补充VE、Se对大鼠肝纤维化和抗氧化功能影响的研究

目的 :　探讨维生素 E(VE)、硒 (Se)对 CCl4 大鼠肝纤维化和抗氧化功能的影响。方法 :　 48只 SD大鼠随机分为 3组。模型组 ,采用腹腔注射 5 0 % CCl4 和橄榄油混合制剂的方式建立大鼠肝纤维化模型 ,喂饲标准饲料 ;干预组 ,处理方式同前 ,并在大鼠饲料中加 VE(2 5 0 mg/kg )和 Se(0 .2 mg/kg)进行营养干预 ;对照组 ,腹腔注射生理盐水 ,喂饲标准饲料。全部动物于处理 8w后处死。通过 HE常规染色和 Masson三色胶原染色对肝组织切片进行病理组织学检查 ;同时分别检测大鼠体内各种抗氧化指标和其他肝纤维化指标 ,并观察其变化。结果 :　干预组大鼠抗氧化能力有显著提高 ,表现在肝组织和血清 SOD、红细胞 GPX活性均显著高于模型组 ,而肝组织和血清MDA水平显著低于模型组。同时 ,干预组大鼠的肝纤维化程度显著低于模型组 ,体现在血清 ALT、AST水平、肝组织羟脯氨酸含量都显著低于模型组 ;组织病理学检查显示肝脏胶原纤维增生程度也显著低于模型组。结论 :　补充适量 VE和 Se具有提高机体抗氧化的能力 ,显著减轻肝脏胶原纤维的增生程度     

维生素E、硒对急性肝损伤期肝细胞凋亡影响的研究

目的: 了解饲料维生素E (VE) 和硒 (Se) 对大鼠急性损伤期肝细胞凋亡的调节作用。方法: 采用腹腔内注射50%CCl4制备大鼠急性肝损伤模型,在饲料中添加适量VE(250 mg/kg)和Se(0.2 mg/kg)进行营养干预,用ALT、AST等肝功能指标及病理组织学观察的方法检测抗氧化剂对肝细胞的保护作用;用原位凋亡(TUNEL)技术结合组织学形态观察的方法检测抗氧化营养素对肝细胞凋亡的影响。结果: 注射CCl4后大鼠ALT和AST值均显著增高;肝细胞凋亡数少于正常对照组; 饲料补充VE和Se后肝损伤程度减轻;肝细胞凋亡数增高。结论: 饲料中添加适量VE和Se可减轻CCl4对大鼠肝细胞的损伤并促进其凋亡。     

补充抗氧化剂对急性肝损伤大鼠肝星型细胞zf-9mRNA表达的影响

目的:探讨经膳食补充抗氧化剂维生素E(VE)、硒及槲皮素对大鼠急性肝损伤早期肝脏星型细胞激活相关性基因zf-9mRNA表达的影响。方法:90只SD大鼠随机分为正常对照组、病理对照组、VE和硒补充组及槲皮素补充组。通过灌胃分别补充VE、Se(VE20mg/kg bw·d,硒16μg/kgbw﹒d)和槲皮素(50mg/kg bw·d)2w后,腹腔内注射CCl4造成急性肝损伤,分别于注射后的3、6、12和24h检测抗氧化状态及肝功能;用胶原酶和链霉蛋白酶灌注肝脏并分离急性肝损伤期各时间点的肝星型细胞,应用半定量聚合酶链反应(RT-PCR)研究zf-9mRNA的表达。结果:膳食补充VE、硒和槲皮素可显著减少急性肝损伤大鼠血清MDA水平,增强SOD活性,保护肝功能;下向调控肝星型细胞激活早期zf-9mRNA的表达。结论:膳食补充抗氧化剂VE、硒及槲皮素可有效地调控HSC激活相关性基因zf-9mRNA的表达。     

PPARγ对肝纤维化肝星状细胞的影响

肝纤维化是肝脏受到各种致病因素的炎症刺激后组织修复失控的病理过程。肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)的激活是其发展的关键环节。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptorγ,PPARγ)与HSC的关系密切,其干扰肝纤维化的形成及发展,有望成为新型抗纤维化药物。     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0及 2 0 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALadder)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果发现 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;γ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景     

姜黄素对肝星状细胞增殖能力影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞细胞株(CSFSC-2G)增殖能力及细胞外基质分泌的影响.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度姜黄素(5,10,15,20,40 μmol/L)在不同培养时间作用下肝星状细胞(HSC)的增殖能力;酶联免疫吸附实验法检测不同浓度姜黄素作用下HSC Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ,Col Ⅲ)合成及分泌能力;流式细胞术检测姜黄素对HSC凋亡的影响.结果 不同浓度的姜黄素(5,10,15,20,40 μmol/L)均可抑制HSC增殖,并呈现明显剂量依赖关系;含20 μmol/L姜黄素培养基培养24 h后,HSCCol Ⅰ、Col Ⅲ吸光度(A)值分别为(0.418±0.019),(0.554±0.043),均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);含20 μmol/L姜黄素培养基培养48 h后,HSC处于G0/G1期的HSC细胞占(39.98±8.07)%,S期细胞占(55.79±9.13)%,G2/M期细胞占(4.23±0.12)%;凋亡率为(20.31±2.55)%,高于阴性对照组凋亡率(0.22±0.11)%,低于秋水仙素阳性药物对照组凋亡率(29.75±2.64)%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 姜黄素可抑制HSC细胞的增殖并促进其凋亡,有可能成为防治肝纤维化的理想药物.     

神经生长因子与肝纤维化的研究进展

肝星形细胞(HSC)活化是肝纤维化形成的关键因素.目前研究显示,神经生长因子(NGF)可能通过抑制肝脏炎症,诱导活化的HSC凋亡,进而减缓肝纤维化的进展,其作用机制可能包括NGF及其低亲和力受体P75的作用.诱导活化HSC凋亡将是治疗和逆转肝纤维化的理想途径.     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 12 5、2 5 0、5 0 0、10 0 0及 2 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALad der)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果显示 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;δ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。结果提示 ,维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景     

重视肝纤维化与肝硬化的防治研究

肝纤维化(Hepatic Fibfosis)是指肝细胞发生坏死及炎症刺激时，肝内纤维结组织增生的病理过程。轻者称为肝纤维化，重者假小叶及结节形成，称为肝硬化。慢性肝病的重要病理基础是肝纤维化，通过纤维化的发展走向肝硬化。肝纤维化是各种原因引起的慢性肝损害导致的病理状态过程，是发展为肝硬化形成的基础和必要阶段。现已证实肝纤维化的第一步是炎症反应和肝星状细胞(HSC)的激活。     

凋亡与肝纤维化

肝细胞和肝星形细胞(hepatic stellate cell,HSC)的凋亡与肝纤维化的形成、发展和减退有关。肝细胞凋亡产生的凋亡小体被吞噬细胞吞噬,且肝细胞凋亡本身可引起或加重炎症,均导致肝纤维化发生;HCS则通过细胞凋亡来减退肝纤维化。因此,肝细胞和肝星形细胞凋亡对肝纤维化有重要作用。     

Antiproliferative and proapoptotic effects of tocopherol and tocol on activated hepatic stellate cells

Activated hepatic stellate cells (HSCs) play crucial roles in liver fibrosis. In the course of liver injury, HSCs, which reside in perisinusoidal spaces and lose lipid droplets, morphologically change into a myofibroblastic phenotype and acquire an increased proliferation activity in what is known as the activated state. We have investigated therapeutic strategies for liver fibrosis by promoting spontaneous reversion or inducing apoptosis in activated HSCs. Vitamin E consists of four tocopherols and four tocotrienols, all of which are well-known antioxidants. In this study, the antiproliferative and proapoptotic effects of a tocol, which lacks methyl groups attached to the chromanol ring, and four tocopherols were investigated using activated HSCs. δ-Tocopherol and tocol exhibited relatively high proliferation inhibitory and proapoptotic abilities. However, they did not show proliferation inhibition ability on primary hepatocytes or HepG2 cells. Significant cell detachment was also observed in δ-tocopherol- and tocol-treated HSCs. Decreased protein expressions of α-smooth muscle actin and β1 integrin were observed in a dose-dependent manner. These results indicate that δ-tocopherol and tocol induce anoikis in activated HSCs.     

Protective effect of sodium ferulate on acetaldehyde-treated precision-cut rat liver slices

Activated hepatic stellate cells (HSCs) play a key role in hepatic fibrogenesis, and inhibition of HSC activation may prevent liver fibrosis. Acetaldehyde, the most deleterious metabolite of alcohol, triggers HSC activation in alcoholic liver injury. In the present study, we investigated the protective effect of sodium ferulate (SF), a sodium salt of ferulic acid that is rich in fruits and vegetables, on acetaldehyde-stimulated HSC activation using precision-cut liver slices (PCLSs). Rat PCLSs were co-incubated with 350?μM acetaldehyde and different concentrations of SF. Hepatotoxicity was assessed by measuring enzyme leakage and malondialdehyde content in tissue. α-Smooth muscle actin, transforming growth factor-β(1), and hydroxyproline were determined to assess the activation of HSCs. In addition, matrix metalloproteinase (MMP)-1 and the tissue inhibitor of metalloproteinase (TIMP-1) were determined to evaluate collagen degradation. SF prominently prevented the enzyme leakage in acetaldehyde-treated slices and also inhibited HSC activation and collagen production stimulated by acetaldehyde. In addition, SF increased MMP-1 expression and decreased TIMP-1 expression. These results showed that SF protected PCLSs from acetaldehyde-stimulated HSC activation and liver injury, which may be associated with the attenuation of oxidative injury and acceleration of collagen degradation.     

硫普罗宁注射液干预大鼠肝星状细胞致肝纤维化形成作用的研究

目的 探讨硫普罗宁注射液抗肝纤维化的作用及其机制。方法 肝星状细胞的分离采用胶原酶循环灌流法。硫普罗宁注射液（25mg／ml、50mg／ml、100mg／ml、200mg／ml、400mg／ml）作用不同时间（24h、48h、72h）后，采用MTT法OD值检测细胞活化增殖情况。硫普罗宁注射液（200mg／m1）作用24h和48h后，流式细胞术检测细胞增殖周期。采用溴乙锭／吖啶橙荧光染色法结合显微镜下形态学观察及流式细胞术检测硫普罗宁注射液对活化的肝星状细胞凋亡的影响。结果 硫普罗宁注射液各浓度组OD值较对照组明显降低（P〈0.05），硫普罗宁注射液200mg／ml组作用24h和48h流式细胞术检测出C2-M期的细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．01），硫普罗宁注射液各浓度组荧光染色法和流式细胞术均未检测到肝星状细胞凋亡。结论 硫普罗宁注射液主要是通过抑制肝星状细胞增殖的C2-M期而产生抗肝纤维化作用的。     

苦参碱对血小板衍生生长因子介导的大鼠肝星状细胞迁移、增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养的肝星状细胞（HSC）迁移、增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化的作用机制。方法用0.25、0.5mg/ml的苦参碱分别处理肝星状细胞-BB型（HSC-T6）和由血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）干预的HSC-T6,观察HSC的生长情况,采用Transwell小室检测细胞迁移,用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组细胞迁移数、吸光度值均低于空白对照组,细胞凋亡率则明显增高;在有PDGF-BB参与的3组中,苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组的细胞迁移率和吸光度值降低,但是细胞凋亡率在3组之间差别无统计学意义。结论苦参碱对单纯激活状态下的HSC迁移、增殖均有较强的抑制作用,并能促进HSC凋亡的发生;苦参碱对PDGF作用下HSC的迁移、增殖有一定的抑制作用,但对此状态下的HSC的凋亡则无明显促进作用。     

Combined selenium and vitamin C deficiency causes cell death in guinea pig skeletal muscle

Combined antioxidant deficiencies of selenium and vitamin E or vitamin E and vitamin C in guinea pigs result in clinical illness. We hypothesized that combined selenium and vitamin C deficiency would have clinical consequences because in vitro interactions of these antioxidant nutrients have been reported. Because guinea pigs are dependent on dietary vitamin C, weanling male guinea pigs were fed selenium-deficient or control diet for 15 weeks before imposing vitamin C deficiency. Four dietary groups were formed and studied 3 weeks later: controls, vitamin C deficient, selenium deficient, and doubly deficient. Deficiencies were confirmed by determinations of glutathione peroxidase activity and vitamin C concentration in liver and skeletal muscle. Plasma creatine phosphokinase activity and liver, kidney, heart, and quadriceps histopathology were determined. Doubly deficient animals had moderately severe skeletal muscle cell death as judged by histopathology and plasma creatine phosphokinase activity of 6630 ± 4400 IU/L (control, 70 ± 5; vitamin C deficient, 95 ± 110; selenium deficient, 280 ± 250). Liver, kidney, and heart histology was normal in all groups. Muscle α-tocopherol levels were not depressed in the doubly deficient group, but muscle F₂ isoprostane concentrations were elevated in them and correlated with markers of cell death. We conclude that combining selenium and vitamin C deficiencies in the guinea pig causes cell death in skeletal muscle that is more severe than the injury caused by selenium deficiency. The elevation of muscle F₂ isoprostanes is compatible with the cell death being caused by oxidative stress.     

肝纤维化病程中Kupffer细胞与HSC的相互关系（综述）

肝纤维化（HF）是诸多慢性肝病共同的病理过程,也是各种慢性肝病向肝硬化转归的中转站。肝星状细胞（HSC）是细胞外基质（ECM）的主要来源,在肝纤维化形成中起关键性作用。枯否细胞（KC）是肝脏内重要的非实质细胞,KC通过分泌一系列细胞因子参与HSC的活化。参与肝纤维化的发生与发展。在肝纤维化的恢复阶段,KC可抑制HSC活性,促进其凋亡从而发挥抗纤维化作用。因此,深入研究Kupffer细胞与HSC的Cross-talk在肝纤维化的发生与发展中的作用和机制,对于临床工作中防治肝脏损伤,提高患者生存率具有实际意义。