用PCR诊断鸟分支杆菌菌血症

作者介绍了一种可以直接从血液中快速诊断鸟分支杆菌的聚合酶链反应(PCR)。 用抗凝血剂(EDTA)从患者采血,同时采用溶解离心法进行血液培养,用Ficoll-Hy-paque梯度离心血液标本提纯外周血液单核细胞,洗涤提纯的细胞并在有chelex-100树脂条件下孵育,煮沸至释放分支杆菌DNA,然后用鸟分支杆菌特异性PCR引物扩增。 扩增的PCR混合物含有70mM Tris(pH8.8)、20mM(NH_4)_2SO_4、2.5mMMgCl2、1mM二硫苏糖醇、100μg牛血清白蛋白/ml、0.1顶Triton X-100及4种脱氧核耷酸每种0.2mM。DNA扩增40个周期(1个周期由94℃ 30秒、50℃30秒和72℃30秒组成)。用等容量0.5N NaOH使20μl PCR产物变性,并将其印到Genescreen Plus杂     

艾滋病患者并发鸟-胞内分支杆菌感染

艾滋病流行之前播散性鸟分支杆菌感染非常罕见,但自1982年起,这一感染在艾滋病患者中的发病人数急剧增多。本文综述了艾滋病患者并发鸟分支杆菌与胞内分支杆菌感染的流行特征、发病机理、临床表现及治疗的研究现状。     

L型结核分支杆菌双相培养基研制

近年来,由于抗结核药、β内酰胺类抗生素等广泛使用,临床上出现越来越多的耐药及复发肺结核病人,而结核病患者L型结核分支杆菌(MTB-L)是结核病难治、易复发及耐药的主要原因之一^[1,2].因此,加强对MTB-L的检测是研究热点.国外BACTEC9000检测系统价格昂贵,且有放射污染,基层医疗单位难以承受^[3].国内庄玉辉教授^[4]研制的改良固体培养基(TSA-L)耗时较长,需4~5周才能出现结果.本研究结合固、液培养基的特点,研制一种新型L型固、液双相培养基(LBCM),在MTB-L快速培养和涂阴肺结核病诊断中取得满意的结果.现报告如下.     

艾滋病合并鸟-胞内复合分支杆菌感染的诊断和治疗进展

鸟-胞内复合分支杆菌是艾滋病晚期播散性细菌性感染最常见的原因。本文就近年来艾滋病合并鸟-胞内复合分支杆菌感染的诊断和治疗进展进行综述。     

艾滋病合并鸟—胞内复合分支杆菌感染的研究现状

鸟—胞内复合分支杆菌(Mycobacterium aviumComplex,Ma—c)感染是艾滋病患者最常见的机会致病菌感染,而且与艾滋病(AIDS)患者的高病死率显著相关.AIDS流行之前Ma—c很少引起人类感染,播散性(disseminated)鸟一胞内复合分支杆菌(dMa—c)感染更为罕见.但随着AIDS的传播流行,患者中dMa—c 感染日益增多.调查表明,AIDS患者生前15%～40%,死后尸检50%以上的病例发现dMa—c感染.为此国外医学界进行了许多研究.本文综述了其病原学、流行病学和临床等方面研究进展.     

结核分支杆菌的分子检测技术研究进展

结核分枝杆菌是分支杆菌中最重要的一种细菌,是肺结核的病原。肺结核是世界上最常见的传染病之一,全球结核病防治面临巨大的挑战,过去多用细菌学、免疫学的方法对其进行检测。随着分子生物学的发展,分子生物学技术开始大量应用于结核分支杆菌的检测。本文就应用于结核分支杆菌检测的分子生物学技术发展概况作一综述。     

结核分支杆菌耐药性快速检测的研究进展

近年来,全球结核病的发病率呈上升趋势。迄今为止,有5000万人感染的是耐药的结核分支杆菌,而在过去30年中未开发出有效的新型抗结核药。出现这种情况的根本原因在于结核分支杆菌产生了耐药性。在结核控制中,建立快速、敏感和特异的检测耐药性结核分支杆菌的方法,可以指导制定合理的治疗方案,判断治疗是否失败并产生耐药性,也便于进行较大规模的结核分支杆菌耐药性调查。     

结核分支杆菌1293株的耐药性分析

目的　分析 1996年以来到福州肺科医院就诊的肺结核病人结核分支杆菌耐药态势 ,为结核病的防治提供依据。方法　应用固体罗氏培养基与快速分离培养技术 (BACTECMGIT 960 )作痰抗酸杆菌培养 ,经菌型鉴定为人型结核分支杆菌者 3 0 0 2株 ,作异烟肼 (INH)、利福平 (RFP)、链霉素 (SM)、乙胺丁醇 (EMB)耐药性测定。结果　 3 0 0 2株结核分支杆菌耐药12 93株 ,总耐药率 43 1% ;耐多药 (MDR) 2 5 9株 ,耐多药率 8 6% ,原发及获得性耐多药率分别为 3 9%和 6 9%。耐单药顺位从高到低依次为SM(2 6 3 % ) ,RFP(2 5 5 % ) ,INH(14 3 % ) ,EMB(10 2 % )。耐 2种药及其以上耐药率 2 0 2 % ,MDR耐药率11 6%。各年龄组耐药及耐多药均为青年组 >中年组 >老年组。结论　结核分支杆菌耐药性结果反映了福州地区结核病耐药的基本现状 ,说明结核病患病率仍有升高的危险 ,防治工作任重道远。     

煤工尘肺合并结核分支杆菌L型感染的临床研究

目的探讨L型菌培养在煤工尘肺结核诊断中的应用价值。方法将100例煤工尘肺结核住院病人的晨痰标本，进行涂片、罗氏培养及L型菌培养，并将其结果进行分析。结果涂片阳性6例，罗氏培养阳性3例，L型培养6例。通过检验在尘肺结核诊断中L型菌涂片对结核分支杆菌L型检出意义不大。L型培养比罗氏培养高出1倍，无统计学意义。结论L型菌培养可作为临床诊断尘肺结核的一种方法，予以应用。且方法简便易普及，如果在病例选择及实验技巧上再稍加改进，应可得到满意的结果。     

卡那霉素和丁胺卡那霉素对结核分支杆菌的耐药不一致性研究

目的探讨卡那霉素（KM）和丁胺卡那霉素（AMK）对结核分支杆菌的耐药不一致性。方法结合MTC药敏试验结果，同时根据结核分支杆菌野生株序列，自行设计覆盖rrs基因核心突变区的系列寡核苷酸探针，对突变位点进行快速检测。结果河南省的多耐分离株中，KM耐药而AMK敏感有48％（47／96）。应用反向斑点杂交法检测47株KM耐药而AMK敏感株和5株双敏感株及5株双高耐株rrs基因的突变位点，结果5株双高耐株rrs基因的1400位点均有突变，KM的MIC植≤64μg／ml菌株在该位点未见突变。结论提示应同时对临床分离株做两种药的耐药检测实验，rrs基因的1400位点可以作为高浓度AMK—KM耐药的一个重要标记。     

卡那霉素和丁胺卡那霉素对结核分支杆菌的耐药不一致性研究

目的探讨卡那霉素(KM)和丁胺卡那霉素(AMK)对结核分支杆菌的耐药不一致性。方法结合MTC药敏试验结果,同时根据结核分支杆菌野生株序列,自行设计覆盖rrs基因核心突变区的系列寡核苷酸探针,对突变位点进行快速检测。结果河南省的多耐分离株中,KM耐药而AMK敏感有48%(47/96)。应用反向斑点杂交法检测47株KM耐药而AMK敏感株和5株双敏感株及5株双高耐株rrs基因的突变位点,结果5株双高耐株rrs基因的1400位点均有突变,KM的MIC植≤64μg/ml菌株在该位点未见突变。结论提示应同时对临床分离株做两种药的耐药检测实验,rrs基因的1400位点可以作为高浓度AMK-KM耐药的一个重要标记。     

艾滋病合并鸟—胞内复合人支杆菌感染的诊断和治疗进展

鸟－胞内复合分支杆菌是艾滋病晚期播散性细菌性感染最常见的原因。本文就近来下艾滋病合并鸟－胞内复合分支杆菌感染的诊断和治疗进展进行综述。     

结核分支杆菌药敏和耐药基因检测的临床应用和分析

目的 采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（PCR－SSCP）检测结核分支杆菌耐药基因（rPOB、katG和rPSL),评估它的临床应用价值。方法 通过Bactec-960快速培养,PCR－SSCP和药物敏感试验了解114例肺结核病人结核分支杆菌耐药情况,分析了临床治疗效果。结果 近1／3的初治肺结核病人至少耐一种抗结核药物,RFP、INH和SM敏感株rPOB、katG和rPSL基因突变率分别为6．5％、11．4％和27．2％,耐药株基因突变率分别为60．2％、45．7％和62．7％,耐药基因突变率随着耐药浓度增而高而增高。药敏试验联合耐药基因检测指导治疗效果满意。结论 耐药基因检测指导治疗是一种新探索,与药敏试验联合应用可互相弥补,可能成为临床指导用药的好方法。     

结核分支杆菌耐利福平耐药基因的检测

目的 评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rPOB基因突变在结核分支杆菌耐利福平（RFP）耐药性测定中的应用价值。方法 采用PCR0－SSCP方法对93株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐RFP或含耐RFP耐多药株58株）和33例耐RFP肺结核病人痰标本rPOB基因突变进行检测,并对部分常规药敏试验耐药而用PCR－SSCP未检测到rPOB基因突变的PCR扩增产物阴性菌株用双脱氧末端终止法进行测序分析。结果 以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rPOB基因PCR扩增产物258bp片段SSCP图谱正常;58株耐RFP分离株中,52株rPOB基因SSCP图谱异常,其敏感性为89．7％。SSCP图谱正常的5株耐RFP的PCR产物经测序证实,4株在531位密码子TCG→TTG,1株在526密码子CAC→TAC,1株未改变。33例耐RFP肺结核病人痰酝标本有30例PCR扩增阳性,23例SSCP图谱与H37RV株有差异,rPOB突变率为76．7％。结论 PCR－SSCP 以快速、准确地检测结核分支杆菌rPOB基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的：探讨耐异烟肼结核分支杆菌KatG基因突变在结核分支杆菌耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCR和PCR－SSCP方法对72株结核分支杆菌临床分离株和30例耐INH肺结核病人痰标本KatG基因突变进行检测。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照，30株药物敏感株的KatG基因PCR扩增产物282bp片段28例SSCP图谱正常，2例异常。42例耐INH分离株中，38株KatG基因扩增阳性，其中24株SSCP图谱异常，其敏感性为63．1％，30例耐INH肺结核病人痰标本有18例PCR扩增阳性，10例SSCP图谱与H37RV株有差异，KatG突变率为55．6％，结论：结核分支杆菌INH耐药的产生可能是由于其KatG基因完全缺失或KatG基因突变所致，PCR－SSCP技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

播散性鸟型分支杆菌复合体感染的临床鉴定及流行趋势

在艾滋病发生之前,鸟型分支杆菌复合体(MAC)引起人类感染较少见,偶尔有慢性肺疾病患者感染MAC肺炎,但播散性鸟型分支杆菌复合体感染(DMAC)罕见。新近来自疾病控制中心的报告指出,在美国艾滋病患者中被确认的DMAC感染者正在增加。作者对门诊DMAC病人的年度发生率进行了调查,以确定DMAC的趋势,并     

成都地区1396例结核分支杆菌的耐药性分析

[目的]分析成都地区结核分枝杆菌(MTB)对一线和二线抗结核药物的耐药性,初步探讨该地区严重耐多药结核杆菌(XDR-TB)的情况。[方法]将成都地区2007年1月～2008年12月期间3325例肺结核患者的痰液进行分离培养、菌型鉴定,获得1396株MTB,采用绝对浓度法对4种一线和4种二线抗结核药物进行耐药性检测。[结果]1396株MTB对一线抗结核药物的总体耐药率为33.1%(95%可信区间为30.6%～35.6%),其中耐多药结核菌株211株(15.1%),严重耐多药结核菌株10株(0.72%);对二线药物的总体耐药率为12.3%(95%可信区间为10.6%～14.0%)。[结论]成都地区结核分枝杆菌对二线抗结核药物的耐药情况严重,耐多药结核菌株中严重耐多药结核菌株的比例过高。表明持续开展MTB的耐药性监测十分重要。     

结核分支杆菌重组MPT64蛋白的血清学诊断

评价结核分支杆菌重组MPT64蛋白为抗原进行结核病血清学诊断的价值。以PPD为对照，通过ELISA方法检测121例结核病人、146例健康体检者、37例卡介苗阳转者血清中的抗结核抗体。结果表明，结核分支杆菌重组MPT64蛋白具有很强的免疫反应性，可以作为结核病抗结核抗体检测的血清学诊断试剂之一。