腺嘌呤灌胃联合高磷饮食诱导CKD-MBD大鼠模型的探讨

目的:观察腺嘌呤灌胃联合高磷饮食方法诱导的慢性肾脏病矿物质和骨代谢异常(CKD-MBD)大鼠模型。方法:34只SD大鼠随机分为对照组及模型组,每组17只。实验第1～4周,每日予250 mg/kg腺嘌呤混悬液灌胃及含1.2%高磷饲料喂养,第5～8周腺嘌呤灌胃改为隔日。对照组和模型组灌胃等体积高纯水。共给药8周。8周后杀检取材,苏木精-伊红(HE)、过碘酸雪夫(PAS)染色、马松(Masson)染色法观察两组大鼠肾脏病理,茜素红、HE染色观察主动脉钙化结节形成情况;HE染色观察胫骨组织形态,显微CT(Micro-CT)与CT-AN软件对股骨进行三维分析,检测皮质骨骨形态计量学参数;全自动生化仪测定血钙(Ca)、血磷(P)、血肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、血清全段甲状旁腺激素(iPTH)水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠的Scr、BUN、P和iPTH水平均显著升高(P<0.01),Ca²⁺水平明显降低(P<0.01);模型组肾小球结构紊乱,肾小球基底膜增厚,肾小管扩张,管腔内有积水、炎性细胞的浸润和棕褐色结晶沉积,肾脏血管明显减少,肾脏间质纤维化,有...     

高磷联合腺嘌呤饮食诱导大鼠高转化型肾性骨病模型 的建立与分析

目的探讨高磷联合腺嘌呤制作大鼠慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)模型诱导的骨矿代谢异常。方法雄性3月龄SD大鼠30只,随机分成三组:基础组(Basal)、对照组(Control)、慢性肾病组(CKD),实验持续6周。所有大鼠先饲养两周以适应环境,Basal在实验开始时处死;Control组给予高磷(1.03%)饮食;CKD组前四周给予腺嘌呤(0.75%)和高磷(1.03%)饮食,后两周给予不含腺嘌呤的高磷(1.03%)饮食。所有动物在处死前进行体内双荧光标记。实验结束时,取左侧胫骨上段(proximal tibia metaphometry,PTM)不脱钙包埋,并采用骨组织形态计量学方法分析。结果与Basal组相比:6周高磷饮食的Control组大鼠骨组织未出现静态参数、生长板参数的变化;而动态参数显示矿化沉积率(MAR)、类骨质体积百分数(%OV/BV)明显增加,矿化延迟时间(MLT)明显减少。与Control组相比:CKD组骨小梁面积百分数(%Tb.Ar)、骨小梁数量(Tb.N)显著降低,骨小梁分离度(Tb.Sp)显著性升高;荧光周长百分率(%L.Pm)、矿化沉积率(MAR)、骨形成率(BRF/TV、BRF/BS、BRF/BV)、类骨质周长百分数(%O.Pm)、类骨质面积百分数(%OV/BV)、每毫米成骨细胞数量(Ob.N)、成骨细胞贴壁周长(%Ob.S.Pm)、每毫米破骨细胞数(Oc.N)、破骨细胞贴壁周长(%Oc.S.Pm)、明显升高,MLT与髙磷对照组比无变化,与Basal组比也减少。生长板参数显示:生长板宽度(G.P.Wi)、纵向生长率(L.G.R)明显减少,但是退行细胞高度(D.C.H)没有改变。结论 CKD模型导致骨的变化表现为明显的骨高转换模型,既促进骨形成,也促进骨吸收;最终骨量减少,说明骨吸收大于骨形成。生长板参数G.P.Wi和L.G.R减少,说明此模型对软骨下成骨有抑制作用。     

慢性肾衰竭与血管钙化

终末期肾衰竭患者的病死率远高于与之年龄匹配的普通人群，由于心血管事件造成的死亡占总的死亡原因的50％以上。一些非传统的尿毒症与透析相关的危险因素如贫血、营养不良、高磷血症及高钙磷乘积等，现已被证实参与了慢性肾衰竭（CRF）患者心血管疾病（CVD）的发生与发展。其中钙磷代谢紊乱及与之相关的血管钙化发生率增加受到了广泛的关注，血管钙化与粥样硬化斑块数量、心肌梗死和心脏骤停等心血管事件的发生都呈密切的相关，目前被认为是强有力的心血管病死率和总病死率的预测因素。近年来，我们在心血管钙化方面从文献整理到临床实验研究上做了一些工作，现介绍如下。     

一步法5/6肾切除大鼠加高磷饮食快速建立肾衰竭致血管钙化动物模型法

目的：建立一种慢性肾衰竭快速诱导动脉血管钙化大鼠模型的实验方法,为进一步阐明肾衰竭所致血管钙化发病机制及其防治和新药的研究提供可靠的实验平台。方法：一步法5/6肾切除大鼠同时予以高磷饮食,28d后检测大鼠血清尿素氮、血肌酐、血钙、血磷和血甲状旁腺激素浓度;盐酸萃取法测定胸主动脉血管壁组织钙含量;von Kossa染色光镜下观察胸主动脉血管病理;pQCT仪测试胫骨近端骨密度。结果：大鼠血清尿素氮、血肌酐、血钙、血磷,血甲状旁腺激素和胫骨近端骨密度值,假手术组与正常组之间各项指标差异无统计学意义（P〉0.05）,手术组与假手术组之间各项指标差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：本方法较传统方法相比,具有省时、省力、经济等特点,为慢性肾衰竭引起的心血管钙化研究提供了一个快速可靠的动物模型,为有效新药筛选提供可靠的动物模型。     

高血磷对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响

目的 研究高血磷对慢性肾衰竭大鼠血管钙化的影响。 方法 44只Wistar雄性大鼠分别行5/6肾切除（n=24，模型组）或假手术（n=20，对照组），39只大鼠术后4周开始给予高磷或低磷饮食10周。动物分4组：模型组+高磷饮食(CHP)，模型组+低磷饮食(CLP)，对照组+高磷饮食(NHP)，对照组+低磷饮食(NLP)。高磷饮食配方：磷（P）1.2%, 钙（Ca）1.6%，维生素D 1 IU/kg；低磷饮食配方：P 0.2%, Ca 0.5%，维生素D 1 IU/kg。特定饮食开始（基线）和结束时称体质量；检测Scr、血P、血Ca、1,25(OH)2D3、全段甲状旁腺激素（iPTH）。特定饮食结束时处死大鼠，取胸主动脉组织，采用Von Kossa染色和钙含量测定判断血管钙化程度，同时检测核心结合因子α1（Cbfα-1）mRNA的表达。 结果 术后第4周特定饮食开始时，模型组大鼠Scr水平显著高于对照组大鼠 [（94.4±17.6）比（36.4±0.6）μmol/L，P < 0.05]，余各项指标组间差异无统计学意义。特定饮食10周时，4组间体质量差异无统计学意义；各组各时间点血Ca水平差异均无统计学意义；血1,25(OH)2D3水平除了在NLP组显著增高外，余3组间差异均无统计学意义；CHP组血P和iPTH水平显著增高，出现严重血管钙化、程度3～4级；胸主动脉钙含量明显增高，同时Cbfa-1 mRNA表达显著上调。血P水平对胸主动脉钙含量的影响比iPTH水平更强（β ＝ 0.832>0.267）。血P水平与胸主动脉钙含量、Cbfα-1 mRNA表达量呈直线正相关（r = 0.672～0.73，P < 0.05）。 结论 高血磷是导致慢性肾衰竭大鼠血管钙化的重要因素。 Cbfα-1的表达上调可能是其导致血管钙化的机制之一。     

高磷诱导血管平滑肌细胞钙化的信号通路研究进展

正血管中膜钙化,是动脉血管中膜层钙和磷酸盐病理性沉积的结果,是慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)、糖尿病和老年患者的常见并发症~([1])。血管钙化在CKD患者中广泛存在,是心血管事件的一个重要危险因素,并且与心血管和全因死亡率以及发病率增加相关~([2])。然而,迄今为止,由于只有一些观察性临床研究,而且血管钙化的发生及发展速度缓慢、诊断方法有限,CKD患者血管钙     

慢性肾衰竭患者血管钙化机制的研究进展

慢性肾衰竭（CRF）患者普遍存在着血管钙化；血管钙化的发生是多方面因素共同作用的结果，但确切的病因及发病机制还不明确。血管平滑肌细胞向成骨细胞转分化是血管钙化发生的关键一步；骨调节蛋白，生物活性因子等也参与了血管钙化的发生。本文就CRF患者血管钙化机制的新近研究进展作一综述。     

清氮灌肠液对腺嘌呤所致大鼠慢性肾衰竭模型的影响

目的:观察清氮灌肠液对慢性肾衰竭大鼠Cr、BUN等的影响.方法:以喂饲腺嘌呤方法复制大鼠慢性肾衰竭模型,设立正常组、模型组、清氮灌肠液高剂量组(6.2 g/ml)、清氮灌肠液低剂量组(3.1 g/ml)及西药包醛氧化淀粉对照组,检测各组大鼠血浆Cr、BUN、MMS的含量.结果:清氮灌肠液可显著降低模型大鼠血浆中Cr、BUN、MMS含量.结论:清氮灌肠液可延缓大鼠慢性肾衰竭的进程.     

高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其机制

目的 探讨高镁对高磷诱导血管钙化的影响及其可能的机制.方法 体外原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs),用β甘油磷酸盐(β-GP)诱导钙化.VSMCs细胞被分为4组:对照组、高磷组(10 mmol/L β-GP)、镁干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/LMgSO4)、镁通道抑制剂(2-APB)干预组(10 mmol/L β-GP+3 mmol/L MgSO4+10-4 mol/L 2-APB).采用茜素红染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测细胞钙化情况;酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;RT-PCR法和Western印迹法检测细胞核心结合因子α-1(Cbfα-1)的表达.24只雄性SD大鼠被随机分为3组:对照组(甲基纤维素灌胃+高磷饮食)、血管钙化组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷饮食)、高镁干预组(硫酸腺嘌呤灌胃+高磷高镁饮食).造模成功后测定大鼠主动脉脉搏波速率(PWV);采用yon Kossa染色及邻甲酚酞络合酮比色法检测胸主动脉钙化情况;免疫组织化学方法检测胸主动脉Cbfα-1表达.结果 细胞培养14 d后,与高磷组相比,镁干预组VSMCs钙盐沉积明显减少,ALP活性降低(P＜0.05),Cbfα-1表达下调;2-APB可抑制高镁对VSMCs的保护性作用.Cbfα-1的动态观察结果显示,镁干预组第3天Cbfα-1的表达下调(P＜0.05),其抑制效应随时间延长呈增强趋势.体内实验中,大鼠慢性肾衰竭血管钙化模型制备成功.和体外实验一致,与血管钙化组相比,高镁干预组大鼠血浆镁离子水平明显升高,胸主动脉PWV明显降低(P＜0.05),血管钙盐沉积程度亦明显减轻.免疫组织化学结果显示高镁可明显降低高磷诱导的Cbfα-1表达(P＜0.05).结论 高镁可抑制血管钙化,其机制可能与其抑制VSMCs骨源性分化相关.     

高磷血症导致血管钙化的研究进展

正慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)已成为威胁人类健康的主要疾病之一,心血管疾病(cardiovascular disease,CVD)是CKD患者死亡的主要原因,血管钙化是导致CKD患者心血管死亡率增加的独立危险因素。研究证实高磷血症可致血管钙化、左心室肥厚等心血管并发症,从而增加CKD患者CVD的相关的病死风险。Eddington等[1]对1 203例非透析CKD患者进行前瞻性研究发现,血磷每升高1 mg/dl,心血管死亡风险增加50%。     

OPG对高磷诱导的牛血管平滑肌细胞钙化的作用

目的：研究护骨素（OPG）对高磷诱导的牛血管平滑肌细胞钙化是否具有抑制作用。方法：用含不同磷（Pi）浓度（1.4～2.0mmol/L）的培养基体外培养牛血管平滑肌细胞,观察细胞钙沉积及OPG的表达;在高磷（2.0mmol/L）培养基中加入不同浓度外源性OPG测定细胞钙化值的变化。用甲ó-酚肽络合酮法测定钙化量,BCA法（二喹啉甲酸检测法）测蛋白含量,并以细胞蛋白含量标化钙化量。Western Blotting法测定OPG蛋白表达。结果：（1）培养基磷浓度1.4mmol/L组细胞仅有少量钙沉积,随着培养基磷浓度增高及培养时间的延长,细胞钙沉积增加,第9天时,iP2.0mmol/L组与iP1.4mmol/L组钙沉积[（138.00±12.53）μg/mg protein比（22.67±2.52）μg/mg protein]差异有统计学意义。（2）随着培养基磷浓度增高OPG蛋白表达量相应增加。（3）随着培养基中OPG浓度的增高细胞钙化有减少趋势,OPG浓度50ng/ml和100ng/ml组钙化分别为（82.67±5.79）μg/mg protein、（60.67±7.36）μg/mg protein,与单纯高磷组比较其差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：高磷培养基能诱导血管平滑肌发生钙化和OPG表达,且与磷浓度和作用时间有关,外源性OPG能抑制高磷诱导的细胞钙化的产生,而且这种抑制作用具剂量依赖性。     

帕米膦酸钠对高磷诱发大鼠血管平滑肌细胞钙化的影响

目的 观察高磷对大鼠血管平滑肌细胞（RVSMC）钙化的影响,探讨帕米膦酸钠对RVSMC钙化的保护作用及相关机制。 方法 培养RVSMC细胞融合后,实验分为3组：正常磷对照组（Pi 1.4 mmol/L）、高磷组（Pi 4.5 mmol/L）、不同浓度帕米膦酸钠处理组（Pi 4.5 mmol/L+帕米膦酸钠10-5、10-6、10-7 mol/L）。甲O-酚酞络合酮吸光光度法测定细胞外基质钙含量。BCA法测定蛋白含量,用蛋白含量标化钙含量,同时以von Kossa染色半定量钙化情况。Western印迹检测不同组细胞的转录因子核心结合因子α1（cbfα-1）、骨钙素的表达量。 结果 培养3 d后,与高磷组相比,帕米膦酸钠干预组细胞外基质钙含量均显著减少（均P < 0.05）;von Kossa染色显示帕米膦酸钠干预组钙质沉积（黑色颗粒）亦显著减少。Western印迹显示,培养3 d后帕米膦酸钠处理组cbfα-1、骨钙素的表达量均较高磷组显著减少（均P < 0．05）。 结论 帕米膦酸钠对高磷诱导的RVSMC钙化有保护作用,此作用可能与其阻断RVSMC向成骨细胞转化有关。     

高磷和肿瘤坏死因子α对大鼠血管平滑肌细胞体外钙化的作用

心血管疾病是终末期肾病(ESRD)患者最主要的并发症和死亡原因.临床研究显示高血磷、慢性炎性反应可能是ESRD患者心血管钙化的主要危险因素.     

海藻酸对腺嘌呤所致慢性肾衰竭的保护作用

用大剂量腺嘌呤饲养大鼠可致肾小管变性、坏死、脱落 ,肾小球破坏 ,数量减少。表现代谢紊乱 ,氮质血症 ,尿毒症毒素在体内潴留 ,与人体慢性肾衰竭类似〔1〕。我们初步观察了海藻酸 (ＡＬＧ)对腺嘌呤诱导慢性肾衰竭的作用 ,现报道如下。材料与方法1　材料　Ｌｅｗｉｓ纯系大鼠 ,雄性 ,本单位动物室提供 ,体重约 2 0 0ｇ ,腺嘌呤为上海生物化学研究所分装进口试剂 ,ＡＬＧ钠盐为永嘉精细化工厂产品。2　实验方法2 .1　分组与饲养　雄性大鼠 32只随机分 4组 ,每组 8只 ,即空白对照组 (Ａ组 )、腺嘌呤组 (Ｂ组 )、腺嘌呤加小剂量ＡＬＧ组 (Ｃ组 …     

腺嘌呤致雄性不育和慢性肾衰大鼠模型的相关性研究

目的　探讨腺嘌呤致雄性不育大鼠模型的机制。方法　用含 0 .75 %的腺嘌呤饲料饲喂大鼠 15天 ,在实验第 30天、第 6 0天检测血中FSH、LH、T、黄嘌呤氧化酶 (XOD)、尿素氮 (BUN)、肌酐 (Scr)的含量。结果　FSH在第 6 0天显著性升高 ,与对照组相比 (P <0 .0 1) ;T进行性下降 (P <0 .0 1) ;XOD在第 6 0天较第 30天显著性升高 (P<0 .0 1) ;BUN、Scr进行性升高 (P <0 .0 1)。第 30天XOD的升高与T的下降呈直线负相关 (r=- 0 .98,P <0 .0 1) ;在第 6 0天 ,Scr的升高与FSH的升高呈直线正相关 (r=0 .91,P <0 .0 1) ,Scr的升高与T的下降呈直线负相关 (r=- 0 .96 ,P <0 .0 1)。结论　在慢性肾衰早期 ,T的下降可能与XOD反应产生氧自由基的损害有关 ;而在慢性肾衰晚期 ,进展性的肾功能不全则引起FSH的升高 ,T的下降。     

复方鳖甲软肝片防治大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭作用的实验研究

目的:观察复方鳖甲软肝片对大鼠腺嘌呤性慢性肾衰竭的防治作用.方法:将SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、尿毒清组、复方鳖甲软肝片小、中、大剂量组.尿毒清组、复方鳖甲软肝片小、中、大剂量组,以200 mg/kg的腺嘌呤及尿毒清组、复方鳖甲软肝片不同剂量灌胃,共4周,在第2周和第4周时留取24 h尿液、称重,第4周处死大鼠,取血、留取肾组织.测定尿、血Ca2 、P3-及Scr、BUN,用SPSS 11.0进行统计学处理.结果:复方鳖甲软肝片组与模型组比较,慢性肾衰竭大鼠的尿、血Ca2 、P3-及Scr、BUN有不同程度的改善.结论:复方鳖甲软肝片对腺嘌呤性大鼠慢性肾衰竭有一定的防治作用.     

慢性肾脏病血管钙化的研究进展

心血管疾病（CVD）是慢性肾脏病（CKD）患者的主要并发症之一,血管钙化是透析患者心血管事件发生率和死亡率增加的重要危险因素。血管钙化实际上是血管平滑肌细胞发生骨样变化的主动调节过程。目前认为血管钙化的机制和调节包括血管平滑肌细胞的损伤、凋亡和囊泡的释放;血管平滑肌细胞的表型改变;血管钙化抑制物的减少;血管钙化的诱导和循环核复合物形成等五个方面。对血管钙化进展的研究将为防治CKD患者的心血管疾病提供了新的前景。     

慢性肾脏病患者的血管钙化

慢性肾脏病(CKD)患者钙磷代谢紊乱的临床意义在于它是一种全身性代谢紊乱,影响软组织和皮肤,特别是血管和心瓣膜,透析患者半数死于心血管疾病.     

金属蛋白酶1组织抑制剂在慢性肾衰竭大鼠钙化动脉中的表达

目的 探讨金属蛋白酶1组织抑制剂（TIMP-1）是否参与慢性肾衰竭大鼠动脉钙化形成。 方法 雄性Wistar大鼠按随机数字表法分组,其中健康对照组8只,实验组36只。用2%腺嘌呤250 mg&#8226;kg－1&#8226;d－1灌胃制备动脉钙化模型。von Kossa染色观察主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉钙化情况。RT-PCR和Western印迹检测主动脉TIMP-1表达。免疫组织化学方法检测TIMP-1、骨桥蛋白（OPN）、核心结合因子α1（Cbfα-1）在主动脉的表达。 结果 实验组大鼠给药2周后出现明显慢性肾衰竭表现,BUN、Scr、血磷、钙磷乘积和全段甲状旁腺素（iPTH）显著高于对照组（P < 0.01）;给药6周后主动脉、股动脉、肾动脉和冠状动脉中层出现不同程度的钙化。RT-PCR和Western印迹结果显示,实验组大鼠主动脉TIMP-1表达较对照组上调（P < 0.05）,随时间延长呈上升趋势。免疫组化的结果显示,给药后第2、4、6、8周主动脉平滑肌细胞TIMP-1蛋白表达均显著高于对照组（P < 0.05）;钙化主动脉出现Cbfα-1的阳性表达;OPN表达显著增多（P < 0.01)。TIMP-1的表达和OPN及Cbfα-1表达均呈正相关（r = 0.317,P = 0.000;r = 0.485,P = 0.000）。 结论 大鼠腺嘌呤肾衰竭模型血管钙化的病理变化与人类慢性肾衰竭血管钙化相似,是研究慢性肾衰竭血管钙化周期较短、较好的动物模型。TIMP-1高表达和慢性肾衰竭动脉血管钙化相关。     

部分肾切除加高磷饮食所致大鼠肾性骨病模型研究

目的 :探讨一种新的肾性骨病大鼠模型制作方法。方法 :采用 3/ 4肾切除加高磷饮食 6月动态观察肾功能、骨代谢指标及骨病理改变。结果 :模型组血尿素氮、肌酐、磷、甲状旁腺素进行性升高 ,钙进行性降低 ,骨代谢指标血清碱性磷酸酶、骨钙素、尿脱氧吡啶酚显著升高 ,骨病理改变与人肾性骨病相似。结论 :3/ 4肾切除加高磷饮食是一种较为理想的肾性骨病大鼠模型的制备方法