异基因造血干细胞移植中异源反应性NK细胞作用机制的研究

异基因造血干细胞移植中天然杀伤细胞(NK)表面杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)-配体不相合可以产生异源反应性NK细胞,单倍体相合及无关供者造血干细胞移植中KIR不相合有利于改善预后,HLA相合同胞供者造血干细胞移植中活化型及抑制型KIR相互作用,共同影响预后.     

DMD患者脐带血干细胞移植中的HLA配型

【目的】了解假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy，DMD)患者接受脐血干细胞移植中HLA-A B DR不相合几率。【方法】用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide，PCR-RSSO)杂交技术，在埘30例DMD患者进行HLA-A B DR基因分型的基础上，将其与广东脐血库中的668份脐血干细胞HLA配型分析比较。【结果】13％(4／30)例患者找到HLA抗原全相合并满足移植细胞数要求的脐血干细胞；50％(15／30)例患者找到HLA抗原1个不相合并满足细胞数要求的脐血干细胞；20％(6／30)例患者找到HLA抗原0～1个不相合且细胞数达要求的2倍以上脐血干细胞。【结论】DMD患者寻找到合适的脐带血干细胞的几率较高，有利于对此病进行临床脐血干细胞移植。     

DMD患者脐带血干细胞移植中的HLA配型

[目的]了解假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)患者接受脐血干细胞移植中HLA-A B DR不相合几率.[方法]用PCR反向序列特异性寡核苷酸(polymerase chain reaction-reverse sequence specific oligonucleotide,PCR-RSSO)杂交技术,在对30例DMD患者进行HLA-A B OR基因分开的基础上,将其与广东脐血库中的668份脐血干细胞HLA配型分析比较.[结果]13%(4/30)例患者找到HLA抗原全相合并满足移植细胞数要求的脐血干细胞;50%(15/30)例患者找到HLA抗原1个不相合并满足细胞数要求的剂血干细胞;20%(6/30)例患者找到HLA抗原0～1个不相合且细胞数达要求的2倍以上脐血干细胞.[结论]DMD患者寻找到合适的脐带血干细胞的几率较高,有利于对此病进行临床脐血干细胞移植.     

异基因造血干细胞移植治疗重型再生障碍性贫血临床研究

目的 探讨异基因造血干细胞移植成功治疗重型再生障碍性贫血的疗效与治疗经验.方法 对15例重型再生障碍性贫血患者进行同胞间人组织相容性抗原(HLA)不全相合/HLA全相合造血干细胞移植,观察移植疗效及并发症,结合相关文献讨论分析.结果 移植后9～24 d(中位时间13.8 d)中性粒细胞大于0.5×109/L;移植后14～26 d(中位时间17.3 d)血小板大于20×109/L.2例于移植后26 d(HLA 3/6相合)和移植后48 d(HLA-A、DR各一个位点不合)发生Ⅱ度急性移植物抗宿主病(GVHD),予甲强龙治疗后控制;9例发生慢性GVHD,其中局限型6例(1例为HLA全相合,1例为HLA-B一个位点不合,4例HLA 3/6相合),广泛型3例[其中1例为HLA-DR一个位点不合,1例为4/6相合(HLA-A、B不合),1例HLA 3/6相合];4例发生肺部感染,3例发生肠道感染,1例巨细胞病毒感染;1例出现肝功能损害,无1例发生肝静脉闭塞病(VOD);随访3～37个月,14例患者无病生存,1例死于肺部侵袭性真菌感染.结论 异基因造血干细胞移植是治疗重型再生障碍性贫血的可靠方法,在充分考虑移植风险和积极准备的基础上可实施HLA不全相合造血干细胞移植.     

脐血干细胞移植治疗重型β-地中海贫血的研究进展

地中海贫血(简称地贫)是世界上最常见的遗传性血液病之一,异基因造血干细胞移植(HSCT)是目前根治重型β-地贫唯一的治疗方法,通过HSCT治疗的重型β-地贫患者的生活质量明显高于传统输血和去铁治疗的患者.造血干细胞移植应作为有人类白细胞抗原(HLA)相合的同胞供者的重型β-地贫患者首选治疗方案.对于无HLA全相合的同胞供者的重型地贫患者,可选择其他来源的造血干细胞.自1988年Gluckman等对1例Fanconi贫血患者成功实施首例HLA全相合同胞脐血移植(CBT)以来,CBT得到迅速发展,全世界以脐血作为造血干细胞(HSC)代替骨髓供体移植逐年增加,脐带血HSC已成为HLA不全相合血缘或非血缘HSC供体的新来源[1].     

HLA配型对慢性粒细胞白血病异基因造血干细胞移植效果的分析

目的分析HLA相合程度对慢性粒细胞白血病(CML)异基因造血干细胞移植的影响。方法 121例CML患者包括:慢性期90例、加速期8例、急变期23例。85例接受相关、36例无关移植。HLA全相合91例、部分相合30例。预处理方案:37例患者用含全身放疗+环磷酰胺、84例改良Bucy(白消安+环磷酰胺+阿糖胞苷)方案,移植物抗宿主病(GVHD)预防:HLA全相合相关移植用环孢素A+甲氨蝶呤(CsA+MTX),无关及相关HLA位点不合移植者采用CsA+MTX+抗胸腺细胞球蛋白或霉酚酸酯。COX模型分析影响长生存的因素。结果 121例患者除4例死于预处理相关毒性外、其余117例病人均获造血重建;HLA全相合与不相合移植者Ⅱ~Ⅳ°急性GVHD发生率分别为26.1%和53.3%(P=0.006),3年累计慢性GVHD发生率在全相合与不相合者分别为47.4%和49.6%(P=0.947);非复发移植相关死亡(TRM)率在HLA相合与不相合者分别为16.5%和40.0%(P=0.007);5年累积白血病复发率为16.7%、其中HLA相合与不相合者复发率分别为15.3%和22.7%(P=0.396);5年累积总生存(OS)和无病生存(DFS)率分别为70.6%和63.8%,其中OS和DFS在相合者为78.2%和70.3%、不相合者为47.6%和43.3%。多因素分析显示:HLA不合为Ⅱ~Ⅳ°急性GVHD的危险因素,Ⅱ~Ⅳ°急性GVHD为TRM发生的危险因素,HLA不合、急性GVHD、疾病分期为影响生存的危险因素。结论 HLA不相合移植TRM高于相合移植,从而导致OS显著低于HLA全相合移植,长期生存与供受来源无关。     

异基因造血干细胞移植后肠道急性移植物抗宿主病24例临床分析

目的 观察异基因造血干细胞移植术后肠道急性移植物抗宿主病(aGVHD)的临床特征、治疗及转归.方法 24例患者中7例接受同胞间白细胞抗原(HLA)全相合造血干细胞移植、17例接受HLA半相合造血干细胞移植,预处理方案依据具体情况选择FBA(氟达拉滨、白消安、阿糖胞苷)、Bu/Cy(白消安/环磷酰胺)、CCNU+Bu+C...     

环孢素A、甲氨喋呤、霉酚酸酯联合抗胸腺细胞球蛋白预防HLA不全相合移植的移植物抗宿主病

目的评价环孢素A(CsA)+甲氨喋呤(MTX)+霉酚酸酯(MMF)+抗胸腺细胞球蛋白(ATG)四联方案预防人类白细胞抗原(HLA)不全相合移植中的移植物抗宿主病(GVHD)的疗效。方法10例白血病和2例骨髓增生异常综合征患者分别接受HLA不全相合造血干细胞移植(HSCT)。预处理方案应用Flu+Bu+CTX;HLA1-3个位点不和。结果11例患者获得造血重建,急性GVHD(aGVHD)发生率7/11,慢性GVHD(cGVHD)发生率6/10,最长随访时间26个月,死亡率4/12。结论CsA+MTX+MMF+ATG可有效预防HLA不全相合移植中的GVHD,不影响造血重建,不增加移植相关死亡率和感染率。     

环孢素A、甲氨喋呤、霉酚酚酸酯联合抗胸腺细胞球蛋白预防HLA不全相合移植的移植物抗宿主病

目的 评价环孢素A(CsA) 甲氨喋呤(MTX) 霉酚酸酯(MMF) 抗胸腺细胞球蛋白(ATG)四联方案预防人类白细胞抗原(HLA)不全相合移植中的移植物抗宿主病(GVHD)的疗效. 方法 10例白血病和2例骨髓增生异常综合征患者分别接受HLA不全相合造血干细胞移植(HSCT).预处理方案应用Flu Bu CTX;HLA1-3个位点不和. 结果 11例患者获得造血重建,急性GVHD(aGVHD)发生率7/11,慢性GVHD(cGVHD)发生率6/10,最长随访时间26个月,死亡率4/12. 结论 CsA MTX MMF ATG可有效预防HLA不全相合移植中的GVHD,不影响造血重建,不增加移植相关死亡率和感染率.     

人类母子微嵌合状态与造血干细胞移植

异基因造血干细胞移植(allo-hematopoietic stem cell transplantation,allo-HSCT)有可能根治血液系统恶性疾病,但HSCT需要找到人类白细胞抗原(HLA)相合的供者,机体才能对外来抗原(非己)产生免疫耐受,使移植成功.因此,理想的造血干细胞移植只能在自体或同卵双生子之间进行.临床实际工作中,仅有少数患者可以找到HLA全相合的同胞或无关供者.     

脐血间充质干细胞治疗肝衰竭的研究进展

肝干细胞按其来源可划分为肝源性干细胞和非肝源性干细胞,而非肝源性肝干细胞主要指骨髓间充质干细胞、脂肪间充质干细胞、脐带间充质干细胞和脐血间充质干细胞等,脐血间充质干细胞作为非肝源性肝干细胞的一种,具有低免疫原性、来源丰富、可扩增及多向分化的特点,在诱导剂的作用下可向肝细胞分化,表达肝细胞特异性标志物及相关功能,这为移植脐血间充质干细胞治疗肝衰竭提供了实验依据。     

Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达及其多态性研究

目的观察Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达及其多态性,为临床治疗脑肿瘤疾病提供实验依据。方法取大鼠神经干细胞及胶质瘤肿瘤干细胞,采用RT-PCR、基因测序等方法研究Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达,对反应产物进行测序,观察两组之间的序列差异,并与Genebank Axin基因序列进行比较。结果相差显微镜下观察,呈悬浮状态的脑肿瘤干细胞聚集在一起的小球,随着培养时间的延长,小球数量增多,球体不断增大但并不均一,长出的新球体大小均一,数量多。分离原代的神经干细胞形成细胞球。脑肿瘤干细胞中Axin序列的表达与神经干细胞及Genebank中Axin比较差异性很大,其相似性为75．6%。结论Axin基因在神经干细胞中正常表达,而在脑肿瘤干细胞中表达过低,说明Axin在脑肿瘤细胞增殖中起着重要的抑制作用。     

饲养层与干细胞的体外培养

干细胞的体外培养要求在保持其未分化状态的同时,还要保持其旺盛的分裂增殖能力,所以在原代或初期培养时,干细胞的体外培养依赖饲养层细胞及其分泌的生长因子,饲养层细胞一方面可促进胚胎干细胞的附着,另一方面可分泌一些促干细胞增殖并抑制其分化的细胞因子,不同实验室在体外培养干细胞过程中所使用的饲养层细胞有所不同,故在此予以综述。     

胚胎干细胞诱导的内皮细胞对自身向成骨细胞分化的影响

目的探讨由胚胎干细胞（embryonic stem cells,ESCs）诱导的内皮细胞（endothelial cells,Ec）与自体胚胎干细胞联合培养时对ESCs成骨作用的影响。方法提取小鼠的胚胎干细胞和胚胎成纤维细胞,诱导胚胎干细胞生成Ec,培养细胞分为四组。A组：胚胎干细胞诱导组;B组：胚胎干细胞诱导组;C组：胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞（Ec）诱导组;D组：ESCs和诱导的EC联合培养诱导组。通过干细胞形态的观察、免疫荧光、细胞的增值、碱性磷酸酶以及骨钙素含量的测定从酶学、组织学及生化学等不同方面观测骨髓基质细胞对胚胎干细胞向成骨细胞诱导转化的影响。结果通过细胞免疫荧光染色证实C组培养诱导的细胞为EC。D组ESCs和诱导的Ec联合培养组MTT检测结果各组细胞生长差异没有显著意义（p〉0.05）,骨钙素和碱性磷酸酶测定D组有明显差异高于其他3组（p〈0.05）。结论以胚胎干细胞诱导生成的内皮细胞对胚胎干细胞的成骨有明显的促进作用。     

Retinal stem cells and potential cell transplantation treatments

The retina, histologically composed of ten delicate layers, is responsible for light perception and relaying electrochemical signals to the secondary neurons and visual cortex. Retinal disease is one of the leading clinical causes of severe vision loss, including age-related macular degeneration, Stargardt's disease, and retinitis pigmentosa. As a result of the discovery of various somatic stem cells, advances in exploring the identities of embryonic stem cells, and the development of induced pluripotent stem cells, cell transplantation treatment for retinal diseases is currently attracting much attention. The sources of stem cells for retinal regeneration include endogenous retinal stem cells (e.g., neuronal stem cells, Müller cells, and retinal stem cells from the ciliary marginal zone) and exogenous stem cells (e.g., bone mesenchymal stem cells, adipose-derived stem cells, embryonic stem cells, and induced pluripotent stem cells). The success of cell transplantation treatment depends mainly on the cell source, the timing of cell harvesting, the protocol of cell induction/transplantation, and the microenvironment of the recipient's retina. This review summarizes the different sources of stem cells for regeneration treatment in retinal diseases and surveys the more recent achievements in animal studies and clinical trials. Future directions and challenges in stem cell transplantation are also discussed.     

Hoechst 33342标记恒河猴皮肤干细胞向结膜上皮细胞分化

 [目的]探讨皮肤干细胞诱导分化为结膜上皮细胞,为组织工程结膜探索一种新型的种子细胞,为严重眼表疾病的治疗奠定基础。[方法]在体外培养纯化鉴定恒河猴皮肤干细胞,并用Hoechst 33342标记,标记后的皮肤干细胞与结膜上皮细胞进行Transwell非接触共培养10d,然后对诱导后的细胞用细胞免疫化学以及流式细胞术检测结膜上皮细胞的特异性表面标志,包括角蛋白4和粘蛋白4,同时检测细胞的Hoechst 33342表达情况。[结果]纯化后的皮肤干细胞比例接近90%。Hoechst 33342标记后的皮肤干细胞胞核显示蓝色荧光。在与结膜上皮细胞共培养10d后,皮肤干细胞显示结膜上皮细胞的标志粘蛋白4和角蛋白4阳性,流式细胞术检测阳性细胞比例分别为49.9%和95.6%,同时细胞还显示胞核的Hoechst 33342表达。[结论]灵长类动物恒河猴的皮肤干细胞,在体外的适宜条件下,可诱导分化为有结膜上皮细胞特征的细胞。     

肿瘤干细胞标记物——乙醛脱氢酶1的研究进展

乙醛脱氢酶1是细胞质里的一种酶,可以将细胞内的许多醛转化为羧酸,参与细胞内有毒物质的降解和细胞的自我保护.早先被证明在造血干细胞中高表达,随后被认为是正常干细胞的标记物.新近的研究表明,乙醛脱氢酶1活性表达与多种肿瘤干细胞相关,在乳腺癌干细胞、大肠癌干细胞、肺癌干细胞、卵巢癌干细胞、肝癌干细胞、前列腺癌干细胞中均表达,但是,乙醛脱氢酶l尚不能做为一种广谱的特异性肿瘤干细胞标记物,其对于肿瘤干细胞的识别、分离意义可能取决于其在所对应的正常组织中的表达水平.     

血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响

目的探讨血清培养对大鼠精原干细胞生长周期的影响。方法采用percoll分离及差速贴壁法纯化精原干细胞.抗端粒酶逆转录酶免疫组化进行鉴定，用流式细胞仪对细胞生长周期进行判断。结果在有血清的培养基中培养的精原干细胞，其OD值逐渐升高（P〈0．05）；精原干细胞DNA合成期（S期）含量的增多。结论抗端粒酶逆转录酶免疫组化可作为鉴定精原干细胞提供较为充分的依据；血清能促进精原干细胞的体外增殖。     

肿瘤干细胞分离方法的研究进展

肿瘤干细胞学说的提出及日渐成熟,使人们对肿瘤的认识有了突破性进展,同时肿瘤干细胞逐渐成为肿瘤治疗的新靶点。肿瘤中存在极少量的与干细胞性质相似,具备极强的自我更新能力、多向分化潜能,并能够导致肿瘤组织产生的肿瘤干细胞。由于肿瘤干细胞含量非常低,快速、有效的分离方法是研究肿瘤干细胞的重要组成部分。现就近年来识别分离肿瘤干细胞的常用方法与技术进行综述。     

卵巢癌干细胞研究进展

肿瘤干细胞是指肿瘤中存在的含量极少、具有无限增殖潜能的干细胞样肿瘤细胞,它们能自我更新、分化、迁徙,是肿瘤发生、复发、转移和治疗失败的根源。卵巢癌也可能是卵巢癌干细胞所致的疾病。寻找特异的卵巢癌分子标志是卵巢癌干细胞研究的关键,针对卵巢癌干细胞的靶向治疗可能在抗卵巢癌治疗中具有重要作用,为临床彻底治愈卵巢癌带来希望。