Lck对肾小管上皮细胞的IL-12信号传递功能研究

目的 研究lck途径激活后对小鼠肾小管上皮细胞的信号传递功能的影响。方法 应用IL-12、IL-2刺激小管皮细胞,通过原位杂交检测lckmRNA在小管上皮细胞的表达;采用lck抑制剂PP1,阻抑小管上皮细胞,通过原位杂交检测lckmRNA在小管上皮细胞的表达;采用lck抑制剂PP1,阻抑小管上皮细胞的lck激酶,通过免疫印迹和放射自显影方法检测lck对小鼠上皮细胞的信号传递功能的影响。结果 lck激酶激活可调控小管上皮细胞的lck/c-Jun信号传递途径;小管上皮细胞中lck途径激活介导的细胞炎症作用与IL-12的c-Jun表达作用有关。结论 lck在IL-12的信号传递中发挥重要的作用。     

白细胞介素12受体的研究进展

IL- 12受体 (IL- 12 R)主要分布在外周血单个核细胞上 ,由 β1 和 β2 两条链组成 ,二者均属于 GP130相关的细胞因子受体超家族。目前已克隆出人和鼠的 IL- 12 R。由 IL- 12 R介导的 IL- 12的信号传导涉及了 JAK/ STAT途径中 TYK2、JAK2、STAT3及 STAT4的酪氨酸磷酸化     

白细胞介素12研究进展

白细胞介素12(IL-12)是一种异源二聚体细胞因子。IL-12能对T细胞和NK细胞的功能施加多种影响,促进细胞免疫,诱导干扰素-γ产生,具有抗肿瘤作用,且毒副作用很小。本文介绍IL-12的分子结构及生物学功能。     

白细胞介素—12与寄生虫感染

ＩＬ－１２是一种具有多种生物学活性的免疫效应细胞刺激因子，能刺激Ｔ和ＮＫ细胞的增殖、诱导它们产生ＩＮＦ－γ等细胞因子并增强它们的细胞毒活性，在抗感染免疫中起着重要的作用，本文就ＩＬ－１２在寄生虫感染听免疫作用进行综述。     

IL—12对狼疮肾炎PBMC中信号传递分子STAT3,STAT4的作用

目的：为了探讨ＩＬ－１２对狼疮肾炎ＰＢＭＣ发挥生物学作用的细胞内信息传递机制。方法：采用ＭＴＴ、免疫沉淀、免疫印迹等方法。检测ＩＬ－１２对ＰＢＭＣ增殖及ＳＴＡＴ２、ＳＴＡＴ４的作用,并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果：发现与正常人对照及静止期相比,ＩＬ－１２对ＰＢＭＣ的中通过ＳＴＡＴ３、ＳＴＡ４途径发挥、存在异常活化,这时可能是ＩＬ－１２促进狼疮肾炎ＰＢＭＣ参与发病的细胞内机制之一。     

重组人白细胞介素12基因在CHO—dhfr^—细胞的稳定表达

将分别含有重组人ＩＬ－１２（ｒｈＩＬ－１２）两个亚单位ｃＤＮＡ的真核细胞高效表达载体，通过Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ介导，共转染至ＣＨＯ－ｄｈｆｒ＾－细胞中。经选择性培养基培养、细胞染色体ＤＮＡ ｄｏｔ ｂｌｏｔ实验、Ｎｏｒｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ及Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ实验鉴定，筛选出能表达ｒｈＩＬ－１２的细胞株，经氨甲喋呤加压诱导，表达量约为１５０ｕ／ｍｌ，且经液氮冻存３ｍｏ以上仍有表达。本实验还研究     

白细胞介素12在细胞免疫中的作用

ＩＬ１２是１９９０年由美国Ｓｔｅｒｎ等用佛波酯和钙离子载体Ａ２３１８７联合刺激Ｂ淋巴样母细胞系ＮＣ３７后,经纯化而得到的一种新的细胞因子。ＩＬ１２的相对分子质量（Ｍｒ）为７５０００,由二硫键将Ｍｒ为４００００和３５０００的两个亚基（ｐ４０和ｐ３５）连接而形成异源双体糖蛋白。ＩＬ１２由细菌及其产物和寄生虫刺激巨噬细胞、Ｂ淋巴细胞或其它辅佐细胞而产生。目前发现的细胞因子均由同一基因所编码。但ＩＬ１２的ｐ４０和ｐ３５则分别由不同的基因所编码。ＩＬ１２的两个亚基ｐ４０和ｐ３５分别含３０６和１９７个氨基酸残…     

IL-12对狼疮肾炎PBMC中信号传递分子STAT_3、STAT_4的作用

目的 :为了探讨IL 12对狼疮肾炎PBMC发挥生物学作用的细胞内信号传递机制。方法 :采用MTT、免疫沉淀、免疫印迹等方法 ,检测IL 12对PBMC增殖及STAT3、STAT4的作用 ,并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果 :发现与正常人对照及静止期相比 ,IL 12对活动期PBMC不需要IL 2的预诱导 ,可促进PBMC增殖并在短时间内激活STAT3、STAT4,而IL 2对STAT4无作用。结论 :表明IL 12对PBMC的作用可通过STAT3、STAT4途径发挥 ,活动期PBMC存在异常活化 ,这可能是IL 12促进狼疮肾炎PBMC参与发病的细胞内机制之一     

低密度脂蛋白诱导肾小管上皮细胞增殖的信号通路

为观察低密度脂蛋白（ＬＤＬ）对肾上管上皮细胞的影响及涉及的相关信号传导机制，以人近曲行小管上皮细胞系（ＨＫ－２）为对象，采用３Ｈ－ＴｄＲ掺入与细胞计数测定增殖；特异性底物磷酸化法测定细胞外信号调节激酶（Ｅｎｇ）活性；凝胶迁移率法检测转录活化因于（ＡＰ－１）ＤＮＡ结合活性。发现ＬＤＬ１００～５００ｕｇ／ｍＬ刺激ＨＫ－２细胞７２ｈ可促进其增殖：加入ＬＤＬ２５０ｕｇ／ｍＬ后２～６０ｍｉｎ内可使该细胞ＥＲＫ活性明显增加，１０ｍｉｎ时达高峰；不同剂量（５０～５００ｕｇ／ｍＬ）刺激时，ＥＲＫ活性分别较对照组增加１．５６～２．１９倍。ＬＤＬ促使核内转录因子ＡＰ－１结合活性增加。ＥＩＵＬ特异性阻断剂ＰＤ（５０ｕｍｏｌ／Ｌ）可以分别阻断ＬＤＬ刺激的ＨＫ－２细胞ＥＲＫ活性和ＤＮＡ合成。ＲＭＡ阻断ＰＫＣ信号途径后，ＬＤＬ对于ＥＲＫ的活化效应明显减弱。     

JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的肾小管上皮细胞转分化

目的：观察Janus激酶/信号转导和转录活化因子(JAK/STAT) 信号的激活对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化的影响。方法:体外培养人肾近曲小管上皮细胞株（HKCs）,分别给予高糖和JAK拮抗剂AG490干预,采用免疫沉淀和Western印迹检测JAK2的磷酸化;Western印迹检测平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)及信号蛋白STAT1、STAT3、磷酸化STAT1 (phospho-STAT1, p-STAT1) 和p-STAT3的水平; 酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞上清液中转化生长因子β₁(TGF-β₁)和I型胶原的分泌,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β₁mRNA表达。结果:与低糖对照组比较,高糖培养的HKCs中α-SMA 的水平及p-JAK2 、p-STAT1 和p-STAT3 比例明显上调；E-cadherin表达明显下调；TGF-β₁ mRNA 表达增加；细胞培养上清液中TGF-β₁、Ⅰ型胶原分泌增加。AG490明显抑制JAK2磷酸化、下调p－STAT1 和p-STAT3的同时,明显抑制高糖刺激HKCs中α-SMA表达的升高，减轻E-cadherin表达下降程度；降低TGF-β₁ mRNA 表达及TGF-β₁、Ⅰ型胶原的分泌。结论:JAK/STAT信号途径参与高糖诱导的HKCs转分化，并刺激TGF-β₁和细胞外基质的分泌。     

系统性红斑狼疮小鼠脾细胞中IL-12信号传递途径的研究

目的探讨在狼疮小鼠脾细胞中是否存在IL-12通过Lck/p38/c-jun传递信号及其对脾细胞的影响。方法以慢性移植物抗宿主病(graft versus host disease,GVHD)小鼠为狼疮小鼠模型,分别采用放射自显影、Western blot和Northern blot,检测培养的脾细胞中Lck的活性、p38磷酸化活化及c-jun基因表达的变化。结果狼疮小鼠脾细胞经IL-12刺激后,与正常对照组相比较,Lck的活性增高、p38异常活化,c-junmRNA的水平增高。加入Lck抑制剂PP1组Lck的活性及p38磷酸化消失,无c-jun基因的表达;加入p38抑制剂SB203580组亦无p38磷酸化及c-jun基因的表达。结论狼疮小鼠的脾细胞异常,IL-12可通过Lck/p38/c-jun在细胞内传递信号,直接参与免疫损伤。     

淫羊藿苷通过AMPK减轻脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤

目的:探讨淫羊藿苷(icariin,ICA)对脂肪酸诱导的肾小管上皮细胞线粒体损伤的作用及其可能机制.方法:利用ICA干预棕榈酸(palmitic acid,PA)培养的大鼠肾小管上皮NRK52E细胞,实验分组为对照组、PA组、PA+ICA组及AMP活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase...     

IL-4及CD40 mAb对肾小管上皮细胞RANTES表达的影响

目的:观察小鼠肾小管上皮细胞(TEC)在IL-4及CD40激活状态下激活正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)分泌的变化。方法:刺激原代培养的小鼠肾小管上皮细胞,检测RANTES的表达,流式细胞仪检测CD40表达。结果:(1)常规培养下,小鼠TEC可表达一定量的CD40,用IL-4刺激TEC 24 h,细胞表面CD40 MFI 显著高于对照组(P<0.01)。(2)常规培养下,小管上皮细胞仅分泌极少量的RANTES(14.78 ng/L±2.20 ng/L),在IL-4刺激或CD40mAb激活后TEC RANTES蛋白分泌分别为43.61±13.73和73.77±4.28,显著高于对照组(P<0.01)。用IL-4刺激肾小管细胞CD40表达的同时,加入纯化的CD40mAb激活CD40受体,TEC RANTES 的合成、分泌显著高于对照组(131.77±41.87,P<0.01),与单纯IL-4刺激组及CD40mAb刺激组比较差异显著(均P<0.01)。(3)用IL-4、CD40mAb及 IL-4+CD40mAb刺激TEC细胞24 h,各刺激组RANTES mRNA表达显著高于对照组(P<0.05)。结论:IL-4及CD40-CD40L共刺激信号可调控RANTES合成及分泌,参与TEC炎症过程。     

Methods of assessing oxidant injury in renal tubular epithelial cells in vitro

Summary Reactive oxygen molecules mediate renal injury in several diseases including glomerulonephritis, ischemic-reperfusion injury, and toxic nephropathies. Several in vivo animal studies document a role for reactive oxygen molecules in causing tissue injury. In vitro methods to determine the mechanisms and effects of reactive oxygen molecule injury will further aid in understanding the pathogenesis of several renal diseases. We describe methods to study cell injury in an in vitro cell culture system of renal tubular epithelial cells exposed to reactive oxygen molecules generated by hypoxanthine-xanthine oxidase or glucose-glucose oxidase. Methods to determine ATP levels and [³H]adenine release as an early response (15 to 90 min) to oxidant stress are described.⁵¹Chromium release representing cell detachment and cell lysis which are late responses (3 to 5 h) are also detailed. Methods of assessing oxidant injury in in vitro systems will allow the precise mechanisms of cell injury to be determined and will allow for the potential development of strategies to prevent or alleviate such injury. Supported by grants from the American Heart Association, Indiana Affiliate, and the James Whitcomb Riley Memorial Association with funds contributed by the Mayflower Classic.     

黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞对顺铂诱导肾小管上皮细胞凋亡的影响

背景：干细胞移植用于治疗急性肾损伤的有效性已经被多个研究证实,但其对肾小管上皮细胞损伤的修复机制尚不明确。 目的：观察黄芪甲苷孵育后的脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡的保护作用及机制。 方法：实验分为4组。2.5 μmol/L顺铂诱导肾小管上皮细胞 24 h,建立肾小管细胞损伤模型(顺铂损伤组);将脂肪源性干细胞与损伤肾小管上皮细胞共培养(脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);利用Transwell小室将20 mg/L黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞48 h后与损伤肾小管上皮细胞共培养(黄芪甲苷孵育脂肪源性干细胞+损伤肾小管上皮细胞组);以正常肾小管上皮细胞做对照(正常对照组)。 结果与结论：与肾小管上皮细胞损伤组相比,AV/PI和TUNEL结果均显示脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组和20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组肾小管上皮细胞发生凋亡的比例和数量明显减少;ELISA结果表明20 mg/L黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组胰岛素样生长因子1分泌显著提高(P < 0.05);Western blot进一步显示20 mg/L 黄芪甲苷脂肪源性干细胞+肾小管上皮细胞组caspase-3蛋白水平明显下降,而Bcl-2的表达量明显增加(P < 0.05)。表明黄芪甲苷孵育的人脂肪源性干细胞对顺铂诱导的肾小管上皮细胞凋亡具有抑制作用,从而有利于肾小管损伤的早期恢复,其保护机制可能与增加胰岛素样生长因子1分泌,抑制caspase-3表达、上调Bcl-2水平有关。中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞;骨髓干细胞;造血干细胞;脂肪干细胞;肿瘤干细胞;胚胎干细胞;脐带脐血干细胞;干细胞诱导;干细胞分化;组织工程全文链接：     

叉头框蛋白O1在内毒素血症急性肾损伤中的作用

目的:探讨叉头框蛋白O1(forkhead box protein O1,FOXO1)在内毒素血症急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)中的作用及相关机制。方法:6～8周龄雄性C57BL/6小鼠腹腔内注射脂多糖(lipopolysaccharide,LPS; 10 mg/kg)诱导内毒素血症AKI模型,检测血清肌酐和血尿素氮。利用Western blot、RT-qPCR和免疫荧光等方法检测小鼠肾组织内FOXO1的表达变化。体外培养人近端肾小管上皮细胞HK-2,LPS诱导内毒素血症AKI肾小管上皮细胞模型,利用FOXO1过表达腺病毒感染HK-2细胞,MTT法检测细胞活力;MitoTracker标记线粒体形态学变化;Mito-SOX检测线粒体超氧化物含量改变;检测FOXO1、促凋亡因子Bax及线粒体氧化磷酸化相关分子mRNA变化,以观察线粒体氧化损伤变化情况。结果:内毒素血症AKI小鼠肾组织FOXO1 mRNA及蛋白表达下调。体外LPS刺激可引起HK-2细胞活力下降,线粒体片段化改变,线粒体超氧化物含量升高,FOXO1 mRNA及蛋白表达下调,Bax表达上调,线粒体氧...