人类未成熟卵母细胞体外成熟技术的研究进展

随着辅助生殖技术的发展，人类未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation，IVM)技术成为治疗不孕症的新途径．具有广阔的应用前景，是目前生殖医学领域的研究热点。本文就近年来IVM技术的研究进展综述如下.     

人类卵母细胞冷冻的研究进展

随着辅助生殖技术的发展,卵母细胞冷冻技术随之发展起来,但是相对于胚胎冷冻,卵母细胞冷冻在临床上有其局限性,目前冷冻损伤是卵母细胞冷冻保存的主要障碍[1].近年来随着冷冻技术的不断提高和ICSI技术的应用,卵母细胞冷冻效果也有了提高,现就人卵母细胞冻存的影响因素及冷冻现状作一综述.     

人未成熟卵母细胞体外成熟的影响因素

人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)技术已广泛应用于临床,为多囊卵巢综合征(PCOS)患者开辟了一条有效的治疗途径,成为生殖医学领域日益关注的研究热点.     

未成熟卵母细胞体外成熟培养技术研究进展

<正>1935年,Pincus和Enzmanz[1]观察到兔的未成熟卵母细胞在体外培养条件下可以自发完成卵母细胞的成熟过程,自此在生殖领域引入了一个新的概念即卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)。自1991年Cha[2]等报道IVM技术取得第1例妊娠以来,IVM技术已应用于治疗多囊卵巢综合征(PCOS)的不孕,预     

人未成熟卵母细胞体外成熟培养在多囊卵巢综合征不孕妇女中的应用

目的：探讨未成熟卵母细胞体外成熟培养-胚胎移植技术（IVM—ET）在多囊卵巢综合征（PCOS）患者不孕症治疗中的临床应用前景。方法：将39例PCOS不孕妇女分未成熟卵母细胞体外成熟培养（IVM）组和常规体外受精／卵胞浆内单精子显微注射（IVF／ICSI）组。IVM组;11例PCOS患者,用小剂量促性腺激素（Gn）刺激后取未成熟卵母细胞体外培养28h,行卵胞浆内单精子显微注射（ICSI）,继续培养3d后行胚胎移植。IVF／ICSI组：28例PCOS患者,用常规IVF／ICSI技术助孕。结果：IVM组获卵数123枚,体外培养成熟率为82．93％（102／123）,受精率为98．04％（100／102）,卵裂率为92．00％（92／100）,优胚率为39．13％（36／92）,移植10个新鲜胚胎周期,临床妊娠2例,临床妊娠率为2／10,累计妊娠率4／11。与同期28例施行IVF／ICSI的PCOS患者进行比较,其Gn天数、用量、HCG日E2水平、获卵数、优胚率显著低于IVF／ICSI组,差异有统计学意义（P〈0．05）;卵裂率无明显差异（P〉0．05）;种植率、临床妊娠率均低于IVF／ICSI组,但差异无统计学意义（P〉0．05）;IVM组无中重度卵巢过度刺激综合征（OHSS）和自然流产的发生,而IVF／ICSI组中重度OHSS发生率为10．71％（3／28）、自然流产率为3／10,但差异亦无统计学意义（P〉0．05）。结论：IVM技术为PCOS患者的治疗开辟了一条新的途径,同时在减少外源性Gn用量,有效控制卵泡数量和E2水平方面具有明显优势。但对其能否降低OHSS风险以及成功率较低等问题,有待进一步研究。     

激光扫描共聚焦显微镜观察冻存对SHR卵母细胞的影响

目的 冻存未受精的成熟卵母细胞（MII期）比冻存同一品系的处于卵裂期的胚胎更困难。因为卵母细胞的某些内部结构对低温很敏感。本研究的目的是希望能够更有效地观察冻存对卵母细胞的影响。方法 我们运用激光扫描共聚焦显微术（CLSM）的光学切片和三维图像重建技术,研究冻存对自发性高血压大鼠（SHR）卵母细胞的结构,尤其是对纺锤体、染色体的影响,以及冻存对体外受精的影响。结果 我们不仅观察到有的卵母细胞冻存后仍维持着完整的桶状纺锤体以及紧密排列的染色体,而且能观察到卵母细胞内均匀分布着细胞质微管星体。冻存也造成对一些卵母细胞纺锤体和细胞质微管星体的破坏。结论 CLSM能够清晰有效地观察冻存对未受精卵纺锤体、染色体以及胞质微管星体的影响,我们推想冻存后卵母细胞的体外受精率下降与这些结构的受损有关。     

两种未成熟卵母细胞体外成熟培养液的运用效果比较

目的:通过比较自行研配的培养液与商品化培养液在卵母细胞体外成熟中的运用效果,为进一步优化体外成熟培养体系提供依据?方法:分别选择使用自行配制培养液的(IVM-A组)110个周期和使用商品化(IVM-B组)培养液的99个周期,并以同期行ICSI的治疗周期为对照(ICSI-C1和ICSI-C2),比较两组在体外成熟?胚胎发育?胚胎种植?临床妊娠及结局等方面的差异?结果:在两对照ICSI-C1和ICSI-C2各项指标无差异的情况下,IVM-A组体外成熟和胚胎发育等方面均高于IVM-B组,且可移植胚胎率?优质胚胎率明显提高(P < 0.05或P < 0.01),可移植胚胎率已达到ICSI组水平?虽然表面上IVM-A组在胚胎种植率?妊娠率(临床妊娠率)?活产率等指标低于IVM-B组,但不同阶段的对照组其指标明显改变,ICSI-C2(2006年以后)明显好于ICSI-C1?这种差异可能与近年来的临床治疗方案的改善及宫腔镜的使用有关?值得注意的是,IVM-A的流产率只有10.53%,显著低于其他3组,而同期的对照(ICSI-C1)却明显高于ICSI-C2,提示使用自行配制培养液培养的胚胎可显著降低流产的发生?但由于样本量还不够大,结果尚待进一步验证?结论:自行配制的培养液具有较好的运用效果,可能与其中额外添加的mHFF及E2等有关?但系统尚需进一步优化,以保证其高效?安全?价廉?     

人卵巢组织冻存与移植研究进展

随着癌症治疗学的发展,癌症病人的生存率有了很大的提高。但性腺毒性治疗对肿瘤病人的生育力造成了不可逆的影响。有效的保护肿瘤病人的生育力,提高她们的生殖健康水平,是医疗工作者面临的重要问题。卵母细胞冻存、胚胎冻存、卵巢组织冻存等技术的发展是为女性生育力保护提供了可能。本文将简述目前常用的生育力保护方法,重点介绍人卵巢组织冻存与移植技术在生育力保护方面的重要作用。     

三种不同来源人未成熟卵母细胞的体外成熟

目的：探讨三种不同来源的人未成熟卵母细胞体外成熟（IVM）的差异。方法：共获得未成熟卵母细胞1055枚,包括卵丘复合物（OCC）613枚和裸卵（DO）442枚。其中OCC分为自然周期组、孕晚期组和IVM纽;DO分为自然周期组、孕晚期组和超促排卵纽。所有未成熟卵母细胞在IVM培养体系体外培养成熟后,卵母细胞胞浆内单精子注射（ICSI）受精序贯培养,除IVM组行第2或第3天胚胎移植外,其余均培养至囊胚阶段。分别比较OCC和DO各组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率;自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率。结果：OCC：自然周期组、孕晚期组及IVM组的未成熟卵母细胞体外成熟率分别为79．5％、74．3％和82．2％,孕晚期组与IVM周期组相比具有统计学差异;3组成熟卵母细胞受精率、卵裂率及自然周期组和孕晚期组的囊胚形成率相比无统计学差异,IVM组的移植周期妊娠率为20％。DO：自然周期组、孕晚期组及超促排卵组未成熟卵母细胞体外成熟率超促排卵组最高（86．0％）,明显高于自然周期组（74．5％）和孕晚期组（72．7％）,（P〈0．05和〈0．01）。3组未成熟卵母细胞的成熟率、成熟卵母细胞的受精率、卵裂率、囊胚形成率相比未见统计学差异。结论：孕晚期来源的未成熟卵母细胞在体外同样具有发育潜能;孕晚期的卵母细胞可作为一种供卵来源。     

细胞组织冻存方法的改进

体外细胞培养作为重要的实验细胞学手段在生命科学研究的众多领域中已广泛应用。目前,选择液氮作制冷源深低温保存肿瘤细胞已得到普遍认同。我们在传统方法基础上改进了细胞冻存方法,在实际应用中取得了满意效果,现将体会介绍如下。1　细胞冻存方法的改进以膀胱癌EJ细胞为例,人膀胱癌EJ细胞培养在含10%小牛血清的RPMI-1640培养液中,取对数生长期的贴壁细胞,0.25%胰蛋白酶消化3～4min后,用上述培养液进行终止消化,计数细胞数,收集细胞悬液于10ml离心管内,1000r/min离心10min,弃上清,保留细胞。同时配制含10%的冻存保护剂二甲基亚砜(DMSO…     

促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养中的应用

目的 评价卵泡刺激素和人绒毛膜促性腺激素在促排卵周期未成熟卵母细胞体外培养过程中的应用价值。方法 收集控制性超促排卵周期行单精子显微注射(ICSI)过程中得到的未成熟卵母细胞(MⅠ期和GV期), 随机分为加促性腺激素培养组和不加促性腺激素培养组, 培养24~28 h后成熟卵母细胞进行ICSI授精, 并观察胚胎发育情况, 记录成熟率、受精率、卵裂率和优胚率。结果 对于MⅠ期卵母细胞, 是否使用促性腺激素不影响其24 h成熟率、受精率、分裂率和优胚率(P>0.05)。对于GV期卵母细胞, 培养液中加入促性腺激素能提高优质胚胎率(31.3% vs 4.2%, P<0.05), 但两组的成熟率、受精率和卵裂率差异无统计学意义(P>0.05)。结论 控制性超促排卵中获得的未成熟卵母细胞进一步体外培养, 无论是否添加促性腺激素都可自然成熟, 在GV期卵母细胞的体外培养过程加入促性腺激素可获得更高的优胚率。     

哺乳动物卵巢组织的深低温冻存

卵巢组织冻存已作为恢复卵巢功能早衰及保存年轻肿瘤患者卵巢功能的方法之一进行研究。目前该项工作尚处于动物实验阶段。经过大量动物实验,人们建立了两种冷冻程式：慢速冷冻一快速复温法(两步法);快速冷冻一快速复温法。同时对冷冻保护剂作了大量研究。对冻存后卵巢组织活力与功能也找到了相应的评估手段。目前,在自体原位移植冻存羊卵巢组织后,已产下一只健康子代羊。该项技术正日趋成熟,以造福人类。     

核抑制剂(Roscovitine)对促排周期人未成熟卵母细胞体外成熟安全性的初步研究

目的 观察核抑制剂(Roscovitine)对人未成熟卵母细胞体外成熟(in vitro maturation,IVM)安全性的影响.方法 获取促排周期的GV期未成熟卵随机分为两组,实验组(经二步法):未成熟卵母细胞先用含有200 vmol/LRoseovitine的培养液培养6 h,然后转入IVM成熟培养液培养24～36 h;对照组:直接用IVM成熟培养液培养24~36h.观察两组卵母细胞成熟情况并应用激光扫描共聚焦显微镜观察培养成熟后MⅡ期卵母细胞纺锤体和染色体的形态.结果 实验组共获未成熟卵母细胞61个,经体外成熟培养后50个卵成熟,其中39个卵可观察到纺锤体与染色体,纺锤体的形态异常者为15个,染色体异常者11个;对照组共获未成熟卵母细胞60个,经体外成熟培养后43个卵成熟,其中32个卵可观察到染色体与纺锤体,纺锤体形态异常者14个,染色体异常者11个.结论 Roscovitine能可逆性抑制体外培养的人卵母细胞的核成熟,但未对纺锤体及染色体形态产生不良影响.     

不同冷冻方法对小鼠卵母细胞冻存的影响

目的：：探讨不同冷冻方法对小鼠卵母细胞存活率及其发育潜能的影响。方法：采用玻璃化冷冻技术,选取开放式载体与封闭式载体分别冻存带卵丘细胞(COC)或剥除卵丘细胞(OD)的小鼠卵丘复合体,复苏后分别作体外受精,胚胎培养。结果：开放式载体冻存组存活卵数76.79%略高于封闭式载体冻存组72.98%,无统计学意义(P >0.05);两组内 COC 组的卵子存活率显著高于 DO 组,但有统计学差异(P <0.05),COC 组的受精率、囊胚率略高于 DO 组,无统计学差异(P >0.05)。结论：(1)封闭式载体有效避免了潜在的污染问题,但不同载体对卵子存活率无显著影响。(2)卵丘细胞在玻璃化冷冻卵母细胞中可以起到保护作用,并对胚胎后期的发育有一定的改善。     

表皮生长因子促进小鼠未成熟卵母细胞体外成熟的实验研究

目的 了解表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)对小鼠未成熟卵母细胞体外成熟、受精及胚胎发育的影响.方法 将生殖泡(germinal vesicle,GV)期卵母细胞分别在EGF浓度为0(对照)、0.5、1、2.5、5、10 ng/ml的培养液中进行体外培养,观察生殖泡破裂(germinal vesicle breakdown,GVBD)和第一极体(the first polar body,PB1)排出的情况.将达到MⅡ期的卵母细胞进行体外受精,观察原核和胚胎发育情况.结果 EGF浓度为1、2.5、5、10 ng/ml组GVBD发生率高于对照组;EGF浓度2.5、5、10 ng/ml组PB1排出率高于对照组,其中EGF浓度5 ng/ml组的GVBD、PB1发生率最高(P＜0.01).卵母细胞在1、2.5、5、10 ng/ml EGF培养浓度下的退化率低于对照组(P＜0.05,P＜0.01).卵母细胞的体外受精率、2-细胞和4-细胞胚胎的发生率在EGF浓度为5 ng/ml时明显高于对照组(P＜0.01).结论 EGF可促进GV期卵母细胞的成熟,对其受精能力和胚胎发展也有促进作用,也可能有抑制卵母细胞凋亡的作用,而EGF以上作用与剂量有关.     

人类卵母细胞冷冻现状的研究进展

<正>20世纪后半段,人类辅助生殖技术已经显著进步。卵母细胞冷冻是辅助生殖技术领域的一项重要成就。这项技术对于生育期妇女生育力的保存提供了更有效的解决办法。卵母细胞冷冻技术主要有慢速冷冻(slow cooling)和玻璃化冷冻(vitrification)。卵母细胞冷冻前后的细胞质量是评价冷冻方法效果的最基本指标。MⅡ期卵母细胞一般以细胞形态、极体的位置和大小,是否存在细胞质空泡和其他异常情况来评价其细胞的质量。卵母细胞冷冻复苏后的质量关系到胚胎或囊     

冷冻对人类成熟及未成熟卵发展潜能的影响

目的：探索冷冻卵子的成熟时期，方法：将153个生发泡期(GV期)人类卵子分为3组，对照组：体外培养至成熟(MⅡ期)，行单精子胞浆内注射(ICSI)，MⅡ期冷冻组：体外成熟至MⅡ，然后将MⅡ期卵子进行冷冻，解冻后将存活的卵子行ICSI；GV期冷冻组：将GV期卵子进行冷冻，解冻后体外培养至MⅡ，然后再行ICSI．用慢速冷冻快速解冻的方法对成熟的和未成熟的卵子进行冷冻和解冻，观察体外成熟情况、解冻后的存活情况、受精情况及胚胎发育情况，结果：体外成熟率：GV期冷冻组51.2％，对照组为70．0％，有显差异；受精率：3组分别为68、0％、33、3%、42.1％，有显差异．对照组的发展潜能要显优于试验组；GV期冷冻组的存活率、受精率优于MⅡ期冷冻组。结论：冷冻会对卵子的发育潜能有1定的损伤，在GV期进行冷冻可降低这种伤害。     

未成熟卵母细胞体外培养治疗不孕症的临床研究

目的:评价未成熟卵母细胞体外培养成熟(IVM)治疗不孕症的临床价值.方法:40例不孕患者接受54个IVM周期治疗,包括26例难治性多囊卵巢综合征(PCOS)和14例月经周期正常但经其他辅助生育技术失败的患者.测定卵泡早期的性激素、抑制素-A(INH-A)、抑制素-B(INH-B).未经任何药物刺激,于月经周期的9～12 d在超声引导下经阴道对两侧卵巢内的小卵泡进行穿刺获卵.体外培养24～48 h,进行卵胞浆内单精子显微注射(ICSI),18 h后观察受精情况,继续培养24～48 h,直至胚胎移植,移植前行激光辅助孵化.结果:7个周期取消,取消率为13%(7/54).1例生化妊娠,19例临床妊娠,每取卵周期的临床妊娠率为35.2%(19/54),每移植周期的临床妊娠率为40.4%(19/47).47个移植周期共获得未成熟卵母细胞857个,平均每周期18.2个,体外培养48 h后总成熟率为73.7%(632/857),正常受精率为75.3%(476/632),卵裂率为91.2%.妊娠组的获卵数显著多于非妊娠组[(22.4±16.2)个vs(15.2±7.1)个,P＜0.05],取卵日和胚胎移植日的子宫内膜厚度显著大于非妊娠组[(8.0±1.5)cm vs(6.8±0.9)cm;(9.5±1.6)cm vs(8.3±1.3)cm,P＜0.05],但两组患者的年龄、不孕年限、体重指数、基础性激素、INH-A、INH-B各参数相比均无显著性差异.结论:未经药物刺激的IVM技术是治疗不孕症的一种有效方法,获卵数和子宫内膜厚度与成功率有关.