大鼠严重烧伤早期心肌细胞组织化学研究

应用组织化学方法研究了大鼠严重烧伤早期心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ），琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白，ＡＴＰ酶的变化，实验发现，大鼠烧伤后心肌细胞内乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）琥珀酸脱氢酶（ＳＤＨ）及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性在烧伤后２４及４８ｈ明显降低，结果提示烧伤早期出现的心肌收缩功能的改变与心肌细胞内ＬＤＨ，ＳＤＨ及肌球蛋白ＡＴＰ酶活性的改变有重要关系。     

Exendin-4对严重烫伤大鼠早期心肌细胞凋亡的影响

目的了解exendin-4对烫伤大鼠早期心肌细胞凋亡的作用和机制。方法 54只健康成年SD大鼠,随机分为正常对照组(N组,n=6)、单纯烫伤组(S组,n=24)和烫伤加exendin-4组(E组,n=24)。S组和N组大鼠采用30%TBSAⅢ°烫伤模型,伤后按Parkland公式补液抗休克。E组伤后给予exendin-4。采用DNA切口末端标记法(TUNEL)检测左室心肌细胞凋亡;免疫荧光法检测心肌组织caspase-3活性。结果 S组大鼠于伤后6h,心肌细胞凋亡指数即升高,12h达高峰,48h仍显著高于正常对照组;心肌组织caspase-3活性于伤后6h开始增强,12h达高峰,伤后24h仍显著高于N组。E组较S组,在伤后6、12、24、48h大鼠心肌细胞凋亡指数显著降低(P<0.05),心肌组织caspase-3活性在伤后6、12、24h也显著降低(P<0.05)。统计学分析表明心肌细胞凋亡指数与心肌组织caspase-3活性呈显著正相关(P<0.05)。结论 Exdendin-4可抑制烫伤大鼠早期心肌细胞凋亡,其机制可能是通过抑制心肌组织caspase-3活性,从而抑制心肌细胞凋亡。     

川芎嗪对严重烧伤大鼠心肌细胞凋亡的影响

目的:观察川芎嗪(TMP)对烧伤后大鼠心肌细胞凋亡的影响及初步机制探讨.方法 选健康Wistar大鼠50只,随机分为5组,对照组、烧伤组(即B组,造成30%TBSAⅢ度烧伤)、烧伤 TMP组(B TMP组,烫伤后即刻腹腔注射TMP,20mg/kg)、烧伤 SB202190组(B SB组,烫伤后立即注射SB202190,10mg/kg)及烧伤 TMP SB202190组(B TMP SB组).放射免疫法测定TNFα含量,末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞、RT-PCR,免疫组化分析心肌Fas、caspase-8、Bcl-2和Bax基因表达,荧光分析法测定Caspase-3活性.结果 与对照组比较,B组大鼠心肌细胞凋亡指数(17.46±2.45),心肌中TNFα含量,Fas、caspase-8和Bax蛋白水平及caspase-3活性均显著性升高,但Bcl-2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01).B TMP组大鼠心肌TNFα含量、心肌细胞凋亡指数(4.15±0.41),心肌Fas、caspase-8和Bax表达水平及caspase-3活性均显著性低于B组,而Bcl-2蛋白表达水平则显著高于B组(P<0.01).结论 TMP对烧伤后心肌细胞凋亡有较好的抑制作用,其机制可能是TMP通过降低TNFα的生成及调节凋亡相关基因的表达.     

大鼠严重烧伤后早期心肌血流量及其病理学基础研究

目的：了解严重烧伤后早期心肌微循环环境的病理学基础。方法：采用心肌切片苏木素碱性复红苦味酸染色法，以及氢气清除技术测定心肌局部血流量。结果：大鼠严重烧伤后３ｈ心肌缺血性损伤以心肌中层明显，呈“夹心样”变，且左室、右室游离壁及室间隔均出现同样的心肌中层坏死表现。烧伤后３、６、１２ｈ心肌局部血流量明显下降（Ｐ〈０．０５￣０．０１）。结论：严重烧伤后早期心肌损伤病理学特征性表现为心肌收缩带形成，中层“夹     

缺氧复合烧伤血清刺激对新生大鼠心肌细胞粘弹特性影响的初 …

目的：了解烧伤后因缺氧、烧伤血清对心肌细胞骨架的损伤机制及由此而产生的损伤效应和意义。方法：通过心肌细胞骨架免疫组化、骨架蛋白流式细胞术及心肌细胞粘弹性测定技术，动态观察体外培养乳鼠心肌细胞致伤前后的变化。结果：大鼠严重烧伤早期，即可引起心肌细胞弹性下降，骨架蛋白的荧光强度降低，中间丝及部分微管阳性信号减弱，培养心肌细胞呈脱落前征象。结论：心肌细胞骨架对维持心肌细胞的完整性是必需的，细胞骨架损伤可     

严重烧伤大鼠早期心肌组织超微结构的变化

目的 严重烧伤后早期可发生心脏功能紊乱，观察严重烧伤早期大鼠心肌组织超微结构的变化。方法 SD大鼠，造成30％体表面积的Ⅲ度烧伤模型，分别在烧伤后0．5、1、2、6、12h取材，透射电镜下观察超微结构的变化。结果 烧伤后心肌细胞超微结构变化主要发生在细胞器，而细胞膜、心肌纤维和闰盘等未见明显异常。伤后0.5h可见较多线粒体收缩，部分线粒体肿胀；伤后1h肌浆网扩张，心肌细胞线粒体肿胀，部分线粒体嵴弯曲，基质颗粒消失；伤后2、6、12h未见明显加重。内皮细胞在伤后0．5h即有明显变化。结论 严重烧伤后早期心肌组织细胞超微结构的变化主要表现在心肌细胞线粒体和内皮细胞上，多为可逆性变化。     

大鼠严重烧伤后核黄素早期使用对肠源性感染的影响

目的 观察早期使用核黄素对烧伤后肠源性感染发生、发展的影响。方法 采用大鼠３０％Ⅲ度烧伤模型并通过胃肠道管饲产灵菌红素的粘质沙雷氏菌示踪，检测血浆内毒素含量和肠道示踪菌的播散情况，比较核黄素腹腔治疗与单纯烧伤之间的差异。结果 治疗组伤后１２ｈ血浆内毒素含量显著低于烧伤对照组（Ｐ〈０．０１），伤后２４ｈ治疗组肠道示踪菌较对照组在血液、痂下、肾、肺的阳性检出率明显降低（Ｐ〈０．０５）；肺、肾、痂下等组     

大鼠高原严重烧伤后早期多脏器损伤的病理观察

目的探讨高海拨地区大鼠30％Ⅲ度烧伤后多脏器（肝、肾、小肠）损伤程度及病理改变。方法48只大鼠随机分为6组，每组8只，另取8只做为对照组，分别在烧伤后3、6、12、24、48和72h各时相点剖腹取出肝、肾、小肠标本做病理学检查。结果烧伤后3h，肝、肾、小肠即出现明显损伤，持续48，72h。结论大鼠高原严重烧伤后多脏器损伤出现时间早，而且呈持续状态，显然与高原缺氧环境有关。     

新生大鼠心肌细胞培养技巧

0　引言　原代培养心肌细胞作为一种主要的研究模型 ,被广泛应用于心血管研究之中 .我们实验室经过长期尝试 ,摸索出了一些行之有效的方法 ,并积累了一些经验 ,现总结如下 :1　新生大鼠鼠龄的选择　新生大鼠心肌细胞在出生后 3ｄ内具有部分的增殖能力 ,成年大鼠心肌细胞则为终末分化细胞 ,不再具有分裂增殖能力 .因此 ,大鼠出生时间越短 ,其心肌细胞分离后成活率越高 ,越容易贴壁生长 .大量观测表明 ,选择 13ｄ龄大鼠分离其心肌细胞进行原代培养较为理想 .其中尤以半日龄大鼠心肌细胞培养效果最佳 .2　消化酶的选择及使用　新生大鼠心肌细胞…     

大鼠动情周期和妊娠早期子宫内膜组织化学的研究

实验观察了大鼠动情周期和妊娠第3、6、8天子宫表面上皮和腺上皮中糖原、脂类、碱性磷酸酶、酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、非特异性酯酶、琥珀酸脱氢酶和3-β-羟基甾体脱氢酶等的组织化学反应。将糖原、脂类和酶活性的反应强度分为4级。结果发现:在间期,酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶和非特异性酯酶活性最低。糖原和脂类的含量也较低。在动情期的表面上皮中,非特异性酯酶、酸性磷酸酶和琥珀酸脱氢酶的活性增强。提示动情期内膜的糖代谢和脂类代谢开始旺盛。妊娠期,特别是妊娠第6天,糖原和脂类的含量以及酸性磷酸酶、葡萄糖-6-磷酸酶、非特异性酯酶的活性都明显增强,提示胚胎植入所需要的营养物质可能主要来源于子宫表面上皮的糖代谢和脂类代谢。在妊娠第6天表面上皮和腺上皮中碱性磷酸酶活性最低。另外还发现大鼠子宫表面上皮中含有3-β-羟基甾体脱氢酶,其意义有待探讨。     

神经肽Y对大鼠心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的影响

目的:观察不同时限内神经肽Y(NPY)对心肌细胞胞浆及核内游离钙浓度的作用。方法:用Fluo3AM荧光标记细胞内游离钙离子,用NPY(100nmol/L)刺激WISTAR乳鼠心肌细胞,检测0min、5min、10min及24h内心肌细胞胞浆及核内钙离子浓度变化。结果:加入100nmol/LNPY即刻至10min内,心肌细胞胞浆及核内钙含量差异均无显著性。经100nmol/LNPY刺激24h后,心肌细胞胞浆钙含量(16.81±2.1)明显高于对照组(7.45±1.96)(P<0.01),核内钙含量(30.65±4.06)也显著高于对照组(15.64±2.16)(P<0.01)。结论:较长时间的NPY刺激可导致心肌细胞胞浆及核内钙浓度增加。     

糖尿病早期大鼠坐骨神经形态学的实验研究

目的：研究糖尿病早期大鼠周围神经形态学变化，为糖尿病周围神经病变动物模型的确立提供客观依据。方法：采用链脲佐菌素（STZ）诱导大鼠建立糖尿病模型（DM），光镜及电镜下观察大鼠6周末坐骨神经病理形态学变化，并对坐骨神经横切面进行定量分析。结果：DM大鼠6周时坐骨神经出现明显的病理损害。光镜下见坐骨神经有髓鞘神经纤维空泡样变性、轴索肿胀。电镜下见严重脱鞘改变。病理图像分析结果与电镜结果相符。结论：STZ诱导大鼠早期已出现明显的周围神经损害，符合糖尿病周围神经病变（DPN）的病理特点，说明DPN模型建立成功。     

烫伤大鼠血浆神经肽Y含量的变化

为观察大鼠烫伤状态下血浆神经肽Y的含量变化 ,复制大鼠轻、中度和重度烫伤模型 ,分别测定其血浆中NPY的含量。结果 :大鼠烫伤后血浆NPY的含量较正常时明显升高 (P <0 .0 1) ,各组间差异非常显著 ,其升高的程度同烫伤的严重程度有密切关系。结果表明NPY在烫伤的病理生理改变中可能起重要作用。     

Fas系统参与介导烧伤后心肌细胞凋亡及牛磺酸的影响

目的观察Fas系统在烧伤后心肌细胞凋亡中的作用及牛磺酸的影响。方法选健康Wistar大鼠,随机分成对照组(Sham)、烧伤组(造成40%TBSAⅢ度烧伤)和牛磺酸保护组(烫伤后即刻腹腔注射牛磺酸400 mg/kg)。用原位末端标记(TUNEL)法检测凋亡细胞,RT-PCR检测Fas mRNA表达,免疫组化检测Fas/FasL和Caspase-8/3蛋白表达和荧光法分析Caspase-3活性。结果烧伤组大鼠伤后6 h和24 h心肌细胞凋亡指数分别为8.96±2.10和18.67±2.48,较对照组(0.92±0.34)有显著性升高,Fas蛋白阳性表达指数分别为13.51±1.56和14.55±1.89,也显著性高于对照组(2.46±0.75);Caspase-3活性分别为1.38±0.16和1.96±0.71,较对照组(0.35±0.06)有显著性差异。烧伤组凋亡指数与Fas表达之间有良好的相关性(r=0.86)。牛磺酸保护组细胞凋亡指数为2.14±0.68,Fas蛋白表达为3.71±0.82,Fas mRNA表达为0.17±0.03,Caspase-3活性为0.88±0.16,较烧伤组均有显著性降低。结论Fas系统参与了介导烧伤后心肌细胞凋亡,牛磺酸对烧伤后心肌细胞Fas表达及其信号转导有较好的拮抗作用。     

环孢素A对实验大鼠脑缺血治疗作用的组织化学研究

【目的】进一步证实免疫因素在脑缺血病理变化中的作用。【方法】将 6 0只局部脑缺血模型SD大鼠分为缺血 3d ,1周和 2周 3个缺血时间组 ,每组分为生理盐水对照和环孢素A治疗两个部分 ,进行TTC和HE组化染色实验 ,并对结果进行统计处理 (t检验 )。【结果】脑缺血 1周 ,环孢素处理组的组织病理学变化较生理盐水对照组明显减轻 ,脑梗塞体积和死亡的神经元数量在环孢素A处理组分别为 3 2 %和 15 8/ 0 0 6 2 5mm2 ,而生理盐水组则为 5 9%和 2 2 1/ 0 0 6 2 5mm2 ,两组之间有显著差异 (P <0 0 5 )。但在脑缺血 3d和 2周组 ,上述变化两组之间无统计学差异。【结论】环孢素A对实验大鼠的缺血性神经元具有一定保护作用 ,结果提示免疫因素的介入 ,加重了脑缺血性损伤。     

玄参提取物对烧伤大鼠微血管反应性的影响

目的 探讨玄参提取物对烧伤大鼠微血管反应性的影响.方法 将SD大鼠30只随机分为对照组、模型组和玄参提取物组.模型组和玄参提取物组用3％凝固汽油烧伤处理造成大鼠体表面积（BSA）深Ⅱ度烧伤模型,玄参提取物组大鼠给予玄参提取物治疗.观察各组大鼠烧伤后10、15、20和25 min时肠系膜微动脉血管口径和血流速度的变化.结果 玄参提取物组肠系膜微动脉血管口径比模型组明显减少（P＜0.01,P＜0.05）,血液流速明显增快（P＜0.01,P＜0.05）.结论 玄参提取物可明显改善烧伤大鼠肠系膜微循环.     

体外诱导骨髓基质细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的：探讨体外诱导骨髓基质细胞向心肌细胞转化的条件。方法：分离大鼠骨髓，体外培养、传代得到骨髓基质细胞，观察不同浓度的诱导剂5-氮胞苷对骨髓基质细胞的生长和诱导作用，进行形态学和免疫组织化学鉴定。结果：5-氮胞苷诱导骨髓基质细胞转化为心肌样细胞，在诱导后2周转化率为29％。心肌特异性肌钙蛋白T(TnT)免疫组织化学染色阳性。结论：MSCs在体外条件下经5-氮胞苷诱导可分化成心肌样细胞。     

甲状旁腺素对心肌细胞钙离子移动的影响

目的:研究甲状旁腺素(PTH)对心肌细胞钙离子移动的影响及其机制。方法:培养的新生大鼠心肌细胞以荧光指示剂Fluo-3/AM负载,通过激光共聚焦显微镜(LSCM)动态观察不同浓度PTH_(1-34)对培养心肌细胞钙移动的作用,以及细胞外钙和钙拮抗剂的影响。结果:在细胞外Ca~(2+)为2.50mmol/L时,PTH_(1-34)在0.00、0.01、0.10和1.00μmol/L浓度下的刺激可使心肌细胞静息钙荧光强度(FI)分别从48.78±6.70、47.78±6.14、45.58±6.11、51.10±9.33,增高至48.82±6.31(P>0.05)、54.63±3.60(P<0.05)、63.82±9.21(P<0.01)、78.66±10.04(P0.05);如应用10.00μmol/L硝苯地平预处理,则FI从47.42±8.80上升到54.12±5.13(P>0.05)。结论:甲状旁腺素显著增加静息心肌细胞[Ca~(2+)]_i,并呈浓度依赖性,电压依赖性钙通道开放引起的细胞外钙内流为其重要机制之一。     

大鼠骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞的实验研究

目的 采用5-氮杂胞苷(5-aza)诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞。方法 分离培养骨髓间充质干细胞,采用密度为1．073的percoll分离液分离大鼠骨髓间充质干细胞并进行体外培养和连续传代,在第3代细胞以5-氮杂胞苷进行诱导,用免疫组化的方法鉴定心肌特异性肌钙蛋白I的表达。结果 诱导前,骨髓间充质干细胞形态均一,呈多突起扁平形态,诱导后细胞形态发生变化,细胞之间形成连接,排列方向渐趋一致,免疫组化显示表达阳性。结论 5-aza可诱导骨髓间充质干细胞分化成心肌细胞。     

损伤的鼠心肌细胞cTnI和LDH释放浓度和时间关系

目的通过测定培养两天龄大鼠心肌细胞释放的完整肌钙蛋白I(cTnI)分子和乳酸脱氢酶(LDH)的释放,探讨二者释放浓度与时间的关系。方法分别用ELISA法和丙酮酸显色法测定体外培养的两天龄大鼠心肌细胞在不同浓度代谢抑制剂(NaCN)和Ca2+负荷及不同作用时间下cTnI和LDH的释放量。结果与LDH释放相比,相同代谢抑制剂浓度和细胞外Ca2+浓度下,cTnI的释放明显晚于LDH,LDH与cTnI的释放量有显著差异(P<001);cTnI的释放是缓慢的、部分的,cTnI的释放量与代谢抑制剂浓度或细胞外Ca2+呈正相关。结论在化学性缺氧和Ca2+负荷下,完整cTnI分子从受损及死亡的心肌细胞内释放;完整cTnI分子的释放量是心肌细胞重度损伤、死亡的指标,但不是早期指标。