某地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变特征分析

目的了解深圳地区结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼的耐药相关基因的突变特点。方法 60株结核分枝杆菌临床分离株通过全自动快速分枝杆菌培养鉴定系统(BACTEC-MGIT960)进行鉴定和药敏分析。在这60株菌株中,针对包括利福平耐药决定区(RRDR)在内的rpoB基因和异烟肼耐药相关位点katG315、inhA-15、kasA269、kasA312进行PCR扩增,并将扩增产物T-A克隆后进行测序。结果在60株结核分枝杆菌临床分离株中,检出利福平耐药株45株,敏感株15株;异烟肼耐药株41株,敏感株19株;利福平和异烟肼同时耐药的有14株。在45株利福平耐药株中,rpoB基因RRDR突变发生率为91.1%(41/45),共检测到12种突变形式,主要突变位点在531、526、516、533,以Ser531Leu突变最常见,占rpoB发生基因突变株的51.2%(21/45)。在41株异烟肼耐药株中,katG315位点有29株发生突变,包括28株katG315(AGC-ACC)和1株katG315(AGC-AAC)突变,突变发生率为70.7%(29/41);inhA-15位点有9株发生突变,均为(C-T)突变,突变发生率为21.95%(9/41)。kasA基因未发现常见突变形式。结论深圳地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药相关基因突变位点与国内外研究基本一致,但各位点频率有所不同。     

台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的流行病学调查

目的 了解台州地区临床流行的结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的表型,为临床有效地治疗结核病提供依据。方法 回顾性分析2015 年8 月至2020 年11 月送检于台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院的482 株临床分离的结核分枝杆菌菌株,采用DNA 微阵列芯片法对利福平耐药相关基因rpoB、异烟肼耐药相关基因katG及inhA 基因进行特异性检测。结果 482 例结核分枝杆菌中利福平耐药基因检测出rpoB 野生型367 例,突变型115 例,其中突变型以rpoB531（C→T）突变为主,检出55 例;检出异烟肼耐药基因katG 和inhA 基因型均为野生型的372 例,突变型110 例,katG 基因突变型中katG315（G→C）突变和katG315（G→A）突变分别是91 例和12 例,inhA 基因突变型只有inhA-15（C→T）突变16 例。2020 年利福平基因耐药率增加到38.46%,异烟肼基因耐药率在6 年间没有明显增长。结论 台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因型以野生型为主,但利福平基因耐药率呈上升趋势。     

浙江省耐药结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点研究

目的 了解浙江省耐异烟肼、利福平、乙胺丁醇结核分枝杆菌katG、rpoB、embB基因突变特点.方法 以结核分枝杆菌标准株H37Rv为对照,应用聚合酶链反应--单链构象多态性(PCR-SSCP)技术、聚合酶链反应--直接测序(PCR-DS)技术检测100株耐药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB、embB基因.结果 经PCR-DS检测katG基因突变率达54.8%,以Ser315Thr突变最常见(40.3%);在耐利福平菌株中,rpoB基因突变率达88.9%,以526、531位氨基酸改变最常见,总突变率达77.8%(63/81);在耐乙胺丁醇菌株中,embB基因突变率达60%,以Met306VaI改变最常见(28.9%).结论 PCR-SSCP技术操作简单、检测快速,可作为临床耐药检测的辅助手段;浙江省结核菌耐药基因突变位点同国内研究基本一致,各位点突变形式所占比例有自身特点.     

广西百色地区结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征分析

目的分析百色地区结核分枝杆菌(MTB)利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测利福平耐药性,PCR技术检测耐药结核分枝杆菌rpoB基因序列并测序分析利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。结果分离培养获得98例MTB,98例MTB出现36株利福平耐药,耐药率为36.73%,36株耐利福平菌株中有27株rpoB基因发生突变,基因突变率为75.00%,其中516位点突变率为3.70%(1/27),531位点突变率为59.26%(16/27),526位点突变率为29.63%(8/27),533位点突变率为7.41%(2/27)。突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB533。结论百色地区耐利福平结核分枝杆菌耐药性产生的主要分子机制是因为rpoB的基因发生突变。     

基因芯片方法快速检测MDR-TB及利福平和异烟肼耐药基因的研究

目的 使用基因芯片结合仪器法液体快速培养分析耐多药(multidrug resistant,MDR)结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)的耐药基因和表型特征.方法 应用聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增-基因芯片杂交法检测耐多药结核分枝杆菌(multidrug resistant tuberculosis,MDR-TB)菌株中利福平(rifampin,RFP)和异烟肼(isoniazid,INH)耐药基因的突变位点及类型,平行用BD MGIT960系统检测所选菌株对RFP和INH的敏感性.结果 以MGIT960药敏结果作为参考标准,34株MDR-TB中,基因芯片检测MTB对RFP、INH药的符合率分别为85.29%和94.11%;32株RFP耐药突变株中22株为rpoB 基因531位密码子突变,29株INH耐药突变株中24株为katG基因315位密码子突变.结论 基因芯片技术可快速、有效地检出MDR-TB,可以在未获得传统细菌表型药敏结果前指导临床用药治疗.     

利用GenoType~? MTBDRplus技术分析福州市结核耐药基因突变特征

目的了解福州市结核菌的耐药基因突变特征,分析突变位点和突变频率,为本地区耐多药结核病诊疗提供更多的数据。方法利用GenoType~?MTBDRplus技术对福州市近年分离的352株结核分枝杆菌进行检测,分析其rpoB、katG和inhA基因的突变特征。结果福州市352株结核菌株,总耐药率13.92%(49/352),ropB耐药基因突变率7.67%(27/352),异烟肼耐药基因突变率13.92%(49/352),耐多药结核菌(MDR-TB)发生率7.67%(27/352)。利福平耐药基因rpoB突变以S531L位点突变最常见,占55.56%(15/27)。异烟肼耐药katG基因突变占75.51%(37/49),inhA突变占24.49%(12/49)。katG突变以S315T1最常见,占59.18%(29/49);inhA基因突变以inhA C15T最常见,占22.45%(11/49)。MDR-TB以rpoB S531L-katG S315T1突变类型最常见,占40.74%(11/27)。结论福州地区结核分枝杆菌对利福平、异烟肼和MDR-TB耐药率总体水平均低于全国平均水平,耐利福平、耐异烟肼菌株和MDR-TB的基因突变存在主流突变类型,分别为rpoB S531L、katG S315T1和inhA C15T、rpoB S531L-katG S315T1,对今后福州市耐多药结核病的快速诊断和控制提供了理论依据。     

西安市耐异烟肼的结核杆菌耐药性及分子特征分析

目的 了解西安市临床分离的结核分枝杆菌异烟肼耐药菌株katG315、inhA-15 突变情况及其分 子特征。方法 利用BACTAC MGIT960 分枝杆菌快速培养系统对临床分离结核分枝杆菌进行药敏试验,采用 定向缺失多重PCR（DTM-PCR）对异烟肼耐药菌株进行基因分型研究,分别利用多重等位基因特异PCR （MAS-PCR) 和PCR-DNA 测序法对其katG315 和inhA-15 突变热点进行检测。结果 117 株异烟肼耐药 菌株有73 株为多重耐药结核分枝杆菌（62.39%）,104 株为北京型菌株（88.89%）,81 株存在katG315 位点突变 （69.23%）,10 株存在inhA-15 位点突变（8.55%）。结论 西安市异烟肼耐药分枝杆菌以北京型菌株为主,耐药 表型主要表现为多重耐药,主要突变为katG315 突变。     

线性探针杂交技术在广西百色地区耐药结核病检测中的应用

目的 了解广西百色地区利福平、异烟肼耐药基因的分布情况。评价线性探针杂交技术(LPA)检测耐药结核分枝杆菌的应用价值。方法 利用LPA技术与传统比例药敏试验分别检测496例结核分枝杆菌感染患者痰标本,统计出利福平、异烟肼各个耐药基因的分布情况并与传统比例药敏试验作比较。结果 LPA技术对结核病患者耐多药的检出率和传统比例药敏试验相比较差异无统计学意义(P>0.05) 。LPA技术检测耐利福平和异烟肼的灵敏度、特异度分别为97.0%、99.1%和77.8%、 99.5%,耐多药结核病的灵敏度和特异度分别为82.8%和99.8%。本地区利福平耐药基因突变频率最高的是rpoB WT8 占32.4%,其次是ropB MUT3占29.7%;异烟肼耐药基因最常见的突变是 katG WT 占46.8%,其次是katG MUT1 占43.6%。kappa一致性检验评价两种药物耐药性检测方法的kappa值分别为0.965和0.904。结论 广西百色地区结核分枝杆菌利福平的耐药基因以rpoB WT8和ropB MUT3两个位点突变为主,而结核分枝杆菌异烟肼的耐药基因则以katG WT和katG MUT1位点突变多见。LPA技术能快速、准确诊断结核分枝杆菌利福平、异烟肼的耐药性及多药耐药性,LPA技术检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性与传统比例药敏试验具有高度的一致性,LPA检测技术可以大大地缩短检测的时限,辅助临床快速诊断出多耐药的结核菌。     

结核分枝杆菌rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度的相关性

目的 研究结核分枝杆菌，rpoB基因突变与多重耐药及利福平耐药程度强弱之间的关系。方法应用绝对浓度法测定58株结核分枝杆菌对4种－线抗结核药物的药敏特性，对耐利福平结核分枝杆菌的耐药谱进行分析。同时对含有核心突变区的结核分枝杆菌，rpoB基因片段进行PCR扩增和DNA测序，分析rpoB基因突变与多重耐药的关系，以及突变位点和突变性质与利福平耐药强弱的相关性。结果58株结核分枝杆菌中，利福平耐药株36株，敏感株22株。36株耐药株均存在，rpoB基因突变，其中88．9％(32／36)至少对利福平和异烟肼同时耐药。90．O％的利福平高度耐药株(18/20)与rpoB基因531位和526位密码子突变相关。密码子531位和526位各有1株双碱基突变，且均为多重耐药株。结论结核分枝杆菌，rpoB基因突变所致的利福平耐药株大部分对异烟肼耐药，因此单独检测rpoB基因突变即可初步筛选多重耐药的结核分枝杆菌；而rpoB基因的突变位点与利福平耐药程度之间具有一定的相关性。     

应用DNA芯片法检测耐多药结核分枝杆菌的研究

目的应用DNA芯片技术快速检测耐多药结核菌的常见突变位点,初步评价其临床应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37RV为对照,应用基因芯片技术、聚合酶链反应-单链构象多态性技术、聚合酶链反应-直接测序技术检测46株耐多药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB基因。结果 46例耐多药菌株中,应用基因芯片检测出katG基因突变28株,检出率为60.9%(28/46);检测出rpoB基因突变37株,检出率为80.4%(37/46);同时检测出二者突变共25株,检出率为54.3%(25/46)。结论基因芯片技术操作简单、检测快速,对异烟肼、利福平耐药基因检出率较高,可作为临床耐药检测的辅助手段。     

浙东地区耐多药结核分枝杆菌耐药特性及分子机制研究

目的 对浙东地区耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）耐药性及分子机制进行研究,为治疗耐多药结核病提供理论依据。方法 收集2018 年1 月～2019 年12 月浙江东部9 家结核病定点医院临床分离的结核分枝杆菌。采用比例法检测异烟肼（INH）、利福平（RIF）、氧氟沙星（OFL）、链霉素（SM）、乙胺丁醇（EMB）、阿米卡星（AK）、对氨基水杨酸（PAS）、卷曲霉素（CM）和丙硫异烟胺（TH）对MDR-TB 的耐药性。通过基因芯片方法检测耐多药结核分枝杆菌rpoB、katG、inhA 突变位点,PCR 扩增OFL 耐药的MDR-TB 的gyr 耐药基因并测序。结果 耐多药结核分枝杆菌对OFL、SM、EMB、AK、PSA、CM、TH、INH 和RIF 耐药率分别为38.1%、54.8%、28.6%、11.9%、8.3%、9.5%、13.1%、100.0%和100.0%。耐多药结核分枝杆菌的突变位点为rpoB 511（9 例）、rpoB 513（3 例）、rpoB 516（3 例）、rpoB 526（25 例）、rpoB 531（38 例）、rpoB 533（2 例）,KatG 315（71 例）,inhA-15(4 例),KatG 315 与inhA-15 同时突变（9 例）。检测到26 株gyrA 基因和2 株gyrB 基因发生突变,突变类型为Thr478Asn、Asn477Thr、Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Ala、Asp94His、Asp94Asn 和Asp94Gly。结论 耐多药结核分枝杆菌利福平耐药以rpoB 基因531位点突变为主;异烟肼耐药以KatG 基因315 位点突变为主;MDR-TB 对喹诺酮类药物的耐药机制以gyrA 基因Ala90Val、Ser91Pro、Asp94Gly 突变类型为主。     

广西百色地区结核分枝杆菌异烟肼耐药基因特征分析

目的：分析百色市地区结核分枝杆菌异烟肼耐药相关基因 KatG 、inhA 的突变特征。方法收集128例结核病患者痰液标本,采用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测异烟肼耐药性,提取耐药菌株 DNA ,PCR 扩增耐药结核分枝杆菌 katG 、inhA 基因序列并分析异烟肼耐药相关基因突变特征。结果分离培养出98例结核分枝杆菌,34株对异烟肼耐药,耐药率为36．7％,耐药菌株 KatG 基因突变率为44．1％（15／34）,其中315位点突变率为66．7％（10／15）,出现两个新的突变位点为279（4／15）和427（1／15）。 inhA 5位点突变率为13．3％（2／15）,inhA 16位点突变率为6．7％（1／15）,3株均为 katG 和inhA 联合突变。结论百色地区耐异烟肼结核分枝杆菌耐药性产生与 katG 和 inhA 基因突变相关,检测本地区结核分枝杆菌katG 和 inhA 基因突变可预测结核分枝杆菌对异烟肼的耐药性。     

结核分支杆菌耐药分子机制及快速检测的研究

目的：研究结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药的分子机制，探索快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性的分子生物学方法。方法：应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药株与katG基因、rpoB基因突变。结果：46例株结核分支杆菌临床分离株均未发现katG基因序列的缺失，17株检测到katG基因突变，耐药株中katG基因的突变率为57％；87株结核分支杆菌利福平耐药临床分离株的PCR－SSCP结果显示，所有39株利福平敏感菌无突变检出，48株利福平耐药菌中，36株高度利福平耐药菌和7株低度利福平耐药菌检测到rpoB基因突变；另5株低度利福平耐药菌未检测到rpoB基因突变，利福平耐药株中rpoB基因的突变检出率为89．6％。结论：证实katG和rpoB基因突变分别是结核分支杆菌异烟肼和利福平耐药的主要分子机制。应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）可快速检测结核分支杆菌异烟肼、利福平耐药性，使应用传统耐药测定方法需时1－2个月缩短到2天内即可完成，使非生长依赖性分子生物学手段应用于快速检测结核分支杆菌耐药性成为可能。     

Rv2629基因191位A/C突变和结核分枝杆菌利福平耐药性的研究

目的 了解Rv2629基因191位A/C突变和结核分枝杆菌利福平耐药性的关系.方法 通过聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)-直接测序的方法分析69株结核分枝杆菌临床分离株的Rv2629 基因序列,同时用基因芯片和PCR直接测序的方法分析其rpoB基因,并以传统的药敏试验为对照.结果 92.8%(64/69)的结核分枝杆菌临床分离株Rv2629为191C等位基因.29株利福平敏感株均无rpoB基因突变,Rv2629 191位A/C突变率为96.5%(28/29).40株利福平耐药株中,75%(30/40)存在rpoB基因突变,191位A/C突变率为90.0%(36/40).结论 Rv2629基因191位A/C突变和结核分枝杆菌利福平耐药性可能没有直接关系,不能作为利福平耐药性检测的分子标志.     

分子线性探针技术分析四川地区结核分枝杆菌耐药情况

摘要：目的应用分子线性探针GenoType®MTBDRplus Assay（GTplus）试剂盒检测四川地区耐多药结核分枝杆菌（MTB）
株的基因型特征,并初步了解耐药结核病的流行情况。方法选取结核确诊患者105份临床标本和68株临床分离株,应
用GTplus 试剂盒检测MTB耐利福平和异烟肼相关的rpoB、katG、inhA 基因的突变,推测其对利福平和异烟肼的耐药
性。结果151例样本的GTplus结果有效,总耐药率和耐多药率分别为29.14%（44/151）和17.22%（26/151）;耐利福平和
高、低水平耐异烟肼的突变菌株分别为21.85%（33/151）、21.19% (32/151）和3.31%（5/151）;突变型以rpoB S531L、katG
S315T1和inhA C-15T为主。痰标本组的耐多药菌株比率明显高于肺外标本组。结论四川地区MTB耐药形势严峻,尤
以耐多药结核病的情况严重,耐药菌株以rpoB S531L和katG S315T1突变型为主,应推广快速分子药敏试剂盒的临床应
用,快速并提高对耐药结核病的诊断。     

云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征

目的 分析云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌katG和inhA基因突变特征。方法 采用PCR方法对云南省异烟肼耐药结核分枝杆菌进行katG和inhA基因扩增,并将扩增产物进行基因测序后比对分析。结果 88株异烟肼耐药菌株中,耐药基因与表型药敏结果的符合率为82.95%(73/88),katG和inhA基因突变率分别为75.00%(66/88)和9.09%(8/88)。最为常见的基因突变位点为katG315(67.05%)和inhA-15(7.95%),katG315位点基因突变主要表现为Ser315Thr(59.09%,52/88)。耐多药与单耐异烟肼菌株中katG基因突变比例,差异有统计学意义(χ²=4.190,P=0.041),而inhA基因及katG315、inhA-15位点基因突变比例,差异无统计学意义(P> 0.05)。结论 云南省异烟肼耐药以katG315和inhA-15基因突变为主,MDR菌株中katG基因突变率高于异烟肼单耐,目前基于基因突变的分子检测技术是检测异烟肼耐药的有效手段。     

河南省耐多药结核分枝杆菌利福平耐药基因rpoB的突变特征

目的:分析河南省耐多药(MDR)结核分枝杆菌利福平耐药相关基因rpoB的突变特征。方法:收集150株MDR结核分枝杆菌,应用PCR扩增利福平耐药相关基因rpoB编码区全长并测序,以结核分枝杆菌H37Rv标准株DNA序列为参比序列,分析菌株的突变特征。结果:MDR菌株rpoB基因编码区存在突变者占97.2%(140/144),突变在利福平耐药决定区(RRDR)内者占96.5%(139/144),RRDR内和RRDR外同时存在突变者占99.3%(139/140);突变热点依次为rpoB531、rpoB526和rpoB516。发现未被记录的15个突变位点和4个突变类型,其中rpoB1284位点突变可能是多态性位点,与利福平耐药无关。结论:检测河南地区结核分枝杆菌rpoB基因RRDR内位点的突变可预测MDR结核分枝杆菌的耐药性。     

基因芯片检测结核分枝杆菌耐药突变基因的结果分析

目的:用基因芯片检测临床痰液标本中的结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、利福平(RIF)、链霉素(SM)和乙胺丁醇(EMB)的耐药性,并评价其临床应用价值。方法:本基因芯片采用聚合酶链反应(PCR)和反向点杂交相结合的技术,快速完成异烟肼、利福平、链霉素和乙胺丁醇四个结核分枝杆菌耐药基因(katG、inhA、rpoB、rpsL、embB)突变位点的检测。同时以传统药敏试验法作对照。结果:基因芯片法对结核分枝杆菌INH耐药性检测符合率、特异性分别为82.1%、100%;对RFP耐药性检测符合率、特异性分别为94.9%、100%;对SM耐药性检测符合率、特异性分别为76.5%、100%;对EMB耐药性检测符合率、特异性分别为82.6%、100%。结论:基因芯片检测结核分枝杆菌的耐药性能满足临床的快速需要,但基因芯片法检测的抗结核药数量有限,并不能完全取代常规药物敏感性试验,因此基因芯片法可作为快速筛选有效抗结核药的补充。     

结核分枝杆菌耐药基因rpoB.katG.inhA突变快速检测方法研究

目的 通过PCR及芯片杂交技术平台,建立临床样品中结核分枝杆菌及耐药基因突变的快速诊断新方法.方法 根据结核分支杆菌标准株H37Rv序列,我们设计了覆盖rpoB基因81个碱基高变区的5个正常探针和6个可以探测特定突变类型的突变探针,制作膜芯片,并检测临床样品中结核杆菌的基突变情况,以此来判断耐药结果.结果 18个利福平培养耐药中的15个样品都在rpoB基因上检出有突变,利福平耐药突变检出率为83.0%（18/15）;25个利福平敏感样品rpoB基因上都未检出突变.20个异烟肼培养耐药的样品中有16个在katG或inhA基因上检出有突变,异烟肼耐药突变检出率为80.0%（16/20）;25个异烟肼敏感样品katG或inhA基因上都未检出突变.结论 用膜芯片检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼的耐药性,具有较高的特异性和敏感性,可用于临床结核杆菌耐药性检测.并具有快速、简便、敏感的特点.     

rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度的变化

目的 探讨rpoB基因不同突变位点结核分枝杆菌利福平体外最小抑菌浓度(MIC)的变化.方法 收集人型的结核分枝杆菌菌株103株,利用基因芯片法筛选rpoB耐药突变基因菌株.采用绝对浓度法对所有菌株进行不同浓度的利福平药敏试验,观察不同菌株对利福平的MIC.结果 基因芯片共分离出55株rpoB突变株,48株非突变株.突变株MIC值为(459.6±205.8)μg/ml,高于非突变株的(5.0±4.5)μg/ml(P ＜0.05).55株rpoB突变株中突变位点分别为531(C→T)、526(C→G/T)和516(A→G/T),531(C→T)位点突变株的MIC值为(576.0±29.3)μg/ml,均高于516(A→G/T)的(432.9±38.2) μg/ml和526(C→G/T)的(355.5±59.5) μg/ml(P＜0.05),但526(C→G/T)、516(A→G/T)位点突变株的MIC比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 基因芯片检测结核分枝杆菌rpoB基因突变株与其耐药表型相关性较高.不同突变位点的结核杆分枝菌菌株对利福平的耐药程度有差异,可为临床合理用药提供参考.