高纯度积雪草总苷的制备工艺研究

目的 研究高纯度积雪草总苷的制备工艺。方法 采用大孔树脂分离技术与重结晶技术相结合的方法,优选最佳积雪草总苷制备工艺参数,同时建立积雪草总苷HPLC检测方法。结果 积雪草药材采用75%乙醇回流提取、回收乙醇、水沉、酸沉,通过HPD-100大孔树脂柱富集后,再采用醋酸乙酯重结晶方法,可制备质量分数90%以上的积雪草总苷。结论 该工艺稳定性高、重复性好,适合于制备高纯度的积雪草总苷。     

不同产地积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量测定

目的采用高效液相法测定不同产地积雪草药材中积雪草苷和羟基积雪草苷含量。方法采用VP－ODS色谱柱,流动相为乙腈-水梯度洗脱,流速1.0mL＆#183;min-1,检测波长204nm,柱温40℃。结果积雪草苷和羟基积雪草苷的平均回收率分别是99.7%、101.4%,RSD分别是1.68%、1.07%（n=6）。结论不同产地的积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷的含量差别较大,广西柳州和广东湛江所产的积雪草中积雪草苷和羟基积雪草苷含量较高。     

积雪草化学成分研究

目的：研究积雪草中的化学成分。方法：以硅胶、凝胶等多种柱色谱分离,制备高效液相色谱纯化,以波谱方法鉴定结构。结果：分离得到5个化合物,鉴定为阿魏酸二十二酯(1),bayogenin(2),3β-6β-23-trihydroxyolean-12-en-28-oic acid(3),3β-6β-23-trihydroxyurs-12-en-28-oic acid(4),D-gulonic acid(5)。结论：所有化合物均为首次从积雪草属植物中分离得到。     

积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ25-35片段所致的PC12细胞损伤模型及SAMP8小鼠脑内SOD, GSH-Px的影响

目的：研究积雪草乙酸乙酯提取物对β淀粉样蛋白25-35片段（Aβ_25-35）所致的PC12细胞损伤模型及快速老化模型小鼠（SAMP8）脑内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）的影响。方法：细胞以1×10⁴个/mL密度接种,预防实验在接种24 h后同时给予含不同质量浓度的药物培养液和终浓度为10 μmol·L^-1的Αβ_25-35溶液,治疗实验在接种24 h后给予终浓度为10 μmol·L^-1的Αβ_25-35溶液,24 h后给予含不同质量浓度的药物培养液,作用72 h后采用MTT法检测积雪草乙酸乙酯提 取物对Aβ_25-35片段所造成的PC12细胞老年性痴呆（AD）损伤模型的预防和治疗作用;Hoechst 33258荧光显微镜染色法观察积雪草乙酸乙酯提取物作用Aβ_25-35片段所致PC12细胞AD损伤模型的形态学变化,SAMP8）40只随机分为模型对照组、积雪草乙酸乙酯提取物高、中、低剂量组（以生药量计为40,20,10 g·kg^-1）和石杉碱甲组（0.386 mg·kg^-1）,8只/组,连续ig给药2个月后,ELISA法测定积雪草乙酸乙酯提取物对SAMP8大脑组织SOD和GSH-Px的影响。结果：Aβ_25-35片段所致的PC12细胞AD模型的预防和治疗实验中,不同浓度的积雪草乙酸乙酯提取物对Aβ_25-35片段所致PC12细胞AD损伤有不同程度的保护作用;荧光显微镜观察到用药组的凋亡细胞数少于模型对照组与MTT的结果相符;ELISA结果显示除低剂量组外,其他各组的SAMP8大脑组织的SOD均高于模型对照组（P<0.05或P<0.01）,中剂量组和石杉碱甲组SAMP8大脑组织的GSH-Px比模型对照组高（P<0.05或P<0.01）。结论：积雪草乙酸乙酯提取物在体外对由Aβ_25-35片段所致的PC12细胞损伤有较好的保护和治疗作用,并能通过提高SAMP8脑内SOD,GSH-Px水平起到抗氧化,清除体内自由基而延缓衰老的作用。     

积雪草苷防治支架再狭窄的生化调节机制

目的：探讨积雪草苷能否作为生化调节剂,有效减轻内皮细胞损伤,进一步抑制支架术后内中膜增生。方法：选取原代人主动脉平滑肌细胞和主动脉成纤维细胞各1株,每株细胞设空白对照组、雷帕霉素组（Rapa）、积雪草苷组（At）、积雪草苷+雷帕霉素组。利用qRT-PCR检测平滑肌细胞和成纤维细胞TGF-β1（转化生长因子1）,Smad7,Ⅰ型胶原基因表达水平,通过ELISA检测Ⅰ型胶原蛋白表达量,计算积雪草苷和雷帕霉素两药相互作用指数（CDI）。另将16只中华小型猪随机分为A,B 2组,前降支球囊大压力预扩后,植入同型雷帕霉素支架1枚。术后A组予生理盐水30 mL·d^-1静脉注射;B组予积雪草苷30 mg·kg^-1·d^-1 （生理盐水稀释至30 mL）静注。术后7,14 d ELISA法检测2组血浆vWF（血管性血友病因子）表达水平;术后28 d复查冠脉造影,取支架血管段组织切片及染色,计算血管面积、支架内面积、管腔面积和新生内膜面积。结果：与对照组相比,两药联合组显著上调平滑肌细胞和成纤维细胞Smad7基因,下调TGF-β1,显著抑制Ⅰ型胶原基因表达（P<0.01）;平滑肌细胞中,两药联合组与Rapa组对Ⅰ型胶原抑制无显著性差异,CDI为0.83;成纤维细胞中,两药联合组优于Rapa 组,存在显著性差异（P<0.05）,CDI为0.77。小型猪术后7,14 d,B组血浆vWF水平均显著低于A组（P<0.05）;术后28 d,2组血管面积和支架内面积无统计学差异;B组管腔面积显著大于A组（P<0.05）,B组新生内膜面积显著小于A组（P<0.05）。结论：积雪草苷通过上调Smad7蛋白表达,抑制TGF-β1表达,显著减少胞外基质合成与分泌,进一步抑制支架术后内中膜增生,减轻内皮细胞损伤,是雷帕霉素的有效生化调节剂。     

手性流动相添加剂法测定积雪草中积雪草总苷的量及其总苷特征图谱

目的 以β-环糊精为流动相添加剂,拆分积雪草药材及其总苷中羟基积雪草苷和积雪草苷,建立羟基积雪草苷和积雪草苷的定量测定方法,同时建立积雪草总苷的高效液相色谱特征图谱.方法 采用Dikma Diamonsil(TM)C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相为乙腈-2 mmol/L β-环糊精溶液(24:76);柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;检测波长205 nm;理论塔板数按积雪草苷峰计算应不低于4 000.结果 β-环糊精的加入很好地分离积雪草药材及其总苷中的羟基积雪草苷和积雪草苷,满足了定量分析的要求,其中有效成分羟基积雪草苷和积雪草苷的线性范围分别为0.181～18.1 μg(r=0.999 98)和0.195～19.5μg(r=0.999 98),积雪草药材的平均加样回收率(n=9)分别为101.2%和101.6%,积雪草总苷的平均加样回收率(n=9)分别为100.3%和99.3%,11批次的积雪草总苷样品的高效液相色谱特征图谱中确定6个共有峰作为定性的指标峰.结论 本法简便快速、结果准确、重现性好,可用于积雪草药材及其总苷的质量控制.     

高效液相色谱法测定积雪草苷片中积雪草苷、羟基积雪草苷的含量

目的:建立HPLC测定积雪草苷片含量的方法。方法:采用Agilent C18色谱柱(150mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈-水(71︰29),流速1.0ml·min-1,检测波长205nm,柱温25℃。结果:积雪草苷平均回收率为99.5%,RSD=1.06%(n=6);羟基积雪草苷平均回收率为100.3%,RSD=1.21%(n=6)结论:所建方法简便,结果准确,可用于积雪草苷片的质量控制。     

田口试验设计法优选积雪草提取工艺

积雪草为伞形科药用植物积雪草Centella asiat-ica(L.)Urban的干燥全草,具有清热解毒、消肿利湿之功效。临床用于治疗炎症、溃疡、皮肤病、促进伤口愈合,静脉功能不全等[1,2]。最近的研究表明其提取物具有抗肿瘤、抗氧化及免疫调节的活性[3-5]。积雪草含有丰富的五环三萜类化合物[6],如积雪草苷、羟基积雪草苷等,其中积雪草苷被认为具有很强的药理活性并作为评价积雪草质量的指标[7-9]。陈瑶等[10]以积雪草总苷为考察指标对积雪....

     

HPLC法测定积雪苷胶囊中积雪草苷的含量

目的：采用外标法测定积雪苷胶囊中积雪草苷的含量,建立了积雪苷胶囊中积雪草苷含量的HPLC测定方法。方法：色谱柱：Phenomenex C18柱（150mmx4．6mm,5岬）;流动相：乙腈-水（30：70）,检测波长：205nm;流速：1．Oml·min^-1。结果：积雪草苷的线性范围为1．75—7．Oμg·ml^-1（r=0．9992）。结论：本方法简便、重复性好,可用于积雪昔胶囊中积雪草苷的含量测定。     

HPLC-CAD法分离测定三金片中同分异构体积雪草苷B和羟基积雪草苷

目的建立一种高效液相色谱-电喷雾检测器(HPLC-CAD)法分离测定三金片中积雪草苷B和羟基积雪草苷2个同分异构体含量的方法。方法采用Thermo AcclaimTM C30色谱柱,甲醇-乙腈-水(35∶8∶57)为流动相,柱温35℃,CAD气化温度为50℃,采集频率为10 Hz,分离测定积雪草苷B和羟基积雪草苷的含量。结果积雪草苷B和羟基积雪草苷线性关系良好,r分别为0.999 8、0.998 4,线性范围分别为0.240 7～2.406 9、0.573 1～5.730 8μg,平均加样回收率分别为100.26%、98.32%,RSD分别为0.69%、1.78%;11批样品中积雪草苷B为1.65～3.18 mg/g,羟基积雪草苷为3.49～7.90mg/g。结论该方法简便、灵敏、准确度高,能有效分离测定积雪草苷B和羟基积雪草苷2个同分异构体,可用于三金片现行药典标准的提高完善。     

RE-HPLC测定积雪草中积雪草甙、羟基积雪草甙的含量

目的测定不同产地的中药积雪草甙和羟基积雪草甙的含量.方法采有RE-HPLC法进行测定.结果不同产地的积雪草中积雪草甙和羟基积雪草甙的含量有很大差异.结论方法简便,准确灵敏.     

Cytotoxic cycloartane triterpene saponins from Actaea asiatica

Three new 9,19-cycloartane triterpene glycosides, asiaticoside A (1), asiaticoside B (2), and 25-O-ethylcimigenol-3-O-beta-D-xylopyranoside (3), together with cimiacemoside I (4), 25-O-acetylcimigenol-3-beta-O-D-xyloside (5), and 25-anhydrocimigenol-beta-O-D-xyloside (6) were isolated from the roots/rhizomes extract of Actaea asiatica, and their structures were established by spectroscopic methods (IR, HRESIMS, and NMR). Compounds 1-3, 5, and 6 had notable cytotoxicity against HepG2 and MCF-7 cancer cell lines.     

积雪草化学成分和药理作用研究进展及其质量标志物预测分析

积雪草为伞形科植物积雪草的干燥全草，应用历史悠久、药理作用广泛。本文通过查询相关文献对积雪草的化学成分、药理作用进行综述分析，并结合中药Q-Marker概念，从传统药性、传统药效、化学成分可测性、不同复方配伍中表达组分等角度对积雪草Q-Marker进行预测，发现积雪草具有促进创伤愈合及抑制瘢痕增生、抗阿尔茨海默病、改善肾肺损伤及关节炎等活性，主要含有三萜皂苷类、黄酮类、挥发油类及多炔烯烃类等成分，主要活性物质为三萜皂苷类成分，建议将积雪草苷、积雪草酸、羟基积雪草苷、羟基积雪草酸和积雪草苷B等三萜皂苷类，芦丁、槲皮素、山柰酚、黄芩素、木犀草素等黄酮类化合物及挥发油类成分作为积雪草Q-Marker的主要选择，有利于完善积雪草质量评价标准并建立科学全面的专属质量控制体系，为积雪草临床用药及其资源的开发利用提供理论依据。     

攀枝花车前草中总黄酮的提取及其含量

目的:提取并测定攀枝花车前草中总黄酮的含量。方法:选取超声波乙醇浸提法提取车前草中黄酮类化合物,正交试验得出黄酮类化合物的最佳提取条件,对提取的黄酮类化合物进行定性分析,采用紫外分光光度法测定其含量。结果:车前草总黄酮的最佳提取条件为70%乙醇浸泡36 h,超声时间35 min,测得车前草内总黄酮的含量为1. 54%,车前草根和叶的平均回收率分别为98. 95%和98. 18%。同一条件下,测得车前草根中总黄酮含量大于叶中总黄酮含量。结论:该方法简单易行、无污染,是提取车前草黄酮类物质的有效途径,也为攀枝花车前草的进一步开发和研究奠定了基础。     

In vitro and in vivo wound healing activity of asiaticoside isolated from Centella asiatica

The activity of asiaticoside, isolated from Centella asiatica, has been studied in normal as well as delayed-type wound healing. In guinea pig punch wounds topical applications of 0.2% solution of asiaticoside produced 56% increase in hydroxyproline, 57% increase in tensile strength, increased collagen content and better epithelisation. In streptozotocin diabetic rats, where healing is delayed, topical application of 0.4% solution of asiaticoside over punch wounds increased hydroxyproline content, tensile strength, collagen content and epithelisation thereby facilitating the healing. Asiaticoside was active by the oral route also at 1 mg/kg dose in the guinea pig punch wound model. It promoted angiogenesis in the chick chorioallantoic membrane model at 40 μg/disk concentration. These results indicate that asiaticoside exhibits significant wound healing activity in normal as well as delayed healing models and is the main active constituent of Centella asiatica.     

高效液相色谱法测定飞龙掌血中异茴芹香豆素含量

目的 :用高效液相色谱法对苗药飞龙掌血中异茴芹香豆素含量进行测定。方法 :采用HypersilC₁₈柱为分析柱 ,以甲醇 水 (70∶30 )为流动相 ,检测波长 306nm。结果 :线性范围 0.00420～0.420 μg ,平均回收率 99.7% ,RSD =2.8%。结论 :本法简便、准确、重现性好 ,可用于飞龙掌血中异茴芹香豆素的含量测定。     

透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡及凋亡相关因子的影响

[目的]观察透骨草提取物对人肝癌SMMC-7721细胞凋亡的影响,探讨透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的分子机制。[方法]流式细胞术检测透骨草提取物诱导SMMC-7721细胞凋亡的影响;免疫组化法检测透骨草提取物对SMMC-7721细胞caspase-9、-3、-7和x连锁凋亡抑制蛋白（XIAP）表达的影响。[结果]40．91μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞凋亡率为（26．84±1．23）％,明显高于对照组（P〈0．05）。40．9μg／mL透骨草提取物处理的SMMC-7721细胞Caspase-9、-3、-7蛋白表达明显低于与对照组（P〈0．05）,而XIAP蛋白表达明显高于对照组（P〈0．05）。瞄论]透骨草提取物能通过XIAP／Caspase信号通路抑制SMMC-7721细胞凋亡。关键词：透骨草提取物;SMMC-7721细胞;凋亡;Caspase-9中图分类号：R285．5文献标识码：A文章编号：1672—1519（2013）10—0612—03     

Pharmacokinetics of the total triterpenic fraction of Centella asiatica after single and multiple administrations to healthy volunteers. A new assay for asiatic acid

A new HPLC assay method was used to investigate the pharmacokinetics of asiatic acid after oral administration of the total triterpenic fraction of Centella asiatica in single doses (30 or 60 mg) and after a 7-day treatment (30 or 60 mg twice daily). Twelve healthy volunteers received each treatment following a randomized cross-over design with trials separated by a 3-week interval. The time of peak plasma concentration was not affected by dosage difference or by treatment scheme. Differences in peak plasma concentration and area under the concentration vs. time curve from 0 to 24 h (AUC0-24) calculated after 30 or 60 mg administration (single dose) were accounted for by the different dose regimen. However, after chronic treatment with both 30 and 60 mg, peak plasma concentrations, AUC0-24 and half-life were significantly higher than those observed after the corresponding single dose administration. This phenomenon could be explained by a metabolic interaction between asiatic acid and asiaticoside, which is transformed into asiatic acid in vivo.     

飞龙掌血抗A型流感病毒活性的鉴定

目的:鉴定中药飞龙掌血体外抗流感病毒(A/PR/8/34H1N1)活性。方法:用四唑氮化合物(MTS)测定流感病毒诱导细胞病变(CPE)方法,初筛200余种中草药提取物抗A型流感病毒活性。复筛中样品的抗病毒活性被进一步用荧光定量聚合酶链反应(PCR)测试方法验证。结果:飞龙掌血在MTS方法和定量PCR中均显示很强的抗H1N1型流感病毒活性,半数有效剂量(EC₅₀)在MTS方法和定量PCR中分别为4.7,0.9mg·L^-1。毒性实验显示半数细胞毒剂量(CC₅₀)为187.2mg·L^-1,选择指数(SI)在定量PCR测试中大于206。药物作用时间实验显示飞龙掌血与病毒同时加入细胞可获得最佳抗病毒效果,病毒感染前、后24h加入飞龙掌血仍然具有一定抗病毒作用。结论:飞龙掌血可作为抗流感病毒候选治疗药物。