小鼠内皮抑素基因克隆、测序及pEgr-IFNγ-mEndostatin 重组双基因表达质粒的构建

目的：克隆小鼠内皮抑素（mEndostatin）编码区cDNA序列并构建含Egr-1启动子的IFNγ和mEndostatin双基因表达载体。 方法：利用逆转录多聚酶链反应法（RT-PCR）,以小鼠肝细胞mRNA为模板,扩增获得全长mEndostatin,与pMD18T载体连接作全自动测序,并利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ和mEndostatin双基因表达质粒。 结果：经测序证实获得的mEndostatin序列与文献报道完全一致,并构建了含Egr-1启动子的IFNγ和mEndostatin双基因表达质粒pEgr-IFNγ-mEndostatin。 结论：利用RT-PCR法成功克隆了mEndostatin的cDNA序列,构建了pEgr-IFNγ-mEndostatin重组双基因表达质粒。     

重组质粒pIRESEgr-IFNγ的构建及其在Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达

目的： 构建重组真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ并检测其在体外培养的Lewis肺癌细胞中的辐射诱导表达。方法：利用基因重组技术构建含Egr-1启动子的IFNγ表达质粒,脂质体介导体外转染Lewis肺癌细胞,酶联免疫吸附法（ELISA）检测0、2、5和10 Gy X射线诱导IFNγ表达的量效和时程关系。结果：酶切鉴定证实,Egr-1启动子和IFNγ基因正确插入真核表达载体pIRES1neo;2、5和10 Gy X射线照射转染该重组质粒的Lewis肺癌细胞,上清中IFNγ表达量明显高于假照组（P＜0.001）,其中5 Gy照射后表达量最高,为假照组的4.39倍。5 Gy照射后2、6、12和36 h上清中IFNγ表达量逐渐增加（P＜0.001）,照射后36 h表达量为照射前的6.27倍。结论：成功构建了真核表达质粒pIRESEgr-IFNγ,该质粒具有辐射诱导基因表达增强特性。     

半枝莲多糖对Lewis肺癌荷瘤小鼠的抑瘤作用研究

目的：探讨半枝莲多糖（SBPS）对Lewis 肺癌荷瘤鼠的抑瘤作用。方法建立Lewis 肺癌荷瘤鼠实验模型,随机的分为5组：分别为模型组（生理盐水）、环磷酰胺（CTX）组（30 mg· kg－1· d－1）、SBPS高剂量组（200 mg· kg－1· d－1）、中剂量组（100 mg· kg－1· d－1）和低剂量组（50 mg· kg－1· d－1）。测定抑瘤率、脾指数、胸腺指数、肺／体比。结果 SBPS 抑制Lewis肺癌荷瘤鼠肿瘤与模型组相比有显著差异（ P ＜0.01）。100 mg· kg－1 SBPS对Lewis 肺癌荷瘤鼠肿瘤的抑制作用最好,抑瘤率为49.68％。 SBPS中剂量组和低剂量组可有效提高脾指数和胸腺指数、降低肺／体比。结论 SBPS对Lewis 肺癌荷瘤鼠具有明显的抑瘤作用。     

基因工程干扰素γ对小鼠Lewis肺癌转移及脾细胞增殖的影响

Ｃ（５７）ＢＬ／６Ｎ小鼠尾静脉注射Ｌｅｗｉｓ肺癌细胞１×１０５后，腹腔注射基因工程干扰素γ（ｒＩＦＮ－γ）１万、５万、２０万ｕ·ｋｇ（－１），连续１０ｄ；小鼠肺湿得减少０．６％、１５．３％、２０．１％；肺转移结节数减少６．６％、３６．７％、５５．０％；ＣｏｎＡ诱导的脾细胞ＤＮＡ掺入量增加３．０％、２５．７％、５２．５％。小鼠环磷酰胺５０ｍｇ·ｋｇ（－１）ｉｐ３ｄ后，尾静脉注射瘤细胞，实验处理同上，小鼠肺湿重减少５．３％、１８．１％、２７．６％；肺转移结节数减少１６．３％、４５．６％、６９．６％；脾细胞ＤＮＡ掺入量增加１７．１％、７２．４％、９０．９％。本文结果表明，ｒＩＦＮ－γ可抑制小鼠Ｌｅｗｉｓ肺癌肺转移，促进ＣｏｎＡ刺激的脾细胞增殖，并与剂量呈正相关。对环磷酰胺处理后免疫功能受抑小鼠的作用更为明显。     

不同治疗期Lewis肺癌小鼠血清内皮抑素与血管内皮生长因子水平变化的研究

目的 检测不同治疗时间点(治疗后当天、治疗后第5 d和第19 d)Lewis肺癌小鼠血清内皮抑素(mES)、血管内皮生长因子(VEGF)水平,探讨其与肿瘤发展、预后的关系.方法 选择55只C57BL/6小鼠,其中11只作为健康对照组,44只复制小鼠Lewis肺癌模型后随机分为非治疗对照组、单纯化疗组、基因治疗组、联合治疗组(化疗+基因治疗),通过ELISA方法 测定不同治疗时间点Lewis肺癌小鼠血清mES和VEGF的浓度,对VEGF与mES进行相关分析.结果 治疗当天(第0 d)4个荷瘤鼠组mES水平无明显差异.第5 d基因及联合治疗组血清mES水平升高,显著高于健康对照组、非治疗对照组及单纯化疗组(P均<0.01);此后表达逐渐下降,第19 d时基因及联合治疗组与化疗组(P<0.05)及健康对照组(P<0.01)差异显著.治疗第5 d时基因及联合治疗组VEGF水平明显下降,与化疗组之间有明显差异(P<0.05),非治疗对照组与三个治疗组均差异显著(P<0.05);第19 d即治疗结束时,基因、联合治疗组VEGF水平较第5 d虽有所回升但总体仍明显降低,化疗组、基因治疗组以及联合治疗组与非治疗对照组均存在显著差异(P<0.05).VEGF与mES相关性分析结果 显示:在基因治疗及联合治疗组呈现负相关的趋势.结论 血清mES及VEGF水平可能成为肿瘤治疗的监测指标.     

消积抑癌外敷方对Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤效果和肿瘤血管生成的影响

目的:探讨消积抑癌外敷方对Lewis肺癌荷瘤小鼠抑瘤效果、肿瘤血管生成、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白及mRNA表达的影响。方法:将20只健康雌性C57BL/6小鼠随机分为荷瘤对照组和治疗组,每组各10只。采用动物移植肿瘤实验法制备Lewis肺癌荷瘤小鼠模型。对照组小鼠瘤体表面外敷面糊,治疗组小鼠瘤体表面外敷消积抑癌...     

槲皮素及槐米提取物对小鼠Lewis肺癌的抑瘤实验研究

目的　观察槲皮素及槐米提取物对小鼠Lewis肺癌的肿瘤生长抑制作用 ,以及与顺铂联合治疗的效果 ,并探讨其对小鼠免疫功能器官重量和血常规指标的影响。方法　以槲皮素和槐米提取物制成受试溶液 ,以移植Lewis肺癌的ICR小鼠为动物模型 ,槲皮素试验组和槐米提取物试验组分别在移植前以槲皮素或槐米提取物连续灌胃 10d ,在移植后继续灌胃 16d ,顺铂治疗组在移植后隔天腹腔注射 1mg/kg剂量的顺铂 1次 ,肿瘤移植 17d后测定各组小鼠体重、瘤重、脾脏及胸腺的重量和血常规指标 ,计算抑瘤率 ,脾指数和胸腺指数。结果　槲皮素高、中、低剂量组的抑瘤率分别为 4 4 .5 %、4 2 .7%、34.3% ;槐米提取物高、中、低剂量组抑瘤率分别为 4 6 .4 %、4 3.8%、37.3%。顺铂治疗组的抑瘤率为 4 0 .2 % ,而顺铂 中剂量槲皮素组和顺铂 中剂量槐米提取物组的抑瘤率分别为 4 9.3%和 5 5 .2 %。小鼠荷瘤后出现脾脏重量和血常规指标的异常 ,经过治疗后 ,异常状态有明显改善。结论　经口给予槲皮素和槐米提取物对小鼠Lewis肺癌有良好的抑瘤作用 ,与顺铂联合治疗的效果明显增强。      

平衡保健丹对Lewis肺癌模型小鼠抑瘤效应研究

目的观察不同剂量平衡保健丹对Lewis肺癌模型小鼠的抑瘤作用。方法将C57B1/6小鼠随机分为对照组、平衡保健丹低剂量组(低剂量组)、平衡保健丹高剂量组(高剂量组)。于接种前3 d开始给药,对照组给予等体积的蒸馏水,低剂量组与高剂量组分别给予平衡保健丹2 g·kg-1与4 g·kg-1。给药第4天时每只小鼠于右腋皮下接种小鼠Lewis肺癌细胞株(LLC)。观察各组小鼠肿瘤体积及小鼠体重,并计算肿瘤抑制发生率。结果高、低剂量组的平衡保健丹对肿瘤体积有抑制作用,与对照组比较差异有统计学意义(P0.01),且高、低剂量组之间无明显的剂量依赖性。在给药期间,高、低剂量组的小鼠体重绝大部分时间显著低于对照组(P0.01),高剂量组在后期体重稳步回升与对照组持平。两组肿瘤发生率分别为70%与80%,提示平衡保健丹有显著抑瘤作用。结论平衡保健丹具有明确抑癌作用,高剂量组效果更佳,其抑瘤率和抑制肿瘤体积作用明显。     

重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌抑制作用的实验研究

[目的]研究重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用。[方法]采用MTT法检测不同剂量不同时间重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的影响;建立Lewis肺癌自发转移模型,将40只荷瘤小鼠随机分为重组人血管内皮抑素小、中、大剂量组(5、15、30 mg.kg-1.d-1)及对照组各10只,连续给药14 d,停药1周后处死小鼠,绘制肿瘤生长曲线,计算原发瘤抑瘤率;利用光镜和透射电镜技术,观察重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞以及对荷瘤小鼠血管内皮细胞和肿瘤细胞的形态学改变。[结果]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌细胞增殖的抑制作用与浓度和作用时间呈正相关,400 ng处理72 h后的抑制率为(68.4±1.5)%,与处理24 h后的抑制率(21.9±2.1)%比较,差异有显著性意义(P<0.05)。各给药组肿瘤生长均较对照组缓慢,小、中、大剂量组的抑瘤率分别为28.2%、49.7%、52.8%。各给药组小鼠瘤组织内均有大面积坏死,血管内皮细胞和肿瘤细胞均发生早期凋亡的改变,且具有剂量依赖性。[结论]重组人血管内皮抑素对Lewis肺癌的抑制作用可能表现为对肿瘤细胞和毛细血管内皮细胞的双重抑制作用。     

血管抑素基因治疗Lewis肺癌移植瘤小鼠的实验研究

目的:观察血管抑素基因对Lewis肺癌小鼠移植瘤生长、转移的抑制作用。方法:建立C57BL/6j小鼠肺癌模型,30只荷瘤鼠按照随机数字表法分为生理盐水空白对照组、阳离子脂质体对照组、血管抑素基因(PAng)治疗组,每组10只。以阳离子脂质体为介导,将血管抑素基因的重组质粒直接注入移植瘤内,每周3次,共5周,每周测瘤体大小1次,第7周末处死所有小鼠,观察瘤体大小变化、肺表面转移灶数、小鼠生存期等。结果:治疗组小鼠移植瘤生长速度减慢,瘤体缩小,肺内转移少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05),小鼠活动能力、饮食、对外界刺激的反应能力均无明显改变,生存期明显长于对照组(P0.05)。结论:阳离子脂质体介导血管抑素基因可有效地抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移。     

蒿甲醚与顺铂联用对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及其机制探讨

目的探讨蒿甲醚与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌抑瘤效应及其作用机制.方法 C57BL/6J小鼠皮下接种3LL细胞（4×105/只）60只,随机分为六组,分别为1：生理盐水（NS）组;2：单用蒿甲醚（ARE）组;3：单用顺铂（DDP）组;4：先给蒿甲醚后给顺铂组;5：先给顺铂后给蒿甲醚组;6：蒿甲醚与顺铂同时给药组.观察各组小鼠的体重、瘤体积变化和抑瘤率,并评价两药联用的抑瘤作用.探讨蒿甲醚与顺铂联用时,不同给药顺序下抑瘤率的变化.瘤组织进行TUNEL和检测凋亡相关基因的表达.结果联合给药组肿瘤体积较生理盐水组瘤体积增长明显缓慢,而且明显慢于单用蒿甲醚或顺铂组;与生理盐水组比较,蒿甲醚组与顺铂组瘤体积增长速度较缓慢.蒿甲醚组与顺铂组抑瘤率分别为36.44%及50.29%,联合用药时（先用蒿甲醚组、先用顺铂组、同时用药组）抑瘤率分别为62.15%、65.54%、66.67%,与单用蒿甲醚或顺铂组比较有差异有统计学意义（P〈0.05）.在联合用药组之间抑瘤率差异无统计学意义（P〉0.05）.应用金氏公式评价蒿甲醚与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌的抑制作用：联合给药时三种给药方式下其q值均：0.85〈q〈1.15,表明蒿甲醚与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用.流式细胞术TUNEL检测结果显示,蒿甲醚与顺铂联用可通过诱导细胞凋亡来抑制Lewis肺癌小鼠瘤体积的生长.FCM法分析其对瘤组织凋亡相关基因检测表明蒿甲醚与顺铂联用能上调Fas、FasL、P53等凋亡基因,下调Bcl-2抑制凋亡基因.结论蒿甲醚与顺铂联用对小鼠Lewis肺癌有相加抑制作用,能促进肿瘤细胞凋亡,其机制可能与调控细胞凋亡相关基因的表达有关.     

肺抑瘤合剂治疗肺癌及对小鼠Lewis肺癌cyclinD1表达影响的临床和实验研究

【论文特点介绍】肺癌为当前世界各地最常见的恶性肿瘤之一，中医药治疗肿瘤是我国的特色和优势，通过辨证论治配合化疗等起到减毒增效、带瘤延年的良好效果。本研究为一个续贯课题，结合山东中医药大学附属医院呼吸内科多年的临床治疗肺癌的经验，根据中医基础理论，筛选出以益气养阴，清热解毒，化痰散瘀为主要治法的肺抑瘤合剂治疗中晚期肺癌。我们在临床观察治疗了78例肺癌患者，同时进行了肺抑瘤合剂对小鼠Lewis肺癌cyclinD1表达影响的实验研究，进一步探明了肺抑瘤合剂在肺癌综合治疗中发挥的作用机理。     

威麦宁对小鼠Lewis肺癌细胞周期的影响

目的复制小鼠Lewis肺癌模型,检测威麦宁的抑瘤率.方法采用流式细胞术分析、免疫组化法检测药物对模型鼠肿瘤细胞周期及对Cyclin D1表达的影响.结果威麦宁浓度在100、150、200、250 mg/(kg*d)时,对小鼠Lewis肺癌的抑制率分别为19.14%、33.59%、40.63%、51.56%, 药物对肿瘤的抑制作用具有剂量依赖性;药物可将肿瘤细胞阻滞在G0～G1期,并降低肿瘤细胞Cyclin D1的表达(P＜0.01).结论威麦宁可能是通过降低肿瘤细胞Cyclin D1的表达,将肿瘤细胞阻止于G0～G1期,使细胞不能进入S期进行DNA复制,从而抑制肿瘤的生长.     

美洲大蠊提取物对Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的研究

目的探讨美洲大蠊提取物对Lewis肺癌小鼠抑制效应及其作用机制．方法Lewis肺癌小鼠分为生理盐水组、美洲大蠊提取物高、低剂量组。检测各组小鼠的体重变化和抑瘤率，瘤组织HE染色观察病理学变化。应用流式细胞术进行瘤细胞DNA倍体分析．结果美洲大蠊提取物高、低剂量组体重没有生理盐水组增加明显。其抑瘤率分别为41．24％及81．08％；肿瘤组织HE染色发现：美洲大蠊提取物高、低剂量组较NS组瘤细胞坏死增多、瘤组织内及其周围微血管少见；流式细胞术检测美洲大蠊提取物能诱导肿瘤细胞凋亡，随着药物剂量的增高，其凋亡率也升高，并能影响肿瘤的细胞周期，肿瘤细胞S期及G2／M期细胞数大量减少，细胞被阻滞在G0／G1期．结论美洲大蠊提取物对Lewis肺癌小鼠瘤组织的生长具有一定的抑制作用，可促进肿瘤细胞凋亡．     

CIK细胞的体外增殖及对Lewis肺癌小鼠抑瘤作用的实验研究

目的：观察CIK(cytokine induced killer)细胞及LAK(Lymphokine activated killer)细胞对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用。方法：建立Lewis肺癌小鼠动物模型，静脉输入CIK细胞做抗肿瘤治疗，同时设LAK对照，用同位素法检测各组小鼠T细胞增殖反应，同时用MTT法检测各组小鼠NK细胞毒活性。结果：CIK细胞对Lewis肺癌小鼠的抗肿瘤作用显著强于LAK细胞。结论：CIK细胞对Lewis肺癌小鼠有明显的抗肿瘤作用，并且优于LAK细胞。     

固本抑瘤Ⅱ号对小鼠Lewis肺癌抑制作用及与化疗药联合应用的实验研究

目的探讨益气活血中药复方固本抑瘤Ⅱ号对小鼠Lewis肺癌的作用及与化疗药物环磷酰胺(CTX)合用的效果。方法60只C57BL/6小鼠随机分为:对照组,CTX化疗组(CTX)(30mg/kgCTX腹腔注射),固本抑瘤Ⅱ号中剂量组(M)35g/(kg.d)灌胃、高剂量组(H)70g/(kg.d)灌胃,固本抑瘤Ⅱ号中剂量加CTX组(M CTX)、高剂量加CTX组(H CTX),每组10只。观察固本抑瘤Ⅱ号对Lewis肺癌移植瘤与转移瘤的作用,及与CTX合用的效果。结果固本抑瘤Ⅱ号M组、H组的抑瘤率(IR)分别为23.35%、36.82%,瘤重分别为(2.82±1.56)g、(2.32±1.06)g,与对照组(3.68±1.10)g相比明显缩小,P均<0.05;M CTX组、H CTX组抑瘤率分别为71.49%、67.13%,与CTX组的63.35%抑瘤率相比未表现出明显差异;但联合用药效应为0.85相似文献   

VEGF反义核酸对Lewis肺癌细胞作用的研究

目的 探讨利用血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)反义寡核苷酸的基因治疗肺癌.方法 制作C57BL/6小鼠皮下肺癌模型30只,分为VEGF反义寡核苷酸(ASODN)治疗组、VEGF正义寡核苷酸(SODN)治疗组及对照组.接种Lewis肺癌细胞后24h内,用ASODN及SODN皮下注射进行治疗,对照组只注射生理盐水,观察小鼠肿瘤的生长情况.用免疫组化方法检测VEGF蛋白表达,RT-PCR方法检测VEGF mRNA的表达.结果 VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组、对照组平均瘤重分别为(4.31±0.45)g、(6.47±0.71)g、(6.23±0.76)g.VEGF反义寡核苷酸治疗组、VEGF正义寡核苷酸治疗组抑瘤率分别为41.8%、5.2%.VEGF反义寡核苷酸能明显抑制VEGF蛋白表达及VEGF mRNA的表达.结论 原位注射VEGF反义寡核苷酸能抑制小鼠肺癌生长.     

丹参酮ⅡA对小鼠Lewis肺癌Bax/bcl-2比值的影响

目的：观察丹参酮ⅡA（TanⅡA）对肺癌组织Bax/bcl-2比值的影响,进而对丹参酮ⅡA的抗癌机制进行探讨。方法：建立Lewis肺癌小鼠模型,将动物随机分为生理盐水组、TanⅡA组、TanⅡA＋环磷酰胺（CTX）组和CTX组共四组。腹腔连续注射给药。用免疫组化方法测定Bax、Bcl-2的表达水平,计算Bax/bcl-2比值。所有数据用SPSS13.0处理。结果：盐水组、TanⅡA组、TanⅡA＋CTX组、CTX组各组Bcl-2阳性表达率分别为（59.83±3.38）%、（45.89±5.31）%、（25.26±4.09）%和（30.93±4.13）%。各组Bax阳性表达率分别为（31.96±8.50）%、（39.66±3.81）%、（52.24±5.25）%和（46.58±4.10）%。各组Bax/bcl-2比值分别为0.54±0.16、0.87±0.13、2.12±0.42、1.53±0.25。与盐水对照组比较,各组结果具有统计学差异,其中TanⅡA＋CTX组各项指标均优于单纯TanⅡ组及CTX组。结论：TanⅡA通过上调Bax、下调Bcl-2的表达、诱导肿瘤细胞凋亡,且TanⅡA与CTX合用具有协同的作用,机制可能与TanⅡA可增强Bax表达、下调Bcl-2表达,提高Bax/Bcl-2比值而增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性有关。     

HA14-1对环磷酰胺治疗小鼠Lewis肺癌增敏作用的实验研究

目的 观察HA14-1对环磷酰胺(CTX)治疗Lewis肺癌小鼠的化疗增效作用,探讨其可能的作用机制.方法 建立Lewis肺癌小鼠肿瘤模型,将40只C57BL/6小鼠随机分为4组:生理盐水组、CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组,给药7 d.于肿瘤接种22 d处死小鼠,描绘各组肿瘤体积增长曲线、计算抑瘤率,免疫组织化学方法测定治疗前后Lewis肺癌细胞Bcl-2、Bax和Caspase-9蛋白的表达情况.结果 HA14-1组与生理盐水组比较无明显抑制肿瘤体积的作用,CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组的肿瘤体积较生理盐水组增长慢.HA14-1组的抑瘤率与生理盐水组比较无明显增加(P>0.05);CTX+HA14-1组及CTX组与生理盐水组比较,CTX+HA14-1组与CTX组比较,抑瘤率均明显增加(P<0.05).CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bcl-2蛋白表达均减少,且CTX+HA14-1组较CTX组Bcl-2蛋白明显减少(P<0.05).CTX组、HA14-1组和CTX+HA14-1组Bax、Caspase-9蛋白表达增加,与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.05);CTX+HA14-1组比CTX组Bax、Caspase-9蛋白表达明显增加(P<0.05).结论 HA14-1可以增加CTX的化疗作用,其作用机制可能是通过抑制Bcl-2蛋白的表达,增加Bax、Caspase-9蛋白表达,从而促使肿瘤细胞凋亡.     

PMA诱导小鼠Lewis肺癌细胞节律基因的表达

目的采用体外节律诱导剂以研究小鼠Lewis肺癌细胞近日节律基因的表达情况。方法采用12-十四酸佛波酯-13-乙酸盐（PMA）刺激体外培养的小鼠Lewis肺癌细胞（LLC），RT—PCR检测不同时间点mPer1的mRNA表达水平。Real—time PCR和RT—PCR检测mClock的mRNA表达水平。结果发现LLC细胞的节律基因mClock、mPer1存在近日节律振荡。结论经PMA诱导后，LLC细胞的节律基因存在近日节律振荡，为体外研究授时因子对近日节律的导引机制提供证据。