急性缺血再灌注损伤对肾脏的近期和远期作用

目的 探讨急性缺血再灌注（IR）损伤对大鼠肾脏的近期和远期作用及其机制。 方法 双侧肾蒂夹闭40 min后再灌注，制作大鼠IR模型。术后4 h、24 h、48 h、72 h、1周、5周和10周收集血样和肾脏标本，动态观察肾脏病理、肾功能和大鼠死亡情况。用透射电镜观察小管上皮细胞的超微结构；原位末端标记法（TUNEL）检测肾小管上皮细胞凋亡情况；Masson染色法观察小管间质纤维化程度；Western印迹法测定α?鄄平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达；免疫组织化学法观察肾脏α-SMA和转化生长因子β1 (TGF-β1)的分布和表达。 结果　 再灌注后IR组的Scr 和BUN水平逐渐升高，48 h达到最高峰。IR组病死率为32% (8/25)，假手术（Sham）组病死率为0 (0/22)。再灌注48 h IR组出现近端肾小管上皮细胞广泛性坏死和少量凋亡；IR组术后5周和10周有轻至中度的小管间质纤维化，术后1周肾脏α-SMA和TGF-β1蛋白表达显著升高，以后两者表达有所下降但仍高于Sham组。 结论 严重的缺血再灌注损伤不仅是早期肾小管大量坏死、肾功能急剧下降和病死率增高的原因，而且可以导致小管间质纤维化，影响肾脏的远期预后。TGF-β1过表达和肌成纤维细胞增多可能介导了纤维化病变。     

PPARγ活化对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞趋化因子表达的干预作用

目的：观察PPARγ活化对转化生长因子-β1（TGF-β1）诱导的肾小管上皮细胞炎症相关趋化因子表达的影响,探讨其在肾脏纤维化中的干预作用。方法：体外培养肾小管上皮细胞HK-2,LDH法检测15d-PGJ2和TGL对HK-2的细胞毒性,应用不同浓度的15d-PGJ2和TGL作用于TGF-β1诱导下的HK-2细胞,应用实时荧光定量PCR技术和ELISA方法检测趋化因子单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、白细胞介素-8（IL-8）表达的变化。结果：5μmol/L15d-PGJ2和2.5μmol/LTGL不影响HK-2细胞MCP-1和IL-8mRNA基础表达和蛋白分泌。TGF-β1作用24h时,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2及2.5μmol/LTGL均能有效干预TGF-β1诱导的MCP-1mRNA表达和蛋白的分泌（P〈0.05）。IL-8的表达与MCP-1相似,2.5μmol/L和5μmol/L15d-PGJ2能显著抑制TGF-β1诱导的IL-8表达,TGF-β1诱导24h时2.5μmol/LTGL能显著抑制IL-8mRNA表达（P〈0.05）。结论：PPARγ激动剂15d-PGJ2和TGL作用均能有效干预TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞趋化因子MCP-1和IL-8的表达,可能具有有效干预肾间质炎症作用。     

糖肾宁对高糖培养肾近端小管上皮细胞FN分泌及TGF-β1 mRNA表达作用

目的研究中药复方糖肾宁对高糖诱导的肾近端小管上皮细胞转化生长因子β1（TGF-β1）表达和分泌纤维连接蛋白（FN）的影响,探讨其治疗糖尿病肾病（DN）的机制。方法分别采用RT-PCR和ELISA方法检测不同时间下高糖对肾近端小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达和分泌FN的作用,及糖肾宁药物血清对上述指标的影响。结果高糖呈时间依赖性增加肾小管上皮细胞TGF-β1 mRNA表达,高糖培养24h后细胞分泌FN也明显增多,加入糖肾宁药物血清后上述指标均有下降（P〈0．05）。结论糖肾宁抑制高糖诱导的肾小管上皮细胞TGF-β1和FN表达可能是其治疗DN的分子机制之一。     

氯沙坦在大鼠IgA肾病小管间质损伤中的保护作用

目的应用氯沙坦对大鼠IgA肾病模型进行干预,观察其对IgA肾病小管间质损害的影响。方法采用牛血清白蛋白（BSA）＋脂多糖（LPS）＋四氯化碳（CCl4）方法建立IgA肾病大鼠模型,设立正常对照组（A组）、IgA模型组（B组）、氯沙坦治疗组（C组）,每组6只,实验前后进行相关生化指标的测定,光学显微镜观察肾脏的组织形态学改变;免疫组织化学法观察各组转化生长因子β1（TGF-β1）、α平滑肌肌动蛋白（α—SMA）表达;逆转录聚合酶链（RT-PCR）方法检测TGF-β1、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）变化。结果B组尿蛋白量增高,C组则有所降低（P〈0．05）;实验前、后,B组肾功能改变显著,C组变化无统计学意义（P〉0．05）;B组大鼠肾脏组织中存在不同程度的系膜细胞增生,肾小管上皮细胞肿胀、空泡变及间质炎细胞浸润,而C组上述变化减轻;免疫组织化学法及RTPCR检测显示TGF-β1、α-SMA及MCP-1在A组肾小管及间质中微量表达,B组高表达,C组表达减少。结论IgA肾病存在肾小管间质的损伤;氯沙坦减少IgA肾病大鼠尿蛋白的排泄,抑制炎症及纤维化因子的表达,对IgA肾病小管间质的损伤起保护作用。     

糖尿病大鼠肾小管整合素连接激酶的表达及氯沙坦的干预作用

目的：观察糖尿病大鼠肾小管上皮细胞整合素连接激酶（ILK）的表达以及氯沙坦对其的影响。方法：雄性Wistar大鼠腹腔内注射链脲佐菌素（STZ）诱导糖尿病模型,随机分为模型组和氯沙坦组;另设正常组腹腔注射缓冲液。第8周、第16周测24h尿蛋白定量和血肌酐,处死大鼠,取肾组织行HE、Masson染色,观察肾脏病理改变;免疫组化法检测大鼠肾小管上皮细胞ILK、TGF-β1的表达。结果：模型组大鼠肾小管上皮细胞胞浆ILK表达增高,与小管间质病变程度一致;同时TGF-β1表达亦增高,并与ILK表达呈正相关性。氯沙坦组大鼠尿蛋白较模型组明显减少,肾小管间质病变减轻,肾小管上皮细胞ILK、TGF-β1表达明显减弱。结论：糖尿病大鼠肾小管上皮细胞存在有ILK的高表达,ILK的表达强度与肾小管间质损伤程度相一致,并与TGF-β1的表达呈正相关;氯沙坦能下调肾小管上皮细胞ILK的表达。     

六味地黄汤对单侧输尿管结扎大鼠肾间质MCP-1及TGF-β1表达的影响

目的：观察六味地黄汤对单侧输尿管梗阻（UUO）大鼠模型中单核趋化蛋白-1（MCP-1）及转化生长因子-β1（TGF-β1）表达的影响。方法：将72只雄性SD大鼠随机分为模型组、依那普利组、六味地黄汤组、假手术组,行UUO术后即预药物干预。于术后第7、14、21天分别处死各组大鼠。用HE和Masson染色法观察各组大鼠术后不同时间点肾脏病理改变,用免疫组化法检测肾小管间质MCP-1及TGF-β1表达。结果：与假手术组比较,其余3组各时间点MCP-1及TGF-β1表达均明显高于假手术组（P〈0.05）;六味地黄汤组的MCP-1和TGF-β1表达明显低于模型组各时间点（P〈0.05）,高于依那普利组（P〈0.05）。结论：六味地黄汤可下调MCP-1和TGF-β1的表达,减缓UUO大鼠肾小管间质损害,可作为梗阻性肾病辅助用药。     

冻结肩病理改变及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ激动剂治疗作用的研究

背景:冻结肩是一种以肩关节疼痛和活动受限为主要特征的疾病,目前病因不明,治疗效果欠佳。目的:研究转化生长因子-β1(TGF-β1)对大鼠肩关节囊纤维化及炎症反应等病理改变的影响,以及过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ(PPAR-γ)激动剂对大鼠冻结肩的治疗作用,为临床治疗冻结肩提供新思路。方法:利用TGF-β1诱导人皮肤成纤维细胞(HSF)异常纤维化,PPAR-γ激动剂三萜类化合物(CDDO-IM)作为治疗药物,检测细胞增殖、迁移情况及细胞外基质蛋白的表达情况。向SD大鼠的肩关节腔注射TGF-β1过表达的腺病毒构建大鼠冻结肩模型。2周后,其中一半大鼠用罗格列酮灌胃饲养2周,作为罗格列酮治疗组。检测大鼠肩关节活动度,利用ELISA检测关节腔炎症因子,HE染色和免疫组织化学法检测大鼠肩关节囊组织细胞外基质蛋白的表达情况。结果:在细胞实验中,TGF-β1组的增殖率为83.6%,TGF-β1+CDDO-IM组增殖率为19.3%(P<0.01);TGF-β1组的迁移率为84.9%,TGF-β1+CDDO-IM组迁移率为44.1%(P<0.05);TGF-β1能够诱导HSF增殖、迁移及异常纤维化。动物实验成功构建了TGF-β1诱导的大鼠冻结肩模型,免疫组织化学结果提示,罗格列酮能够抑制大鼠冻结肩的炎症形成,减少基质蛋白生成,重塑纤维组织结构。结论:冻结肩的病理改变主要是纤维细胞异常增生,炎症细胞浸润,纤维结构紊乱,而PPAR-γ激动剂可以缓解大鼠冻结肩关节僵硬,减弱炎症反应,抑制异常纤维化。     

胰岛素样生长因子在常染色体显性遗传性多囊肾病发病中的作用

目的研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在常染色体显性遗传性多囊肾病(ADPKD)发病中的作用。方法采用酶联免疫吸附法测定41例ADPKD患者的血液、囊液及尿液中IGF-1浓度;应用原位杂交及免疫组织化学染色方法检测IGF-1及其受体(IGF-1R)在正常肾组织及ADPKD囊壁组织中的表达分布;采用MTT、流式细胞仪及电镜透视的方法,观察IGF-1对囊肿衬里上皮细胞的促增殖作用。结果41例ADPKD患者囊液中的IGF-1浓度为(162.00±5.06)ng/ml,显著高于血液的(76.00±28.13)ng/ml和尿液中的(62.00±19.18)ng/ml(P<0.01);正常肾组织中IGF-1mRNA、IGF-1的表达主要分布在远端肾小管及集合管,而IGF-1RmRNA、IGF-1R在近端肾小管表达阳性。在ADPKD囊肿组织中的囊壁衬里上皮细胞、平滑肌细胞及间质细胞均有IGF-1、IGF-1R阳性表达。IGF-1、IGF-1R在ADPKD囊肿组织中平均吸光度明显高于正常肾组织中的平均吸光度(P<0.01)。IGF-1在1～50ng/ml范围内显著地促进囊肿衬里上皮细胞的增殖。结论囊液中增多的IGF-1可能来自囊肿衬里上皮细胞及间质细胞合成和分泌,这些细胞通过自分泌和旁分泌,可能刺激囊肿衬里上皮细胞的进一步增殖,刺激囊肿形成和长大,从而参与了ADPKD发病。     

慢性肾盂肾炎肾间质纤维化与雌激素及其受体相关性的实验研究

目的：探讨雌激素及其受体与慢性肾盂肾炎肾间质纤维化的有相关性。方法：应用雌性大鼠卵巢切除（去势）后和/或大肠杆菌由膀胱经不完全梗阻输尿管逆行感染制作慢性肾盂肾炎肾间质纤维化动物模型,观察正常或去势后、或合并慢性肾盂肾炎肾间质纤维化、及用氟哌酸或/和倍美力治疗后的大鼠雌激素受体在肾脏组织中的表达,及α-SMA及TGF-β在肾脏组织中表达的改变,探讨雌激素、雌激素受体与慢性肾盂肾炎、肾间质纤维化的关系。结果：去势后慢性肾盂肾炎组大鼠尿蛋白定量有所升高。去势、慢性肾盂肾炎均造血清雌激素水平降低,氟哌酸、倍美力、氟哌酸加倍美力治疗后血清雌激素水平均有不同程度的升高。肾脏ER-β主要定位于肾小管上皮细胞、集合管上皮细胞的胞浆。单纯去势组、去势后慢性肾盂肾炎大鼠肾脏ER-β较正常组升高。与正常组比较,慢性肾盂肾炎组、去势后慢性肾盂肾炎组大鼠肾脏表达间质纤维化标志蛋白α-SMA及TGF-β1明显增高,肾间质纤维化明显,氟哌酸加倍美力组可降低α-SMA的表达,缓解肾间质纤维化。血清E2与肾脏ER-β呈负相关,与肾间质纤维化指标α-SMA、TGF-β1负相关,肾脏ER-β与TGF-β1有一定的正相关,而与α-SMA无明显关系。结论：雌激素及其受体与慢性肾盂肾炎肾间质纤维化具有相关性。     

胆道梗阻早期大鼠MCP-1、TGF-β1的表达及意义

目的 探讨炎性趋化因子MCP-1及致纤维化因子TGF-β1在胆道梗阻早期大鼠中的表达及与肝脏损伤相应指标的关系.方法 50只Wistar雄性大鼠随机分为3组:正常组、假手术组和胆道梗阻组.术后10 d,各组大鼠检测血清ALT和BIL-T值,肝脏匀浆组织测得MDA含量,酶联免疫吸附试验反应血清TGF-β1指标,免疫组化表达肝脏MCP-1的浸润程度.结果 相比正常组及假手术组大鼠的各检测指标,早期胆道梗阻组大鼠肝脏MDA含量、MCP-1表达强度及血清ALT、BIL-T、TGF-β1水平均升高.胆道梗阻早期大鼠肝脏MCP-1表达与血清ALT及BIL-T升高有关,MCP-1高表达还与肝脏氧化应激指标MDA含量增加有关.血清TGF-β1水平升高只与血清ALT及BIL-T数值增加相关.而与MDA含量增加无关.结论 胆道梗阻早期大鼠肝脏MCP-1高表达及血清TGF-β1指标升高均与肝脏损伤及胆汁淤积有关,同时MCP-1的高表达还与肝脏氧化应激一致,二者对胆道梗阻早期肝脏损伤机制研究有重要意义.