咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的:研究咖啡因对LY294002 诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用。方法:DNA 断裂分析采用琼脂糖凝胶电泳法,[Ca²⁺]i 测定采用Fura-2 荧光技术,磷酸化c-Jun 分析采用免疫荧光法,c-Jun 含量和JNK 活性分析采用Western blot 法。结果:咖啡因对LY294002 诱导小脑颗粒神经元凋亡具浓度依赖性的保护作用,这种保护作用不依赖[Ca²⁺]i 的升高或cAMP的生物效应。咖啡因可抑制c-Jun 氨基末端激酶(JNK) 的活性,降低细胞内磷酸化c-Jun 的含量和c-Jun 的表达。结论:咖啡因可抑制JNK 活性,阻断c Jun 磷酸化及其介导的细胞凋亡信号转导系统,从而对LY294002 诱导小脑颗粒神经元凋亡具有保护作用。     

复方二精灵多糖对谷氨酸诱导的海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨中药复方二精灵多糖(EJL)预防阿尔茨海默病的机制。方法实验分为正常对照组、模型(100μmol.L-1谷氨酸诱导)组、阳性对照组(50μmol.L-1多奈哌齐)及EJL实验组(0.5,1.0,2.0及3.0g.L-1)。体外培养9d的海马神经元先用各药物预处理一定时间后,加入谷氨酸。采用MTT法、Hoechst 33258荧光染色、流式细胞术和Western蛋白质印迹法等方法检测细胞凋亡。结果MTT检测发现,随着EJL浓度的增加,细胞的存活率也增加;与模型组〔(59.6±4.6)%〕比较,EJL2.0及3.0g.L-1组细胞存活率明显升高〔(82.8±2.8)%和(89.4±4.1)%;n=3,P<0.05〕。荧光染色观察形态学变化发现,EJL预处理组凋亡细胞明显减少。FITC-Annexin Ⅴ和PI双染,在直方图中可以发现,模型组的凋亡率为32.33%,EJL预处理组则分别为24.33%,22.01%及12.12%。Western蛋白质印迹法结果显示,与模型组比,EJL2.0g.L-1预处理可以显著提高Bcl-2蛋白表达量,减少Bax蛋白表达量。结论EJL对海马神经元有一定的保护作用。     

咖啡因对苯妥英诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用及机制

目的　观察咖啡因 (caffeine)对苯妥英 (diphenylhy dantoin ,DPH) 10 0 μmol·L-1处理的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranularneurons ,CGNs)存活率的影响 ,并探讨其作用机制。方法　体外培养 8d的CGNs,同时给予 10 0μmol·L-1苯妥英和 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因 ,4 8h后行凋亡分析 ;采用dantrolene(2 0 μmol·L-1)、2APB (5 0 μmol·L-1)、nifedipine(10 0 μmol·L-1)和nimodipine(10 0 μmol·L-1)、MK80 1(4μmol·L-1)、KN93(1μmol·L-1)以及MEK1抑制剂PD980 5 9(5 0 μmol·L-1)分别预先孵育 30min ,再与10mmol·L-1咖啡因和 10 0 μmol·L-1苯妥英共孵育 4 8h ,测定CGNs存活率 ,观察咖啡因的作用与 [Ca2 + ]i 的关系 ;Westernblot法检测咖啡因对磷酸化c Jun和磷酸化ERK水平的影响。结果　① 1 2 5～ 2 0mmol·L-1咖啡因可浓度依赖性抑制 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡 ,显著提高CGNs存活率 ;②dantrolene、2APB、nifedipine和nimodipine、KN93、MK80 1和PD980 5 9均不能取消 10mmol·L-1咖啡因对 10 0 μmol·L-1苯妥英引起的CGNs凋亡的保护作用。③咖啡因可明显抑制苯妥英诱导CGNs中c Jun磷酸化水平的升高 ,但不影响被苯妥英抑制的ERK的活性。结论　一定浓度的咖啡因可保护苯?     

吡格列酮对谷氨酸诱导的皮质神经元损伤的保护作用

目的观察吡格列酮对谷氨酸所致培养皮质神经元损伤的保护作用及其机制。方法乳大鼠大脑皮质神经元,培养7d后用于实验。实验分为对照组,加入0.1%二甲亚砜;谷氨酸损伤组,加入谷氨酸100μmol·L-1作用2h或24h;吡格列酮组,先分别加入吡格列酮0.01,0.1和1μmol·L-1作用1h,然后加入谷氨酸;谷氨酸+吡格列酮+GW9662组,先加入GW966210μmol·L-1作用30min,然后加入吡格列酮1μmol·L-1,作用1h后加入谷氨酸。MTT法测定细胞存活率;Hoechst33258核染色观察细胞凋亡的形态学改变;Western印迹法检测Bcl-2蛋白、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化c-Jun氨基端激酶1(JNK1)表达水平;免疫荧光染色法检测钙蛋白酶Ⅰ及磷酸化活化转录因子2(ATF2)表达。结果谷氨酸作用24h可使体外培养神经元细胞存活率明显下降,从对照组的(100.0±15.4)%降低至(71.5±6.1)%;细胞凋亡百分率明显增加,从对照组的(8.7±1.3)%增加至(35.4±6.9)%;磷酸化JNK1、钙蛋白酶Ⅰ蛋白和磷酸化ATF2表达增加,Bcl-2蛋白表达水平降低。吡格列酮0.1及1μmol·L-1明显对抗谷氨酸引起的神经元损伤,神经元细胞存活率分别为(91.1±4.7)%和(96.6±3.4)%;细胞凋亡百分率分别为(15.5±3.8)%和(9.2±0.9)%。过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)的特异性阻断剂GW9662不能拮抗吡格列酮对神经元的保护作用,谷氨酸+吡格列酮+GW9662组细胞存活率为(91.3±6.7)%,细胞凋亡百分率为(10.2±1.8)%。单独应用GW966210μmol·L-1对细胞存活率和细胞凋亡百分率没有影响。吡格列酮也可抑制谷氨酸引起的磷酸化JNK1、磷酸化ATF2、钙蛋白酶Ⅰ表达增多及Bcl-2蛋白表达减少。结论吡格列酮对谷氨酸引起的培养皮质神经元损伤具有明显的保护作用,可能与吡格列酮抑制磷酸化JNK1和钙蛋白酶Ⅰ表达,以及增强Bcl-2蛋白表达有关,与PPARγ激活无关。     

地黄寡糖对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响

目的观察地黄寡糖对谷氨酸诱导海马神经元损伤的影响。方法将培养7～9d的SD大鼠海马细胞进行NSE鉴定,然后随机分为:正常组(control);单纯地黄寡糖用药组(ROS);谷氨酸损伤组(Glu);谷氨酸损伤前地黄寡糖预处理组(ROS+Glu)。采用倒置显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率,比色法测定培养液中的乳酸脱氢酶(LDH)含量,流式细胞术测定细胞凋亡率。结果0.1mmol·L-1谷氨酸作用于海马神经元24h,出现明显细胞损伤,细胞存活率下降,培养液中LDH含量明显增加,细胞凋亡率增高(P<0.01);4、20、100mg·L-1的地黄寡糖可不同程度的改善谷氨酸损伤引起的神经细胞形态的改变,提高细胞存活力,减少LDH的漏出,降低细胞凋亡率,并呈一定的剂量依赖性。4、20、100mg·L-1单纯地黄寡糖组与正常组间各指标差异没有显著性(P>0.05)。结论谷氨酸能诱导海马原代细胞的凋亡,地黄寡糖能有效保护海马神经细胞免受谷氨酸诱导的细胞损伤。     

胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系

用凝胶电泳和fura-2荧光技术测定［Ca²⁺］_i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与［Ca²⁺］_i升高之间的关系. 将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾（25 mmol·L^-1 KCl）培养基中转移到低钾（5 mmol·L^-1 KCl）培养基中,神经元发生凋亡. 但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因（5-20 mmol·L^-1）浓度依赖性地保护,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定(ryanodine) 敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林(dantrolene)的影响;也不被Ｌ-型钙通道阻断剂硝苯地平, 尼莫地平, 维拉帕米和NMDA受体阻断剂地佐环平抑制. 结果说明［Ca²⁺］_i的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的.     

大豆苷元对谷氨酸体外诱导海马神经元损伤大鼠的保护作用

［摘要］目的探讨大豆苷元对谷氨酸体外诱导原代培养大鼠海马神经元损伤的作用及机制. 方法通过对海马神经元的超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）生化测试及胞内游离钙浓度测定,观察大豆苷元对谷氨酸诱导海马神经元损伤的作用. 结果大豆苷元呈浓度依赖性的拮抗由400 μmol&;#8226;L 1谷氨酸诱导的［Ca2+］i 增高、MDA生成,并提高SOD活性.结论大豆苷元对谷氨酸体外诱导大鼠海马神经细胞损伤具有保护作用,可能与缓解胞内Ca2+超载、提高神经元抗氧化能力有关.     

藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡的保护作用

目的　研究藻酸双酯钠（ＰＳＳ） 对蜂毒肽（ｍａｓｔｏｐａｒａｎ）诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠皮质神经元，定性定量检测细胞凋亡：①用ＦＤＡ（ｆｌｕｏ ｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ） 染色检测细胞存活率，用Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色，分析细胞核的形态变化；②琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ 断裂；③流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果　ＰＳＳ使皮质神经元存活率增加，使ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 使神经元的ＤＮＡ电泳图谱出现明显的“梯子状”，而ＰＳＳ使此现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ使神经元的流式细胞仪分析图上出现明显的凋亡峰，ＰＳＳ可使此凋亡峰消失。结论　藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡具有明显的保护作用     

阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用的影响

目的探讨MEK/ERK信号转导通路是否参与了阿魏酸钠(SF)对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡作用。方法以谷氨酸诱导大鼠皮层神经元凋亡为模型。采用Westernblot观察Bcl-2、caspase-3、磷酸化ERK1/2表达的改变。结果阿魏酸钠能够显著降低谷氨酸诱导的神经细胞caspase-3的表达,提高Bcl-2、磷酸化ERK1/2的表达。PD98059可以减弱SF的保护作用。结论 MEK/ERK1/2通路参与阿魏酸钠对抗谷氨酸诱导的鼠皮层神经元凋亡。     

化合物LH-17对谷氨酸导致原代皮层神经元凋亡的保护作用

研究化合物LH-17对谷氨酸诱导原代皮层神经元凋亡的保护作用及其机制。L-谷氨酸钠(0.1,0.5和1.0 mmol·L-1)处理神经元30 min进行造模,化合物处理组在加入L-谷氨酸钠前给予美金刚(1μmol·L-1)或不同剂量的LH-17(0.1,1和10μmol·L-1)预孵育1 h再造模;换正常神经元培养基继续培养24 h后,MTT法检测细胞存活率,流式细胞仪检查细胞凋亡和坏死率,琼脂糖电泳分析凋亡后DNA lad-der情况;Fura-2对细胞内钙进行染色,荧光显微镜观察LH-17瞬时给药后细胞内钙离子浓度的影响,试剂盒分析NO水平。结果表明,L-谷氨酸钠浓度依赖性地诱导神经元发生凋亡和坏死,LH-17能抑制L-谷氨酸钠对细胞的毒性作用,减少凋亡小体,降低DNA断裂程度;L-谷氨酸能引起细胞内钙浓度大幅增加,用LH-17预处理后,增加幅度明显降低(P<0.05);同时,LH-17逆转了L-谷氨酸导致的细胞内NO浓度增高。以上结果提示,LH-17可能通过抑制神经元内钙超载,及下游NO浓度增高而起到减少谷氨酸引起的兴奋性氨基酸毒性的作用。     

Study of the protective effect of calcium channel blockers against neuronal damage induced by glutamate in cultured hippocampal neurons

BackgroundThe aim of this study was to examine the putative protective effect of calcium channel blockers on hippocampal neurons in the experimental model of excitotoxic damage.MethodsSeven-day old primary dissociated cultures of rat hippocampal neural cells containing one of the following calcium channel blockers: cinnarizine, flunarizine or nimodipine were exposed to glutamate-induced injury. Quantitative assessments of neuronal injury were accomplished by measuring lactate dehydrogenase (LDH) activity in the media 24 h after exposure to glutamate and by counting and establishing the apoptotic and necrotic cells in flow cytometry with Annexin V-FITC/PI staining.ResultsIn our experiment, glutamate induced a 339% elevation of apoptotic cells and a 289% increase of necrotic cells in hippocampal neurons as compared to control cultures without drugs. In cultures containing flunarizine, glutamate-induced cell apoptosis was suppressed by 62% while necrosis showed no significant alternation. Cinnarizine exerted no anti-apoptotic effects on glutamate-injured cultured hippocampal neurons, while nimodipine intensified the apoptotic pathway of cell death and promoted an increase in the number of apoptotic neurons by 26%. When cinnarizine or nimodipine were used, the percentage of necrotic cells was significantly lower when compared with glutamate-injured cultures and it amounted to 44% and 24% for cinnarizine and nimodipine, respectively.ConclusionsThe obtained results suggest the beneficial anti-apoptotic potential of flunarizine and the anti-necrotic potential of cinnarizine against glutamate-induced death of cultured hippocampal neurons. Nimodipine can protect neurons against necrosis, but has an intensified adverse pro-apoptotic effect on cultured neurons in the experimental model of excitotoxic injury.     

Oxidative stress accelerates synaptic glutamate dyshomeostasis and NMDARs disorder during methylmercury‐induced neuronal apoptosis in rat cerebral cortex

Methylmercury (MeHg) is a potent neurotoxin,which leads to a wide range of intracellular effects. The molecular mechanismsassociated to MeHg‐induced neurotoxicity have not been fully understood.Oxidative stress, as well as synaptic glutamate (Glu) dyshomeostasis have beenidentified as two critical mechanisms during MeHg‐mediated cytotoxicity. Here,we developed a rat model of MeHg poisoning to evaluate its neurotoxic effectsby focusing on cellular oxidative stress and synaptic Glu disruption. Inaddition, we investigated the neuroprotective role of alpha‐lipoic acid (α‐LA), a natural antioxidant, todeeply explore the underlying interaction between them. Fifty‐six rats wererandomly divided into four groups: saline control, MeHg treatment (4 or 12μmol/kg MeHg), and α‐LApre‐treatment (35 μmol/kg α‐LA+12μmol/kg MeHg). Rats exposed to 12 μmol/kg MeHg induced neuronal oxidativestress, with ROS accumulation and cellular antioxidant system impairment. Nrf2 andxCT pathways were activated with MeHg treatment. The enzymatic or non‐enzymaticof cellular GSH synthesis were also disrupted by MeHg. On the other hand, the abnormalactivities of GS and PAG disturbed the “Glu‐Gln cycle”, leading to NMDARsover‐activation, Ca2+ overload, and the calpain activation, which acceleratedNMDARs degradation. Meanwhile, the high expressions of phospho‐p44/42 MAPK,phospho‐p38 MAPK, phospho‐CREB, and the high levels of caspase 3 and Bax/Bcl‐2 finallyindicated the neuronal apoptosis after MeHg exposure. Pre‐treatment with α‐LA significantly preventedMeHg‐induced neurotoxicity. In conclusion, the oxidative stress and synapticGlu dyshomeostasis contributed to MeHg‐induced neuronal apoptosis. Alpha‐LAattenuated these toxic effects through mechanisms of anti‐oxidation andindirect Glu dyshomeostasis prevention     

诱导型HSP70过表达对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的观察腺病毒介导的人诱导型HSP70过表达对低钾诱导的原代培养的大鼠小脑颗粒神经元(cerebellargranuleneurons,CGN)凋亡的影响。方法原代培养5d的CGN共感染含人诱导型HSP70和绿色荧光蛋白(GFP)的腺病毒(AdTR5/HSP70-GFP)和四环素调控的启动子(AdCMV/tTA),或共感染含GFP的腺病毒(AdTR5/GFP)和AdCMV/tTA(对照组)。48h后,采用细胞荧光免疫组织化学法、Westernblot法检测HSP70的表达,或者换成无血清含5mmol·L-1KCl的培养基以诱导神经元凋亡。24h后,采用相差显微镜观察细胞形态学变化,MTT法检测神经元存活率,Hoechst33258核染色和DNA琼脂糖凝胶电泳分析神经元凋亡,以观察HSP70过表达对低钾诱导的CGN凋亡的影响。结果共感染了AdCMV/tTA和AdTR5/HSP70-GFP的CGN过表达了HSP70,抑制了低钾诱导的CGN的凋亡:使神经元存活率由45·5%±5·2%提高至82·3%±5·2%(P<0·01),核固缩减少,DNA的片段化减轻。结论腺病毒介导的人诱导型HSP70的过表达抑制了低钾诱导的CGN凋亡。     

胞内钙离子浓度与咖啡因保护小脑颗粒神经元作用的关系(英文)

用凝胶电泳和 fura- 2荧光技术测定 [Ca2 + ]i方法研究咖啡因对低钾诱导的大鼠小脑颗粒神经元凋亡的保护作用与 [Ca2 + ]i 升高之间的关系 .将体外培养的小脑颗粒神经元从高钾 ( 2 5mmol· L-1KCl)培养基中转移到低钾 ( 5mmol· L-1KCl)培养基中 ,神经元发生凋亡 .但低钾引起的神经元死亡可被咖啡因 ( 5- 2 0 mmol· L-1)浓度依赖性地保护 ,且咖啡因的这种作用不受蓝尼定 ( ryanodine) -敏感钙释放阻断剂蓝尼定和丹曲林 ( dantrolene)的影响 ;也不被 L-型钙通道阻断剂硝苯地平 ,尼莫地平 ,维拉帕米和 NMDA受体阻断剂地佐环平抑制 .结果说明 [Ca2 + ]i 的升高并不是咖啡因对小脑颗粒神经元的保护作用所必需的 .     

茶碱对低钾诱导的小脑颗粒神经元凋亡的保护作用

目的　研究茶碱对复极化浓度钾离子 (5mmol·L-1KCl,又称低钾 )诱导的小脑颗粒神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠小脑颗粒神经元 ,定性定量检测细胞凋亡 :①用FDA (fluoresceindiacetate)染色检测细胞存活率 ,用Hoechst 332 5 8染色 ,分析细胞核的形态变化 ;②琼脂糖凝胶电泳分析DNA断裂 ;③免疫荧光法检测细胞内cAMP水平。结果　茶碱使低钾培养的小脑颗粒神经元的存活率增加 ,使低钾引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失 ;低钾使神经元的DNA电泳图谱出现明显的“梯子状” ,而茶碱使此现象消失 ;敏感性内钙释放阻断剂、L 型钙通道阻断剂及NMDA受体阻断剂均不能抑制茶碱对神经元的保护作用 ;茶碱对细胞内cAMP水平没有明显的影响。结论　茶碱对复极化浓度钾离子诱导的小脑颗粒神经元凋亡具保护作用 ,此作用不依赖胞内钙离子浓度 ,也不通过升高胞内cAMP水平来实现     

甘草酸二铵对大鼠脑缺血再灌致神经细胞凋亡的保护作用

研究表明,细胞凋亡是造成脑缺血-再灌注后迟发性持续神经细胞损伤不可忽视的重要因素.所以,减少神经细胞的凋亡对于减轻局灶性脑缺血再灌注损伤显得尤为必要.已有研究表明,甘草酸二铵为18α-甘草酸的铵盐制剂,具有很强的抗炎、抗过敏、保护膜结构和免疫调节作用[1].本实验则进一步研究了甘草酸二铵(DG)对缺血再灌注致脑神经细胞凋亡的保护作用.