新生隐球菌变种问ITS序列差异的研究

目的 利用真菌核糖体基L大1内转录间隔区(ITS)序列分析和系统进化学分析来研究新生隐球菌上海变种的地位及变种问ITS序列的差异.方法 采用真菌通用引物ITS1、ITS4对12株新生隐球菌不同变种标准株的ITS片段进行PCR扩增和测序,结合基因库等数据库中11株新生隐球菌标准株的ITS序列,用CLUSTAL W1.83软件多重比对分析序列的差别,MEGA3.1软件处理数据绘制系统进化树.结果 新生隐球菌变种之间ITS序列存在明显差异,存在6种亚型;gattii变种ITS序列存在4种亚型.中国发现的新生隐球菌上海变种S8012与gattii变种在表型及分子生物学研究均存在显著的差异,但仍属于变种内差异.结论 我国发现的上海变种S8012归入gattii变种的ITSC型,原gattii变种RV20186归人gattii变种的ITSF型.     

作为巴西隐球菌病病原的新生隐球菌变种

83株新生隐球菌分离自12例免疫正常的患者,"例AIDS和5例有免疫抑制的患者,其中80株分离自脑脊液/血液,另2株分别分离自肺组织和痰。使用CGB培养基和分型血清作血清分型,并根据临床资料比较两个变种与临床     

新生隐球菌格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的多重聚合酶链反应鉴定

目的 建立一种基于核糖体基因内间隔区（IGS）的多重聚合酶链反应（PCR）,用于快速鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌。方法 选取新生隐球菌和格特隐球菌IGS中变异度最高的Ⅰ区（IGS1）为靶点,经ClustalW2多重比对,并结合Oligo6软件在不同序列位点设计针对新生隐球菌新生变种、格鲁比变种和格特隐球菌的引物用于多重PCR分析。通过51株新生隐球菌（VNⅠ-VNⅣ和VNB基因型）和41株格特隐球菌（VGⅠ-VGⅣ基因型）对该方法进行验证,并将该方法与已报道的CGB显色培养和采用特异性引物GPA1A、CLA4D和SOD1gattii扩增格鲁比变种、新生变种和格特隐球菌的单一引物PCR方法进行比较。结果 基于IGS的多重PCR分析成功鉴定所有92株新生隐球菌和格特隐球菌,对其他常见致病酵母的扩增均阴性,显示所设计引物较高的特异性;已报道的基于GPA1A和CLA4D引物PCR分别在鉴定2株和1株格特隐球菌时出现假阳性结果;CGB培养基在鉴定1株格鲁比变种和1株新生变种时出现假阳性结果。上述方法在鉴定时均未出现假阴性结果。结论 建立的多重PCR可快速准确地鉴定新生隐球菌新生变种、格鲁比变种、AD杂合子和格特隐球菌,且优于已报道的单一引物PCR 或CGB显色培养法。     

新生隐球菌AD血清型是新生变种?

新生隐球菌根据传统的分类方法和以往的观点,血清型AD型新生隐球菌一直被视为新生隐球菌新生变种\,但事实上,AD型新生隐球菌无论在地区分布、致病特征等方面,均与新生隐球菌新生变种中的A型和D型有明显不同^[2,3].本文采用变性梯度胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术和核酸序列分析,首次发现新生隐球菌AD型28S rDNA基因型与新生隐球菌新生变种的A、D型不同,而与新生隐球菌格特变种B、C型完全一致,现报道如下.     

墨西哥隐球菌脑膜炎患者中新生隐球菌格特变种的首次报导

近来据文献报导新生隐球菌格特变种(Cryptococcus neoformans var.gattii)可发生在艾滋病患者及非流行区,且与新生隐球菌新型变种(Cryptococcus neoformans var.neoformans)所致隐球菌脑膜炎的临床经过有所不同,因此有必要对隐球菌脑膜炎的病原体的鉴定、分布和临床特点进行研究。作者对此作了研究。 患者来源于墨西哥国立神经病学、神经外科学研究所。1989～1994年共有20例隐球菌脑膜炎患者,隐球菌从患者脑脊液中分离。用二     

新生隐球菌格特变种引起免疫功能正常宿主的原发性隐球菌蜂窝织炎

皮肤隐球菌感染常是免疫功能受损者发生中枢神经系统或肺部感染而引起的播散性感染的一种表现。已报告主要由种植或外伤引起的原发性皮肤感染,可见于有免疫抑制的患者,偶有由新生隐球菌新型变种引起的免疫功能正常     

新生隐球菌不同变种所致小鼠原发性皮肤感染的比较

目的：探讨新生隐球菌不同变种在原发性小鼠新生隐球菌皮肤感染中的作用。方法：按照我们建立的原发性皮肤隐球菌感染模型的方法，将新生隐球菌新生变种标准野生株B3501与格特变种标准株ATCC32609分别皮内接种于免疫抑制与非抑制的BALB／c小鼠，皮损真菌培养与组织病理检查确证感染。观察2种隐球菌感染的病程，比较皮损形成与消退的平均时间。结果：2种变种的新生隐球菌皮下接种于BALB／c小鼠后，可以在免疫抑制与非抑制的BALB／c小鼠皮肤上产生丘疹、结节、溃疡、传染性软疣样皮损，皮损可以自愈，真菌培养与病理确证为隐球菌感染。2种菌株只在免疫正常小鼠的皮损形成时间上存在差异。结论：新生变种与格特变种的新生隐球菌均可以造成BALB／c小鼠相似的皮肤感染。推测2种变种对原发性皮肤感染的致病力可能无差异，新生变种发病较多可能与其分布有关。     

新生隐球菌生态学研究

目的:研究中国环境中新生隐球菌变种的生态学特点.方法:采集10个城市(3组)鸽粪标本620份和江西贵溪地区澳洲赤桉标本819份;采用咖啡酯玉米山梨醇琼脂(cAcA)培养基分离新生隐球菌,并对菌株进行CGB培养,酚氧化酶、尿素酶、血清型、交配型试验和形态学观察.结果:①不同纬度地区鸽群的新生隐球菌标本阳性率为G1[40°～50°北纬(N)]13%,G2(30°～40°N)50%,G3(20°～30°N)29%,G2显著高于G1(P＜0.01);3组鸽群阳性率基本相同(P＞0.05),平均为81%.②环境分离358株全部37℃生长、酚氧化酶阳性、CGB培养阴性;1株尿素酶阴性;其中101株均为α交配型和A血清型,提示全部为grubii变种;发现环境分离菌株荚膜变异并与其他真菌的自然黏附现象.③从江西贵溪生长的澳洲赤桉未分离到新生隐球菌格特变种.结论:中国环境中以grubii变种为主的新生隐球菌的生态学特点与其所在的地区纬度明显相关:由澳洲赤桉分离新生隐球菌格特变种的研究仍然需要继续进行.     

新生隐球菌和肺泡巨噬细胞间的相互作用

新生隐球菌感染在免疫低下者中发病率高。肺泡巨噬细胞(AM)是新生隐球菌入侵机体后的最早防御屏障,它们之间的相互作用机理尚未阐明。早期的研究对AM吞噬新生隐球菌过程的观察仅限于数小时,不能分辨粘附的和吞入的新生隐球菌;只在和新生隐球菌接触     

印度的新型隐球菌格特变种

18株由临床分离的菌株用 API 20C 法鉴定为新型隐球菌,再测试尿素酶、酚氧化物酶为阳性,全部菌株均不同化硝酸盐。18株中3株可在 CGB 培养基上生长,血清分型为B 型,属格特变种。其它15株血清分型为 AD     

黑素与新生隐球菌

黑素的产生与多种微生物的毒力相关.新生隐球菌主要通过酚氧化酶(漆酶)合成黑素,黑素主要通过抵抗宿主微生物杀伤机制和影响宿主免疫应答来致病.主要就新生隐球菌黑素的微观结构、生物合成,漆酶的分子调节,黑素与新生隐球菌毒力的关系,黑化对真菌生存的影响及与抗真菌治疗的关系等方面进行概述,以期通过对黑素特征的理解为抗真菌药物的开发和对疾病的治疗策略选择提供帮助.

Abstract：

The production of melanin is associated with the virulence of various microorganisms.Cryptococcus neoformans produces melanin mainly via phenoloxidase(laccase)pathway.Melanin contributes to virulence likely by reducing the susceptibility of melanized fungi to host defense mechanisms and affecting immune responses in infected hosts.This review mainly focuses on the microstructure and biosynthesis of Cryptococcus neoformans melanin, molecular regulation of laecase, relationship between melanin and Cryptococcus neoformans virulence, effects of melanization on the survival of fungi, relationship between melanization and antifungal treatment, ete, which may facilitate the design and development of antifungal agents and strategies.     

新生隐球菌磷脂酶的研究进展

新生隐球菌是重要的条件致病菌，它主要感染艾滋病患者和其他免疫功能受损的人群。磷脂酶作为新生隐球菌的一种潜在的毒力因子日益受到重视。综述近年来对新生隐球菌磷脂酶的检测及其性质、可能的致病机制和分子水平的研究进展。     

新生隐球菌磷脂酶的研究进展

新生隐球菌是重要的条件致病菌 ,它主要感染艾滋病患者和其他免疫功能受损的人群。磷脂酶作为新生隐球菌的一种潜在的毒力因子日益受到重视。综述近年来对新生隐球菌磷脂酶的检测及其性质、可能的致病机制和分子水平的研究进展     

新生隐球菌28S rDNA的基因型特征与序列分析

目的 探讨新生隐球菌各变种、血清型与基因型的关系。方法 新生隐球菌标准株10株、新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10以及临床分离株19株,采用变性梯度胶电泳(DGGE)结合DNA序列分析,对以上菌株的28S rDNA片段进行研究。结果 经过DGGE和DNA序列分析,所有新生隐球菌新生变种(A、D型)具有一致的基因带型和序列,格特变种(B、C型)具有不同于新生变种的独特一致的带型和序列;AD型的基因型和序列与格特变种完全相同,新生隐球菌荚膜缺陷株CAP10(D型)的基因型类同于新生变种;19株临床分离菌在DGGE上可分为2型,17株与A、D型完全相同,2株与B、C型相同。结论 DGGE结合DNA序列分析,对于探讨新生隐球菌各变种、血清型的基因型特征、关系具有重要价值;我国非艾滋病隐球菌病感染以新生变种为主,AD型在系统发育上更类同于格特变种,而不是新生变种;本研究不支持A血清型为新生变种以外的新变种即grubii变种的观点。     

新生隐球菌ISC10基因的cDNA克隆及序列分析

目的克隆新生隐球菌ISC10基因(Meiosis-specific protein required for spore formation)的全长cDNA序列,并进行生物信息学分析。方法从新生隐球菌B3501菌株中分离提取总RNA,逆转录成cDNA,运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增获得新生隐球菌ISC10基因,构建pGM-T/ISC10重组载体,测序后与GenBank中ISC10基因(DQ332212)进行同源性比较和序列分析。结果所克隆的基因共编码267个氨基酸,分子量为31.65KD,与GenBank中ISC10基因(DQ332212)序列同源性达99.10%,编码的蛋白质在67位氨基酸由Ala(丙氨酸)突变为Pro(脯氨酸),233位氨基酸由Thr(苏氨酸)突变为Ser(丝氨酸)。结论所克隆的基因为新生隐球菌的一个新基因,其相关生物学信息的明确,为应用分子生物学技术进一步深入研究新生隐球菌的感染和致病机制奠定了基础。     

细胞因子与新生隐球菌感染

了解白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子在隐球菌感染过程中的变化和作用 ,以及影响上述因子分泌的菌体成分或其他因素 ,有助于进一步阐明宿主抗隐球菌免疫反应机制以及临床上应用细胞因子的治疗前景     

用改进的PCR方案测定PCR指纹条带序列后设计的特异引物对新生隐球菌新生变种作基因分型

新生隐球菌新生变种通过用 (ＧＡＣＡ) 4 引物采用ＰＣＲ指纹法可产生 4条主要条带 (42 0、4 75、5 4 0和80 0ｂｐ) ,根据它们不同的组合可以被再分为 6种基因型 (ＶＮ1～ＶＮ6 )。该研究的目的是确定能扩增这4条主要条带的特异性引物。首先须测定这 4条主要条带的核苷酸序列 ,为此作者建立了一种无需克隆载体的改进的ＰＣＲ测序方案以克服用 (ＧＡＣＡ) 4作单循环测序引物的缺陷 ;而后以获得的序列设计新引物 ,通过对新生隐球菌和其他酵母株的扩增 ,以证实新引物具有种的特异性 ,可用作新生隐球菌的分子分型。材料和方法 :①抽提 12株新生…     

细胞因子与新生隐球菌感染

了解白介素、干扰素、肿瘤坏死因子、集落刺激因子在隐球菌感染过程中的变化和作用，以及影响上述因子分泌的菌体成分或其他因素，有助于进一步阐明宿主抗隐球菌免疫反应机制以及临床上应用细胞因子的治疗前景．     

新生隐球菌多糖荚膜研究进展

新生隐球菌作为一种条件致病菌日益受到重视,其多糖荚膜是第一个被明确的毒力因子。本文从多糖荚膜的生化组成及分型,可能的致病机理(抑制吞噬、激活补体、抑制细胞因子释放等),抗新生隐球菌抗体的作用及荚膜形成有关基因研究现状等方面进行综述。