乙型肝炎病毒表面抗原阳性判断值的探讨

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)定性试验中cut off值再确定的必要性及其可行方法。方法应用定值血清法,阴性对照均值法及ROC曲线法对乙型肝炎表面抗原cut off值进行了探讨。结果 ROC曲线法计算的cut off值为0.109,灵敏度与特异度分别为98.1%、96.0%,曲线下面积(AUC)为0.992;定值血清法计算的cut off值为0.169;阴性对照均值法计算的cut off值为0.101。结论重新认识和确定HBsAg定性试验的cut off值有利于提高其检验质量。     

乙型肝炎病毒表面抗原定性试验中临界值再确定的必要性与方法

目的探讨乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）定性试验中S／CO的分布规律、最低检测限、临界（cut off）值再确定的必要性及其可行方法。方法以SPSS软件分析HBsAg的S／CO分布规律,用电化学发光仪E170鉴定待检标本的HBsAg,评价酶联免疫吸附试验试剂盒最低检测限,以常规条件下的变异（ROC）曲线对HBsAg的cut off值进行再确定。结果HBsAg阴性标本S／CO呈正偏态分布,阳性标本S／CO呈负偏态分布;科华HBsAg试剂盒的最低检测限约为8．0 COI;一步法时,由ROC曲线计算的cut off值为0．103,灵敏度与特异度分别为97．1%、100％,曲线下面积（AUC）为0．993（P〈0．01）;两步法计算的cut off值为0．218,灵敏度与特异度分别为97．8％、100％,AUC为0．996（P〈0．01）;两步法优于一步法,但两方法之间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论重新认识和确定HBsAg定性试验的S／CO分布规律、最低检测限、cut off值有利于提高检验质量。     

结核分枝杆菌MPT64基因克隆与表达质粒构建

[目的] 克隆并构建编码结核分枝杆菌MPT64分泌蛋白的重组表达质粒。[方法] 采用聚合酶链反应(PCR)方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA中扩增出MPT64基因(687bp)，并克隆到T载体，然后用双内切酶消化后，与同样酶消化的pGEX-4T-2连接，转化大肠杆菌E．coil DH5α，阳性克隆用酶切和DNA测序鉴定。[结果] 酶切鉴定所切下的片段大小与预计相符，测序结果与文献报道一致，证实符合表达框架。[结论] 成功地克隆并构建了MPT64基因的重组表达质粒pGEX-MPT64。     

应用MPT64检测建立结核分枝杆菌药敏新方法的初步探索

目的初步探索应用MPT64检测建立一种结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）药敏新方法的可行性,确定药敏方法的实验条件和实验程序。方法通过检测MTB标准株和临床株的MPT64分泌,验证MPT64检测用于药敏结果指示的有效性;对不同方式制备的菌悬液进行MPT64检测,确定药敏方法的接种程序。结果指示有效性试验中,MTB标准株和60株MTB临床株的菌悬液MPT64检测均阳性;药敏接种程序确定试验中,直接挑取菌落方式配制的各种浓度MTB菌悬液（分别为1、0.1、0.01和0.001 mg/ml）MPT64检测均阳性,而生理盐水洗涤方式配制的各种浓度MTB菌悬液（分别为1、0.1、0.01和0.001mg/ml）MPT64检测均阴性。结论 MPT64检测能有效指示MTB的生长;洗涤方式制备菌悬液可避免MTB原代菌株产生的MPT64被带入培养基中,从而能够更真实地反映无药和含药培养基中MTB的生长情况。     

应用MPT64检测建立结核分枝杆菌药敏新方法的初步探索

目的 初步探索应用MPT64检测建立一种结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)药敏新方法的可行性,确定药敏方法的实验条件和实验程序.方法通过检测MTB标准株和临床株的MPT64分泌,验证MPT64检测用于药敏结果指示的有效性;对不同方式制备的菌悬液进行MPT64检测,确定药敏方法的...     

qRT-PCR检测结核分枝杆菌蛋白抗原编码基因表达水平

目的运用实时定量PCR（quantitative real-time,qRT-PCR）检测结核分枝杆菌蛋白Ag85B、38kDa及MPT64编码基因的表达水平,探讨结核分枝杆菌耐药菌株和敏感株,北京基因型和非北京基因型的蛋白抗原在转录水平的差异性及qRT-PCR诊断活菌的价值。方法根据Genbank提供的序列,设计目的基因fbpB、psts1、mpt64及内参基因Sigа的特异性引物,将扩增片段克隆入载体pMD18-T simple,重组质粒经纯化及倍比稀释,应用SYBR GreenⅠ荧光染料建立检测fbpB、psts1、mpt64基因表达水平的实时定量PCR方法。选用46株结核分枝杆菌临床分离株,以及2株非结核分枝杆菌。应用qRT-PCR检测上述菌株、H37Rv国际标准株fbpB、psts1、mpt64基因的表达水平。结果结核分枝杆菌活菌的扩增结果呈典型的S型曲线,而结核分枝杆菌死菌和非结核分枝杆菌呈水平直线,没有检测到荧光信号;耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株,有统计学意义（t=3.093,P〈0.01;t=2.545,P〈0.05）,北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。结论有统计学意义（t=2.567,P〈0.05;t=2.373,P〈0.05）。结论成功建立了fbpB、psts1、mpt64基因的qRT-PCR检测方法,该方法可以快速判断活菌与死菌。检测发现耐药组中的mpt64基因表达水平低于敏感组及H37Rv标准株;北京基因型组中的psts1基因表达水平低于非北京基因型组及H37Rv标准株。     

Dot-ELISA法检测结核分枝杆菌特异性抗原CFP10的改进和建立

目的建立一种检测结核分枝杆菌特异性抗原培养滤液蛋白10（culture filtrate protein 10,CFP10）的斑点酶联免疫吸附试验（dot enzyme linked immunesorbant assay,Dot-ELISA）方法。方法采用真空泵抽吸浓缩检测样本,改进Dot-ELISA用改进前的和改进后的Dot-ELISA方法检测同一批临床确诊的结核性胸膜炎的胸腔积液25例和非结核性胸腔积液31例,比较方法改进前后检测CFP10的敏感性和特异性;改变实验程序中的工作条件（硝酸纤维素膜的孔径、滴加样本的体积、真空泵抽吸的压力、不同的封闭液、温育的温度和时间及抗体的滴度）,确定最适工作条件及重复性和稳定性。结果改进前检测CFP10的敏感性为76.0%,改进后并应用最适条件的敏感性为96.0%,差异有统计学意义（P=0.042）;特异性和重复性、稳定性实验结果表明,所建立的Dot-ELISA法特异性和改进前差异无统计学意义（P=0.641）,且稳定性和重复性较好。结论所建立的Dot-ELISA是一种比较敏感、特异和稳定的检测方法,能用于结核特异性抗原的检测和疾病的诊断。     

重组核衣壳蛋白用于肾综合征出血热病人IgG抗体检测

目的检测肾综合征出血热病人的IgG抗体及发现在我国可能存在的新的血清型。方法 用五种血清型汉坦病毒核衣壳重组蛋白作抗原建立间接ELISA法,检测HFRS病人血清中特异性IgG。结果检测了91份病人血清,发现我国山东、北京地区的汉坦病毒感染以HTN血清型群为主(56.1％);首次检测到2份疑似DOB型病毒感染血清。结论我国有可能存在DOB病毒血清型。     

分枝杆菌菌体超声抗原用于ELISA检测血清结核抗体的效果

本文报道了不同类群分枝杆菌菌体超声抗原，用于ＥＬＩＳＡ检测血清结核抗体的效果。发现人型结核菌菌体超声抗原对结核病患者血清抗体的阳性检出率最低，为２８％￣４２％，而淋巴分枝杆菌菌体超声抗原（Ｂ６ｂ）阳性检出率最高，达７２％。Ｒ６ｂ抗原用于肺癌血清结核抗体检测，假阳性率１．９％。Ｂ６ｂ抗原用于结核病血清学诊断和用于结核病与肺癌的鉴别诊断，其效果均优于ＰＰＤ抗原，且易于制备、性能稳定可靠。     

快速C-反应蛋白检测及临床应用评价

C-反应蛋白（以下简称CRP）是血清中的一种糖蛋白，为急性时相蛋白，分子量为100000-144000，正常情况下含量甚微，当细菌感染引发炎症或组织损伤和术后，CRP血中浓度会急剧升高，在炎症开始后6-12h就可检测到。与白细胞总数及分类、血沉等反映感染情况的实验室指标相比，CRP具有辅助诊断和检测快速的特点，是目前临床上最常用的急性时相反应指标。尤其近年来，国内引入Quick Read CRP分析仪不仅可以检测血清CRP浓度，而且在门诊化验室，与多项血常规测定同时进行指血CRP浓度测定，为全面评估患儿现状感染情况和抗生素应用提供了更多实验学依据。2002年3月我科开展快速CRP检测项目，对其方法学和临床意义进行探讨，现将结果报告如下。     

糖尿病病人的超敏C-反应蛋白、恤脂、纤维蛋白原的测定

糖尿病以慢性高血糖为特征，久病可引起多系统损害，引起多种慢性并发症，动脉粥样硬化是其中一个重费的并发症，目前假说认为2型糖尿病可能足细胞因子介导的炎症反应，是一种免疫性疾病，炎症在糖尿病发病机制中起媒介作用。而纤维蛋白原（FIB）是心脑血管血栓性疾病的一种高危因素。