对照组相比,运动组大鼠比目鱼肌对电刺激诱导的各种收缩张力均明显增强,比目鱼肌ATP含量、线粒体DNA含量和PGC-1α、NRF mRNA增加显著(P0.01)。运动组大鼠比目鱼肌中构成型NOS(cNOS)的蛋白表达及其NOS活性明显上调(P0.01),而NO含量仅小幅增加(P0.05);同时,4周运动增加大鼠血清ADMA浓度,并伴有骨骼肌DDAH2表达下调。结论:短期耐力运动增强比目鱼肌单次收缩、强直收缩和抗疲劳收缩肌功能,其机制可能与过度增加的cNOS促使ADMA水平反馈性升高,从而维持骨骼肌NO低幅度增加,促进线粒体生物合成有关。     

糖肾方对糖尿病肝损伤和肝组织中SIRT1和PGC-1α表达的影响

目的:观察糖肾方对糖尿病(DM)肝损伤的作用及其对肝组织沉默信息调节因子1(SIRT1)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)表达的影响。方法:采用高脂高糖饮食联合链脲佐菌素(STZ)诱导建立2型糖尿病大鼠模型,将成模大鼠随机分为DM模型组及糖肾方低、中、高剂量组,另设正常对照组。糖肾方给药12周后检测空腹血糖(FBG)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天冬氨酸氨基转移酶(AST)的含量;放射免疫法检测血清胰岛素(FINS)的水平,并计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR);ELISA技术检测血清肿瘤坏死因子α(TNF-α)和白细胞介素1(IL-1)含量;羟胺法和TBA法分别测定肝组织超氧化物歧化酶(SOD)的活性和丙二醛(MDA)的含量;Western blot技术测定SIRT1和PGC-1α蛋白的表达;HE染色和Masson染色法检测肝组织病理变化。结果:与正常对照组相比,DM模型组血清FBG、TG、ALT、AST、FINS、HOMA-IR、TNF-α和IL-1均明显升高(P0.01);肝组织MDA含量升高,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达降低(P0.01);病理结果显示肝细胞呈明显脂肪变,局灶性坏死伴炎细胞浸润,门管区和小叶间可见胶原纤维增生。与DM模型组比较,糖肾方各治疗组FBG、TG、FINS、HOMA-IR、ALT和AST均明显降低(P0.05);肝脏组织损伤、炎症和纤维化程度明显改善;肝组织MDA水平降低,SOD活性及SIRT1和PGC-1α蛋白表达升高(P0.05)。结论:糖肾方可能通过促进SIRT1和PGC-1α蛋白表达来改善胰岛素抵抗和氧化应激,从而减轻糖尿病肝损伤。     

激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α对大鼠离子型谷氨酸受体1表达的影响

目的探讨星形胶质细胞在癫痫发病中的作用。方法选用肿瘤坏死因子TNF-α(TNF-α)刺激及TNF-α反义寡核苷酸阻断后马桑内酯(CL)刺激纯化培养的海马星形胶质细胞，将这两种条件培养基提取液(ACM)10μl分别注入正常大鼠侧脑室，观察动物行为与脑电图的变化；用免疫细胞化学方法检测大脑皮质与海马中离子型谷氨酸受体(NMDARI)表达水平的改变，并做显微图像分析。结果1．侧脑室注射肿瘤坏死因子TNF-α刺激后的条件培养基提取液可引起大鼠Ⅲ级癫痫样发作及典型的尖波、棘波、棘-慢波癫痫样脑电图表现，大脑前梨状皮质和海马CA1区NMDAR1免疫反应阳性神经元数和平均光密度值均明显高于对照组；2．侧脑室注射TNF-α反义寡核苷酸阻断后由马桑内酯刺激的条件培养基提取液，大鼠无癫痫样行为发生，大脑前梨状皮质和海马CA1区NMDAR1免疫反应阳性神经元数和平均光密度值与对照组无显著性差异。结论1．激活的星形胶质细胞分泌的TNF-α可诱导大鼠癫痫发作。2．NMDAR1表达的变化可能与癫痫发作有关。     

SIRT6对小鼠米色脂肪细胞适应性产热功能的影响

目的:探索沉默信息调节因子6(SIRT6)对小鼠米色脂肪细胞适应性产热功能的影响及其机制。方法:利用Seahorse能量代谢分析仪和real-time PCR检测SIRT6对小鼠原代米色脂肪细胞线粒体呼吸的调控作用及产热基因表达的情况;在HEK293A细胞和小鼠原代米色脂肪细胞中利用免疫共沉淀(Co-IP)实验检测SIRT6和过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)的相互作用;利用免疫沉淀(IP)实验检测SIRT6对PGC-1α乙酰化水平的影响,并通过双萤光素酶报告基因实验检测SIRT6对PGC-1α转录辅激活活性的调控作用。结果:过表达SIRT6可增加小鼠原代米色脂肪细胞的氧气消耗速率,上调产热基因的表达,Co-IP实验说明SIRT6与PGC-1α存在相互作用,IP实验表明SIRT6会去乙酰化PGC-1α,双萤光素酶报告基因实验证实SIRT6会协同增强PGC-1α的转录辅激活活性。结论:SIRT6通过去乙酰化PGC-1α增强小鼠原代米色脂肪细胞的适应性产热,从而促进能量消耗。     

cAMP反应元件结合蛋白(CREB)在正常发育大鼠视皮层的表达研究

正常视觉信息输入对初期视皮层的发育和修饰至关重要。视觉发育的特点是存在一个关键期 ,在此期内控制信息输入将导致皮质联系的显著变化。转录因子 -c AMP反应元件结合蛋白 ( CREB)在多种有机体的信号传导通路中的枢纽作用和其参与长时程突触可塑性的生理活动提示 ,它可能参与了在视皮层发育中发挥重要作用的分子机制。本研究应用免疫组织化学方法和 Western blot技术 ,对 P14、P2 2、P3 0、P45和 P90年龄组 Sprague-Dawley大鼠视皮层内 CREB的免疫反应性进行观察和分析。结果证明 ,CREB在视皮层各层内的蛋白表达时程与视觉发育的关键期一致 ,其免疫反应性在 P2 2至 P45期间达到高水平 ,成年后的蛋白表达出现下调。结论 :视觉可塑性降低的同时存在 CREB表达的显著改变 ,但该蛋白表达改变与突触传递和可塑性的关系尚待阐明     

慢性寒冷暴露与线粒体数量改变

目的建立慢性寒冷暴露模型,观察冷应激对线粒体数量、形态学调控蛋白及生物合成的影响并对其机制进行初步探讨。方法选取8周龄健康雄性C57BL/6J小鼠40只,随机分为对照组和寒冷组,每组各20只。寒冷组于-4~0℃环境中饲养4周建立慢性寒冷暴露模型。采用Mito Tracker在体标记小脑皮质颗粒细胞线粒体的方法统计线粒体的数量,同时应用免疫荧光染色法和Western blotting技术,检测线粒体分裂、融合蛋白及转录辅激活因子过氧化物酶体增殖活化受体γ辅助活化因子1α(PGC-1α)的表达情况。结果与对照组相比,寒冷组线粒体数量增多(P0.01),线粒体分裂、融合蛋白及转录辅激活因子PGC-1α表达均显著增多(P0.01)。结论慢性寒冷暴露可能通过诱导PGC-1α的高表达增强线粒体生物合成,增加线粒体数量;活化的PGC-1α协同冷应激促进线粒体形态学调控蛋白表达,构建新的分裂和融合的动态平衡,为机体适应低温环境提供高效率的产能机制。     

低氧诱导肌成纤维细胞生成并通过ERK1/2途径促进Ⅰ型胶原的表达

目的：探讨低氧能否激活成纤维细胞转化为肌成纤维细胞,以及低氧环境对肾皮质肌成纤维细胞表达Ⅰ型胶原（Col-Ⅰ）的影响及其可能的信号通路。方法：（1）采用正常大鼠肾成纤维细胞系（NRK-49F），应用Western blotting方法检测低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达;比较低氧和正常氧条件下α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平。（2）原代培养正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞，Western blotting方法检测低氧和正常氧条件下，HIF-1α和Ⅰ型胶原蛋白水平以及ERK1/2的活化及其特异阻断剂 PD98059的阻断效应；RT-PCR方法检测Ⅰ型胶原mRNA表达水平；细胞免疫化学法检测HIF-1α胞内表达部位的变化；明胶酶谱法检测细胞上清中基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和基质金属蛋白酶-9（MMP -9）的活性。结果：（1）低氧刺激6 h，NRK-49F细胞和肌成纤维细胞胞内和核内均有HIF-1α蛋白表达，核内更明显。（2）低氧培养12 h,NRK-49F细胞表达α-SMA蛋白明显增高，是正常氧组的187%±32%（P<0.05），验证了低氧可引起成纤维细胞表型转化。（3）低氧刺激原代培养的正常大鼠肾皮质肌成纤维细胞6 h、12 h上清中Ⅰ型胶原蛋白水平增加，分别为正常氧组的171%±27%（P<0.05）和256%±61% （P<0.05）；低氧刺激4 h、6 h，Ⅰ型胶原mRNA表达增加，为正常氧组的189%±28%（P<0.05）和221%±44%（P<0.05）。（4）低氧刺激肌成纤维细胞6 h、12 h、24 h，培养上清液中MMP-9、MMP-2活性无明显变化。（5）低氧刺激肌成纤维细胞15 min 即可使ERK1/2活化，阻断实验显示，PD98059可以使低氧12 h引起Ⅰ型胶原增加（低氧刺激组为正常氧对照组的273%±51%，P<0.05)显著减少（PD98059 +低氧组为正常氧组的108%±19%，P>0.05)。结论： 低氧促肾纤维化可能与其诱导肾成纤维细胞转化为肌成纤维细胞并经ERK1/2途径增加Ⅰ型胶原蛋白的表达有关。     

高糖通过下调PGC-1α激活NFAT并促进足细胞凋亡

目的:足细胞凋亡在慢性肾病的发病发展中起着重要的作用,但目前对足细胞凋亡机制的研究还远未明确。本文旨在探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α(PGC-1α)下调对足细胞凋亡的影响及其机制。方法:建立高糖诱导足细胞凋亡的体外模型,运用实时荧光定量PCR、Western blot、流式细胞术等方法分析高糖和PGC-1α沉默对足细胞凋亡以及相关分子mRNA和蛋白表达的影响。结果:在足细胞凋亡的体外模型中,PGC-1α表达显著下调。用siRNA沉默足细胞中的PGC-1α后,足细胞凋亡明显增加。核内活化T细胞核因子(NFAT)蛋白的表达在足细胞凋亡的体外模型也中明显增加,即NFAT活化;正常足细胞中沉默PGC-1α后NFAT也明显活化;在正常培养足细胞中沉默PGC-1α的同时沉默NFAT后,足细胞凋亡明显减轻。结论:PGC-1α的表达下调导致足细胞凋亡;NFAT可能介导了PGC-1α下调引起的足细胞凋亡。     

柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及FoxO1/PGC-1α通路的影响北大核心CSCD

目的:探讨柴胡皂苷D对2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗及叉头框蛋白O1(FoxO1)/过氧化物酶体增殖物激活受体γ辅激活因子1α(PGC-1α)通路的影响。方法:以高脂饮食联合小剂量链脲佐霉素腹腔注射诱导建立2型糖尿病大鼠模型,随机分为模型组、柴胡皂苷D低剂量、中剂量、高剂量(50、100、150 mg/kg)组、二甲双胍(24.2 mg/kg)组,每组12只,另取12只SD大鼠以基础饲料喂养,并腹腔注射等剂量生理盐水,设为对照组。大鼠经药物分组处理后,测定大鼠空腹胰岛素(FINS)水平、空腹血糖(FBG)水平,计算胰岛素抵抗指数(IRI)、胰岛素敏感指数(ISI);行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),计算血糖曲线下面积(AUC);检测大鼠肝糖原及肝脏脂肪合成情况;ELISA检测大鼠血清致炎因子水平;Western blot检测大鼠肝组织FoxO1/PGC-1α通路蛋白表达。结果:与对照组比较,模型组大鼠肝糖原显著减少,脂肪合成显著增多,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平显著升高,ISI水平显著降低(P<0.05);与模型组比较,柴胡皂苷D各剂量组与二甲双胍组大鼠肝糖原增多,脂肪合成减少,FINS、FBG、IRI、AUC、血清TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-18水平、肝组织FoxO1/PGC-1α通路p-FoxO1/FoxO1、PGC-1α蛋白表达水平降低,ISI升高,且柴胡皂苷D各剂量组间呈剂量依赖性(P<0.05);柴胡皂苷D高剂量组与二甲双胍组比较,大鼠各指标无明显差异(P>0.05)。结论:柴胡皂苷D可能通过抑制FoxO1/PGC-1α信号通路激活从而降低血糖,抑制炎症,降低2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗。     

血脑屏障氧糖剥夺体外模型中缺氧诱导因子-1α的表达及血脑屏障通透性的变化

目的研究血脑屏障氧糖剥夺体外模型中缺氧诱导因子-1α和紧密连接相关蛋白claudin-5的表达及血脑屏障通透性变化。方法提取纯化大鼠脑微血管内皮细胞,建立血脑屏障氧糖剥夺模型,模拟在体缺血,在氧糖剥夺不同时间点(0、30、60、120、240min),应用EVOM测定仪测定培养的脑微血管跨内皮细胞内皮阻抗值,分析血脑屏障的通透性;应用辣根过氧化物酶渗漏实验分析血脑屏障的通透性;应用Westernblot法分析大鼠脑微血管内皮细胞的缺氧诱导因子-1α和紧密连接相关蛋白claudin-5的表达。结果与正常对照组相比,氧糖剥夺30min,缺氧诱导因子-1α表达增加,辣根过氧化物酶流量升高;氧糖剥夺60min达峰值;氧糖剥夺120min、240min,逐渐降低,但仍高于正常对照组。氧糖剥夺30min,跨内皮阻抗值降低,claudin-5表达减少,在60min最低;120min、240min表达逐渐升高,但仍低于正常对照组。结论氧糖剥夺30min至240min,缺氧诱导因子-1α和claudin-5表达及血脑屏障通透性改变明显,氧糖剥夺60min达峰值。