蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤保护机制

目的：探讨蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35诱导大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12细胞）损伤保护的作用机制。方法：在Aβ25—35诱导PC12细胞损伤模型的基础上加入蜜环茵多糖含药血清,采用比色法检测含药血清对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤培养液中乳酸脱氢酶的活力、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活力的影响。结果：不同浓度的含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞的存活率有提高作用,含药血清浓度在5％时达最大值（P〈0．05或P〈0．01）;5％浓度的含药血清可明显降低模型细胞培养液中LDH活力、MDA含量,提高SOD活力。结论：蜜环菌多糖含药血清对Aβ25—35损伤的PC12细胞有保护作用．机制可能与提高细胞抗氧化能力有关。     

齐墩果酸对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及机制研究

目的 研究琐琐葡萄提取物齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对β淀粉样蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 采用20μmol/L Aβ25-35诱导PC12细胞损伤构建阿尔茨海默病(AD)细胞模型,20、40和80μg/mL OA干预,CCK-8法检测各组细胞的存活率,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞膜通透性及完整性,Annexin V-FITC流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测细胞凋亡相关基因bcl-2和bax表达.结果 与模型组比较,20、40和80μg/mL OA预处理可有效提高PC12细胞存活率,减少乳酸脱氢酶渗漏,降低细胞凋亡率,下调bax mRNA表达(P＜0.05),40、80μg/mL OA预处理上调bcl-2 mRNA表达(P＜0.05).结论 OA对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡损伤具有明显的保护作用,其机制可能与OA通过调节细胞凋亡相关基因表达,从而抑制凋亡有关.     

白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法用不同浓度的Aβ25-35处理PC12细胞,建立细胞毁损模型,然后加入不同浓度的白藜芦醇,在显微镜下观察PC12细胞形态的变化及突起生长情况。采用MTT检测技术观察PC12细胞的生长活性,采用酶标仪检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,采用瑞士-吉姆萨染色和流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果损伤组加入Aβ25-35,24 h后细胞形态不规整,突起出现不同程度的肿胀破裂,48 h后见不到完整的突起结构;保护组加入白藜芦醇预孵育后明显延缓突起损伤,24 h后仍能观察到比较完整的突起结构,48 h后远端发生轻微断裂。保护组细胞突起长度和D(λ)值明显大于损伤组(P<0.01),细胞凋亡数以及LDH活性明显低于损伤组(P<0.01)。结论白藜芦醇对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤具有明显的保护作用。     

丁苯酞对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的作用及其机制

目的 探讨丁苯酞(NBP)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导的PC12细胞凋亡的保护作用及其机制.方法 不同浓度的NBP(0.1、1.0、10、100 μmol/L)作用到经Aβ诱导或未经诱导的PC12细胞上,然后分别采用细胞存活率检测(MTT)及PI单染、透射电镜方法检测细胞凋亡,采用western印迹法检测Bcl-2和Cyt-C蛋白的表达,进而观察NBP对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡的保护作用.结果 MTT显示不同浓度(0.1、1.0、10、100 μmol/L)NBP组细胞存活率分别为76.5%±1.1%、84.2%±1.3%、89.5%±1.3%、81.9%±1.9%,明显高于模型组(71.7%±1.4%),其中10 μmol/LNBP组最明显,差异有统计学意义(P＜0.05);流式细胞学结果显示10 μmol/L NBP组细胞凋亡率明显低于模型组(P＜0.05);电镜下模型组细胞凋亡特征明显,10 μtmol/L NBP组细胞形态接近正常;Western印迹显示:10 μmol/L NBP组Bcl-2蛋白表达增加,而模型组Bcl-2表达明显减少(P＜0.05);模型组胞质Cyt-C表达最强,而10μmol/L NBP组有较弱的Cyt-C表达(P＜0.05).结论 NBP对Aβ诱导的PC12细胞凋亡有保护作用,其机制可能和NBP增加Bcl-2蛋白水平,抑制Cyt-C从线粒体的释放有关.     

雷公藤甲素对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究

探讨雷公藤甲素对β- 淀粉样蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12 细胞损伤的保护作用及其机制。方法通过噻唑蓝（MTT）法确立Aβ25-35诱导PC12 细胞损伤模型的工作浓度;同时利用MTT 法检测1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L雷公藤甲素对细胞活性的影响,以及雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞后对细胞活性的影响。PC12细胞随机分为3组：对照组、Aβ25-35处理组、Aβ25-35和雷公藤甲素处理组。细胞处理24 h后,利用免疫荧光法检测细胞中活化Caspase-3的表达,同时采用逆转录聚合酶链反应检测凋亡相关基因-2 和的表达水平。结果Aβ25-35在10 μmol/L工作浓度下可诱导PC12 细胞复制阿尔茨海默病体外细胞损伤模型,其细胞存活率为（58±6）%;单纯雷公藤甲素在1×10-11、1×10-10和1×10-9 mol/L浓度下处理细胞对细胞活性无显著影响。Aβ25-35处理细胞后,细胞活性降低,活化Caspase-3在细胞中表达升高,同时Bax mRNA表达升高,而Bcl-2 mRNA 的表达下降。然而,雷公藤甲素和Aβ25-35同时处理细胞时,前者能够降低Aβ25-35对PC12 细胞的毒性损伤,且细胞活性随雷公藤甲素浓度的增加而升高;同时活化Caspase-3在细胞中的表达,Bcl-2 和Bax mRNA 表达水平也受抑制。结论雷公藤甲素可能通过调节-3、及-2 基因的表达以抑制细胞凋亡,从而对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤发挥保护作用。     

雌激素对Aβ25-35致PC12细胞损伤的影响

目的观察可溶性Aβ25-35作用下PC12细胞细胞活力的改变及17β-雌二醇(17βE2)对此改变的影响。方法培养的PC12细胞作为神经细胞体外模型,可溶性Aβ25-35作用于PC12细胞作为AD早期病理损害的细胞模型,实验设空白对照组、Aβ损伤组、雌激素干预组,雌激素干预组再分为五个剂量亚组,分别于培育各时间点(0.5,6,24,48,72 h),用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,乳酸脱氢酶(LDH)法检测细胞损伤程度。结果Aβ损伤组与空白对照组相比,PC12细胞代谢活力(MTT还原率)明显降低(P<0.01),细胞培养液上清中LDH漏出明显增多(P<0.01),以上损伤出现较早,并随着时间的延长而加重。与Aβ损伤组比较,在10-9-10-6mol/L各浓度下,17βE2组细胞MTT还原率均有显著提高,细胞培养液上清LDH漏出均有显著降低,且有剂量依赖性。结论超生理量的Aβ即使呈可溶解状态也可以对神经元细胞造成毒性损害,雌激素具有剂量依赖性的抗Aβ损伤和神经细胞保护作用。     

β-淀粉样蛋白25-35片段诱导PC12细胞凋亡

目的　探讨 β -淀粉样蛋白 2 5 - 35片段 (Aβ2 5-3 5)对体外培养的PC12细胞的毒性作用机制。方法　用四甲基偶氮唑蓝 (MTT)代谢率检测 ,光镜吖啶橙荧光染色术 ,透射电镜以及流式细胞仪技术研究Aβ2 5-3 5损伤PC12细胞的途径。结果　用Aβ2 5-3 5处理PC12细胞 2 4h ,Aβ2 5-3 5剂量依赖性地引起PC12细胞的MTT代谢率减少 ,荧光染色及电镜观察发现经Aβ2 5-3 5处理的PC12细胞表现出凋亡细胞的特征 ,流式细胞仪检测发现 ,对照组 2 0 μmol/L及 5 0 μmol/L的Aβ2 5-3 5组PC12细胞的凋亡率分别为 0 .0 8%± 0 .0 1% ,14 .8%± 1.13% ,2 5 .9%± 2 .34%。结论　Aβ对PC12细胞的损伤主要通过细胞凋亡的途径     

原儿茶酸对β淀粉样蛋白_(1-42)诱导PC12细胞毒性的保护作用及机制

【目的】探讨原儿茶酸(PCA)在阿尔茨海默病(AD)细胞模型中的保护作用及机制。【方法】采用免疫荧光法鉴定β淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))纤维聚体,将Aβ_(1-42)作用于PC12细胞,并于不同时间点(0、3、6、9、12、24 h)观察细胞形态,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞存活率以确定造模条件,并用MTT法检测原儿茶酸对PC12细胞的毒性条件。采用预保护的给药方式,检测不同浓度的原儿茶酸对PC12细胞的干预作用。采用Western-blot法检测自噬相关标记蛋白Beclin1的表达水平,以探究原儿茶酸的保护作用机制。【结果】显微镜下观察到12、24 h时,Aβ_(1-42)白色团块聚集基本稳定,无明显差异,MTT检测细胞损伤率均达40%,由此确定12 h和24 h均可做为AD的造模条件。原儿茶酸在200~800μmol/L浓度作用24 h的条件下,细胞活力显著上升(P0.01)。Western-blot结果显示:原儿茶酸可显著增加Beclin1的表达水平。【结论】原儿茶酸有助于改善Aβ_(1-42)诱导的PC12细胞毒性,其机制可能与增加自噬水平有关。     

Wnt信号通路对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的作用研究

目的观察Wnt信号通路在Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡中的作用。方法Aβ25-35模拟PC12细胞氧化应激损伤,WST-1法检测PC12细胞的增殖活力,倒置显微镜观察细胞的形态,流式细胞仪检测细胞的凋亡率,Western Blot检测Bax/Bcl-2表达量的变化。结果在一定浓度范围内,Wnt3a呈浓度依赖的增加PC12细胞存活率,改善细胞形态,减少早期凋亡细胞数目,升高细胞Bcl-2/Bax比值,且浓度100 ng/ml时达到最佳效应。结论Wnt3a可能通过Wnt信号通路抑制过氧化氢(H2O2),诱导线粒体凋亡通路,进而发挥保护由Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤。     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

Aβ25-35诱导PC12细胞周期变化与凋亡的关系

目的探讨β-淀粉样肽25-35(βamyloid peptide-25-35,Aβ25-35)诱导体外去血清培养的PC12细胞周期变化与凋亡的关系。方法用常规的去血清培养使细胞同步于G0期,采用终浓度为0~45μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞24h,用MTT比色法分析细胞存活率;Hoechst33258荧光染色观察细胞核凋亡的形态学改变;DNA电泳观察细胞凋亡时特异性梯状条带(DNA-Ladder);流式细胞仪检测分析细胞周期的改变与凋亡的时间关系。结果随着Aβ25-35剂量的增加,PC12细胞存活率降低(P<0.01);用25μmol/L Aβ25-35处理PC12细胞12、24h,荧光染色结果显示24h出现典型的凋亡,表现为核固缩、核碎裂;DNA电泳结果显示凋亡特异性梯状条带;流式细胞仪分析表明去血清培养24h可使约90%PC12细胞停滞于G0/G1期,25μmol/L Aβ25-35诱导组8、16、24h与对照组比较,S期细胞比例增加(P<0.01),16h后细胞凋亡率增加(P<0.01),可见明显的亚二倍体峰(Ap峰)。结论Aβ25-35降低去血清培养的PC12细胞存活率,诱导同步化于G0/G1的PC12细胞重新进入细胞周期并随之出现凋亡,提示Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡可能与细胞周期紊乱有关。     

Aβ_(1-42)寡聚体诱导阿尔茨海默病动物模型的研究

阿尔茨海默病(AD)是一种世界性疾病,建立AD动物模型对于研究和治疗AD有重要意义。可溶性Aβ1-42寡聚体来自源淀粉样前体蛋白,与其他Aβ进行比较,Aβ1-42的神经毒性更强,在诱导AD动物模型时更接近于AD的病理状态,其能更全面地诠释AD的发病机制,该模型的建立为今后AD药物研究以及治疗奠定了基础。     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的 探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用.方法 常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/LAβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达.结果 梓醇终浓度1×10-5 mol/L和1 ×10-4 mol/L显著提高PC12细胞存活率(P＜0.05和P＜0.01);1×10-4 mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P＜0.01).Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白Bax mRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5 mol/L和1×10-4 mol/L有降低作用(P＜0.05和P＜0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P＜0.05和P＜0.01).结论 地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用.     

地黄活性成分梓醇抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡作用

目的探讨地黄活性成分梓醇对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)诱导PC12细胞凋亡的保护作用。方法常规培养PC12细胞,加入不同浓度梓醇,24 h后加20μmol/L Aβ25-35,48 h后观察梓醇的作用,MTT法测定细胞存活率,TUNEL法测定细胞凋亡发生率,半定量RT-PCR检测细胞Bax和Bcl-2 mRNA表达。结果梓醇终浓度1×10-5mol/L和1×10-4mol/L显著提高PC12细胞存活率(P<0.05和P<0.01);1×10-4mol/L显著降低细胞凋亡发生率(P<0.01)。Aβ25-35损伤可引起凋亡相关蛋白BaxmRNA的表达增加,梓醇终浓度5×10-5mol/L和1×10-4mol/L有降低作用(P<0.05和P<0.01);同时Aβ25-35使Bcl-2 mRNA的表达降低,梓醇有提高作用(P<0.05和P<0.01)。结论地黄活性成分梓醇有对抗Aβ25-35损伤引起的PC12细胞凋亡作用。     

α-细辛醚、β-细辛醚改善Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤及机制

目的：探究α-细辛醚、β-细辛醚对β淀粉样蛋白活性片段Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型的保护作用及相关作用机制。方法：采用Aβ_25-35诱导PC12细胞建立Aβ毒性损伤细胞模型。将PC12细胞分为空白对照组、模型对照组、α-细辛醚组（0.5、1.0、1.5?μg/mL）、β-细辛醚组（6.3、12.5、25.0?μg/mL）、血管活性肠肽（VIP）组,并设VIP拮抗剂对照。采用细胞计数试剂盒（CCK-8）法检测细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验检测炎症因子白介素（IL）-1、IL-10、肿瘤坏死因子（TNF）-α,氧化因子诱生型一氧化氮合酶（iNOS）、一氧化氮（NO）和凋亡因子caspase-3、p53水平;蛋白质印迹法检测细胞c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）蛋白表达。结果：与模型对照组比较,α-细辛醚组、β-细辛醚组和VIP组细胞存活率增加,细胞凋亡率下降,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平下降,IL-10水平升高,氧化因子iNOS和NO水平下降,c-Jun氨基端激酶（JNK）、p38MAPK蛋白表达减少（均P<0.05）。VIP拮抗剂干预后,β-细辛醚组细胞存活率下降,细胞凋亡率增加,凋亡因子caspase-3、p53和炎症因子IL-1、TNF-α水平升高,IL-10水平下降,氧化因子iNOS和NO水平升高,JNK、p38MAPK蛋白表达增加（均P<0.05）;α-细辛醚组无显著变化（均P>0.05）。结论：α-细辛醚、β-细辛醚对Aβ_25-35诱导的PC12细胞损伤模型具有保护作用,β-细辛醚可通过促进VIP的分泌,调控JNK/MAPK通路从而抑制炎症因子、氧化因子水平,改善PC12细胞凋亡;α-细辛醚作用机制与VIP分泌水平无明显联系。     

肌肽对H2O2、Aβ25-35诱发PC12细胞损伤的保护作用

目的 研究肌肽对H2O2和β淀粉样蛋白片段（Aβ25－35）诱发PC12细胞损伤的保护作用。方法 将培养的PC12细胞分为3组：正常对照组；损伤组，分别加入H2O2和Aβ25－35；保护组，在用H2O2、Aβ25－35处理前30min加入肌肽。用LDH法、MTT法观察肌肽的神经保护作用。结果 保护组LDH活性显著少于损伤组（P＜0．01）；MTT测定结果显著高于损伤组（P＜0．01）。结论 肌肽对H2O2和Aβ25－35诱发PC12细胞损伤有显著的保护作用。     

MCI-186对Aβ25-35诱导PC12细胞晚期糖基化终产物的影响

目的:研究MCI-186对淀粉样β蛋白25-35(Aβ25-35)诱导PC12细胞晚期糖基化终产物(AGEs)的影响。方法:实验对象共分3组:正常对照组、MCI-186处理组(20μmol/LMCI-186,30μmol/LAβ25-35)和Aβ25-35干预组(30μmol/LAβ25-35)。采用MTT法测定细胞生存率,ELISA法测定AGEs含量。结果:与正常对照组相比,MCI-186预处理组细胞生存率和AGEs含量没有差异(P>0.05)。与Aβ25-35干预组相比,MCI-186预处理组细胞生存率和AGEs含量减低(P<0.001,P<0.01)。结论:MCI-186能够减少Aβ25-35对PC12细胞内晚期糖基化终产物的生成,发挥神经保护作用。     

MCI-186对Aβ25-35诱导PC12细胞晚期糖基化终产物的影响

目的：研究MCI-186对淀粉样β蛋白25-35（Aβ25-35）诱导PC12细胞晚期糖基化终产物（AGEs）的影响。方法：实验对象共分3组：正常对照组、MCI-186处理组（20μmol/LMCI-186,30μmol/LAβ25-35）和Aβ25-35干预组（30μmol/LAβ25-35）。采用MTT法测定细胞生存率,ELISA法测定AGEs含量。结果：与正常对照组相比,MCI-186预处理组细胞生存率和AGEs含量没有差异（P〉0.05）。与Aβ25-35干预组相比,MCI-186预处理组细胞生存率和AGEs含量减低（P〈0.001,P〈0.01）。结论：MCI-186能够减少Aβ25-35对PC12细胞内晚期糖基化终产物的生成,发挥神经保护作用。     

Phloretin对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响及其机制

目的:探讨Aβ25-35(β-amyloid)诱导PC12细胞凋亡过程中氯通道阻断剂Phloretin的保护作用及其机制.方法:采用MTT比色,LDH(lactate dehydrogenase)活力检测、Hoechst33258染色和琼脂糖凝胶电泳比较正常对照组、Aβ25-35损伤组和Aβ25-35 PMoretin组的PC12细胞存活与凋亡;Western Blot印迹检测3组的JNK,P-JNK蛋白表达.结果:10 mmol/L Phloretin可明显抑制Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,提高细胞存活率,减少LDH释放,减少PC12细胞核固缩、碎裂,降低P-JNK蛋白的表达(P<0.01).结论:小剂量氯通道阻断剂Phloretin对Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡具有保护性抑制作用,其机制与下调JNK的磷酸化激活有关.