重组天花粉蛋白体外诱导宫颈癌HeLa细胞p27基因去甲基化的研究

目的研究重组天花粉蛋白(recombinant trichosanthin,rTCS)对宫颈癌HeLa细胞中p27基因甲基化状态和基因表达的影响。方法应用不同质量浓度的rTCS(20、40、80μg/mL)处理体外培养的宫颈癌HeLa细胞后,MSP法检测用药前后细胞中p27基因的甲基化状态,Real-Ti me PCR法检测用药前后细胞中p27和DNA甲基转移酶-1(DNMT1)mRNA水平的变化,Western-blotting法检测用药前后细胞中p27蛋白表达的变化。结果HeLa细胞中p27基因为低表达,基因启动子区CpG岛呈部分甲基化状态。40μg/mLrTCS处理导致p27基因启动子区CpG岛去甲基化;在20、40、80μg/mL的rTCS作用48 h后,p27基因mRNA相对表达水平分别升高2.22、4.00、6.03倍,p27蛋白水平表达也逐渐增加;宫颈癌HeLa细胞中DNMT1 mRNA高表达,40μg/mLrTCS处理48 h可至DNMT1 mRNA表达水平降低78%。结论rTCS通过抑制DNMT1,逆转p27基因启动子区CpG岛的甲基化状态,使宫颈癌HeLa细胞中p27基因表达活化。rTCS能逆转宫颈癌HeLa细胞p27基因甲基化状态,调控p27基因和DNMT1的表达。     

刺五加法尼基焦磷酸合酶、鲨烯合酶、鲨烯环氧酶基因启动子CpG岛的预测与功能验证

目的获得刺五加法尼基焦磷酸合酶(FPS)、鲨烯合酶(SS)、鲨烯环氧酶(SE)基因启动子的CpG岛分布情况和功能活性。方法针对已克隆的FPS、SS、SE基因启动子序列,使用EMBOSS和Li Lab进行CpG岛预测,同时利用GUS基因作为报告基因,p CAMBIA1301质粒作为表达载体,利用根癌农杆菌转化拟南芥进行功能验证。结果发现刺五加FPS、SS启动子含有2个CpG岛,长度分别是520、218 bp和108、103 bp,SE启动子含有3个CpG岛,长度为290、119、149 bp。FPS、SS、SE基因启动子均具有启动活性,但强度不一,SS启动子活性最强。结论研究首次获得刺五加FPS、SS、SE基因启动子区域的CpG岛分布情况,以及其功能活性,为后续进一步FPS、SS、SE甲基化分析及其在刺五加中的表达调控研究奠定了基础。     

心力衰竭患者SLC6A2启动子区甲基化状态及与气虚、血瘀证的相关性

目的探讨心力衰竭(简称心衰)患者去甲肾上腺素转运体(NET,SLC6A2)基因启动子区甲基化状态及其与气虚、血瘀证的相关性。方法选择Ⅲ~Ⅳ级心衰患者36例作为心衰组,评估气虚、血瘀证积分,另收集同期来自福建省立医院体检人群中健康老年30名(老年组)及青年30名(青年组)。采用分段焦磷酸测序法检测SLC6A2基因启动子Cp G岛甲基化水平。应用Pearson及Partial相关分析评价心衰患者SLC6A2基因启动子区甲基化状态与气虚、血瘀积分的相关性,应用Logistic回归筛查和调整危险因素。结果单因素方差分析:心衰组SLC6A2基因启动子区总甲基化率(MTI)为(219.72±54.03)%,明显高于老年组[(194.47±34.92)%]及青年组[(161.60±41.11)%],差异均有统计学意义(P0.05),且老年组高于青年组(P0.01)。协方差分析:控制BMI、年龄因素后,心衰组总MTI仍高于老年组(P=0.041),老年组高于青年组(P=0.016)。3组SLC6A2基因启动子总MIT比较,差异有统计学意义(F=16.447,P=0.01),青年组SLC6A2基因启动子总MTI偏低。Partial相关分析:心衰组总MTI与气虚、血瘀积分均呈正相关(r值分别为0.494,0.419;P0.05)。Logistic回归分析:调整混杂因素后,SLC6A2基因启动子总MTI的相对危险度(OR值)为1.038(95%CI:1.006~1.071,P=0.020)。结论 SLC6A2基因启动子区域甲基化异常升高是心衰的危险因素之一,甲基化程度与心衰患者气虚、血瘀证候呈正相关。     

CELSR2基因启动子区甲基化与代谢综合征痰证的关系研究

目的 检测代谢综合征（MS）痰证、非痰证患者及健康人外周血中CELSR2基因CpG位点DNA甲基化水平,初步探索MS痰证形成的表观遗传学机制。方法 收集MS患者,运用证素辨证法筛选MS痰证、非痰证患者各27例,并以27名健康人为对照。理化指标检测包括：收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、身体重指数（BMI）、腰围（WC）、空腹血糖（FPG）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）;MethylTarget方法检测CELSR2基因启动子区41个CpG位点的DNA甲基化水平。结果 与健康组比较,MS痰证、非痰证组中SBP、DBP、BMI、WC、FPG、TG升高而HDL-C降低（P<0.01）;与MS非痰证组比较,MS痰证组中DBP、BMI、WC、FPG、TG升高（P<0.05）。与健康组比较,MS非痰证组中CpG28、CpG34 DNA甲基化水平降低（P<0.05）,MS痰证组中CpG24、CpG34 DNA甲基化水平降低（P<0.05）;与MS非痰证组比较,痰证组中CpG20、CpG24、CpG34 DNA甲基化水平降低（P<0.01）。与健康组比较,MS患者吸烟、饮酒人数较多（P<0.01）;与MS非痰证组比较,痰证组饮酒人数增多（P<0.05）。与CELSR2基因CpG34甲基化率正常比较,低甲基化发生MS痰证的风险是其4.14倍（95%CI：1.25~13.70,P<0.05）;与未饮酒相比,饮酒发生MS痰证的风险是其3.55倍（95%CI：1.07~11.82,P<0.05）。结论 DBP、BMI、WC、FPG、TG升高可能使MS痰证形成的风险升高,CELSR2基因CpG34位点的DNA低甲基化可能是MS痰证形成的表观遗传学基础,饮酒是MS痰证形成的危险因素。     

长期负性情绪应激对D-gal大鼠认知功能及海马NR2B基因甲基化表达的影响

目的探讨长期负性情绪应激对大鼠脑老化进程的影响机制。方法将雌雄各半的70只Wistar大鼠分别采用随机方法,分为空白对照组、D-gal脑老化模型组、应激脑老化组,每组14只且雌雄各半,其余大鼠做为攻击鼠参与负性情绪应激的诱导;采用颈后部皮下多点注射D-gal 0.1g/(kg·d)制备脑老化大鼠模型;采用不可预知性刺激,诱导应激脑老化组大鼠长期负性情绪应激;采用Morri′s水迷宫实验记录大鼠水下寻台时间(SPL),评价大鼠学习记忆功能;采用ELISA测定大鼠血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)和皮质酮(CORT)含量;采集大鼠海马样本制备匀浆,采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测海马N-甲基-D-天门冬氨酸受体-2B亚型(NR2B)基因调控区胞嘧啶-磷酸-鸟嘌呤位点(CpG)甲基化程度,采用ELISA法测定甲基化转移酶1(DNMT1)活性。结果与D-gal脑老化模型组比较,应激脑老化组大鼠的SPL明显延长,NR2B基因启动子区CpG甲基化程度及DNA DNMT1活性显著增高(P0.05),血浆CORT、ACTH水平显著升高(P0.05)。结论长期情绪调节不良能够加速机体大脑老化进程,其机制可能与慢性情绪应激引发机体特定基因甲基化程度增高有关。     

基于胶质细胞源性神经营养因子甲基化修饰探讨电针改善慢传输型便秘大鼠肠动力的作用机制

目的:观察电针大肠俞募穴"天枢""大肠俞"对慢传输型便秘(STC)大鼠肠道传输功能的改善情况,通过检测大鼠结肠组织胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的表达以及GDNF基因启动子区CpG岛甲基化状态,探讨电针治疗STC的可能机制。方法:雄性SD大鼠随机分为正常组、盐水组、模型组和电针组,每组16只。采用15 mg/mL复方地芬诺酯混悬液灌胃(10 mL·kg^-1·d^-1)复制STC大鼠模型。盐水组予同等剂量的0.9%氯化钠溶液灌胃。电针组电针双侧"天枢""大肠俞",每次15 min, 1次/d,连续14 d。观察大鼠排便情况并检测大鼠肠道传输功能;采用透射电镜观测结肠组织Cajal间质细胞(ICC)超微结构;Western blot法、实时荧光定量PCR法检测结肠组织中GDNF蛋白、mRNA的表达;重亚硫酸盐测序法检测结肠组织GDNF基因启动子区CpG岛甲基化状态。结果:与正常组、盐水组比较,模型组大鼠24 h排便量下降(P<0.01),粪便性状评分降低(P<0.05),小肠推进率下降(P<0.01),ICC形态结构遭到破坏...     

基于骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化探究鹿茸中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠的疗效机制＊

目的 基于骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平，探究鹿茸中药复方对去卵巢骨质疏松症大鼠的疗效机制。方法 去卵巢复制绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠模型，将其分4组，分别为：正常组、模型组、鹿茸中药复方组、仙灵骨葆阳性对照组。灌胃14周后，X射线吸收测量法检测骨密度、质谱法检测Runx2、Osterix启动子甲基化水平。结果 ①与正常组比较，模型组第1~6腰椎骨密度明显降低（P < 0.01）；骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显升高（P < 0.05）；骨组织Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显升高（P < 0.01）。②与模型组比较，鹿茸中药复方组、仙灵骨葆阳性对照组第1~6腰椎骨密度明显升高（P < 0.05）；鹿茸中药复方组骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG3甲基化水平明显降低（P < 0.05），Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1甲基化水平明显降低（P < 0.05）；仙灵骨葆阳性对照组骨组织Runx2启动子-955 bp~-456 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显降低（P < 0.05），Osterix启动子-1082 bp~-583 bp CpG1、CpG2甲基化水平明显降低（P < 0.01）。结论 鹿茸中药复方通过降低骨组织Runx2、Osterix启动子甲基化水平的表观遗传学机制，有效防治PMOP。     

丹红注射液对动脉粥样硬化小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化及PI3K/Akt/mTORC1信号通路的影响

目的观察丹红注射液对动脉粥样硬化(AS)小鼠自噬基因Atg13启动子区甲基化及自噬信号通路PI3K/Akt/mTORC1的影响,探讨其可能的作用机制。方法 40只8周龄雄性ApoE~(-/-)小鼠高脂饲料喂养6周,随机分为模型组、阳性对照组和丹红注射液低、高剂量组,每组10只,各给药组给予相应药物干预。6周后RT-PCR检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13、Atg3和Atg4a的mRNA表达;Westernblot检测AS小鼠主动脉Beclin1、LC3Ⅱ/Ⅰ、PI3K、Akt、p-Akt、mTORC1和p-mTORC1的蛋白表达;采用亚硫酸氢盐测序法检测AS小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平。结果与模型组比较,丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Beclin1蛋白表达明显升高,丹红注射液低剂量组小鼠主动脉LC3Ⅱ/Ⅰ表达明显升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉Atg13、Atg3和Atg4a mRNA表达显著升高(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉自噬基因Atg13启动子区甲基化水平明显降低(P0.01),丹红注射液高、低剂量组小鼠主动脉p-Akt蛋白表达明显降低(P0.01),丹红注射液高剂量组小鼠主动脉p-mTORC1蛋白表达明显降低(P0.01)。结论丹红注射液防治AS的机制可能与降低模型小鼠主动脉Atg13启动子区甲基化水平、抑制PI3K/Akt/mTORC1信号通路和促进细胞自噬有关。     

温胆汤对脂质代谢紊乱相关基因Adiponectin和LDLR甲基化的影响

目的：探讨温胆汤对大鼠脂质代谢紊乱相关基因脂联素和低密度脂蛋白受体启动子甲基化状态的影响。方法：采用高脂饲料喂养建立肥胖SD大鼠模型,用甲基化特异性PCR研究肾周脂肪组织脂联素和低密度脂蛋白受体基因启动子甲基化状态。结果：SD大鼠存在脂联素基因启动子甲基化的情况,其中高脂喂饲形成肥胖后甲基化率高,温胆汤可以降低此甲基化率,但无统计学差异;大鼠低密度脂蛋白受体启动子区无Cp G岛存在,其是否存在甲基化还有待研究。结论：温胆汤可能通过调整肥胖大鼠脂联素等基因启动子区的甲基化状态,从而减轻肥胖。     

肥胖痰湿证模型大鼠脂肪组织代谢相关基因启动子甲基化状态及温胆汤的干预作用

目的探讨肥胖痰湿证模型大鼠脂肪组织代谢相关基因启动子甲基化的改变以及温胆汤干预的可能机制。方法采用喂饲高脂饲料8周建立肥胖痰湿证大鼠模型,将造模成功大鼠采用随机数字法分为温胆汤组和模型组各10只,另设正常组大鼠10只。造模后各组大鼠均采用普通饲料喂养,同时温胆汤组给予温胆汤15g/(kg·d)灌胃,模型组和正常组给予同体积蒸馏水灌胃,共干预4周。采用甲基化DNA免疫共沉淀测序(MeDIP-seq)方法对各组大鼠腹腔脂肪组织启动子甲基化差异基因与代谢相关基因进行筛选,并用焦磷酸测序验证基因启动子甲基化检测结果。结果肥胖痰湿证与代谢相关的基因分别有19个启动子甲基化程度降低、36个启动子甲基化程度增加。温胆汤干预肥胖痰湿证后,与代谢相关的甲基化差异基因有14个甲基化程度降低,38个甲基化程度增加,且其中与肥胖痰湿证有关的启动子甲基化差异基有7条,即B4galt7、Elof1、Iws1、Kynu、Sc5d、Mutyh、Tgif2。结论肥胖痰湿证模型大鼠存在着脂肪组织代谢相关基因启动子甲基化状态的改变,温胆汤对代谢相关基因启动子的甲基化具有一定的调控作用。     

冠心病不稳定性心绞痛血瘀证患者IL-6基因甲基化研究及方法探讨

目的:研究冠心病不稳定性心绞痛(unstable angina,UA)患者外周血细胞中白细胞介素-6(IL-6)基因启动子区甲基化状态与中医血瘀证的关系。方法:选取6例2015年2月—2015年5月中国中医科学院广安门医院心血管科住院或门诊UA血瘀证患者作为试验组,另选取6例中国中医科学院广安门医院心内科住院或门诊UA非血瘀证患者作为对照组,采用重亚硫酸盐处理检测两组IL-6基因启动子区甲基化状态并进行组间比较,分析血瘀证与基因启动子区甲基化相关性。结果:IL-6基因转录起始位点前-1 118 bp至-826 bp序列中7个位点Cp G位点甲基化程度血瘀证组存在高于非血瘀证组的趋势,但差异尚无统计学意义。IL-6基因转录起始位点前-1 47 1 bp至-1 184 bp序列4个Cp G位点甲基化程度血瘀证组与非血瘀证组之间的差异尚不明显。结论:UA血瘀证患者IL-6基因启动子甲基化水平存在高于非血瘀证组的趋势,一定程度反映了UA血瘀证本质。     

急性髓系白血病中医证型与ID4基因启动子区甲基化相关性研究

目的研究急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者骨髓细胞中ID4基因启动子区甲基化状态与中医证型的关系,探讨ID4基因甲基化与AML发生、发展的关系。方法选取35例2010年2-12月山东中医药大学附属医院血液科住院或门诊AML患者作为试验组,另选取10名山东中医药大学附属医院健康体检中心体检健康者作为对照组,采用甲基化特异性聚合酶链反应(methylation-specific polymerasechain reaction,MS-PCR)检测两组ID4基因启动子区甲基化状态并进行组间及中医证型间比较,分析中医证型与基因启动子区甲基化相关性。结果 AML患者ID4基因启动子区甲基化为27例(77.1%),与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。各证型患者ID4基因启动子区甲基化阳性率由低到高依次为气阴两虚证<瘀血痰结证<毒热炽盛证,差异均有统计学意义(P<0.05)。ID4基因启动子区甲基化阳性患者外周血白细胞数、骨髓原始细胞比例高于阴性患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论毒热炽盛证、瘀血痰结证患者更易出现ID4基因甲基化,ID4基因启动子区甲基化阳性表达从分子水平验证了AML初期中医邪实内存的本质,也一定程度上反映了AML恶性程度。     

慢性应激大鼠海马组织Stk32c基因表达及逍遥散干预的表观遗传学机制初探

目的通过中药复方逍遥散干预慢性应激损伤模型大鼠,对Stk32c基因表达进行验证,并对其基因启动子区DNA甲基化修饰变化进行探索,以期从表观遗传学角度阐释慢性应激损伤机制及逍遥散对慢性应激损伤的干预机制。方法90只雄性Wistar大鼠随机分为空白对照组、慢性应激模型组、逍遥散治疗组三组,每组30只。除空白对照组外,其他两组造模采用Cart多相慢性应激大鼠模型并加以改进,逍遥散治疗组在造模同时每只每天给予逍遥散2 ml,连续造模21天。采用RT-PCR一步法及免疫组织化学染色法测定各组大鼠海马区Stk32c基因及其蛋白表达情况,采用Sequenom Mass ARRAY法检测Stk32c基因启动子区甲基化水平。结果慢性应激损伤大鼠海马Stk32c mRNA及其相应蛋白表达较空白对照组显著下调,其基因启动子区某些特定位点(特别是引物方案2的CpG_6、CpG_27.28、CpG_39位点)的甲基化程度明显高于空白对照组。逍遥散治疗能够明显逆转慢性应激引起的Stk32c mRNA及其相应蛋白的表达变化,相应位点DNA甲基化程度较慢性应激模型组显著下调。结论 Stk32c基因启动子区特定位点甲基化程度升高可能是慢性应激造成大鼠海马神经元损伤的机制之一,逍遥散可能通过干预相应区域DNA甲基化修饰发挥抗慢性应激损伤作用。     

新疆雪莲总黄酮对DNA甲基化酶抑癌作用的影响

目的探讨新疆雪莲总黄酮对DNA甲基化酶活性及癌细胞DNA甲基化状态的影响。方法采用DNA甲基化酶活性分析实验检测雪莲总黄酮对DNA甲基化酶活性的影响,甲基化特异性PCR(MSP)检测雪莲总黄酮处理2d后食管癌KYSE510细胞抑癌基因P16启动子CpG岛甲基化状态;同时流式细胞仪检测细胞凋亡。结果雪莲总黄酮抑制DNA甲基化酶M.Alu I活性,MSP实验结果显示雪莲总黄酮处理2 d后,癌细胞未甲基化状态P16基因的表达水平升高,KYSE510细胞P16基因mRNA恢复表达。流式分析结果显示,雪莲总黄酮处理KYSE510癌细胞2 d后,处理组细胞凋亡率与对照组比较显著增加(P﹤0.05)。结论雪莲总黄酮可以通过影响DNA甲基化酶活性,激活表观沉默的抑癌基因表达,抑制癌细胞增殖。     

慢性乙型肝炎和肝硬化“异病同证”的全基因组甲基化分析

目的：本文从全基因组DNA甲基化的角度探讨慢性乙型肝炎（慢乙肝）和慢乙肝后肝硬化（肝硬化）湿热内蕴证、肝郁脾虚证和肝肾阴虚证异病同证的生物学基础。方法：采取慢乙肝及肝硬化湿热内蕴证、肝郁脾虚证和肝肾阴虚证患者和健康志愿者外周血样本,提取DNA进行HumanMethylation450K芯片检测及分析。结果：慢乙肝和肝硬化异病同证湿热内蕴证特异性差异甲基化位点有9个,覆盖9个基因;肝郁脾虚证有30个,覆盖20个基因;肝肾阴虚证有22个,覆盖14个基因。其中,与正常组相比,湿热内蕴证中KCTD2和NAV1,肝郁脾虚证中LGR6和SH2D4B及肝肾阴虚证中CYP2E1、PCSK6、DEXI、HIST1H3B和SULT1C2的差异位点甲基化程度变化较大（|Delta Beta|>0.15）。结论：慢乙肝与肝硬化基因甲基化可能与其湿热内蕴证、肝郁脾虚证和肝肾阴虚证的形成有关。     

全基因组CpG岛甲基化——中药复方干预骨髓增生异常综合征基因甲基化的崭新研究途径

骨髓增生异常综合征属血液系统恶性肿瘤,目前该病发病机制的尚未明确。基因甲基化是骨髓增生异常综合征最受认可的发病机制。全基因组CpG岛甲基化是研究MDS基因甲基化的新方法,通过比对中药干预前后全基因组甲基化位点的改变,可能找到中药治疗骨髓增生异常综合征的有效靶点。     

电针对肥胖大鼠脂肪组织白细胞介素6基因启动子区H3K9乙酰化水平的影响

目的探讨电针治疗肥胖的可能作用机制。方法将70只大鼠随机选10只作为正常组,给予普通饲料喂养,其余给予高脂饲料喂养8周建立肥胖模型。将达到肥胖标准的30只大鼠随机分为模型组、电针组、假电针组,每组10只。电针组取"足三里""中脘""关元""丰隆"穴,连接电针治疗,每周3次,共治疗8周。假电针组取电针组穴位旁约5mm处浅刺并夹持电极,不予通电。正常组和模型组于相同时间内给予抓取固定。记录各组大鼠干预第0、2、4、6、8周时的体重,计算Lee′s指数;实验结束后检测脂肪组织中白细胞介素6(IL-6)和沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白及mRNA表达,并检验IL-6基因启动子区H3K9乙酰化(H3K9ac)程度以及SIRT1和H3K9ac的共表达情况。结果与正常组比较,其余各组大鼠第0、2、4、6、8周Lee′s指数均显著升高,第8周模型组大鼠脂肪组织中SIRT1蛋白及mRNA表达降低,IL-6蛋白及mRNA表达升高,IL-6基因启动子区H3K9ac水平升高(P0.05);与模型组比较,电针组第6、8周大鼠体重和Lee′s指数均明显下降,脂肪组织中SIRT1蛋白及mRNA表达升高,IL-6蛋白及mRNA表达降低,IL-6基因启动子区H3K9ac水平下降(P0.05),而假电针组与模型组之间差异无统计学意义(P0.05)。各组SIRT1和H3K9ac在脂肪组织细胞核中均存在共表达。结论电针能够有效降低肥胖大鼠体重及Lee′s指数,其机制可能与激活脂肪组织中SIRT1表达,降低IL-6基因启动子区H3K9乙酰化程度有关。     

苦参碱诱导白血病K562细胞抑癌基因RIZ1的表达

目的：探讨苦参碱对白血病K562细胞抑癌基因RIZ1的mRNA表达的影响。方法：利用半定量RT-PCR方法检测了0．1mg／ml苦参碱作用K562细胞不同时间后RIZ1基因mRNA水平表达的变化，并同0．2mg/ml苦参提取液与DNA甲基化转移酶抑制剂5-氮杂-2＇-脱氧胞苷（5-aza-2＇-deoxycytidine，5-Aza-CdR）分别诱导的RLZ1因表达变化进行了比较。结果：K562对照组细胞低表达RIZ1，苦参碱和苦参提取液作用K562细胞24小时和72小时后，RIZ1表达明显升高，并呈时间依赖性；同样，5-Aza-CdR作用K562细胞后，RIZ1表达也明显增高。结论：苦参碱在苦参液诱导抑癌基因RIZ1表达中起了重要作用；二者诱导的RIZ1基因表达可能同RIZ1基因启动子去甲基化作用有关。     

白虎加桂枝汤对热痹模型大鼠特征性甲基化基因表达的影响

考察湿热环境下热痹模型大鼠特征性甲基化基因及白虎加桂枝汤对热痹特征性甲基化基因的调控作用。采用大鼠足底注射CFA并复合湿热环境制备热痹大鼠模型。造模后第15天给予白虎加桂枝汤干预治疗30 d。造模后每隔4 d检测足容积,第45天采用HE染色法检测大鼠踝关节组织病理学,Me DIP-Seq测序法检测大鼠膝关节滑膜甲基化水平并以取差集的方法筛选热痹模型特征性甲基化基因,悬浮芯片检测血清中IL-1β,IL-17,TNF-α,EGF,IL-12p70,IL-4,IL-6及IFN-γ含量水平,qRT-PCR检测大鼠滑膜特征性甲基化基因mRNA相对表达水平。实验发现,与完全弗氏佐剂性关节炎(AA)模型组比较,热痹模型组足肿胀度和病理严重程度仅轻微增加;与空白组比较,2个模型组全基因Cp G岛均呈低甲基化状态,热痹模型组甲基化水平最低,且AA模型组共705个差异性甲基化基因,热痹模型组共2 418个差异性甲基化基因;与AA模型组比较,热痹模型组存在1 287个差异性甲基化基因,其中共974个差异性基因甲基化下调,这些差异性基因显著分布于32个KEGG Pathway中(P0.05),此外启动子区上热痹特征性甲基化基因共52个,其中36个甲基化下调基因,16个甲基化上调基因;药物干预后,白虎加桂枝汤显著改善热痹模型组足肿胀度和病理损伤,且明显降低IL-1β,TNF-α,EGF,VEGF,IL-17,IL-12p70的含量水平(P0.05),还能抑制热痹特征性甲基化下调基因Ahcy及Rpl3 mRNA的表达,促进热痹特征性甲基化上调基因Agxt mRNA的表达水平。可见,热痹模型滑膜基因存在独特的甲基化水平变化,而白虎加桂枝汤可能针对性回调热痹特征性基因的甲基化水平,达到治疗热痹的作用。     

火针对坐骨神经损伤大鼠脂肪酸合酶基因启动子区H3K27乙酰化水平的影响

目的 观察火针对坐骨神经损伤大鼠运动功能及脂肪酸合酶基因启动子区H3K27乙酰化(H3K27ac)水平的影响,探讨脂肪酸合酶(FASN)基因启动子区H3K27ac参与火针促进坐骨神经功能恢复中表观遗传的调控机制。方法 将72只大鼠随机分为假手术组、模型组和火针组,每组24只。火针组与模型组建立坐骨神经压榨损伤大鼠模型,火针组给予火针治疗。采用坐骨神经功能指数(SFI)评价各组大鼠的运动功能,免疫组化法检测坐骨神经损伤处FASN的表达,Western blot法检测组蛋白去乙酰化酶1(HDAC1)的表达,染色质免疫共沉淀法检测FASN基因启动子区H3K27ac水平。结果 与假手术组比较,模型组SFI评分、FASN蛋白表达显著下降(P<0.01);HDAC1蛋白表达、FASN基因启动子区H3K27ac丰度显著升高(P<0.01)。与模型组比较,火针组SFI评分、FASN蛋白表达、FASN基因启动子区H3K27ac丰度显著升高(P<0.01);HDAC1蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论火针能够有效改善坐骨神经损伤模型大鼠的运动功能,其机制可能与抑制坐骨神经损伤组...