葡萄糖浓度波动对体外内皮细胞丙二醛和抗氧化因子影响

目的 研究波动性葡萄糖和恒定高葡萄糖对体外培养的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)的氧化应激因子丙二醛(maleic dialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH)及超氧化物歧化酶(super oxide dismutase,SOD)含量的影响,探讨波动性葡萄糖造成糖尿病慢性血管并发症的可能机制.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞株,分为正常对照(normal control,NG)组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L);恒定高葡萄糖(constant high glucose,HG)组(含葡萄糖浓度为25 mmol/L);波动性葡萄糖(fluctuated glucose,FG)组(葡萄糖浓度为5.5 mmol/L与葡萄糖浓度为25 mmol/L 2种条件培养液,每8 h更换1次);NG组和HG组同样每8 h更换培养液,共作用72 h.用分光光度比色法检测MDA、GSH,SOD的含量或活力.结果 FG组与HG组相比,MDA含量明显上升[(7.63±0.42)μmol/L比(6.54±0.35)μmol/L,P<0.05]; GSH、SOD含量或活力明显下降,差异有统计学意义[分别为(78.47±2.77)mg/L比(86.43±2.79)mg/L,P<0.05;(28.57±2.75)U/mL比(33.66±1.71)U/mL,P<0.01]. FG组和HG组与NG组相比,MDA含量明显上升,GSH、SOD含量或活力明显下降,差异有统计学意义(P<0.05或0.01).结论 波动性葡萄糖可能比持续高血糖对血管内皮损害更大.     

Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响

目的:探讨Resveratrol对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞氧化应激和p27蛋白表达的影响?方法:体外培养大鼠肾小球系膜细胞,分为正常对照组(NC组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L)?Resveratrol组(Res组,葡萄糖浓度5.6 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L)?高糖组(HG组,葡萄糖浓度30mmol/L)和高糖+Resveratrol组(HG+Res组,葡萄糖浓度30 mmol/L+ Resveratrol 20 μmol/L),各组细胞分别培养72 h,用比色法测定细胞上清液丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,流式细胞仪检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,蛋白含量/细胞数比值评估系膜细胞大小,Western blot法检测细胞内p27蛋白表达的变化?结果:①与NC组相比,HG刺激后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均明显上调(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞内MDA?ROS含量均降低(P < 0.05)?②与NC组相比,HG刺激72 h后,大鼠肾小球系膜细胞肥大?p27蛋白表达明显增加(P < 0.01);与HG组相比,HG+Resveratrol干预后大鼠肾小球系膜细胞细胞肥大减轻?p27蛋白表达减少(P < 0.05)?Res组和NC组之间p27蛋白表达无统计学意义(P > 0.05)?结论:Resveratrol可能通过缓解高糖诱导系膜细胞的氧化应激?抑制p27蛋白高表达,减轻糖尿病肾脏疾病早期的肾脏肥大?     

熊果苷拮抗H2O2损伤的研究

目的通过体外细胞学实验观察熊果苷拮抗H2O2的作用.方法体外培养人脐静脉内皮细胞ECV-304,将细胞分为对照组、损伤组和熊果苷组,熊果苷组提前12h加入熊果苷,500μmol/L H2O2诱导细胞氧化应激状态.光镜实验比较各组细胞形态学的变化;MTT实验比较各组细胞增殖活力的改变.结果光镜下可见,对照组细胞结构清晰,呈单层铺路石状紧密排列;损伤组细胞变形、皱缩、排列紊乱、脱落明显,胞浆内出现空泡;熊果苷组细胞形态结构基本清晰,但细胞有轻度肿胀,其它接近于正常对照组;MTT结果显示,与损伤组相比,熊果苷能明显保护ECV-304细胞增殖活力(P<0.05).结论本实验结果提示,熊果苷可以抵御H2O2所致ECV-304细胞氧化应激损伤.     

消可宁颗粒剂对高糖环境下内皮细胞的保护作用

目的 观察消可宁颗粒剂对高糖条件下培养的人脐静脉血管内皮细胞(ECV-304)的保护作用.方法 苏木精-伊红染色观察体外培养的不同消可宁浓度下的ECV-304细胞形态学改变和四甲基偶氮唑盐法(MTT)测定ECV-304细胞增殖活性.结果 ①高糖对照组ECV-304细胞生长抑制,变小变圆,出现不同程度的空泡变性.各消可宁组ECV-304细胞出现不同程度的细胞恢复.②80 g/L和100 g/L消可宁组可减轻高糖对ECV-304细胞的生长抑制,与高糖对照组比较具有显著性差异(P＜0.05).结论 高糖引起ECV-304细胞损伤,对其生长增殖具有明显的抑制作用.消可宁可有效减轻高糖对ECV-304细胞的损伤和生长抑制,从而保护内皮细胞.     

低糖诱导人脐静脉内皮细胞一氧化氮与活性氧变化的研究

目的观察低浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞一氧化氮(NO)与活性氧(ROS)变化的影响。方法以体外培养人脐静脉内皮细胞株HUVEC-12为研究对象,将实验分为正常对照组(5.5mmol/L葡萄糖)、低糖组(2.8mmol/L葡萄糖)、无糖组(0mmol/L葡萄糖)。分别用2.8、0mmol/L葡萄糖干预HUVEC-12细胞,经过1、2、4、12h后,硝酸还原酶法测定NO产量,化学比色法测定一氧化氮合成酶(NOS)活性,Dihydroethidium荧光探针法测定细胞内ROS水平。结果与正常对照组相比,低糖组与无糖组NO水平降低(P<0.01),NOS活性下降(P<0.01),细胞内ROS水平升高(P<0.01),均呈剂量依赖关系。同一浓度组内随着时间的延长,内皮细胞NO水平、NOS活性进一步降低(P<0.01),ROS水平进一步升高(P<0.05),各指标都具有浓度和时间依赖性。结论低糖可导致内皮细胞功能障碍,NO水平降低,NOS活性下降,其机制可能与低糖导致内皮细胞氧化应激损伤有关。     

氧化低密度脂蛋白对高糖状态下血管内皮细胞NO释放及ET-1分泌的影响

目的 观察高糖状态下氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)一氧化氮(NO)释放及内皮素-1(ET-1)分泌的影响.方法 不同葡萄糖(Glu)浓度(5.5 mmol/L,20 mmol/L)的培养液细胞中,分别加入含不同浓度ox-LDL(0 μg/ml,50 μg/ml,100 μg/ml)进行氧化损伤48 h,观察细胞形态、3H-TdR标记法测定细胞增殖、特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO表达、放射免疫法测定ET-1含量.结果 ①高糖状态下高浓度ox-LDL抑制ECV-304的增殖,且呈浓度依赖性;②高浓度Glu和ox-LDL具有正协同作用,促进ET-1的分泌,且对ET-1的促分泌作用高浓度ox-LDL可能要强于高血糖.而NO含量则随作用时间延长表现出先升高后下降的动态变化过程.结论 高浓度Glu和ox-LDL对ECV-304具有协同损伤作用,高糖状态下ox-LDL可直接导致VEC-304功能的异常,引起ET-1产生增多以及损伤内皮NO系统,促进糖尿病血管并发症的发生、发展.     

SS-GAG对高糖状态下血管内皮细胞NO释放及ET-1分泌的影响

目的观察高糖状态下扇贝裙边糖胺聚糖(scallop skirt glycosaminogly can, SS-GAG)对体外培养的血管内皮细胞(ECV-304)一氧化氮(NO)释放及内皮素-1(ET-1)分泌的影响。方法在体外培养生长良好的ECV-304分别加入不同浓度葡萄糖，建立高糖损伤细胞模型，选择葡萄糖终浓度为55.5mmoL/L的培养液作为高糖环境,加入不同浓度SS-GAG继续培养至12、24、36、48h，倒置显微镜下观察细胞生长状态，特异性硝酸还原酶法检测细胞内NO，放射免疫法测定ET-1。结果① 高糖能抑制ECV-304细胞生长,细胞形态发生改变。 SS-GAG减轻高糖对ECV-304损伤，SS-GAG保护组细胞形态基本完好；② 高浓度葡萄糖促进ET-1的分泌，与正常对照比较差异有统计学意义（P＜0．01)。而NO含量则随作用时间的延长表现出先升高后下降的动态变化过程，与正常对照比较差异有统计学意义（P＜0．01)。SS-GAG对高糖状态下ECV-304细胞分泌ET 1、NO具有调节作用，使其趋于正常，与正常对照比较差异无统计学意义（P＞0．05)，与高糖比较差异有统计学意义（P＜0．01)。结论高浓度葡萄糖对ECV-304具有明显的损伤作用，可直接导致ECV-304形态和功能异常,引起ET-1分泌增多以及损伤内皮NO系统使NO分泌失调。SS-GAG可减轻高糖对ECV-304细胞的损伤，通过调节 ET和NO平衡，起到保护ECV-304作用。     

高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤及盐酸贝那普利对其保护作用的实验研究

目的探讨盐酸贝那普利对体外高糖诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用及其机制。方法将人脐静脉血管内皮细胞株分别培养在含5.5mmol/L葡萄糖(A组)、33.3mmol/L葡萄糖(B组)、33.3mmol/L葡萄糖 0.1μmol/L盐酸贝那普利(C组)、33.3mmol/L葡萄糖 1.0μmol/L盐酸贝那普利(D组)、33.3mmol/L葡萄糖 10.0μmol/L盐酸贝那普利(E组)的培养基中培养24h,倒置相差显微镜观察细胞形态,并分别进行细胞活力、细胞培养上清液谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-PX)活力、丙二醛(MDA)含量、NO分泌量的测定。结果B、C、D、E组的细胞活力、MDA含量、GSH-PX活力、NO分泌量与A组比较差异均有统计学意义(P<0.01)。C组、D组、E组的细胞活力、MDA含量、GSH-PX活力与B组间差异均有统计学意义(P<0.01);NO分泌量与B组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论盐酸贝那普利对体外高糖诱导损伤的血管内皮细胞具有保护作用,其作用机制可能通过清除活性氧、降低脂质过氧化、提高内皮细胞抗氧化酶体系的活力而实现对高糖损伤血管内皮细胞的保护效应。     

红景天苷对高糖损伤人脐静脉内皮细胞的保护作用研究

目的观察红景天苷对高糖诱导血管内皮细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法实验于2017年2月—2017年11月在青海大学高原医学研究中心实验室进行。体外培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株贴壁后,以MTS法观察不同浓度葡萄糖对人脐静脉内皮细胞活力的影响,根据糖浓度分组。糖浓度5.5 mmol/L作为正常对照组,糖浓度45 mmol/L作为模型组,以不同红景天苷浓度(1×10~(-5)mol/L、5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L)作用于模型损伤组,并通过MTS法观察细胞活力,WST-1法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)活力,TBA法测定细胞内丙二醛(MDA)含量,观察红景天苷对血管内皮细胞损伤的保护作用。结果与模型损伤组比较,细胞培养24 h、48 h,红景天苷5×10~(-5)mol/L、1×10~(-4)4mol/L、2×10~(-4)4mol/L组细胞活力均明显增加(F=5.111、16.330,P<0.01),细胞内MDA含量均明显下降(F=22.567、28.382,P<0.01),细胞内SOD活力均明显增加(F=23.388、82.244,P<0.01);培养48 h,红景天苷1×10~(-5)mol/L组细胞活力与模型损伤组比较显著增加(P=0.04)。结论红景天苷可以降低高糖损伤的HUVEC的氧化应激水平,从而对高糖损伤的血管内皮细胞提供一定的保护作用。     

胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞增殖的影响

目的:研究胎盘多肽注射液对人脐静脉内皮细胞(ECV-304)增殖的影响.方法:采用细胞计数和MTT法观察不同稀释度胎盘多肽作用72 h后,ECV-304细胞增殖情况.同时以免疫组织化学法检测不同稀释度胎盘多肽对ECV-304细胞增殖细胞核抗原(PCNA)表达的影响.结果:一定稀释度的胎盘多肽可促进ECV-304细胞的增殖,25 ml/L即可发挥作用,200 ml/L作用最明显.ECV-304细胞PCNA表达阳性率与胎盘多肽稀释度呈剂量相关性.结论:胎盘多肽可促进体外培养的ECV-304细胞增殖.     

泛素在高糖诱导的血管内皮细胞凋亡中的表达

目的检测高浓度葡萄糖对血管内皮细胞凋亡的影响和泛素表达的变化.方法ECV-304细胞在高糖(25 mmol/L)和正常糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养液中分别培养24、48、72 h,用MTT法检测细胞活力,用琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡特异性的DNA片段,并用Northern blot检测泛素mRNA的变化.结果高糖24、48、72 h组细胞OD值比正常浓度组均显著下降(P＜0.05);1.8%琼脂糖凝胶电泳在高糖48、72 h组检测到细胞凋亡特异性DNA片段;泛素mRNA在高糖24、48、72 h组分别增加25.37%、53.47%和63.93%(P＜0.05).结论高浓度葡萄糖可增加血管内皮细胞凋亡,泛素mRNA在高糖诱导的内皮细胞凋亡中表达上调,且发生在凋亡形态学改变之前,泛素参与调节高血糖诱导的细胞凋亡.     

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞株ECV-304生长的抑制作用

目的: 观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞生长的影响,探讨高同型半胱氨酸血症(HHCY)致动脉粥样硬化(As)的机制。方法: 将不同浓度Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,倒置显微镜下观察细胞形态,MTT法检测细胞生长抑制率,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成。结果: 显微镜见对照组细胞呈单层鹅卵石样紧密排列,而实验组随Hcy浓度的升高及作用时间的延长,细胞排列杂乱,聚集成团。低浓度Hcy对细胞生长的抑制作用不明显,5.0、10.0 mmol/L Hcy对细胞生长呈现抑制作用,且两组浓度作用72 h的生长抑制率高于作用48 h (P< 0.01)。5.0、10.0 mmol/L Hcy作用48 h、72 h,3H-TdR掺入抑制率高于相应对照组和低浓度组,且作用72 h的掺入抑制率显著高于48 h (P<0.01)。结论: Hcy对VEC具有直接损伤作用,可以时间及剂量依赖方式抑制ECV-304细胞的生长及DNA的合成。     

同型半胱氨酸对ECV-304细胞NO和ROS形成的影响

目的: 观察同型半胱氨酸(Hcy)对ECV-304细胞产生一氧化氮(NO)及其对细胞内活性氧(ROS)产生的影响。方法: 将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养24h,硝酸还原酶法检测3种一氧化氮合酶(NOS)激动剂前后各组NO含量;流式细胞术检测细胞荧光强度,以反映ROS水平。结果: 0.50、1.00mmol/LHcy作用24h时NO量明显低于对照组(P<0.01);加入3种NOS激动剂刺激后,仍显示Hcy对ECV-304细胞释放NO反应的抑制作用,1.00mmol/LHcy组与对照组和低浓度组差异均有显著性(P<0.01)。0.50、1.00mmol/LHcy组的荧光强度明显高于对照组和低浓度组(P<0.01)。结论: Hcy可促进血管内皮细胞内ROS的产生,并抑制NO的形成,且呈剂量-效应关系。     

去甲二氢愈创木酸对内皮细胞影响的形态学观察

目的：探讨去甲二氢愈创木酸（NDGA）对内皮细胞形态的影响及特点。方法：采用倒置显微镜、光镜、电镜和流式细胞仪观察分析不同浓度NDGA作用下人脐静脉内皮细胞系ECV－304细胞形态和细胞调亡峰的变化。结果：①不同浓度（50－200μmol/L）的NDGA处理ECV－304细胞24－72h后或一定浓度（100μmol/L）的NDGA处理ECV－304细胞不同时间（1－7d）后,内皮细胞由多角形变长,呈梭形,细胞稀疏,核分裂明显减少,显示细胞增殖的抑制,上述变化与NDGA的浓度和作用时间有关;②NDGA处理后,部分细胞呈现出调亡样形态学改变,以48h为明显。流式细胞仪检测也出现明显高于对照的调亡峰即亚G0峰,12h时相点最高（20.42％）。此外,处理后的细胞也有变性、坏死等病理变化,与NDGA的浓度呈正比。结论：NDGA对内皮细胞的生长和增殖有抑制,形态学初步证明也有诱导调亡等作用,这在影响血管生成中可能具有一定意义。     

同型半胱氨酸对血管内皮细胞凋亡和核因子-κB活化的影响

目的:观察同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞株ECV-304细胞凋亡及核因子-κB (NF-κB)活化的影响,以探讨Hcy致动脉粥样硬化的可能机制。方法:将不同浓度的Hcy与ECV-304细胞体外共培养不同时间,PI单染法检测细胞凋亡,免疫组织化学染色法检测细胞内Bcl-2的表达及NF-κB的细胞内定位,流式细胞术检测细胞核NF-κB的表达。结果:Hcy可诱导细胞凋亡,凋亡指数随Hcy浓度增大和作用时间的延长而逐渐升高;10.0 mmol/L Hcy作用24 h后Bcl-2表达阳性细胞的均数显著低于1.0、5.0 mmol/L组和对照组(P < 0.01);随Hcy浓度的升高,NF-κB由细胞质转位至细胞核,5 mmol/L Hcy作用0.5、1、2 h,NF-κB的核内表达率分别为(16.76±2.55)%、(12.91±1.38)%、(14.15±1.74)%。结论:Hcy可下调抗凋亡基因Bcl-2的表达而诱导细胞凋亡,且存在剂量效应关系。Hcy可活化NF-κB,且呈现剂量依赖性。     

黄芪含药血清对血管紧张素Ⅱ致内皮细胞凋亡的保护作用

目的：观察血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的致凋亡效应及黄芪含药血清的保护作用。方法将培养的 ECV-304分为以下3组：（1）空白对照组;（2）AngⅡ诱导组,使培养基中 AngⅡ终浓度为0、1×10－6、1×10－5、1×10－4 mol／L,与细胞共孵育18 h。MTT 法检测 AngⅡ对 HUVECs 生长增殖的影响;流式细胞仪检测 AngⅡ作用后内皮细胞凋亡率的变化;电子显微镜观察 AngⅡ诱导后内皮细胞的超微结构特点;（3）黄芪含药血清干预组,培养基中加入不同浓度黄芪含药血清培养24 h 后,加入 AngⅡ（1×10－4 mol／L）孵育18 h,检测内皮细胞凋亡率的变化。结果不同浓度的 AngⅡ均能抑制内皮细胞生长增殖。不同浓度的 AngⅡ均可显著诱导内皮细胞凋亡。透射电镜下可见 AngⅡ诱导后内皮细胞的凋亡形态。黄芪含药血清抑制 AngⅡ所诱导的内皮细胞凋亡。结论黄芪含药血清具有内皮保护作用。     

低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

目的 研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4 ℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(In vivo liposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法 (1) 将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37 ℃、5% CO₂的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验。(2) 使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN 的+/-电荷比率为2。(3) 应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4 ℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25 μmol/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率。结果 在ECs中、4 ℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了最大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异。但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性。结论 在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoy ODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据。     

hSulf-1基因腺病毒表达载体的构建及其对血管内皮细胞增殖、迁移能力的影响

目的 构建携带人硫酸酯酶1基因(hSulf-1)的腺病毒载体,研究其对于人脐静脉内皮细胞ECV-304增殖、迁移能力的影响。方法 通过基因操作技术将hSulf-1基因插入到腺病毒基因组中,构建重组腺病毒Ad5-hSulf1;应用蛋白质免疫印迹法检测hSulf-1蛋白在ECV-304细胞中的表达及细胞内磷酸化Akt、ERK的表达变化;MTT实验检测hSulf-1过表达对于ECV-304细胞增殖的影响;采用划痕实验研究hSulf-1过表达对于ECV-304细胞迁移的影响。结果 成功构建携带目的基因hSulf-1的腺病毒载体;免疫印迹结果表明hSulf1基因过表达会下调ECV-304细胞Akt和ERK信号分子的磷酸化水平;细胞增殖实验结果表明hSulf1基因过表达抑制了ECV-304细胞增殖,感染复数为50、100时细胞存活率下降至(68.49±0.05)%以及(67.78±0.06)%(P<0.05);划痕实验结果表明hSulf1基因过表达能够抑制细胞的迁移,相比于对照组细胞迁移能力减弱(P<0.01)。结论 重组腺病毒Ad5-hSulf1介导的hSulf-1基因在ECV-304细胞中的过表达明显抑制细胞增殖及迁移,为hSulf-1用于肿瘤及血管生长相关疾病的基因治疗奠定了基础。     

从受体角度探讨黄芩苷对肺炎衣原体感染细胞的干预机理

【目的】观察黄芩苷对肺炎衣原体诱导的TOLL受体(TLRs)的影响。【方法】体外培养人脐静脉内皮细胞(ECV-304细胞)，待长成单层后加入肺炎衣原体(CPN)为模型组，不加任何刺激者为正常组，每组设3个复孔，6孔板培养2d后，用单克隆抗体荧光标记和姬姆萨染色检测肺炎衣原体在ECV-304细胞内的生长情况；用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法检测细胞TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达。另取长成单层的ECV-304细胞，加入CPN为模型组，加入CPN 黄芩苷0．48g／L为黄芩苷高剂量组，加入CPN 0．24g／L为黄芩苷低剂量组，用流式细胞仪检测ECV-304细胞表面TLR2蛋白表达。【结果】CPN能在ECV-304细胞内生长；该细胞检测不出TLR4 mRNA的表达，存在TLR2 mRNA和TLR2蛋白的高表达。中药黄芩苷高剂量可降低TLR2蛋白的表达。【结论】黄芩苷对CPN所刺激的TLR2高表达具有抑制作用。     

巨噬细胞对血管内皮细胞增殖、Hoxb2、血管内皮生长因子受体和整合素ανβ3表达的影响

目的 建立人巨噬细胞系U937与人脐静脉血管内皮细胞系ECV-304体外共培养模型,以刀豆蛋白A(ConA)作为U937激活剂,研究巨噬细胞调节血管生成的机制。方法 实验分4组:ECV-304、ConA+ECV-304、U937+ECV-304和ConA+U937+ECV-304。将ECV-304细胞接种,待60%融合时按照不同的分组进行共培养48h后,流式细胞仪检测细胞周期的变化;采用3H-TdR掺入试验检测内皮细胞DNA合成变化;RT-PCR技术检测内皮细胞血管内皮生长因子(VEGF)受体KDR和同源盒(homebox)Hoxb2基因mRNA表达水平的变化;免疫荧光在流式细胞仪上检测整合素受体ανβ3表达的变化。结果 ConA激活的U937细胞可使内皮细胞S期、DNA合成明显增加(P<0.01);ConA刺激的U937细胞使内皮细胞VEGF受体KDR(0.879±0.003)、Hoxb2基因mRNA的表达水平(0.947±0.003)和整合素受体ανβ3的表达水平(10.26±1.73)明显上调(P<0.01)。结论 ConA活化的巨噬细胞可通过影响内皮细胞的细胞周期、DNA合成、VEGF受体KDR、Hoxb2及整合素受体ανβ3的表达来促进内皮细胞的增殖、迁移及与基质的黏附,从而调节血管的生成。