荧光定量PCR在乙型肝炎病毒检测中的应用及临床意义

对1025份临床血清标本用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)的方法进行HBV DNA定量检测,并同时用酶联免疫吸附试验(ELISA)进行乙肝免疫学指标的对比检测。结果:HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)模式HBV DNA阳性率为99.2％(390/393),其平均拷贝数为4.65×10 E8拷贝/ml:在HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)模式中HBV DNA阳性率为62.5％     

慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物与HBV DNA的相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者HBV血清标志物(HBV serum markers,HBV-M)HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb和HBcAb IgM含量与HBV DNA水平的相关性,为临床诊断和治疗提供依据。方法采用化学发光微粒子免疫测定法和荧光定量聚合酶链反应分别检测446例慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)患者血清HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量和HBV DNA水平,同时检测54例HBcAb IgM阳性患者的血清HBV DNA水平,统计分析HBV-M含量与HBV DNA水平的相关性。结果①CHB患者血清中,HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关(P<0.05),HBeAb和HBcAb含量与HBV DNA水平未见相关性(P>0.05);②HBcAb IgM阳性患者中HBcAb IgM含量与HBV DNA水平亦未见相关性(P>0.05)。结论 CHB患者血清HBsAg和HBeAg含量与HBV DNA水平呈正相关。定量检测HBV-M和HBV DNA能更好地了解HBV的动态变化,对诊断和治疗有重要指导意义。     

HBcAb滴度评定乙肝病毒感染和病毒复制的临床应用及意义

目的 探讨HBcAb滴度评定HBV感染和病毒复制的临床应用及意义.方法 选择250例既往HBV感染及乙肝患者,其血清HBcAb均为阳性.用ELISA法检测血清HBcAb滴度,用电化学发光法检测血清HBsAg,用PCR法检测血清HBV DNA含量,分析HBcAb滴度与HBsAg及HBV DNA的关系.结果 HBsAg阳性者的HBcAb滴度明显高于HBsAg阴性组(P＜0.01),高滴度HBcAb(≥1∶320)患者血清中的HBsAg检出率为91.66％,低滴度(＜1∶320)患者血清中的检出率为0.94％.HBV DNA阳性者的HBcAb滴度明显高于阴性组(P＜0.01),高滴度HBcAb患者血清中的HBV DNA检出率为43.05％,低滴度患者血清中的检出率为0.94％.结论 HBcAb滴度是评定HBV感染和病毒复制的良好指标.     

60例孕妇HBV血清标志物水平与母婴传播的关系分析

目的 探讨孕妇乙型肝炎病毒（HBV）血清标志物水平与母婴传播的关系。方法 采取60例孕妇、脐带、新生儿血清用美国雅培试剂做HBV血清标志物（HBVM）包括：HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb定量分析,用荧光定量PCR法测HBV DNA。结果 HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性母亲的新生儿脐血HBV M阳性率91．67％,新生儿血HBV M阳性率85％,母血HBsAg、HBeAg、HBcAb滴度显著高于脐血、新生儿血,且母血、脐血、新生儿血HBV M水平依次降低;HBV DNA阳性率也依次降低,分别为58、33％、10％、6、67％,滴度也依次降低。HBsAg、HBeAb、HBcAb阳性母亲,HBsAg、HBcAb阳性母亲和单项HBsAg阳性母亲的新生儿脐血、新生儿血HBV M阳性率较低。新生儿血以HBeAg阳性为主,滴度明显高于正常值,HBsAg滴度仅略高于正常值。结论 母婴垂直传播与母亲HBeAg高滴度有密切关系,与母亲HBV DNA阳性或阴性关系并不十分密切。检测脐血和新生儿血HBsAg、HBV DNA阴性并不能排除HBV感染,不如检测HBsAg、HBeAg更有意义,更经济。     

HBeAg和HBeAb同时阳性患者血清HBV DNA定量检测

目的观察患者血清HBeAg和HBeAb同时阳性(简称e系统双阳)时HBVDNA含量变化,以探讨两者的相关性.方法采用微粒子酶免分析法检测HBV-M,采用定量PCR法检测血清HBVDNA.结果e系统双阳者标本HBVDNA含量为104.6±1.31拷贝/mI;HBsAg、HBeAg、HBcAb阳性(大三阳)者为106.5±1.89拷贝/ml,两者比较有显著性差异(P＜0.01).结论HBeAg(+)者S/N值与HBVDNA含量呈正比,e系统双阳者HBVDNA含量明显降低,但HBV并未停止复制,只是复制水平较低,传染性较小而已.     

肝细胞癌患者血清HBeAg和HBV DNA的检测

目的探讨HBV感染与肝细胞癌发生之间的关系。方法回顾性分析乙型肝炎和肝细胞癌患者血清乙型肝炎病毒标志物和HBV DNA的变化。结果在75例肝细胞癌患者中,HBsAg阳性94.6%,HBsAb阳性5.3%,HBeAg阳性10.6%,HBeAb阳性66.6%,HBcAb阳性74.6%）;HBV DNA≤103～105copies/ml为61.3%,≥106copies/ml为17.3%;慢性乙型肝炎患者中HBsAg均为阳性,HBsAb均为阴性,HBeAg阳性为28.3%,HBeAb阳性为73.3%,HBcAb阳性为84.0%。结论慢性HBV感染者HBeAg阴性或血清转换,HBV DNA载量下降,要警防HCC的发生。     

慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg水平的相关性分析

目的探讨慢性乙型肝炎患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度的关系。方法在951例慢性乙型肝炎患者,采用FQ-PCR法和Abbott化学发光微粒子免疫分析技术分别测定血清HBV DNA水平及HBsAg和HBeAg滴度,分析HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度的相关性。结果在951例患者中,HBVDNA阳性率为53.83%(512/951);患者血清HBV DNA水平与HBsAg和HBeAg滴度呈正相关(rs=0.45和re=0.49,P<0.05);在HBV DNA水平≥7lg拷贝/毫升患者,血清HBsAg和HBeAg滴度高于HBV DNA为3～7lg拷贝/毫升患者,HBV DNA为3～7lg拷贝/毫升患者血清HBsAg和HBeAg滴度大于HBV DNA<3lg拷贝/毫升患者,差异均有统计学意义(P<0.05);将HBsAg分为<1000 IU/ml、1000～10000 IU/ml和≥10000 IU/ml3组,结果不同HBsAg滴度患者血清HBV DNA水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论在血清HBV DNA≥7lg拷贝/毫升和HBsAg滴度≥10000 IU/mL患者,HBV DNA水平与HBsAg滴度呈正相关,在HBV DNA>3 lg拷贝/毫升患者,血清HBV DNA水平与HBeAg滴度呈正相关。     

慢性乙型肝炎患者肝组织HBV cccDNA、总HBV DNA与血清HBV DNA的相关性及其与临床的关系

目的探讨慢性乙型肝炎患者肝组织HBV共价闭合环状DNA（cccDNA）、肝组织总HBV DNA（HBV tDNA）与血清HBV DNA之间的相关性及其与临床的关系。方法 78例慢性乙型肝炎患者入选本研究。肝组织β- globinDNA、HBV cccDNA和HBV tDNA采用实时荧光定量PCR方法检测,平均每个肝细胞HBV cccDNA和HBV tDNA含量（拷贝/cell）=HBV cccDNA（实测值）/β-globin DNA（实测值）和HBV tDNA（实测值）/β3-globin DNA（实测值）,肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA含量的计算单位定义为log₁₀拷贝/10⁶cell;采用实时荧光定量PCR、ELISA法检测血清HBVDNA和HBV标志物;采用免疫组织化学方法检测肝细胞中HBsAg和HBcAg的表达。统计分析采用pearson相关分析及t检验。结果 （1）肝组织HBV cccDNA与HBV tDNA定量呈正相关（r=0.696,P<0.001）;肝组织HBV cccDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（r=0.304,P<0.01）;肝组织HBV tDNA与血清HBV DNA定量呈正相关（r=0.341,P<0.01）;（2）肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;肝细胞内HBcAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义和（P均>0.05）;（3）肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量明显高于阴性患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;肝细胞内HBsAg定性检测阳性患者与阴性患者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量差异均无统计学意义（P>0.05）;（4）HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者,且差异有统计学意义（P<0.05）;HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量与HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者比较差异均无统计学意义（均P>0.05）;（5）肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA以及血清HBV DNA三者与肝脏炎症活动度及纤维化程度均无显著相关性（P>0.05）。结论 （1）血清HBV DNA定量结果并不一定能完全反映患者肝组织中HBV cccDNA和HBV tDNA含量,尤其在血清HBV DNA<500拷贝/mL时,肝组织中仍存在HBV cccDNA和HBV tDNA,且含量大小不等。（2）肝细胞内HBcAg定性检测阳性或者HBsAg定性检测阳性患者的血清HBV DNA定量均明显高于阴性患者;而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA定量均没有显著差异;（3）HBeAg（+）/抗-HBe（-）患者血清HBV DNA定量明显高于HBeAg（-）/抗-HBe（+）患者,而两者的肝组织HBV cccDNA和HBV tDNA均没有显著差异;（4）肝组织HBV cccDNA、HBV tDNA及血清HBV DNA与肝脏炎症活动度和纤维化程度均无显著相关性。     

拉米夫定对异基因造血干细胞移植患者乙型肝炎病毒再激活的预防作用

目的探讨拉米夫定对异基因造血干细胞移植患者乙型肝炎病毒再激活的预防作用。方法2003年1月至2004年1月南京市鼓楼医院血液科3例行异基因造血干细胞移植的白血病患者中,2例乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性,HBV DNA分别为4.75×106拷贝·mL-1和1.15×106拷贝·mL-1。另1例HBsAg阴性,但其供者HBsAg阳性,HBV DNA为3.48×107拷贝·mL-1。对2例HBsAg阳性受者,移植前用拉米夫定;对HbsAg阴性受者干细胞回输时开始用拉米夫定,剂量均为0.1g每日1次,用至移植后1年。结果其中1例HBsAg阳性患者在移植后1个月内HBV DNA较高,波动于(1~1.2)×105拷贝·mL-1,1个月后HBV DNA降低,<3×104拷贝·mL-1。移植后1周丙氨酸转氨酶(ALT)升高,最高达152U/L,持续1周后恢复正常。另1例移植后HBV DNA较低,持续<1×105拷贝·mL-1。无明显肝功能损害,ALT最高达56U/L。接受供者HB-sAg阳性患者移植后HBeAb阳性,HBcAb阳性,HBV DNA<1×103拷贝·mL-1。移植后10dALT升高,最高达205U/L,持续1周后恢复正常。3例患者长期服用拉米夫定耐受性好,无明显毒副反应。结论初步观察表明,拉米夫定可以预防异基因造血干细胞移植患者乙型肝炎病毒再激活,无明显毒副反应。     

定量PCR检测慢性乙型肝炎患者HBV-DNA及其意义

目的了解慢乙肝患者抗-HBe阳性和e抗原阳性血清的病毒量及不同病变程度的慢乙肝与HBV感染量的关系.了解HBV-DNA含量和血清ALT水平之间的关系.方法临床确诊的89例慢乙肝患者,经ELISA测定后,选取30例HBeAg(+)/HBeAb(-)血清和30例HBeAg(-)/HBeAb(十)血清,采用AmpliSensor PCR定量技术,测定HBV-DNA.使用全自动生化分析仪,测定血清ALT水平.各组HBV-DNA含量和ALT水平用求算术平均值的方法计算.结果 HBeAg(+)/HBeAb(-)血清30例,HBV-DNA平均含量为(11.21±6.92)E拷贝/L;HBeAg(-)/HBeAb(+)血清22例,HBV-DNA平均含量为(9.73±5.61)E拷贝/L,两组具有显著差异(P＜0.05).轻度慢性乙肝17例,HBV-DNA平均含量为(10.93±6.22)E拷贝/L;中度慢性乙肝23例,HBV-DNA平均含量为(9.84±6.06)E拷贝/L;重度慢性乙肝12例,HBV-DNA平均含量为(8.72±5.62)E拷贝/L轻、重度组间HBV-DNA平均含量有显著差异(P＜0.05).血清ALT水平与肝组织病变程度无一致关系,与HBV-DNA含量亦无明显相关.结论多数抗-HBe阳性患者HBV仍持续复制,血清病毒量低于HBeAg(+)者.慢乙肝病变程度与HBV-DNA平均拷贝数成反比.肝脏炎症程度似可作为估计病毒量的间接指标.