膜杂交技术检测HPV基因分型联合液基细胞学在宫颈癌筛查中的应用

目的采用膜杂交法对人乳头瘤病毒（HPV）进行基因分型,液基细胞学检测细胞分级,用作宫颈癌筛查手段的临床价值和意义。方法采用膜杂交法检测23个HPV基因型别（低危型：HPV6、11、42、43、45和高危型：HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、83、MM4）和液基细胞学（TCT）作为宫颈癌和癌前病变的筛查。结果781例临床样本中,HPV阳性360例;占46.02%,其中单一型HPV感染中,低危型占34%、高危型占60%、二型和二型以上混合感染占6%。TCT检查≥ASCUS 184例占27%。结论本地区宫颈疾患人群中,存在较高的HPV感染率;随着TCT级别的升高,HPV感染率、特别是高危型的感染率明显升高。HPV基因分型检测是有价值的辅助诊断技术,与细胞学联合,是最佳的宫颈癌筛查的方案。     

199例妇科门诊就诊者HPV多重感染检测结果分析

目的探讨芜湖市妇女HPV多重感染状况及基因型分布特点。方法采用核酸分子快速杂交分型技术对芜湖市弋矶山医院妇科门诊4991例就诊者进行HPV基因型的分型检测,并对其进行HPV亚型多重感染率及年龄分步的分析。结果4991例妇科门诊就诊者,共检出多重感染患者199例,多重感染阳性率3.99%,其中高危混合型、高低危混合型和低危混合型占多重感染的比例分别为60.8%、34.17%,5.03%,其中双重阳性感染者最多,为152例,占多重阳性感染者的比例为76.38%。在各个年龄组中,60岁以上的女性多重阳性检出率最高,为16.8%,各年龄组HPV多重感染差异有统计学意义(χ2=21.56,P<0.05)。结论芜湖地区女性HPV多重感染阳性率低,其中以高危混合型为主,对妇科门诊就诊者HPV检测,并进行多重感染的分析,对宫颈癌早期发现、预防及治疗具有重要意义。     

妇科门诊患者HPV分型检测及结果分析

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）的感染在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤样病变（CIN）及浸润性宫颈癌（ICC）中的表达,旨在提高宫颈上皮内瘤样病变及浸润性宫颈癌的诊断率。方法对就诊的有宫颈疾患的妇女794例,采用导流杂交HPV基因分型技术进行DNA检测。结果 HPV检测阳性113例,阳性率14.23%,其中单一型别HPV感染84例,占总数的74.33%,多型别感染的29例,占总数的25.67%,最常见的HPV基因型为52、16、58、18、53高危型感染率较低危型相比,上升趋势更为明显。结论在宫颈病变筛查中HPV检测可提高细胞学检测的有效性,是早期诊断CINⅢ及ICC的一个重要辅助方法。     

基因芯片技术在乙型肝炎病毒基因分型检测中的应用探讨

目的：探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。方法：查阅国际上主要的乙型肝炎病毒(HBV)基因分型诊断标准和现行技术，通过将基因芯片技术与目前用于HBV基因分型的技术方法进行对比，探讨利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断方法的可能性。结果：HBV的基因分型，既可通过全基因序列比对，也可通过片段基因序列比对，片段基因序列比对是实际工作中HBV基因分型的主要方法，现有报道的技术主要为型特异引物(SSP)PCR扩增法和PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法。基因芯片技术具有高敏感、高通量和能够平行检测DNA类型等特点，技术类型属于PCR扩增型特异探针(SSO)杂交法。尚未见有应用基因芯片技术进行HBV基因分型检测的报道。结论：借鉴现有的PCR扩增型特异探针（SSO)杂交法，如微板核酸杂交一ELISA显色技术，理论上利用基因芯片技术建立乙型肝炎病毒基因分型诊断的方法是完全可能的，并且具有高效、快速和廉价等特点。     

生殖器疣活检标本中HPV多重检测技术的建立

目的探索生殖器疣活检标本中人乳头瘤病毒（HPV）的多重检测分型技术,为我国生殖器疣感染HPV的检测和分型研究的开展提供有效手段。方法针对病毒L1区基因序列自行设计通用引物MY09、MY11、GP5＋和GP6＋,并对反应条件进行优化,建立基于聚合酶链式反应（PCR）及序列分析的检测生殖器疣活检标本中HPV感染型别的方法。结果采用巢氏PCR方法能够特异扩出140bp的目的条带,实现HPV感染的定性检测;通过对目的基因片段的测序分析能够实现单型别感染/多型别复合感染HPV的分型和鉴定,并可以检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。结论基于HPV病毒L1区基因序列建立的PCR和序列分析检测技术是快速检测和分型生殖器疣活检标本中HPV的一种有效方法。     

高危型HPV检测及TCT检查在宫颈癌筛查中的应用效果研究

目的:探讨高危型人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)检测及液基薄层细胞检测(Thinprep cytologic test,TCT)在宫颈癌筛查中的效果比较.方法:选择我院2012年8月-2020年5月期间,接受宫颈癌筛查的疑似宫颈癌患者120例作为研究对象,均进行高危型HPV检测及TCT...     

P16和FHIT基因联合高危HPV检测在宫颈癌诊断中的研究

目的探讨P16、脆性组氨酸三联体（FHIT）基因启动子异常甲基化及高危HPVDNA与宫颈病变恶性程度的相关性及三者联合检测的的临床意义。方法采用巢式甲基化特异性PCR方法检测26例宫颈癌及35例宫颈上皮内瘤变患者（CIN）P16、FHIT的甲基化状态，同时测定其高危HPVDNA并与43例无上皮内瘤变患者作对照，分析三者联合检测的临床诊断价值。结果宫颈癌患者P16、FHIT基因启动子异常甲基化及高危HPV阳性率分别为23．7％、65．4％、88．4％。CIN患者P16、FHIT基因启动子异常甲基化及高危HPV阳性率分别为5．7％、11．4％、42．8％。健康对照者标本中P16、FHIT基因无异常甲基化。高危HPV阳性率为13．9％。结论P16、FHIT基因启动子异常甲基化及高危HPV与宫颈病变恶性程度相关，联合检测P16、FHIT启动子异常甲基化及高危HPV可提高宫颈癌诊断的敏感性和特异性，对于宫颈癌的早期诊断具有重要意义。     

地方株HPV16 L1基因免疫保护性研究

人乳头状瘤病毒（human papillomavims，HPV）至今已鉴定的HPV型超过200个，约40个型能感染生殖道，以性接触方式传播。分子流行病学证据显示HPV是引起浸润性宫颈癌和宫颈上皮内癌的主要原因，其中HPV16型在宫颈癌中检出率最高，约50％的宫颈癌患者肿瘤组织能被检测到，HPV16也是我国妇女宫颈癌的主要型别。因为HPV感染性疾病的难治性、复发性和潜在致癌性，研制开发安全、有效的HPV疫苗有一定的实用意义。     

TCT技术与HPV分型技术在子宫颈病变筛查中的应用价值

为探讨液基薄层细胞检测法（TCT）与人乳头状瘤病毒（HPV）分型检测在子宫颈病变筛查中的应用价值,对18534例妇科宫颈刷检标本进行TCT检测,其中257例标本采用导流杂交技术（FTH）检测HPV分型。结果表明,257例标本中,108例HPV病毒检测结果为阳性（阳性率42.1%）,包括93例高危亚型感染,15例低危亚型感染,20例感染两种以上HPV亚型,149例HPV为阴性（57.9%）。HPV是诱发女性宫颈癌及生殖器病变的主要病源。TCT检测技术联合HPV分型应用于宫颈癌早期防治以及确诊子宫颈病变具有着重要意义。     

HPV分型检测联合TCT检查在宫颈病变筛查中的应用

目的 探究人乳头瘤病毒（HPV）以及液基细胞学（TCT）的联合检测在宫颈病变的筛查中的应用。方法 选取2015 年12月~2016年11月因宫颈异常来我院就诊的2327例妇科疾病患者,对其实施TCT以及HPV DNA检测,对阳性的患者进行阴道镜活检,以患者组织的病理学结果作为最终确诊标准。结果 共计355例患者进行阴道镜检查,其中HPV检测灵敏度为75.72%,准确性为70.43%,特异性为30.22%;TCT检测灵敏度为41.32%,准确性43.40%,特异性为47.87%;二者联合诊断灵敏度为88.21%,准确率75.10%,特异性为43.36%。两种检测方法的阳性检出敏感度相比,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 HPV分型检测联合TCT的检测方式具有相当高的阳性率及灵敏度,能够提高患者宫颈病变的检出率,延长患者的筛查间隔,有利于临床上对于宫颈病变的筛查。     

p16及HPV分型检测在子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移中的诊断价值

目的 探讨联合使用免疫组化标记p16及HPV分型检测在诊断和鉴别诊断子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移中的诊断价值.方法 分析3例子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移的临床病理学特征,对子宫颈及卵巢的癌灶进行含p16在内的多个免疫组化标志物染色及HPV分型检测.结果 3例患者的子宫颈均有不同程度的肥大、糜烂及肿块,双侧卵巢增大,切面有黏液感伴出血、坏死;镜下可见子宫颈腺癌周围有不典型增生的子宫颈管腺上皮,与腺癌移行过渡,可见癌栓,腺癌几乎侵及子宫颈全层;双侧卵巢纤维增生明显,腺癌穿插其中.颈体交界、子宫内膜、输卵管黏膜、阴道手术切缘等查见癌累及.3例子宫颈及卵巢癌灶的免疫表型基本一致,均强阳性表达p16、CK7和Ki-67,HPV亚型分型检测阳性结果如下.子宫颈/卵巢:例1,16、18/16、18、58;例2,16、18/18;例3,16/18.根据p16的表达及HPV分型检测结果,提示3例均为子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移.结论 子宫颈黏液腺癌伴双侧卵巢转移属于晚期子宫颈癌.借助p16的表达及HPV亚型的分型检测结果可诊断及鉴别诊断肿瘤的原发部位,有利于肿瘤的后期治疗.     

精液人乳头瘤病毒（HPV）16型的检测在优生优育中的应用研究

人乳头瘤病毒１６型（ＨＰＶ），能引起生殖道感染和先天感染。本研究采用ＰＣＲ方法，选用引物特异性地扩增ＨＰＶ１６型基因组的１９５ｂｐ的片段，对５０例精液进行了ＨＰＶ１６型的检测。结果显示：人群中阳性率２２％，其中正常生育组２０％，不育或有流产史组２２％。本研究为人群中精液ＨＰＶ１６型的流行病学提供了可参考的数据。该文讨论了父亲通过母亲至婴儿的传播及其危害     

SNPstream基因分型技术在医学遗传学研究中的应用

目的 对SNPstream基因分型技术的原理、操作方法、效果及应用的可行性、性价比及优缺点进行系统评价.方法 根据152个单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)上万份样品的SNPstream基因分型结果来分析该技术的可行性、应答率和一致率.用测序法验证SNPstream基因分型的准确性.结果 在152个SNP中有122个可用本方法分型,其中116个分型成功,成功率达95.1％.重复试验显示分型一致率为99％.测序验证显示,当SNPstream基因分型聚类清晰时,准确性可达100％,当聚类不清晰时,准确性可达93.8％.结论 SNPstream基因分型技术具有准确性高、通量灵活、性价比高的特点,在医学遗传学研究中将得到更多的应用.     

parC检测在解脲支原体基因分型中的临床应用

目的 根据parC基因序列差异建立一种解脲支原体基因分型方法,以实现其两个生物型Uu(Ureaplasma urealyticum)和Up(Ureaplasma parvum)的快速鉴定,便于临床常规应用.方法 依据解脲支原体14个血清型标准株parC基因序列,设计可区分Uu和Up的特异性引物与和探针;通过检测serovarl和serovat4标准株、50份解脲支原体临床分离株(Uu 12株,Up38株),7种阴道常见分离菌以鉴定该方法的特异性;留取70例性病门诊非淋球菌性泌尿生殖道炎症患者和71例妇科正常体检者的标本,分别进行解脲支原体培养和基因分型鉴定,以比较两种方法的敏感性,并应用统计学分析Uu、Up在性病和正常人群中分布的差异.结果 应用parC基因分型法成功将serovar1标准株、serovat4标准株、Uu和Up临床分离株鉴别,Uu、Up两生物群之间以及7种阴道常见菌均未出现非特异性扩增;基因分型方法的敏感性显著高于培养法(P＜0.05);在70例性病门诊患者中,Uu和Up的检出率分别为8.57％和61.40％,两者混合感染为24.30％;在71例妇科体检人群中Uu和Up检出率分别为7.04％和67.60％,两者混合感染为8.45％,性病门诊病人中解脲支原体感染率显著高于体检人群(P＜0.05),Uu和Up单纯感染在两群体中的分布差异无统计学意义(P＞0.05),而混合感染在性病门诊病人中显著增加(P＜0.05).结论 解脲支原体在性病患者中的感染率显著高于健康体检者,且混合感染在性病患者中明显增加,而Uu和Up单纯感染在两人群中分布差异无统计学意义,因此解脲支原体的致病可能与其不同基因型的混合感染有关.     

一种新型基因芯片技术在人乳头瘤病毒(HPV)高通量基因分型检测的应用研究

目前应用比较多的采用反向点杂交/线性杂交方法的人乳头瘤病毒(HPV)基因分型检测方法,操作比较繁琐.该文通过设计针对29种HPV基因型的引物对和特异性探针,对HPV样品进行PCR扩增后,将反向引物生物素标记的PCR产物与固定在HPV基因芯片上的HPV DNA探针杂交、清洗和酶标显色,再对芯片进行图像分析转化为数字信号、确定HPV型别,建立HPV高通量基因分型方法(HPG).HPV基因芯片大小为0.36 cm2,每个芯片可在96孔板内的小孔中进行杂交和显色.与HCII方法检测的203例样本比较,对13种高危型检测的结果表明,HPG和HCII方法的一致性较好(kappa值0.663),HPG的分析灵敏度更高.显示了高通量快速检测的在大规模流行病调查、疫苗试验和常规诊断的临床应用前景.     

应用多重逆转录聚合酶链反应技术检测石蜡包埋三种软组织肉瘤中融合基因的表达

目前,用于软组织肉瘤（soft tissue sarcoma,STS）染色体易位或其融合基因检测的技术方法很多,以逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）方法最为常用。然而对于一些形态学缺乏特征性排列结构的小圆细胞肿瘤,运用RT-PCR技术对不同融合基因逐一检测和排除,也存在检测程序繁琐、耗时、耗材等不足。针对此问题,我们设计了多重引物,应用多重RT-PCR技术检测石蜡包埋STS融合基因的表达,建立一套稳定高效、适合临床常规STS融合基因表达检测的分子诊断方法。     

小扩增子基因分型方法在检测XRCC1 Arg194Trp多态性分析中的应用

目的 应用小扩增子基因分型方法检测正常人宫颈癌易感基因XRCC1 Arg194Trp位点多态性改变.方法 提取10例健康人外周血基因组DNA;PCR扩增XRCC1 基因 Arg194Trp位点,扩增产物进行小扩增子基因分型分析.并应用测序方法对分析结果进行验证.结果 HRM检测结果分别显示3种基因型:XRCC1 Arg194Arg(C/C)、XRCC1 Arg194Trp(C/T)和XRCC1 Trp194Trp(T/T).测序结果与小扩增子基因分型方法分析结果完全一致.结论 应用小扩增子基因分型方法可以对XRCC1 Arg194Trp进行准确分型.     

对比基因组杂交技术在肿瘤遗传学研究中的应用

对比基因组杂交技术是近几年发展起来的一种能快速全面分析染色体一个基因组甚至一条染色体获得和缺失的分子细胞遗传学方法。其具体方法是分别标记肿瘤ＤＮＡ和正常人体胎盘组织中提取的参照ＤＮＡ，制成探针，再与正常人体中期染色体铺片竞争性地原位杂交，通过对比各条染色体ＤＮＡ序列中两种荧光强度，揭示出肿瘤染色体某一基因的扩增和缺失。     

小扩增子基因分型方法在检测XRCC1 Arg194Trp多态性分析中的应用

目的 应用小扩增子基因分型方法检测正常人宫颈癌易感基因XRCC1 Arg194Trp位点多态性改变.方法 提取10例健康人外周血基因组DNA;PCR扩增XRCC1 基因 Arg194Trp位点,扩增产物进行小扩增子基因分型分析.并应用测序方法对分析结果进行验证.结果 HRM检测结果分别显示3种基因型:XRCC1 Arg194Arg(C/C)、XRCC1 Arg194Trp(C/T)和XRCC1 Trp194Trp(T/T).测序结果与小扩增子基因分型方法分析结果完全一致.结论 应用小扩增子基因分型方法可以对XRCC1 Arg194Trp进行准确分型.     

炭疽芽孢杆菌IS605插入位点在细菌检测与基因分型中的应用研究

目的研究并分析我国炭疽芽孢杆菌(Ba)中IS605的分布,探讨以插入序列IS605检出Ba和对其进行分型的可能性。方法按照已发表的Bacillus anthracis str.‘Ames Ancestor’全基因序列全部7个位置的IS605设计引物,对90株Ba进行PCR扩增、琼脂糖凝胶电泳分析,得到了相应的分布,最终通过测序确定差异的性质。结果此次研究中90株Ba的IS605完全一致。但对5、6、7这3个位置与Ba近缘的细菌比较发现仅Ba出现阳性扩增结果。结论IS605在Ba稳定存在,研究范围内所有菌株仅5、6、7这3个位置均有插入,因此这3个位置可以作为Ba与其他芽孢杆菌识别的特征;IS605定位不适合作为Ba的分型指标。