复方肝舒康抗乙肝病毒活性研究

目的:研究复方肝舒康各提取部位的体外抗乙肝病毒(HBV)作用。方法:取各萃取部位作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)考察药物对该细胞的毒性,采用酶联法(ELISA)检测药物对2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用。结果:石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位的半数毒性浓度(TC50)分别为125、375、62.5μg/mL。最大无毒浓度(TC0)分别为62.5、125、31.3μg/mL;石油醚部位、乙酸乙酯部位对2215细胞的HBsAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为48.6、14.0μg/mL,对2215细胞的HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)52.4、19.7μg/mL,而正丁醇部位均大于125μg/mL。石油醚部位的治疗指数(TI)值分别为2.57和2.43,乙酸乙酯部位的治疗指数分别为26.7和19.04,正丁醇部位均小于2。结论:复方肝舒康提取物乙酸乙酯部位体外抗乙肝病毒的作用最强,石油醚部位抗乙肝病毒作用较弱,正丁醇部位对乙肝病毒无作用。     

大叶蛇葡萄石油醚提取物抗乙肝病毒体外实验研究

目的 研究大叶蛇葡萄石油醚提取物体外抗乙肝病毒(HBV)的作用.方法 将大叶蛇葡萄石油醚提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变(CPE)观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法(ELISA)检测药物对培养8d的2215细胞分泌的表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)表达的抑制作用.结果 石油醚提取物的半数毒性浓度(TC50)为99.1μg/ml,最大无毒浓度(TCo)为62.5 μg/ml;石油醚提取物对培养8d的2215细胞的HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度(IC50)分别为4.2 μg/ml,26.3μg/ml,治疗指数(TI)值分别为23.6,3.8.结论 大叶蛇葡萄石油醚提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效部位.     

半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分分析及其抗子宫内膜癌细胞活性研究

目的:对半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位成分进行分析,并研究体外抗子宫内膜癌细胞活性。方法:采用GC-MS结合保留指数(Kovats retention index,KI)对主要成分进行分析和鉴定;甲基偶氮唑盐类(MTT)法研究三者的抗子宫内膜癌细胞活性。结果:通过GC-MS分析鉴定出半枝莲、白花蛇舌草及药对石油醚部位中同时含有不饱和脂肪酸、酯类、甾醇类等成分,白花蛇舌草和药对相区别于半枝莲的石油醚部位又含有较多蒽醌类化合物。半枝莲、白花蛇舌草及其药对石油醚部位抗子宫内膜癌细胞HEC-1A的IC50值分别为275.204μg/m L,105.826μg/m L,148.645μg/m L,抗子宫内膜癌细胞Ishikawa的IC50值分别为189.114μg/m L,77.974μg/m L,137.999μg/m L。结论:半枝莲与白花蛇舌草及其药对石油醚部位对子宫内膜癌细胞HEC-1A和Ishikawa均有抑制作用,其中白花蛇舌草的抗子宫内膜癌细胞活性最强,推测可能与含量较高的蒽醌类化合物有关。     

大叶蛇葡萄乙醇提取物对2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的实验研究

目的：研究大叶蛇葡萄乙醇提取物的抗乙肝病毒（HBV）作用。方法：将大叶蛇葡萄乙醇提取物作用于乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞系2215细胞,以细胞病变（CPE）观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法（ELISA）检测药物对培养8天的2215细胞分泌的表面抗原（HBsAg）和e抗原（HBeAg）表达的抑制作用。结果：大叶蛇葡萄乙醇提取物的半数毒性浓度（TC50）为250μg/ml,最大无毒浓度（TC0）为125μg/ml;乙醇提取物对培养8天的2215细胞HBsAg、HBeAg表达抑制作用的半数有效浓度（IC50）分别为43.1μg/ml、54.8μg/ml,治疗指数（TI）值分别为5.8、4.7。结论：大叶蛇葡萄乙醇提取物具一定的体外抗乙肝病毒的作用,为有效物质部位。     

白花蛇舌草核苷体外抗肿瘤作用实验研究

目的 探讨白花蛇舌草中核苷的体外抗肿瘤作用.方法 采用24孔板培养法和MTT法观察白花蛇舌草核苷对人红白血病细胞株K562、人非小细胞肺癌细胞株A549的抑制作用.结果 显微镜下观察24孔板,白花蛇舌草核苷呈现明显的抗肿瘤作用.体外抑瘤实验表明,白花蛇舌草核苷对两种细胞株起效的最低药物浓度分别为100 μg/ml和50μg/ml,半数致死量IC50分别是248.1 μg/ml和147.7 μg/ml.结论 白花蛇舌草核苷具有抗肿瘤活性.     

白花蛇舌草的体外抗肿瘤活性研究

目的:应用白花蛇舌草提取物进行体外结肠癌HT-29细胞株、结肠癌HCTI16细胞株的抑制实验,观察白花蛇舌草提取物的抗肿瘤活性。方法:通过体外培养的方法培养人结肠癌HT-29细胞株和结肠癌HCTI16细胞株,对比分析不同浓度白花蛇舌草提取物对细胞株的影响。结果:白花蛇舌草提取物对HT-29、HCTI16细胞株的影响为:3mg/ml浓度时抑制率分别为(25.64±1.36)%、(27.36±1.87)%;5mg/ml浓度时抑制率(37.25±2.01)%、(39.01±1.65)%;7mg/ml浓度时抑制率(49.87±1.68)%、(51.22±2.33)%,其抑制率均优于对照组(P0.05)。结论:白花蛇舌草提取物可有效抑制结肠癌HT-29细胞株以及结肠癌HCTI16细胞株的增值,具有显著的抗肿瘤效果。     

白花蛇舌草内生真菌BY1不同提取部位对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的作用研究

目的:研究白花蛇舌草内生真菌BY1乙酸乙酯提取部位、氯仿提取部位、甲醇提取部位对人胃癌细胞SGC-7901(SGC-7901细胞)增殖和凋亡的作用。方法:体外培养SGC-7901细胞,采用MTT法测定BY1不同提取部位对SGC-7901细胞干预48 h的增殖抑制作用,采用Hoechst 33258染色法观察SGC-7901细胞的凋亡变化。结果:BY1不同提取部位对SGC-7901细胞均具有抑制作用,由强到弱依次为氯仿部位、乙酸乙酯部位和甲醇部位,对SGC-7901细胞半数抑制浓度(IC_(50))分别为177.37±11.53μg/ml、380.53±40.07μg/ml和1 077.80±40.17μg/ml。细胞凋亡形态可观察到核固缩、核碎片和聚集等,药物干预48 h后凋亡率增加呈剂量-效应关系。结论:白花蛇舌草内生真菌BY1对SGC-7901细胞具有良好的抑制作用,并可诱导其凋亡。     

白花蛇舌草不同极性部位抗血管生成及抗氧化活性研究

目的:研究白花蛇舌草不同极性部位的体外抗血管生成和抗氧化活性,以期为白花蛇舌草深入研究与开发提供理论依据。方法:使用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇对95%乙醇提取物水溶液依次萃取,得到4种不同极性部位。人脐静脉内皮细胞(HUVEC)管腔形成实验初步观察各极性部位抗血管生成活性;以总还原力、DPPH·和·OH清除率为评价指标,考察各萃取物抗氧化能力。结果:石油醚、乙酸乙酯萃取物对HUVEC管腔形成有较好抑制作用;乙酸乙酯部位总还原力高于其他部位;DPPH·清除率顺序为:乙酸乙酯正丁醇石油醚水部位,其IC50值分别为0.110 mg/m L、0.122 mg/m L、0.473 mg/m L和0.754 mg/m L,·OH清除率顺序为:石油醚正丁醇乙酸乙酯水部位,其中石油醚部位清除·OH线性关系较好,线性方程为y=38.565x-40.991,IC50值为2.374 mg/m L。不同极性部位对HUVEC管腔形成的抑制和抗氧化活性呈浓度依赖关系,DPPH·清除率呈时间依赖关系。结论:白花蛇舌草不同极性部位具有一定抗氧化活性,同时能抑制HUVEC管腔形成。     

白花蛇舌草注射剂调节Bcl-2/CytC信号通路诱导线粒体凋亡抑制肝癌细胞增殖的研究

目的:评估白花蛇舌草注射剂抑制肝癌细胞增殖及相关机制。方法:选取120例肝癌患者临床资料进行分析,将其按照治疗方案不同分成参照组30例,研究组90例,其中研究组根据白花蛇舌草注射剂的不同浓度分为低(25μg/ml)、中(50μg/ml)、高(100μg/ml)三个浓度各30例,参照组不做任何处理,研究组注射白花蛇舌草注射剂,进行肝癌细胞HepG_2细胞体外培养,注射后24 h和48 h观察细胞生长情况,逆向显微镜和透射电镜观察细胞形态,Western Blot检测Bax,Bcl-2,Caspase-3,Cyt C蛋白表达情况。结果:在24 h和48 h后,白花蛇舌草注射剂浓度为50μg/ml和100μg/ml时,HepG_2细胞的存活率明显下降。抑制率随药物浓度的增加和作用时间的延长而增加,呈剂量依赖性和时间依赖性关系,在50μg/ml和100μg/ml浓度下,白花蛇舌草注射剂对HepG_2细胞有明显的抑制作用(P<0.05),发现研究组1促进肿瘤扩散的趋势在25μg/ml浓度,表明细胞定量24 h后,低温提取蛋白质可能影响中药的使用,白花蛇舌草注射液能够改变Hep G_2细胞超微结构,参照组细胞核较大,细胞核清晰,丰富的细胞器,线粒体呈圆形或椭圆形,基础丰富,细胞核染色质均匀分布,当白花蛇舌草注射液浓度为100μg/ml时,微绒毛,胞质变性,空泡,细胞染色质固缩,边缘,有细胞凋亡的早期迹象。Western blot检测Bcl-2/CytC信号通路相关蛋白在HepG_2细胞中的表达,当用浓度为100、50、25μg/ml的白花蛇舌草注射液预处理24h后,与对照组相比,Bax、CytC、Caspase-3蛋白表达逐渐升高,Bcl-2蛋白表达逐渐降低,Bcl-2/Bax比值降低。其中,100μg/ml和50μg/ml浓度最为明显,表明白花蛇舌草注射液能够作用于Hep G_2使其释放Cyt C,激活Caspase-3蛋白质的表达,诱导肝癌细胞的凋亡。结论:白花蛇舌草注射液可以抑制人肝癌HepG_2细胞的增殖并诱导其凋亡,这可能与Bcl-2/CytC信号通路的调控有关,可以提高整体疗效,减少不良反应少,安全性高。     

白花蛇舌草通过Wnt信号通路抑制结肠肿瘤干细胞分化

目的:研究白花蛇舌草对结肠肿瘤干细胞(CSC)分化的影响,从Wnt信号通路阐明其作用机制。方法:制备白花蛇舌草乙醇提取物,从人结肠肿瘤组织中消化、分拣出结肠CSC。用干细胞球形成试验研究白花蛇舌草对结肠CSC活性的影响,用含胎牛血清的DMEM/F-12培养基诱导CSC分化,并研究白花蛇舌草对结肠CSC分化的影响,以及对结肠CSC中CK20和CD133 mRNA水平的影响,用软琼脂克隆形成试验研究白花蛇舌草对结肠CSC体外转化的影响,用qRT-PCR研究白花蛇舌草对结肠CSC中Wnt信号通路基因β-catenin和TCF4表达的影响。结果:终浓度为125μg/ml、250μg/ml和500μg/ml的白花蛇舌草乙醇提取物可以剂量依赖性地抑制结肠CSC球形成,抑制结肠CSC分化,下调结肠CSC中CK20和CD133 mRNA水平,抑制结肠CSC体外转化,并降低结肠CSC中β-catenin和TCF4 mRNA水平。结论:白花蛇舌草可以抑制结肠CSC分化,其机制在于抑制Wnt信号通路的活性。     

白花蛇舌草水提取物对白血病K562细胞的抑制作用及诱导其凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草水提取物对K562细胞的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色试验检测白花蛇舌草水提取物对K562细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞凋亡形态结构的改变;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草水提取物对K562细胞的诱导凋亡作用。结果白花蛇舌草水提取物能明显抑制K562细胞的生长,药物浓度在0.005μg/ml作用于48 h后,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为5μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带。结论白花蛇舌草水提取物对白血病K562细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导肿瘤细胞凋亡是其机制之一。     

白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的生长抑制及诱导其凋亡的研究

目的研究白花蛇舌草醇提取物对人类红白血病细胞(K562细胞)的生长抑制作用及其机制。方法采用MTT比色实验检测白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的抑制率;光镜、电镜技术观察细胞形态结构的改变;琼脂糖凝胶电泳法检测白花蛇舌草醇提取物诱导K562细胞的凋亡作用。结果白花蛇舌草醇提取物能明显抑制K562细胞的生长,药物浓度在0.32μg/ml作用于48 h后,即具有显著的抑制作用,抑制率呈剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC50)约为1 000μg/ml;光镜、电镜下见细胞体积缩小,细胞膜皱缩,染色质明显浓缩,核聚集成团块,形成凋亡小体,有的边聚于核膜下呈新月形等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示实验组出现明显的DNA梯形凋亡带,而对照组没有出现梯形条带。结论白花蛇舌草醇提取物对K562细胞的生长具有明显的抑制作用,诱导细胞凋亡是其机制之一。     

刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1蛋白酶活性的研究

目的 对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物刺头复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-l蛋白酶活性进行研究.方法 用荧光光度法测定蛋白酶的半数抑制浓度(IC5o).结果 刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、水提取物抑制HIV-1蛋白酶的半数有效浓度IC50分别为0.73,1.17,2.47 μg/ml.结论 刺头复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物与水提取物具有体外抑制HIV-1蛋白酶活性.     

白花蛇舌草水提物对白血病CEM细胞抑制作用及机制研究

目的研究白花蛇舌草对CEM细胞抑制作用及机制。方法以不同浓度的白花蛇舌草水提物作用CEM细胞24,48,72h后,通过MTT比色试验,检测其对CEM细胞的抑制率;用浓度分别为166μg/ml、33.2μg/ml、6.64μg/ml的白花蛇舌草水提物作用于CEM细胞24,48,72h后,通过逆转录PCR(RT-PCR)检测P53基因的表达,探索白花蛇舌草抑制CEM细胞的可能机制。结果白花蛇舌草水提物能够抑制CEM细胞的生长;白花蛇舌草能促进CEM细胞的P53基因表达,且随用药浓度的升高及作用时间的延长,其抑制作用逐渐增强、P53基因表达也逐渐增强。结论白花蛇舌草水提物能抑制白血病CEM细胞的生长,其作用强度与时间、浓度呈正相关,其抑制机制可能与上调P53基因的表达有较大关联。     

民族药野梦花基源及提取物抗丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶活性研究

目的研究民族药野梦花基源及提取物体外抗丙型肝炎病毒(HCV NS3/4A)蛋白酶活性。方法采用生药学常用鉴别方法确定野梦花基源,利用系统溶剂萃取法提取和初步分离野梦花,经荧光法测试野梦花提取物抗HCV NS3/4A蛋白酶活性。结果野梦花为瑞香科植物(Daphne papyracea Wall.ex Steud.var.crassiuscula Rehd.),其乙酸乙酯和正丁醇提取物,在浓度为100μg.ml-1时,对HCV NS3/4A蛋白酶的抑制率分别为70.5%和65.4%。结论民族药野梦花的乙酸乙酯和正丁醇部位为抗HCV NS3/4A蛋白酶的有效部位。     

马来鱼藤中一新的鱼藤酮类化合物及相关成分的抗幽门螺杆菌活性

作者发现鱼藤酮具很强的抗幽门螺杆菌活性(MIC 为1.3μg/mL),进而从马来鱼藤Derris malaccensis Prain 根分离出一新的鱼藤酮类化合物 derrisin(1)和10个已知的该类化合物,并研究了它们的抗幽门螺杆菌活性。该植物干燥根的甲醇提取物用乙酸乙酯和水分配提取。乙酸乙酯部位具有显著的抗幽门螺杆菌活性,IC_(50)<1μg/mL。从该部位     

复叶耳蕨提取物体外抗HIV-1 RT活性的研究

目的对鳞毛蕨科复叶耳蕨属植物复叶耳蕨不同提取部位体外抗HIV-1逆转录酶活性进行研究。方法在体外无细胞系统内采用酶联免疫吸附测定HIV-1逆转录酶的半数有效浓度(IC50)。结果复叶耳蕨乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物抑制HIV-1逆转录酶的半数有效浓度IC50分别为84.069,.74μg.ml-1,水提取物抑制HIV-1逆转录酶的半数有效浓度IC50>200μg.ml-1。结论复叶耳蕨乙酸乙酯提取物与正丁醇提取物具有体外抑制HIV-1逆转录酶作用。     

广东蛇葡萄石油醚萃取部位体外抗乙肝病毒活性实验研究

目的观察广东蛇葡萄石油醚萃取部位对乙肝病毒(HBV)的抑制活性。方法将广东蛇葡萄石油醚萃取部位作用于2215细胞(乙肝病毒DNA转染人肝癌细胞),以细胞病变(CPE)为指标,观察药物对2215细胞的毒性,用酶联免疫测定法(ELISA)检测培养液中HBeAg和HBsAg水平。结果广东蛇葡萄石油醚萃取部位对2215细胞HBeAg、HBsAg的分泌有明显抑制作用,其半数毒性浓度(TC50)为99.6 g/mL,最大无毒浓度(TC0)为62.5 g/mL;对培养8d的2215细胞抑制HBeAg(IC50)为26.5 g/mL、抑制HBsAg(IC50)为4.3 g/mL;治疗指数(TI)值分别为4.0、23.7。结论广东蛇葡萄石油醚物质部位能明显抑制2215细胞HBsAg和HBeAg的分泌,具有一定的抗乙肝病毒活性,为蛇葡萄属药物的抗乙肝病毒的研究和开发提供了一定的参考依据。     

西藏红缨合耳菊提取物对酪氨酸酶的抑制作用

目的:研究西藏红缨合耳菊提取物对酪氨酸酶的抑制作用。方法:将红缨合耳菊的70%乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,然后测定各部分对酪氨酸酶的抑制作用,并进行酶抑制动力学研究。结果:乙酸乙酯、正丁醇的萃取部分对酪氨酸酶的活性抑制较强;对单酚酶抑制作用明显并有延迟作用,半数抑制浓度(IC50)分别为57.8、140μg/ml;对双酚酶的抑制作用显示浓度依赖关系,IC50分别为41.2、59.6μg/ml,相比熊果苷抑制双酚酶活性的IC50值1.44mg/ml,抑制效果分别是熊果苷的35、24倍;抑制类型:乙酸乙酯部分为竞争性抑制,Ki为19.7μg/ml,正丁醇部分为非竞争性抑制,Ki为60.7μg/ml。结论:西藏红缨合耳菊乙醇提取物的乙酸乙酯、正丁醇萃取部分对酪氨酸酶活性抑制较强。     

白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR抑制作用的研究

目的研究白花蛇舌草水提物对白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制作用及其机制。方法采用MTT比色实验检测白花蛇舌草对多药耐药细胞株CEM/VCR的抑制率;光镜、电镜技术观察白花蛇舌草对CEM/VCR细胞作用后的细胞形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测白花蛇舌草诱导CEM/VCR细胞凋亡作用。结果白花蛇舌草水提物能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,药物在低浓度20μg/ml作用CEM/VCR细胞24h即具有显著抑制效应,抑制率为23.66%,抑制率与药物作用浓度及作用时间呈正比关系,药物作用72h的半数抑制浓度(IC50)约为264.70±4.21μg/ml,浓度为500μg/ml时的抑制率达60.46%;光镜、电镜下见实验组细胞体积缩小,细胞膜皱缩,甚至破损,染色质明显浓缩,核聚集,边聚于核膜下,有的形成胞膜完整的凋亡小体等典型的凋亡特征;琼脂糖凝胶电泳结果显示,实验组各条带中出现明显的DNA梯形凋亡条带,且随着药物浓度的加大、作用时间延长,凋亡梯形条带越清晰,凋亡越明显。结论白花蛇舌草能够有效的抑制白血病多药耐药细胞株CEM/VCR的生长,诱导细胞凋亡可能是其抑制机制之一。