脂质体介导核因子-kappaB诱捕物寡聚脱氧核苷酸对重症急性胰腺炎大鼠胰腺炎症因子mRNA表达和胰腺损伤的影响

目的探讨脂质体(liposome)介导核因子-κB(nuclear factor κB,NF-κB)诱捕物(decoy)寡聚脱氧核苷酸(ODN)对重症急性胰腺炎大鼠胰腺NF-κB活性及受其调控炎症因子基因mRNA表达和胰腺损伤的影响.方法除假手术组(n=10)外,其余SD大鼠以牛磺胆酸钠(STC)诱导建立重症急性胰腺炎模型后,分别于建模后1 h静脉注射裸ODN(n=10)、脂质体/decoy ODN复合物(n=10)、脂质体/scrambled ODN复合物(n=10)和生理盐水(n=10),注射4 h应用电泳迁移率变动分析(EMSA)NF-κB的活性,利用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测胰腺组织ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α,VCAM-1 mRNA表达,同时检测血淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织髓过氧化物酶(MPO).结果EMSA显示,脂质体/decoy ODN复合物组NF-κB活性明显低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(P＜0.05).RT-PCR结果显示,脂质体/decoy ODN复合物组ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA表达低于生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组,均有显著性差异(ICAM-10.75±0.13 vs 1.39±0.15,1.37±0.16,1.32±0.17,P＜0.05;IL-1α0.64±0.09 vs 1.34±0.20,1.30±0.14,1.25±0.20,P＜0.05;IL-20.23±0.08vs 0.74±0.13,0.71±0.12,0.69±0.14,P＜0.05;TNF-α0.41±0.13 vs 1.30±0.17,1.26±0.17,1.23±0.20,P＜0.05;VCAM-10.21±0.06 vs 0.68±0.13,0.69±0.15,0.63±0.13,P＜0.05).与生理盐水组、脂质体/scrambled ODN复合物组和裸ODN组相比,脂质体/decoy ODN复合物组淀粉酶、胰腺组织湿/干重比率和胰腺组织MPO活性显著性降低(淀粉酶50931.85±22432.15 nkat/L vs 188024.26±38659.56,188412.68±37988.26,183119.95±33636.23nkat/L,all P＜0.05;湿/干重比率5.76±0.20 vs 6.77±0.18,6.72±0.18,6.35±0.12,P＜0.05;MPO活性46.68±3.00 nkat/g vs 99.02±2.50,98.19±2.83,98.52±2.50 nkat/g,P＜0.05).结论NF-κB decoy ODN可特异性抑制胰腺NF-κB活性及其调控的炎症因子ICAM-1,IL-1α,IL-2,TNF-α和VCAM-1 mRNA的表达,减轻胰腺损害.     

PDTC对重症急性胰腺炎胰腺腺泡细胞NF-κB活性与血液炎症因子的影响

目的通过检测胰腺腺泡细胞核转录因子(NF-κB)活性及血液IL-2、IL-6、IL-10、TNFα及ICAM-1含量的变化,探讨吡咯烷二硫代氨基甲酸脂(PDTC)对重症急性胰腺炎(SAP)胰腺腺泡细胞NF-κB活性和血液炎症细胞因子的影响。方法采用5%牛磺胆酸钠胰管逆行注射制备SAP动物模型。SD雄性大鼠40只,按随机分配原则分为SAP( )PDTC治疗组和SAP(-)空白对照组。采用EMSA法检测胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性、Western-blotting法检测胰腺腺泡细胞胞质IκBa抑制活性及ELISA法检测血液IL-2、IL-6、IL-10、TNFα及ICAM-1含量。结果PDTC在1h、3h、5h及7h均可显著抑制SAP胰腺腺泡细胞胞核NF-κB活性(22.47±5.39 vs 31.36±5.72、27.92±4.75 vs 39.44±6.31、23.77±3.95 vs 33.80±5.96及19.78±3.48 vs 25.69±4.91)(P<0.01);显著增强SAP胰腺腺泡细胞胞质IκBa活性(8.55±1.26 vs 6.37±1.19、7.31±1.36 vs 5.91±1.65、9.53±1.73 vs 6.85±1.37及9.19±1.48 vs .97±0.86)(P<0.01);显著抑制血液中炎症细胞因子IL-2、IL-6、IL-10、TNFα及ICAM-1活性(P<0.05)。结论吡咯烷二硫代氨基甲酸酯可通过抑制SAP胰腺腺泡细胞NF-κB活性,增加胰腺腺泡细胞胞质IκBa抑制活性的能力,减少血液中炎症细胞因子活性,从而抑制SAP引起的过度炎症反应。     

核因子-κB在大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织的表达及其意义

目的:观察大鼠实验性溃疡性结肠炎肠组织核因子-κB(NF-kB)及TNF-α、ICAM-1的表达,探讨NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中的作用.方法:采用三硝基苯磺酸(TNBS)制备大鼠溃疡性结肠炎模型,设正常组、生理盐水组及轻、重模型组共4组.采用免疫组织化学染色检测肠组织NF-κB、TNF-α和ICAM-1表达,生化方法检测MPO含量,并分析NF-κB活性与肠道病理损伤指数、MPO含量、TNF-α及ICAM-1表达的关系.结果:溃疡性结肠炎大鼠肠组织中NF-κB活性,TNF-α、ICAM-1表达及MPO含量较正常组及生理盐水组显著增高(NF-κB:52.14±9.81、30.26±10.20,60.73±13.41、45.24±10.86 vs13.31±4.76、16.95±6.83,11.61±4.85、14.10±5.76;TNF-α:74.50±11.20、48.11±5.95,84.09±14.52、53.40±8.79vs16.99±5.48、20.04±6.76,10.13±1.79、16.03±6.21;ICAM-1:68.15±7.25、44.34±7.54,77.69±8.09、47.01±8.82vs15.34±4.03、17.50±6.95,10.33±2.38、13.41±4.91;MPO:1.69±0.11,0.71±0.06vs0.39±0.07,0.31±0.08;P＜0.01),且在病情严重组增高尤为明显.NF-κB表达水平与TNF-α和ICAM-1阳性细胞密度、MPO含量、肠道病理损伤指数呈显著正相关关系(r分别为0.9 304,0.8 680,0.6 865,0.9 292,0.8 462;P＜0.001或P＜0.005).结论:NF-κB在溃疡性结肠炎发病过程中可能起重要作用.     

大鼠急性坏死性胰腺炎NF-κB的变化及乌司他丁的调控作用

目的:探讨乌司他丁对急性坏死性胰腺炎大鼠核因子-κ B(NF-κB)的表达及有关细胞因子的影响．方法:将30只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组(SO 组)、急性坏死性胰腺炎组(ANP组)和急性坏死性胰腺炎乌司他丁治疗组(UTI组),比较各组大鼠NF-κB、IL-6、 TNF-α、血清淀粉酶的水平．结果:ANP组淀粉酶活性195 907．51±38 618．39 nkat／L, TNF-α值41.37±7．54 ng／L,IL-6值32．32±8．62 ng/L,肺、胰腺组织NF-κB表达增加,与SO组比较P均<0．01,乌司他丁治疗后,淀粉酶活性69 804．30±19 432．55 nkat／L,TNF-α值 18．66±6．45 ng／L,IL-6值23．41±7．65 ng／L,肺、胰腺组织NF- κB表达降低,与SO组和ANP组比较P均<0．01．结论:急性坏死性胰腺炎时NF-κB活化,上调IL-6、TNF-α, 加重胰腺及肺的损伤,乌司他丁抑制NF-κB表达而减轻胰腺及肺的损伤,改善急性坏死性胰腺炎的预后．     

抗氧化剂对急性胰腺炎大鼠核因子-κB和一氧化氮合酶的影响

目的:探讨抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对急性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB(nuclear factorkappa B,NF-κB)和诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响.方法:♂SD大鼠95只,随机分成正常对照组(C组,25只)、急性胰腺炎组(A组,35只)和NAC干预组(N组,35只).A组分2次腹腔内注射8 g/L的L-精氨酸(L-arginine,L-Arg)1.2 mg/g诱导急性坏死性胰腺炎(acute necrotizing pancreatitis,ANP)模型;C组同法腹腔内注射等量生理盐水;N组先提前1h腹腔内注射0.5 mol/L的NAC0.05 mg/g,然后同A组方法诱导ANP.在首次注射L-Arg后于6,12,24,36,48 h 5个时点分批处死大鼠,检测胰腺NF-κB及iNOS活性.结果:N组NF-κB浓度在ANP早期比A组的明显降低(10.4±2.3 vs 89.7±6.4,6.8±3.2 vs 21.5±3.5,7.9±3.4 vs32.5±4.5,5.4±2.7vs 14.7±5.2,5.0±3.7vs 11.1±2.3,P＜0.05及P＜0.01).A组各时点iNOS明显升高,N组各时点iNOS活性均较A组的明显下降(15.2±4.0 vs24.2±3.8,28.3±8.0 vs 36.8±6.0,25.2±3.8 vs30.5±3.5,21.2±3.7 vs 28.7±7.2,18.8±5.5 vs28.2±4.2,P＜0.05及P＜0.01).结论:抗氧化剂可通过抑制NF-κB的激活而抑制iNOS的表达.     

核因子-κB在急性胰腺炎中的激活及NBD多肽的干预作用

目的:探讨核因子-κB(nuclear factor-kappaB.NF-KB),及活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)在大鼠SAP发病过程中的作用:并观察NF-κB必需调节蛋白结合域(NF-κB essential modifier binding domain,NBD)多肽对大鼠SAP的干预作用.方法:逆行胰胆管内注射50 g/L牛磺胆酸钠(1mL/kg)制备大鼠SAP模型.大鼠64R,随机分成4组:假手术组,SAP组,TAT-NBD(WT)多肽组和TAT-NBD(MT)多肽组.术后6,12 h处死大鼠,观察胰腺组织病理、血清淀粉酶和胰腺组织NF-κB P65蛋白的变化.检测胰腺组织MDA含量及T-SOD活力.结果:与假手术组比较,SAP模型组6,12 h大鼠NF-κB P65蛋白表达显著升高(49.3±2.2vs 4.3±1.4,65.8±1.8 vs 5.0±1.3,均P<0.05);MDA生成增加(212.7±12.5 vs 87.7±7.5,296.8±13.3 vs 96.2±8.3,均P<0.05),T-SOD活力下降(88±10 vs 183±10,65±7 vs 194±10,均P<0.05);与SAP模型组比较,TAT-NBD(WT)多肽预处理6,12 h后,NF-κB P65蛋白表达(25.9±2.3,38.9±2.6)显著降低(P<0.05),MDA生成(102.5±10.4,164.5±12.2)降低(P<0.05);T-SOD活力(153±11,168±12)增加(P<0.05),胰腺病理学评分下降(5.04±0.41 vs 8.71±0.45,5.45±0.34 vs 10.31±1.23,均P<0.05),淀粉酶无明显变化.TAT-NBD(MT)多肽组上述指标均无明显变化.结论:SAP时大鼠胰腺组织的NF-κB过度激活,活性氧簇生成增加;NBD多肽预处理可以抑制NF-κB过度活化,减少活性氧簇生成,减轻胰腺局部炎症损伤.     

急性胰腺炎大鼠肝脏核因子κB活化与肝损伤的关系

目的:观察急性胰腺炎大鼠肝脏中核因子κB(nuclear factorkappa B,F-κB)的活化及其与肝损伤之间的关系.方法:Wistar大鼠72只,随机分为3组:急性胰腺炎组(AP),急性胰腺炎PDTC处理组(APP),假手术组(SO).分别于术后3,,12,4 h检测肝组织中NF-κB活性、血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)、淀粉酶(AMS)水平,并观察肝脏及胰腺病理改变.结果:SO组术后未见NF-κB活化,血浆ALT及肝脏病理无显著变化.与SO组相比,P组术后3～6 h NF-κB活性显著增加(3.13±0.57 vs 0.71±0.10,.92±0.26 vs 0.67±0.11,＜0.01),血浆ALT在3～24 h也显著高于SO组(1.1±0.2 vs 0.7±0.09,.6±0.2 vs 0.7±0.1,.4±0.4 vs 0.7±0.09,.5±0.7vs 0.8±0.1,＜0.01),肝组织病理改变明显重于SO组.在运用了NF-κB抑制剂PDTC的APP组,F-κB活性显著低于AP组(1.85±0.38 vs 3.13±0.57,.36±0.22 vs 1.92±0.26,＜0.01),血浆ALT较AP组也有了显著下降(1.2±0.2,s 1.6±0.2,.7±0.2 vs 2.4±0.4,.1±0.4 vs 3.5±0.7,＜0.01或P＜0.05)肝脏病理改变较AP组也有明显减轻.结论:急性胰腺炎大鼠肝组织中存在着NF-κB的显著活化,活化的NF-κB参与了肝损伤的发生.     

NBD多肽对大鼠急性坏死性胰腺炎的影响

(76±6.7)ng/L、(387±67)ng/L、8.71±0.45、(49.26±2.15)%;多肽预处理后血清TNF-α和IL-6水平、胰腺病理分值、NF-κB p65蛋白阳性表达率分别为(48±4.5)ng/L、(295±48)ng/L、6.76±0.26、(37.46±1.68)%,两组相差均非常显著(P＜0.05).结论 NBD多肽预处理可抑制ANP大鼠胰腺组织NF-κB的过度活化,下调炎症因子TNF-α、IL-6的表达,减轻胰腺损伤.     

核因子-κB在高脂饮食诱导的大鼠胰腺损伤中的作用

目的 研究长期高脂饮食诱导的大鼠胰腺损伤及核因子-κB(NF-gB)在其发病机制中的作用.方法 雄性Wistar大鼠14只分为高脂组和正常对照组,分别给予正常饮食和高脂饮食喂养20周.检测血清三酰甘油、总胆固醇及淀粉酶、脂肪酶、葡萄糖水平;常规HE染色观察胰腺病理改变;透射电镜观察胰腺超微结构改变;苦味酸-天狼猩红染色观察胶原形成;免疫组织化学染色检测NF-κB/p65、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)和α-平滑肌动蛋白(α-SMA)表达; R-PCR法检测胰腺组织中NF-κB/p65、ICAM-1、TNF-α、α-SMA mRNA水平.结果 高脂组大鼠喂养2周后即出现高脂血症,20周末,高脂组大鼠血清三酰甘油和总胆固醇均高于对照组(P＜0.01).20周后高脂组大鼠胰腺组织腺泡细胞萎缩、空泡变性;内质网明显扩张,血管内皮细胞间隙增宽,血管内皮断续;胰腺组织内有胶原形成.高脂组大鼠胰腺NF-κB/p65、ICAM-1和α-SMA蛋白高表达;高脂组大鼠NF-gB/p65、ICAM-1、TNF-α、α-SMAmRNA水平均较对照组明显增高(P＜0.05或P＜0.01).结论 长期高脂饮食可引起高脂血症和胰腺组织损伤,其分子机制与NF-κB活化及其下游分子的表达增强有关.     

核因子-κB激活在大鼠冠状动脉微栓塞后的心肌组织中的作用及机制

目的 探讨核因子-κB(NF-κB)激活在冠状动脉微栓塞(CME)后心肌组织中的作用及机制.方法 清洁级雄性SD大鼠88只,其中64只经左心窜内注射自体微血栓、同时短暂夹闭主动脉建立大鼠CME模型后,随机分为未治疗组及二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)干预组,分别于术后1、3、7、14 d处死;余24只为假手术组.电泳迁移率改变分析(EMSA)检测不同时间点心肌组织NF-κB DNA结合活性,Western blot测定肿瘤坏死因子α(TNFα)、白细胞介素-6(IL-6)及细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达水平,实时聚合酶链式反应检测TNFα、IL-6及ICAM-1 mRNA 表达含量.结果 NF-κB DNA结合活性在CME后1 d增高,3 d时达到高峰;7 d时明显降低,14 d时与假手术组无显著性差异.CME组在不同观察时间点心肌TNFα、IL-6、ICAM-1蛋白及基因的表达较假手术组均明显增强(P＜0.05).NF-κB DNA结合活性与TNFα、IL-6、ICAM-13种细胞因子的mRNA表达水平均呈显著正相关(分别是r=0.72,P＜0.05;r=0.94,P＜0.01;r=0.62,P＜0.05).NF-κB特异性抑制剂PDTC干预显著抑制CME后心肌中TNFα、IL-6及ICAM-1蛋白及mRNA的表达(P均＜0.05),同时也改善心功能.结论 CME后NF-κB激活促使炎性因子TNFα、IL-6、ICAM-1在基因及蛋白水平明显上调,是诱导CME心肌炎症反应、心功能减低的重要早期事件.     

沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响

目的探讨沙格列汀对ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤及miR-590/TLR4/NF-κB表达的影响。方法培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并分为对照组、ox-LDL组、沙格列汀组、沙格列汀+miR-590抑制物组、NC模拟物组、miR-590模拟物组、NC抑制物组、miR-590抑制物组。检测细胞的增殖活力、细胞中miR-590/TLR4/NF-κB表达量及培养基中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)的含量。结果 ox-LDL组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于对照组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于对照组;沙格列汀组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于ox-LDL组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显高于ox-LDL组;沙格列汀+miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于沙格列汀组,细胞增殖活性及细胞中miR-590的表达量明显低于沙格列汀组;miR-590模拟物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显低于NC模拟物组,miR-590抑制物组细胞中TLR4、NF-κB p65的表达量及培养基中TNF-α、IL-1β、ICAM-1、VCAM-1的含量均明显高于NC抑制物组。结论沙格列汀能够通过miR-590/TLR4/NF-κB通路减轻ox-LDL诱导的血管内皮细胞损伤。     

二苯乙烯苷对急性酒精性肝损伤小鼠炎症相关因子的影响

目的:研究二苯乙烯苷(tetrahydroxystilbene glucoside,TSG)对急性酒精性肝损伤小鼠炎症相关因子的影响.方法:将昆明种小鼠随机分为正常对照组、模型组、TSG低剂量组(30mg/kg)、TSG高剂量组(60mg/kg)、水飞蓟宾组(50mg/kg);采用白酒灌胃的方式建立小鼠急性酒精性肝损伤模型.光学显微镜观察小鼠肝脏病理变化,采用ELISA法检测各组小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α、白介素1β(interleukin1β,IL-1β)、IL-6的含量,鲎试剂终点显色法检测小鼠血浆内毒素水平,Real-timePCR法检测肝脏组织TNF-α和iNOS基因表达,Westernblot法检测肝脏组织IκB-α磷酸化水平和NF-κB核移位程度.结果:与正常对照组比较,模型组小鼠肝索排列紊乱,肝脏出现明显的脂肪变性,血清TNF-α、IL-1β、IL-6的含量和血浆内毒素水平均显著升高,TNF-α和iNOS基因表达上调,IκB-α磷酸化水平升高和NF-κB核移位增多,差异具有统计学意义[TNF-α:128.5pg/mL±20.7pg/mLvs45.2pg/mL±14.2pg/mL;IL-1β:71.8pg/mL±9.1pg/mLvs33.1pg/mL±9.5pg/mL;IL-6:59.8pg/mL±13.1pg/mLvs23.7pg/mL±5.9pg/mL;endotoxin:0.35EU/mL±0.09EU/mLvs0.11EU/mL±0.03EU/mL.TNF-α mRNA:1.33±0.11vs0.63±0.10;iNOS mRNA:0.85±0.09vs0.40±0.07;phospho-IκB-α:2.02±0.14vs0.92±0.19;NF-κB P65:1.10±0.14vs0.44±0.13,P<0.05或P<0.01];给予TSG后,小鼠肝脏组织脂肪变性减少,各组小鼠血清TNF-α、IL-1β、IL-6的含量和血浆内毒素水平均明显降低;肝脏组织TNF-α和iNOS基因表达下调,同时IκB-α磷酸化水平和NF-κB核移位减少,差异具有统计学意义[TSG60mg/kg group:TNF-α:65.9pg/mL±13.9pg/mLvs128.5pg/mL±20.7pg/mL;IL-1β:43.0pg/mL±7.1pg/m Lvs 71.8pg/mL±9.1pg/mL;IL-6:36.3pg/mL±10.1pg/mL vs 59.8pg/mL±13.1pg/mL;endotoxin:0.20EU/mL±0.05EU/mL vs 0.35EU/mL±0.09EU/mL;TNF-α mRNA:0.79±0.09vs1.33±0.11;iNOS mRNA:0.53±0.10vs0.85±0.09;phospho-IκB-α:1.35±0.32vs2.02±0.14;NF-κB P65:0.62±0.05vs1.10±0.14,P<0.05或P<0.01].结论:TSG对小鼠急性酒精性肝损伤有良好的保护作用,其机制可能是通过抑制内毒素引起的Kupffer细胞激活,进而抑制下游核因子NF-κB的激活,减少炎性反应级联放大的触发机制,从而产生肝功能保护作用.     

核因子-κB在重症急性胰腺炎肺损伤发病机制中的作用

目的探讨核因子-κB(nuclear factor-kappa B,NF-κB)在重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤发病机制中的作用.方法66只雌性Wistar大鼠随机分为正常组、SAP组、PDTC(二硫代氨基甲酸吡咯烷)预处理组三组.SAP模型采用5%的牛磺胆酸钠1 ml/kg胰胆管内逆行注射方法建立.PDTC预处理组在建立SAP模型前1 h腹腔内注射PDTC100ml/kg.后两组分别在3、6、12 h三个时相点将动物处死后(各10只),留取肺组织.应用SP免疫组化方法检测SAP肺组织NF-κB表达情况,运用RT-PCR的方法检测肺组织TNFα、IL-6、ICAM-1 mRNA的表达,并测定肺组织湿/干比值作为肺损伤的指标.结果SAP组肺组织湿/干比值除3 h与正常组相比无差异外,其余各组与正常对照组之间有显著性差异(P＜0.05),肺组织内可见NF-κB活化的中性粒细胞浸润,且肺组织TNFα、IL-6、ICAM-1mRNA表达增加.PDTC预处理组肺组织湿/干比值明显降低,NF-κB活化的中性粒细胞明显减少,TNFa、IL-6、ICAM-1 mRNA表达水平显著降低.结论SAP时存在肺损伤,肺组织NF-κB活化并通过促进TNFa、IL-6、ICAM-1 mRNA的表达而参与肺损伤.     

风湿性心脏病慢性心房颤动患者心房肌细胞核因子-κB、细胞间黏附分子-1及血管间黏附分子-1表达水平的研究

目的 研究风湿性心脏病伴或不伴慢性心房颤动(简称房颤)患者右心房心肌细胞核因子-κB(NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)及血管间黏附分子-1(VCAM-1)的表达,探讨房颤与NF-κB、ICAM-1及VCAM-1表达之间的关系.方法 将26例风湿性心瓣膜病患者分为两组,其中窦性心律(简称窦律)组10例、慢性房颤组16例,术中获取右心耳组织,分别进行苏木素-伊红(HE)和Masson染色,观察炎性细胞浸润和心肌纤维化程度.采用免疫组织化学染色法测定心肌细胞NF-κB、ICAM-1及VCAM-1表达水平.结果 慢性房颤组患者炎性细胞浸润和心肌纤维化程度较窦律组明显加重,NF-κB和ICAM-1的表达程度显著增加(P＜0.01),VCAM-1的表达水平高于窦律组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 风湿性心脏病患者慢性房颤的发生可能与NF-κB、ICAM-1及VCAM-1的表达增高有关.     

异甘草酸镁对CCl4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用

目的:研究异甘草酸镁(MI)对CCl4诱导急性肝损伤小鼠的保肝降酶作用与及其对肝组织中核因子-κB(nuclear factor kappa B,NF-κB)、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法:30只♂昆明小鼠(284±2.2g),随机分为3组,即正常对照组、模型组和异甘草酸镁组.正常对照组ip生理盐水(0.1 mL/10 g),模型组ip 0.1?l4(0.1 mL/10g),异甘草酸镁组于ip 0.1?L4(0.1 mL/10 g)前15 min予MI(15mg/kg体质量)ip,1次/d,共5次.采用生化法测定血清ALT、AST及肝组织MDA和SOD含量.采用HE染色观察肝组织病理损伤.SP免疫组化染色检测NF-κB、ICAM-1表达.结果:肝损伤组ALT、AST及MDA较正常组显著升高(465.10±35.90 kU/L vs 47.40±4.13 kU/L;582.37±25.63 kU/L vs 116.06±12.82 kU/L;4.07±0.38 nmol/mg vs 1.39±0.03nmol/mg;均P＜0.01),SOD明显降低(29.71±2.25U/mg vs 87.02±4.84U/mg,P＜0.01).在正常组织中无NF-κKB、ICAM-1表达,肝损伤模型组中NF-κB有较强表达,ICAM-1在肝坏死区强表达.MI组ALT、AST及MDA(263.51±22.89 kU/L,292.56±26.01 kU/L,2.17±0.03nmol/mg)较肝损伤组显著降低(P＜0.01),SOD(58.04±2.56 U/mg)明显升高(P＜0.05),NF-κB、ICAM-1表达均较肝损伤组减弱,肝组织坏死程度也轻.结论:NF-κB、ICAM-1在CCl4诱导小鼠急性肝损伤中表达明显增强,MI可减少NF-κB及ICAM-1表达并减轻肝损伤程度.     

脂质体转染NF-κB诱捕物寡核苷酸抑制大鼠肝脏缺血再灌注损伤

目的探讨转染NF-κB诱捕物寡核苷酸(decoy ODN)对肝脏缺血再灌注损伤的影响。方法制作20只肝脏缺血再灌注SD大鼠模型,无序ODN对照组、decoy ODN实验组各10只。阻断肝脏血流后,实验组行脂质体包裹的NF-κBdecoy ODN溶液门静脉注射转染,对照组行脂质体包裹的无序ODN门静脉注射。开放肝脏血流后3h取出肝脏,应用病理学、EMSA和RT-PCR分别检测移植肝脏病理改变、肝脏组织NF-κB转录活性和TNF-αmRNA表达情况。结果实验组肝脏损伤减轻,肝细胞NF-κB转录活性、TNF-α mRNA表达较对照组明显减小或减少(均P0.01)。结论 NF-κBdecoy ODN可有效抑制肝脏细胞NF-κB的激活从而抑制肝脏缺血再灌注损伤。     

大黄素对急性胰腺炎大鼠胰腺核因子-κB活化的影响

目的观察大黄素对急性胰腺炎(AP)大鼠胰腺组织核因子-κB(NF-κB)活化的影响,初步阐明大黄素治疗AP的分子作用机制.方法雄性SD大鼠采用持续输注雨蛙素(5μg·kg-1·h-1)法建立急性水肿性胰腺炎模型,分为注射后5、30 min及1、2、4、6 h组,停止输注后6 h组;造模前2 h大鼠腹腔注射大黄素(10、30、100 mg/kg)组及生理盐水对照组.采用电泳迁移率改变分析实验检测NF-κB DNA结合活性,Westem blot检测NF-κB抑制蛋白(IκBs)的IκBα和IκBβ降解水平,Northern blot检测NF-κB信号下游效应分子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)和细胞间粘附分子-1(ICAM-1)基因表达.结果超生理剂量的雨蛙素可诱导大鼠胰腺NF-κB发生双相活化,活化高峰出现在雨蛙素注射30min和4 h后,其相对面积灰度值分别为正常对照的(3.9±2.0)和(7.7±3.2)倍(n=4,P值均＜0.01).大黄素10、30和100 mg/kg剂量治疗组大鼠胰腺NF-κB活性较AP模型组分别下降45%,62%和84%(30min)和28%,74%和80%(4h,n=4,P值均＜0.01).同时,大黄素(100 mg/kg)可明显抑制雨蛙素诱导的胰腺IκBα和IκBβ蛋白降解(n=4,P值均＜0.01).与其对NF-κB活化的抑制作用一致,大黄素剂量依赖性地抑制雨蛙素诱导的胰腺MCP-1和ICAM-1基因表达.结论大黄素可抑制胰腺内IκBs/NF-κB信号转导通路活化,从而抑制炎性细胞因子和粘附分子基因表达,发挥其对AP的治疗作用.     

Nuclear factor-KB decoy oligodeoxynucleotides attenuates ischemia/reperfusion injury in rat liver graft

AIM: To evaluate the protective effect of NF-κB decoy oligodeoxynucleotides (ODNs) on ischemia/reperfusion (I/R) injury in rat liver graft. METHODS: Orthotopic syngeneic rat liver transplantation was performed with 3 h of cold preservation of liver graft in University of Wisconsin solution containing phosphorothioated double-stranded NF-κB decoy ODNs or scrambled ODNs. NF-κB decoy ODNs or scrambled ODNs were injected intravenously into donor and recipient rats 6 and 1 h before operation, respectively. Recipients were killed 0 to 16 h after liver graft reperfusion. NF-κB activity in the liver graft was analyzed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Hepatic mRNA expression of TNF-α, IFN-γ and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) were determined by semiquantitative RT-PCR. Serum levels of TNF-α and IFN-γ were measured by enzyme-linked immunosorbent assays (ELISA). Serum level of alanine transaminase (ALT) was measured using a diagnostic kit. Liver graft myeloperoxidase (MPO) content was assessed. RESULTS: NF-κB activation in liver graft was induced in a time-dependent manner, and NF-κB remained activated for 16 h after graft reperfusion. NF-κB activation in liver graft was significant at 2 to 8 h and slightly decreased at 16 h after graft reperfusion. Administration of NF-κB decoy ODNs significantly suppressed NF-κB activation as well as mRNA expression of TNF-α, IFN-γ and ICAM-1 in the liver graft. The hepatic NF-κB DNA binding activity [presented as integral optical density (IOD) value] in the NF-κB decoy ODNs treatment group rat was significantly lower than that of the I/R group rat (2.16±0.78 vs 36.78 ±6.35 and 3.06±0.84 vs 47.62± 8.71 for IOD value after 4 and 8 h of reperfusion, respectively, P<0.001). The hepatic mRNA expression level of TNF-α, IFN-γ and ICAM-1 [presented as percent of p-actin mRNA (%)] in the NF-κB decoy ODNs treatment group rat was significantly lower than that of the I/R group rat (8.31 ±3.48 vs 46.37±10.65 and 7.46± 3.72 vs 74.82±12.25 for hepatic TNF-a mRNA, 5.58±2.16 vs 50.46±9.35 and 6.47±2.53 vs 69.72±13.41 for hepatic IFN-y mRNA, 6.79 ±2.83 vs 46.23±8.74 and 5.28±2.46 vs 67.44±10.12 for hepatic ICAM-1 mRNA expression after 4 and 8 h of reperfusion, respectively, P<0.001). Administration of NF-κB decoy ODNs almost completely abolished the increase of serum level of TNF-α and IFN-γ induced by hepatic ischemia/reperfusion, the serum level (pg/mL) of TNF-α and IFN-γ in the NF-kB decoy ODNs treatment group rat was significantly lower than that of the I/R group rat (42.7±13.6 vs 176.7±15.8 and 48.4±15.1 vs 216.8±17.6 for TNF-α level, 31.5±12.1 vs 102.1±14.5 and 40.2±13.5 vs 118.6±16.7 for IFN-γ level after 4 and 8 h of reperfusion, respectively, P<0.001). Liver graft neutrophil recruitment indicated by MPO content and hepatocellular injury indicated by serum ALT level were significantly reduced by NF-κB decoy ODNs, the hepatic MPO content (A655) and serum ALT level (IU/L) in the NF-κB decoy ODNs treatment group rat was significantly lower than that of the I/R group rat (0.17±0.07 vs 1.12 ±0.25 and 0.46±0.17 vs 1.46±0.32 for hepatic MPO content, 71.7±33.2 vs 286.1±49.6 and 84.3±39.7 vs 467.8±62.3 for ALT level after 4 and 8 h of reperfusion, respectively, P< 0.001). CONCLUSION: The data suggest that NF-κB decoy ODNs protects against I/R injury in liver graft by suppressing NF-κB activation and subsequent expression of proinflammatory mediators.     

异常血流动力对TLR4/NF-κB信号传导通路及其下游炎症因子的影响

目的研究异常血流应力或压力单独作用对人脐静脉内皮细胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/NF-κB信号传导通路及下游炎症因子:血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、细胞间粘附分子-1(ICAM-1)及血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)等的影响,探讨异常血流动力导致动脉粥样硬化的机制。方法将生长良好的HUVECs以1×105个/ml密度接种于细胞综合应力刺激实验系统(型号BIO-CCS13)中进行干预。将HUVECs按所受的应力不同分成应力组、压力组和正常组。在各组应力作用下培养一天后收集细胞备用,用q PCR方法测定TLR4、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,My D88)、肿瘤坏死因子受体相关因子-6(tumor necrosis factor receptor-associated factor-6,TRAF-6)、血凝素样氧化低密度酯蛋白受体-1(LOX-1)、核因子-κB(NF-κB)、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1因子的基因表达,用蛋白质印迹方法测定TLR4、NF-κB、LOX-1、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1因子的蛋白表达。结果与正常组比较,应力组和压力组TLR4、My D88、TRAF-6、LOX-1、NF-κB、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1m RNA表达水平显著升高(P0.01),TLR4、LOX-1、NF-κB、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1蛋白表达显著升高,差异有统计学意义(P0.01)。结论异常血流动力导致动脉粥样硬化的机制可能与激活TLR4/NF-κB信号传导通路和增强下游炎症因子:LOX-1、TNF-α、ICAM-1及VCAM-1等的表达有关。     

沙格列汀和格列本脲对2型糖尿病大鼠主动脉内皮细胞核因子κB及血管细胞间黏附因子1表达的影响

目的 观察沙格列汀对T2DM大鼠主动脉内皮细胞核因子κB（NF-κB）、血管细胞间黏附因子1（VCAM-1）表达的影响. 方法 将成模大鼠分为糖尿病对照（DM）组、格列本脲治疗（DMG）组和沙格列汀治疗（DMS）组.DMG、DMS组分别予格列本脲、沙格列汀治疗8周.12周末检测各组FPG、FIns、血脂、NF-κB和VCAM-1表达,计算胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）,观察大鼠主动脉形态学变化.结果 12周末,与DMG组比较,DMS组FIns[（11.38±1.56） vs（6.13±0.54） μIU/ml]、TG[（1.17±0.15）vs （0.72±0.25）mmol/L]、LDL-C[（0.57±0.05）vs（6.13±0.54） mmol/L]、HOMA-IR[（12.78±1.53）vs（6.78±0.57）]、NF-κB平均灰度值[（143.33±13.38）vs（121.67±11.43）]和VCAM-1平均灰度值[（153.33±12.74）vs（133.00±11.53）]表达降低（P＜0.05）. 结论 沙格列汀在改善糖、脂代谢的同时,可下调糖尿病大鼠主动脉内皮升高的NF-κB、VCAM-1蛋白表达量,可能参与改善大血管并发症.