星形胶质细胞、少突胶质细胞分离培养新方法研究

根据神经胶质细胞中星形胶质细胞、少突胶质细胞的生长存在时间差异,细胞生长方式及细胞对培养层粘附等特性不同,作者建立了体外分离培养方法。经光镜、扫描电镜证实,分离培养的细胞形态与先前用其它方法的研究结果相一致。免疫细胞化学鉴定显示星形胶质细胞的标志蛋白胶原纤维酸性蛋白（ Ｇ Ｆ Ａ Ｐ）和少突胶质细胞标志蛋白髓鞘碱性蛋白（ Ｍ Ｂ Ｐ）的表达与分离的细胞相符。表明所分离细胞的纯度较好,该方法可靠易行。     

星形胶质细胞与神经轴突再生

神经元是难再生细胞,神经组织损伤后神经再生主要表现为神经轴突的延长与神经突触的重塑,而神经轴突再生受胶质瘢痕、神经营养因子及轴突生长抑制因子等因素的影响,其中胶质瘢痕形成及神经营养因子的产生与星形胶质细胞密切相关。中枢神经系统损伤后星形胶质细胞分泌神经营养因子、形成胶质瘢痕形成,对神经轴突再生有利弊双重作用。     

003 有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药，对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞，反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性，研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

有机磷农药对星形胶质细胞的影响

有机磷农药是我国生产和使用最多的农药,对神经的损伤是有机磷农药中毒患者致死的主要原因。研究表明星形胶质细胞可能是有机磷农药除乙酰胆碱酯酶之外的作用靶点。有机磷农药能够激活星形胶质细胞,反应性胶质化在有机磷农药的神经毒性中具有两面性,研究者们更倾向于认为它对有机磷农药神经毒性的保护作用。     

星形胶质细胞与帕金森病的研究进展

帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一种锥体外系功能障碍引起的,病理特征为脑黑质致密体部位多巴胺能神经元变性和路易体(Lewy body)形成为特征的慢性神经退行性疾病.纹状体内多巴胺递质含量显著减少,导致黑质纹状体多巴胺能神经功能低下而胆碱能神经功能相对占优势,从而产生运动障碍.导致多巴胺神经元变性的原因迄今不明,目前认为,环境、遗传、感染、免疫功能异常、衰老、体内外的神经毒素等因素对帕金森氏病发病均起一定的作用,而氧化应激和线粒体功能受损在帕金森氏病的发病中起着十分重要的作用.星形胶质细胞在PD 中的作用已日益受到关注,普遍认为星形胶质细胞在PD 中起双重作用.本文现就星形胶质细胞与帕金森病的发病研究作一综述.     

星形胶质细胞与神经退行性疾病

神经退行性疾病(neurodegenerative disease,ND)是大脑和脊髓的细胞神经元丧失的疾病状态,严重威胁着人类健康,其发病机制尚不完全清楚,也缺乏有效的治疗方法。目前研究表明星形胶质细胞反应在ND的发生发展中起重要作用,已成为这类疾病的病理标志。随着研究的深入,星形胶质细胞在这类疾病中的地位和作用也受到了越来越多的关注。     

反应性星形胶质细胞对中枢神经系统损伤的保护作用

胶质瘢痕抑制轴突再生的观念在过去的100年里一直占据着主导地位。近年来,越来越多分子消除技术的研究表明,反应性星形胶质细胞增生和瘢痕的形成,在中枢神经系统的损伤恢复中起到重要的保护作用,尤其是在损伤的急性期。本文将从分子水平,信号机理和胶质瘢痕等方面对中枢神经系统(center nervous system,CNS)损伤后,星形胶质细胞的作用予以综述。     

氯化镉对大鼠原代星形胶质细胞凋亡的影响

目的研究氯化镉对星形胶质细胞凋亡的影响。方法取处于对数生长期的细胞,以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20、40μmol/L氯化镉溶液染毒12、24 h,采用MTT实验测定细胞的存活率;以终浓度为0(对照)、2.5、5、10、20μmol/L氯化镉溶液染毒12 h,采用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测定细胞的凋亡率。结果与对照组相比,5~40μmol/L氯化镉染毒12、24 h时大鼠星形胶质细胞的存活率均较低,5~20μmol/L氯化镉染毒12 h时大鼠星形胶质细胞的凋亡率均较高,差异均有统计学意义(P0.05);且随着氯化镉染毒浓度的升高,大鼠星形胶质细胞的存活率呈下降趋势,而凋亡率呈上升趋势。结论氯化镉对星形胶质细胞具有明显的毒性作用,可诱导星形胶质细胞凋亡。     

星形胶质细胞在阿尔茨海默病炎症中作用

随着社会的老龄化,阿尔茨海默病(AD)的发病率呈逐渐上升的趋势,而且会带来巨大的生理痛苦和社会负担。近年来,炎症反应在AD中的作用越来越受到重视。本研究就星形胶质细胞参与AD炎症反应的可能机制做一综述。     

水囊压迫大鼠脑组织致星形胶质细胞中胶质纤维酸性蛋白的变化

目的 研究水囊压迫大鼠颅脑造成损伤后星形胶质细胞的反应.方法 将改装后的5F漂浮导管球囊部位全部插入颅内硬膜外后,注射0.5 ml无菌生理盐水人球囊使其扩张并维持压力2 h.于伤后不同时间将大鼠处死,取脑组织进行HE染色和胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)免疫组...     

酒精对星形胶质细胞和少突胶质细胞膜脂质流动性的影响

为探讨酒精所致的神经元分化成熟迟滞和髓鞘形成受阻机制,本文以ＤＰＨ荧光探针研究了酒精对与神经元和髓鞘发育相关的星形胶质细胞、少突胶质细胞膜脂质流动性的影响。结果表明５ｍｍｏｌ／Ｌ酒精可导致星形胶质细胞、少突胶质细胞ＤＰＨ荧光探针的荧光偏振度（Ｐｒ）降低,膜脂质流动度（ＬＦＵ）增高,呈明显的剂量－反应关系,并发现酒精对星形胶质细胞作用强于少突胶质细胞。上述结果揭示酒精能改变两种胶质细胞的膜脂质流动性。它可能在酒精所致的神经元和髓鞘功能发育异常中起重要作用。     

镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响

目的研究氯化镧对小鼠大脑皮质星形胶质细胞凋亡相关基因表达的影响。方法原代培养的小鼠大脑皮质星形胶质细胞分别于终浓度为0(对照)、0.25、0.5、1.0 mmol/L氯化镧无血清培养基处理24 h后,采用RT-PCR法检测星形胶质细胞B细胞淋巴瘤2(B-cell lymphoma 2,Bcl-2)、B细胞淋巴瘤2相关X基因(Bcl-2-associated Xgene,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(caspase-3)、caspase-8和caspase-9 mRNA的表达水平。结果与对照组比较,0.25、0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均显著升高,0.5和1.0 mmol/L氯化镧染毒小鼠星形胶质细胞Bcl-2 mRNA的表达水平均显著降低,差异有统计学意义(P<0.05);且随着氯化镧染毒剂量的升高,小鼠星形胶质细胞Bax、caspase-3和caspase-9 mRNA的表达水平均呈上升趋势,Bcl-2 mRNA的表达水平呈下降趋势。而各组小鼠星形胶质细胞caspase-8 mRNA的表达水平间比较,差异无统计学意义。结论氯化镧对星形胶质细胞产生毒作用的机制可能与氯化镧致促凋亡基因Bax和caspase-3、caspase-9表达升高以及抑凋亡基因Bcl-2表达下降有关。     

星形胶质细胞培养方法的改进

目的改进大鼠大脑皮质星形胶质细胞的体外培养方法,为研究星形胶质细胞的生物学作用提供实验模型。方法新生1～3d的大鼠,无菌操作下取双侧大脑皮质,机械吹打使细胞分散成悬液,差速粘附处理以去除成纤维细胞成分,细胞悬液原代培养9～14d,待细胞融合成单层并铺满瓶底后,4次消化传代,GFAP免疫组化染色鉴定星形胶质细胞。结果这种改进的星形胶质细胞培养方法,分离培养出星形胶质细胞,纯化率达95%以上。结论采用本实验改进的方法,培养的大鼠星形胶质细胞生长良好,纯度高,为后续实验对星形胶质细胞的生物学作用研究奠定实验基础。     

甲状腺激素对脑发育期星形胶质细胞的影响

甲状腺激素可影响脑发育期星形胶质细胞的增殖、分化成熟和移行.其作用机制主要包括两方面:①基因转录机制,三碘甲状腺原氨酸与核内甲状腺激素受体结合,激活靶基因特录.不同甲状腺激素受体异构体作用不同,甲状腺激素受体α1和甲状腺激素受体β在星形胶质细胞分化成熟上作用对立;②非基因转录机制,甲状腺素和反三碘甲状腺原氨酸可通过促进星形胶质细胞肌动蛋白聚合以及调节Ⅱ型脱碘酶(D2)数量及活性影响脑发育.该文对甲状腺激素对脑发育期星形胶质细胞的影响作以综述.     

高热对星形胶质细胞GFAP表达的影响

目的　研究高热对大脑星形胶质细胞中胶质原纤维酸性蛋白 (glialfibrillaryacidicprotein ,GFAP)表达的影响及后果。方法　分离培养脑星形胶质细胞 ;42℃分别作用细胞 1、2、4h后 ,进行免疫学染色 ,观察GFAP表达的变化 ;采用改良Lowry法测定星形胶质细胞条件培养液中总蛋白含量。结果　在高温条件下 ,脑星形胶质细胞反应性增生。 42℃作用 4h后 ,GFAP表达显著减少 ,细胞条件培养液中总蛋白含量减少 2 6μg/ml(由 3 83 μg/ml降低到 3 5 7μg/ml)。 结论　高热条件可以下调脑星形胶质细胞GFAP的表达 ,影响星形胶质细胞生物学功能 ,在中枢损伤的发生发展过程中发挥作用     

砷对脑星形胶质细胞的毒性作用

探讨砷对脑星形胶质细胞的毒性作用。以原代培养脑星形胶质细胞(astrocyte,AST)为实验对象,在含砷浓度分别为0、5、10、20、30μmol/L的培养液中培养24h,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞仪测定细胞线粒体膜电位的水平,荧光双波长分光光度计法检测细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)。与对照组相比,AST活力及线粒体膜电位水平随砷暴露浓度的增加而明显下降;[Ca2+]i随砷暴露浓度的增加而显著升高。砷对AST具有明显的毒性作用,在5～30μmol/L的浓度范围内其毒性作用随砷暴露浓度的增加而增强,可引起AST内钙超载,并破坏线粒体功能。 更多还原     

溴氰菊酯对原代培养大鼠星形胶质细胞存活率和胞内游离钙浓度的影响

目的　观察溴氰菊酯 (DM)对原代培养大鼠神经星形胶质细胞存活率及胞内游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i)的影响。方法　以锥虫蓝染料排斥试验检测细胞染DM后存活率的变化 ;以Fura 2 /AM为荧光指示剂 ,RF 5 30 1PC荧光分光光度计测定细胞内 [Ca2 + ]i的变化。结果　 1× 10 -5mol/L组染毒DM 72h后细胞存活率下降为 91.9% ,与对照组的差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,1× 10 -4mol/L组DM染毒4、12、4 8、72h后细胞存活率分别为 89.0 %、84 .8%、81.2 %和 79.2 % ,差异有显著性 (P <0 .0 1) ;1× 10 -7、1× 10 -6、1× 10 -5mol/L组DM染毒 5min后胞内 [Ca2 + ]i分别上升至 (45 1.4± 4 2 .3)、(5 36 .9± 4 7.5 )、(870 .9± 10 0 .5 )nmol/L ,与染毒前及对照组比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。以后各染毒组胞内 [Ca2 + ]i逐渐下降 ,15min时 1× 10 -8、1× 10 -7、1× 10 -6、1× 10 -5mol/L染毒组胞内 [Ca2 + ]i分别降至 (12 4 .3± 6 .0 )、(131.3± 19.1)、(118.9± 1.4 )、(136 .6± 3.8)nmol/L ,与染毒前及对照组比差异均有显著性 (P <0 .0 5或P <0 .0 1)。结论　DM在体外可降低神经胶质细胞的存活率并短时升高胞内 [Ca2 + ]i。     

氟对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞的毒性作用

目的探讨NaF对体外培养大鼠大脑皮层星形胶质细胞细胞周期和琥珀酸脱氢酶(SDH)、5′-核苷酸酶(5′-NT)、酸性磷酸酶(ACP)活性的影响。方法体外分离纯化培养获得纯度达98%以上的大鼠大脑皮层星形胶质细胞(特异性抗GFAP免疫化学鉴定),分别用浓度为1、2和5mmol/LNaF对星形胶质细胞染毒12、24、48和72h,FCM检测细胞周期构成比,紫外比色法检测SDH、5′-NT、ACP活性。结果FCM分析细胞周期显示:1～5mmol/L剂量范围内,NaF能够以剂量依赖方式诱导星形胶质细胞周期由S期阻滞向G2/M期阻滞转变,随着时间延长变化更明显,超出这一范围则主要为subG1期细胞。紫外比色法检测结果表明,NaF抑制SDH、ACP活性,2mmol/L范围内对5′-NT活性影响无显著性(P0.1),增加剂量5′-NT失活;SDH、ACP活性与subG1DNA期细胞相对含量显著负相关(SDH:r=-0.84148,P0.05;ACP:r=-0.90416,P0.01)。结论NaF可诱导星形胶质细胞细胞周期阻滞及凋亡,并可抑制其SDH、5′-NT、ACP活性。     

醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用

目的探讨醋酸铅对小鼠星形胶质细胞的凋亡作用,为进一步研究铅对血—脑屏障的损伤提供理论基础。方法用不同浓度醋酸铅(0、5、10、20、40μmol/L)染毒对数生长期小鼠星形胶质细胞C8(6、12、24、48 h)后,MTT法检测细胞生长情况;倒置相差显微镜观察细胞形态;分光光度计检测细胞上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活力、丙二醛(MDA)含量,了解细胞损伤程度;免疫组化检测P53、Bax、Bcl-2的表达;PI-Hoechst33342染色、流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果不同浓度醋酸铅染毒不同时间,各染毒组细胞生长活力较对照组明显降低(P0.01),并存在浓度与时间依赖关系;醋酸铅(5、10μmol/L)染毒24 h组,形态学观察细胞密度较对照组降低,突触缩短变细,细胞间连接减少;培养上清液中染毒组LDH、MDA含量较对照组明显升高(P0.01),P53、Bax表达上升,Bcl-2表达降低;PI-Hoechst33342双重染色和流式细胞仪检测显示,染毒组细胞凋亡率较对照组明显升高。结论醋酸铅可明显抑制小鼠星形胶质细胞生长,并通过Bax/Bcl-2比值升高促使凋亡,进而影响血—脑屏障。     

工频磁场对星形胶质细胞间隙连接通讯功能的影响

目的　探讨工频磁场 (PFMF)是否有促癌或协同促癌作用。方法　利用荧光光漂白后再恢复法观察漂白细胞荧光强度的恢复以判断经间隙连接的细胞间通讯 ,以相对荧光强度恢复速率(CFIRR)作为对细胞间隙连接通讯 (GJIC)作用的评价指标 ,研究不同磁场强度单独作用或协同佛波酯(TPA)对星形胶质细胞GJIC功能的影响。结果　 3ng/mlTPA作用 1h时CFIRR的中位数 (Md)值为4 .53 % /min ,空白对照组为 9.74% /min ,两组的差异有显著性 (H =1 2 .0 84,P <0 .0 0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 4h时CFIRR的Md 分别 8.2 5、6 .68% /min ,与空白对照组比较 ,差异无显著性 (H =32 .61 7,P >0 .0 5)。 0 .8或 1 .6mT磁场作用 2 3h ,再与TPA共同作用 1h时CFIRR的Md 分别为 3 .32、2 .85% /min ,与TPA组比较 ,差异无显著性 (H =2 .589,P >0 .0 5)。结论　 0～ 1 .6mT的 50Hz磁场单独作用不能抑制星形胶质细胞GJIC功能 ;协同TPA ,不能增强TPA对星形胶质细胞GJIC的抑制作用 ;但是磁场对星形胶质细胞GJIC的抑制作用随着磁场强度增强呈递增趋势