山东省腹泻病人携带耶尔森菌HPI毒力岛大肠杆菌的调查

目的 了解携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌的易感人群、感染率、临床症状、分离率。方法 对4个医院1997年6～11月就诊泻患者,进行流行病学调查并收集大便标本,进行细菌分离和鉴定。结果 在671例腹泻病人中,共检出20个属种449株致病毒,志贺菌检出率为25.48%,致泻性大肠杆菌为15.05%,对于176株疑似产志贺样毒素且具侵袭大肠杆菌(ESIEC)菌株采用irp-2、irp-B基因探针进行菌落原位杂交,检出42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌。与42株携带HPI毒力岛的大肠杆菌相关的腹泻病人所表现的临床症状为食欲不振、腹痛、腹泻、寒战、乏力、体温正常或低热,粪例多为粘液便或水样便,日腹泻次数超过6次以上者为33例,占78.57%。各年龄组均有感染,10岁以下儿童为主,占33.33%.结论 自671例腹泻病人的粪便标本中,分离到的志贺菌占首位,致泻性大肠杆菌次之;在致泻性大肠杆菌以携带耶尔森菌HPI毒力岛的大肠杆菌为主(6.26%)。     

浙江省检出首例带stx2 O157:H7病人的报告

目前大多数学者认为肠出血性大肠杆菌O157：H7之所以能对人类致病，其致病因子为志贺毒素，并认为该毒素为肠出血性大肠杆菌（EHEC）所特有。浙江省于1997年首次在杭州人和动物中检出肠出血性大肠杆菌O157：H7后，又相继在宁波等地从动物中检出，但是都不带志贺毒素1（stxl）和志贺毒素2（stx2）。本次检出的病人为浙江省首次发现带有stx2毒素的肠出血性大肠杆菌O157：H7菌株。现报告如下。     

大肠埃希菌O157血清型分离株的脉冲场凝胶电泳分型

目的了解杭州地区分离的产志贺毒素和不产志贺毒素大肠埃希菌O157菌株的分子流行病学特征。方法对杭州地区于1997～2005年间自散发腹泻患者和动物中分离的10株大肠埃希菌O157血清型菌株,PCR检测毒力基因stx1、stx2、eae和ehxA,eae阳性者进行eae基因分型;按标准化的脉冲场凝胶电泳法(pulsefieldgelelectrophoresis,PFGE)进行分子分型,并与国内其他省份分离的产志贺毒素大肠埃希菌(Shigatoxin_producingEscherichiacoli,STEC)O157∶H7菌株进行比较。结果杭州分离菌株HZ1_11携带毒力基因stx2、γ型eae和ehxA,为浙江省检获的首株STECO157∶H7;3株杭州O157∶NM分离菌株(2_1、26_1和SR05株)仅携带β型eae基因;其他6株杭州O157∶H?分离菌株中,均未检出毒力基因。PFGE揭示,在杭州人源O157菌株中,STECO157∶H7HZ1_11株与近年江苏和安徽分离STECO157∶H7菌株密切近缘,且其图谱与江苏菌株几乎完全相同;3株eae阳性的O157∶NM分离菌株聚类成与STECO157∶H7菌株较远的一簇,杭州1株stx阴性的O157∶H?(1_68株)则处于另一独立的一簇。5株杭州O157∶H?动物分离菌株与其他人源菌株图谱差异极大。结论浙江省首株STECO157∶H7可能是源自近年在江苏流行的STECO157∶H7菌株。β型eae阳性的大肠埃希菌O157∶NM菌株可能具有引起散发腹泻的能力。     

浙江省检出首例带stx2 O157∶H7病人的报告

目前大多数学者认为肠出血性大肠杆菌O157∶H7之所以能对人类致病,其致病因子为志贺毒素,并认为该毒素为肠出血性大肠杆菌(EHEC)所特有〔1〕。浙江省于1997年首次在杭州人和动物中检出肠出血性大肠杆菌O157∶H7后〔2,3〕,又相继在宁波等地从动物中检出〔4〕,但是都不带志贺毒素1(stx1)和志贺毒素2(stx2)。本次检出的病人为浙江省首次发现带有stx2毒素的肠出血性大肠杆菌O157∶H7菌株。现报告如下。1病人发病和治疗情况患者,男性,15个月龄,杭州市人。2005年6月2日上午9时在家中开始腹泻,起初腹泻为黄色水样便,后转为黏液样便,腹泻2d共12~…     

大肠埃希菌O157∶H7携带stx2::IS1203v基因研究

目的了解中国部分地区大肠埃希菌O157：H7菌株携带志贺毒素基因变异状况。方法采用聚合酶链反应扩增志贺毒素基因，使用核苷酸序列测定判断是否存在志贺毒素的新变种，用HeLa细胞毒性实验研究其细胞毒性的变化。结果1992—2002年中国部分地区分离到的289株产志贺毒素的大肠埃希菌O157：H7中有3株菌携带的志贺毒素2（stx2）基因有1．3kb的插入序列（IS）插入，且这段IS和IS1203变种（IS1203 variant，IS1203v）有100％的核苷酸序列同源性。IS1203v插入到3株大肠埃希菌O157：H7 stx2基因的位置及开放性读码框（ORF）方向有所不同。除此之外，3株菌原有的stx2基因序列完全一致且为Stx2原型毒素。和Stx2原型毒素相比，这3株携带stx2：：IS1203v基因的菌株对HeLa细胞的毒性明显降低。结论分离到IS1203v插入stx2基因的大肠埃希菌O157：H7菌株；IS1203v的插入可导致对HeLa细胞的细胞毒性降低。     

郑州市2005年肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染状况调查

目的：了解郑州市肠出血性大肠杆菌O157∶H7在腹泻病人中的检出情况和宿主动物带菌及毒力基因情况.方法：对采集的宿主动物和腹泻病人粪便及食品应用免疫磁珠富集分离法进行大肠杆菌O157∶H7分离和鉴定.结果：郑州市内共发现3例肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染病例,首次从腹泻病人中检出产毒O157∶H7菌株,采集5种以上动物粪便标本共计475份,从牛粪（247份）中分离到16株O157∶H7,检出率为6.48%,从羊粪（33份）中分离到3株O157∶H7,检出率为9.10%,并检出3株产毒O157∶H7菌株.采集5类市售食品共146份,未分离到O157∶H7.结论：郑州市存在发生肠出血性大肠杆菌O157∶H7感染暴发或流行的潜在危险.     

一起外籍船舶船员感染性腹泻的病原学检测

目的 对一起外籍船舶船员感染性腹泻疫情进行病原学检测。方法 采集外籍船舶船员的粪便10份、肛拭子样本16份、血液9份、其他样品6份。依照《感染性腹泻诊断标准》(WS 271—2007)和《预防医学微生物学及检验技术》,通过细菌培养、核酸检测及毒力基因检测等方法来鉴定本起感染性腹泻疫情是否由O157∶H7引起。结果 从腹泻患者的肛拭子和粪便中,检出2份肠出血性大肠杆菌EHEC-stx1基因核酸阳性,患者血清中检出志贺毒素EHECstx1,并且从肛拭子和粪便中培养出2株肠出血性大肠杆菌菌株。结论 本次外籍船舶船员感染性腹泻是由肠出血性大肠杆菌引起,并排除本次感染性腹泻是由O157∶H7引起的疫情。     

城区动物携带O157大肠杆菌状况及致病力研究

目的 了解重庆市区及近郊家禽家畜中O157大肠杆菌的存在和致病力情况以及对人群可能存在的威胁。方法 采集重庆近郊5个区养殖场动物粪便和环境标本共570份检测O157大肠杆菌，对分离菌株问的流行病学关系及菌株的致病力情况进行了探讨。结果 分离出17株O157大肠杆菌，其中有3株无动力O157：NM，总分离率2．89％。通过质粒图谱和限制性酶切图谱分析发现2株菌有流行病学相关性，属同一克隆株。通过溶血因子检测、小鼠毒力实验、Vero细胞毒实验及PCR毒力基因检测，发现多数大肠杆菌O157不含志贺毒素基因、不产志贺毒素，但却携带eae和hly基因，同时有溶血活性并均能致实验小鼠死亡。结论 重庆市区的养殖场动物携带有O157大肠杆菌，并造成了环境的污染，污染细菌有不同程度的致病力，表明本地区已存在O157大肠杆菌感染的威胁。     

安阳市首次分离到产毒O157:H7菌株的PCR鉴定

目的:鉴定从生羊肉中分离到的大肠杆菌O157:H7菌株的毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。方法:PCR技术同时检测大肠杆菌O157:H7的四种毒性基因和rfbO157、flicH7特异性基因。结果:可疑菌株含有鞭毛H7基因(fli-cH7),志贺毒素2(stx2)基因,溶血素基因(hlyA),肠上皮细胞纤毛清除素基因(eaeA)和O157:H7特异性基因(rfbO157),但不含有志贺毒素1(stx1)基因。结论:菌株为产志贺毒素大肠杆菌O157:H7血清型。     

2005-2009年河南省肠出血性大肠埃希菌O157：H7监测分析

目的监测河南省肠出血性大肠埃希菌O157∶H7在腹泻患者和宿主动物中带菌及毒力基因情况,探索疾病发生的原因和相关因素。方法对2005-2009年河南省监测点所送可疑菌株进行血清学和PCR复核,对确认菌株进行stx1、stx2、eaeA、hlyA毒力基因测定。结果河南省2005-2009年共监测各类标本10 732份,检出O157∶H7菌株255株,检出率为2.38%;其中动物粪便标本的检出率为6.31%,检出率最高的为羊粪（8.04%）,其次为牛粪（7.20%）;各年份菌株检出率之间有一定差异;河南省肠出血性大肠埃希菌O157∶H7的产毒株主要来自于羊、牛、鸡粪便及蝇类和生肉标本;毒株类型主要为stx2、eaeA、hlyA组合型。结论河南省肠出血性大肠埃希菌O157∶H7在人群和各类动物中均存在,最重要的动物宿主是羊和牛;部分食品在加工环节有可能被污染,存在引起暴发的危险性。     

云南战区部队首次检出携带耶尔森菌HPI毒力岛基因irp-2的大肠杆菌

目的：了解携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因irp^-2的大肠杆菌在云南战区部队腹泻患者粪便标本中的存在情况，并对其菌株做毒力试验。方法：用PCR扩增法检测毒力岛基因irp^-2，小白鼠腹腔注射检测毒力。结果：从268份腹泻病人粪便中分离的大肠杆菌菌株中，检测出携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的18株，检出率为6．72％（18／268）。毒力试验使小白鼠发病并死亡。结论：云南战区存在携带小肠结肠炎耶尔森菌HPI毒力岛基因卸12的大肠杆菌，该菌对部队指战员的健康具有潜在性的威胁。     

产毒性和致病性大肠埃希菌中小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛分布的研究

目的：了解小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在产毒性（ETEC）和致病性大肠埃希菌（EPEC）中的分布。方法：用聚合酶链反应扩增和原位杂交方法。结果：在检测的93株ETEC和10株EPEC的毒力岛的检出率分别为32.25%(32/93)和30.00%(3/10),1株肠聚集性大肠埃希菌（EAggEC)也检出了毒力岛,而且这些阳性菌株中的岛大部分连接到天门冬氨酸tRNA（asntRNA)位点。结论：ETEC、EPEC以及EAggEC是致病性较强的病原菌,而小肠结肠炎耶尔森菌强毒力岛在ETEC和EPEC中具有阳性率较高的分布,对于进一步研究大肠埃希菌毒力变化和毒力的调控以及细菌毒力的进化具有重要意义。     

即食凉拌食品中微生物污染调查分析及大肠菌群限量探讨

目的了解即食凉拌食品中微生物污染状况,为制定即食凉拌食品微生物限量标准提供依据。方法采用国家食源性疾病监测网监测方案和《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验方法》（GB/T4789-2003）检测凉拌食品中的沙门氏菌、志贺氏菌、O157∶H7/NM、单核细胞增生李斯特氏菌和大肠菌群。结果29家零售加工单位即食凉拌食品受大肠菌群污染差异无统计学意义（χ2=5.60,P〉0.05）,其零售的76份即食凉拌食品样品中均未检出目的致病菌。大肠菌群是主要污染菌,阳性率为71.05%,其中中式凉拌菜阳性率为70.23%,高于西式沙拉的68.97%,差异无统计学意义（t=0.92,P〉0.05）,菌浓度差异无统计学意义（t=0.7,P〉0.05）。超市零售加工的中式凉拌菜大肠菌群阳性率高于普通饭店和中高级饭店,差异有统计学意义（χ2=7.00,P〈0.05）,平均菌浓度差异有统计学意义（F=11.06,P〈0.01）。结论大肠菌群是凉拌食品主要的污染菌,应尽快出台即食凉拌食品卫生标准,建议即食凉拌食品大肠菌群限量≤100MPN/g。     

The serological relationship between Yersinia enterocolitica O9 and Escherichia coli O157 using sera from patients with yersiniosis and haemolytic uraemic syndrome

Sera from patients with yersiniosis, shown to contain antibodies to Yersinia enterocolitica O9; and sera from patients with haemolytic uraemic syndrome (HUS) caused by Escherichia coli O157, were used to investigate serological cross-reactions between Y. enterocolitica O9 and E. coli O157. Lipopolysaccharide (LPS) was isolated from strains of Y. enterocolitica O9 and E. coli O157 and reacted with sera by immunoblotting and ELISA. Sera from patients with HUS contained antibodies to the LPS of E. coli O157 only; 80% of sera from patients with yersiniosis contained antibodies to the LPS of Y. enterocolitica O9 and E. coli O157. This one-way cross-reaction was also detected using hyperimmune rabbit antisera.     

The serological relationship between Escherichia coli O157 and Yersinia enterocolitica O9 using sera from patients with brucellosis.

Sera from ten patients with positive brucella serology were used to investigate antibody cross-reactions between the O-antigens of Escherichia coli O157 and Yersinia enterocolitica O9. SDS-PAGE profiles of lipopolysaccharide (LPS), purified from strains of E. coli O157 and Y. enterocolitica O9, were reacted with sera by immunoblotting. All ten sera contained antibodies which bound to the LPS of E. coli O157, and five of these sera also contained antibodies which bound to the LPS of Y. enterocolitica O9. Absorption studies using these five cross-reacting sera indicated the existence of at least three epitopes exposed on the O-antigens of E. coli O157 and Y. enterocolitica O9. One antigen binding site appeared to be exposed on the LPS of both organisms, while one epitope was exposed on the LPS of E. coli O157 only, and another on the LPS of Y. enterocolitica O9 only.     

大肠杆菌O157胶体金免疫层析快速筛查方法的建立

目的建立一种大肠杆菌O157的胶体金免疫层析快速筛查方法。方法利用胶体金免疫层析技术,采用双抗体夹心法检测大肠杆菌O157,对该法进行敏感性、特异性和食品样品的适用性分析。结果该法能在15分钟内完成检测,检测不同的肠杆菌科细菌(非O157型大肠杆菌、沙门菌、志贺菌、变形杆菌、柠檬酸杆菌、肠杆菌、沙雷菌、耶尔森菌)、葡萄球菌、李斯特菌、气单胞菌、弧菌等共24种30株常见细菌,未发现有交叉反应,显示该法特异性良好。检测大肠杆菌O157的最低检出浓度为1×105cfu/ml。方法适用于奶粉、面粉、淀粉、咖啡粉、饼干、蛋糕、果冻、燕窝和果汁等食品样品的检测。结论新建立的大肠杆菌O157胶体金免疫层析试验简便、快速,特异性和灵敏度较好,适用于现场样品的快速筛查。     

大肠埃希菌O157：H7家蝇实验带菌消长的研究

目的采用大肠埃希菌O157∶H7-EDL933株,实验感染家蝇,观察家蝇体内外感染和带菌消长情况。方法点滴法体外定量染菌,剂量为1μ（l菌悬液浓度为8.0×10^5～1.9×10^7cfu/ml）,并采用昆虫单虫单管方法饲养观察。结果家蝇经体外染菌,获得体内外带菌,体外带菌时间中位数为（96.0±15.3）h（95%CI：66.0～126.0h）;体内中位数为（144.0±17.3）h（95%CI：110.2～177.8h）;家蝇体内外带菌消长差异无统计学意义（χ^2=0.74,P=0.388）,家蝇最长带菌时间至少216h（9d）。结论研究结果提示,家蝇不仅是O157∶H7疾病传播的媒介,更重要的可能是人类感染潜在的贮存宿主。     

登封市屠宰场生猪小肠结肠炎耶尔森菌病原学研究

目的 了解登封市屠宰场生猪小肠结肠炎耶尔森菌带菌率、血清分型、毒力基因分布等情况,为制定预防措施提供参考依据。方法 从屠宰场生猪扁桃体及回盲部内容物中分离小肠结肠炎耶尔森菌,并进行生化鉴定、血清分型、毒力基因PCR检测。结果 从196份生猪咽拭子中分离出107株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为54.59%;从196份生猪肛拭子中分离出36株小肠结肠炎耶尔森菌,检出率为18.37%。检出菌血清型为O∶3,生物型为3型,Ⅰ型（ail＋、ystA＋、ystB-、yadA＋、virF＋）占93.71%（134/143）,Ⅱ型（ail＋、ystA＋、ystB-、yadA-、virF-）占6.29%（9/143）。结论 登封市生猪小肠结肠炎耶尔森菌以致病性菌株为主,今后应加强该菌的进一步监测工作。     

Resistance of Yersinia enterocolitica, Escherichia coli O157:H7 and natural microflora against acidic conditions and freezing-thawing in fresh sausages

The resistance of Yersinia enterocolitica O:9, Escherichia coli O157:H7 and natural microflora against lactic acid (LA), ascorbic acid (AA), and freezing-thawing in noninoculated and inoculated fresh sausages was studied. Samples were stored at -18 degrees C for 28 days and thawed in microwave (MW), at room temperature (RT), in refrigerator (R) and under flowing of tap water (F) on days 7, 14, 21 and 28. Plate Count Agar (PCA), Sorbitol Mac Conkey agar (SMC) and Mac Conkey agar (MC) were used for microbial counts. A maximal reduction of 1.57 log in mesophilic aerobes and no significant changes in total and fecal coliform levels with respect to the initial counts in natural microflora were observed along storage. In inoculated fresh sausages, reductions of 1.37 log on PCA and 2.17 log on SMC were obtained in E. coli O157:H7 populations as compared to the control groups on day 0. Similarly, reductions of 1.69 log on PCA and 2.79 log on MC as compared to the initial level were observed in counts of Y. enterocolitica inoculated samples. Salmonella Anatum, P. aeruginosa, Y. enterocolitica B1A O:7,8-8-8,19 and E. coli non O157:H7 strains were recovered from the natural microflora by enrichment techniques. Thawing in refrigerator was more frequently related to the best reductions of total mesophilic aerobe, E. coli O157:H7 and Y. enterocolitica O:9 counts than the other thawing methods. Reductions of microbial populations observed in LA treated samples were similar to those observed in AA treated samples. Although the acidic and freezing treatments might reduce the microbial levels in natural microflora of fresh sausages, they appeared to be ineffective in the total elimination of high inocula of pathogens like E. coli O157:H7 and Y. enterocolitica O:9.