hTR反义寡核苷酸联合全反式维甲酸的体内抗口腔鳞癌作用研究

目的：评价人端粒酶RNA模板（hRT）反义寡核苷酸联合全反式维甲酸的体内抑瘤效果,并对其作用机制进行初步探讨。方法：裸鼠皮下注射Tca8113细胞,建立荷瘤动物模型。分别给予端粒酶反义寡核苷酸、端粒酶正义寡核苷酸、全反式维甲酸、端粒酶反义寡核苷酸联合全反式维甲酸、端粒酶正义寡核苷酸联合全反式维甲酸治疗。治疗结束时,计算各处理组抑瘤效果。端粒酶重复序列扩增法（TRAP法）检测各实验组肿瘤端粒酶活性;Tunel法检测细胞凋亡水平;免疫组织化学法观察bcl-2和bax蛋白表达情况;透射电镜检测各实验组细胞超微结构。实验结果以SPSS10.0软件包进行单因素、双因素方差分析。结果：端粒酶反义寡核苷酸和全反式维甲酸治疗均可抑制肿瘤的生长,两者联合应用具有协同作用。治疗后组织标本与对照组比较,端粒酶活性明显下降、细胞凋亡数目增高,bcl-2蛋白表达下调（P〈0.05）。结论：针对端粒酶hTR靶点的端粒酶反义寡核苷酸联合全反式维甲酸治疗,对荷瘤鼠具有协同抑制肿瘤生长的作用。其抑瘤作用机制可能是通过降低端粒酶活性而引起肿瘤细胞凋亡,bcl-2在此过程中起着重要作用。     

tankyrase 1反义逆转录病毒抑制人舌癌Tcca-8113细胞增殖的实验

目的研究反义tankyrase1逆转录病毒对舌癌细胞系TCCA-8113的端粒酶活性调节及对细胞生长的抑制作用,探讨以tankyrase1为靶点的舌癌基因治疗的可能性。方法构建含反义tankyrase1的逆转录病毒并转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒,感染舌癌TCCA-8113细胞。采用RT-PCR检测tankyrase1表达,端粒酶重复扩增法(telomerase repeat amplification protocol,TRAP)检测端粒酶活性,绘制生长曲线了解细胞生长状态,倒置显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果反义tankyrase1逆转录病毒作用后的舌癌细胞tankyrase1表达下降,端粒酶活性及细胞生长受到明显抑制,细胞出现凋亡。结论反义tankyrase1对舌癌TCCA-8113细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制作用,有可能以tankyrase1为靶点对舌癌进行基因治疗。     

5-氟尿嘧啶对人舌癌细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响

目的 :研究 5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞的抑制作用和对端粒酶活性的影响 ,进一步探讨它的抗癌机理。方法 :应用MTT法、双层琼脂培养法、倒置显微镜观察、HE染色观察、透射电镜观察研究细胞用药前后的生长增殖活性和大体及超微结构变化 ,用免疫组化法、TRAP -PCR -ELISA法研究细胞用药前后部分癌基因表达及端粒酶活性的变化。结果 :5 -氟尿嘧啶对人舌癌Tca8113细胞有明显的抑制作用且呈浓度依赖性 ,对细胞大体形态和超微结构有明显的改变 ,下调c -myc、bac - 2的表达 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性 (用 876ng/ml5 -氟尿嘧啶处理舌癌细胞后 12h、2 4h、4 8h、72h、96h端粒酶活性分别为 0 .76± 0 .0 3、0 .4 5± 0 .0 6、0 .32± 0 .0 5、0 .14± 0 .0 2 ,阴性 )。结论 :5 -氟尿嘧啶可以明显抑制Tca8113细胞的增殖活性及其转移复发倾向 ,还可以作用于线粒体 ,在下调c -myc、bac - 2表达的同时抑制端粒酶活性     

TSA对Tca-8113细胞抑制作用及端粒酶的影响

目的观察不同浓度的组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A（TSA）对口腔鳞癌细胞系Tca-8113细胞体外抑制作用及端粒酶的影响,从而可能提供TSA对口腔鳞癌临床化疗应用的实验依据。方法采用不同浓度TSA对Tca-8113细胞进行药物干预,倒置显微镜观察细胞用药前后的形态学改变;MTT法检测细胞增殖活性,确定后续实验中TSA作用浓度及时间点;应用以PCR为基础的端粒重复序列扩增（TRAP-PCR）银染法检测端粒酶活性,用蛋白印迹（Western blot）方法检测端粒酶逆转催化亚基单位（hTERT）蛋白表达。结果TSA呈时间剂量性抑制Tca-8113细胞的生长,同时它也能降低端粒酶活性及hTERT蛋白表达的变化趋势。结论TSA能够抑制Tca-8113细胞的增殖,进而下调细胞端粒酶活性及hTERT蛋白表达,这可能是TSA抗肿瘤作用机制之一。     

岩黄连总碱抑制Tca8113细胞及其端粒酶活性的实验研究

目的:研究中草药岩黄连总碱(yanhuanglian total alkalions,YHL-TA)对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响及其抗癌机制。方法:采用噻唑蓝比色法(MTT法)检测YHL-TA浓度分别为0.200、0.100、0.050、0.025g/L和空白对照组Tca-8113细胞增殖的情况,同时用以PCR为基础的TRAP-ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性的改变。所有数据采用SPSS13.0进行统计学分析。结果:岩黄连总碱能明显抑制Tca8113细胞增殖,且呈浓度和时间依赖性。72h时,0.200、0.100、0.050、0.025g/L岩黄连总碱组细胞增殖抑制率分别为(66.0±4.0)%、(57.5±3.2)%、(45.3±3.3)%、(37.9±5.5)%。72h时,0.100、0.050g/L组端粒酶活性低于空白对照组(P<0.05)。结论:岩黄连总碱可以明显抑制Tca8113细胞株的增殖及其端粒酶活性,抑制端粒酶活性可能是岩黄连总碱抗舌癌的机制之一。     

反义端锚聚合酶1逆转录病毒载体的构建及其对舌癌细胞增殖的抑制作用

目的探讨以端锚聚合酶1（TRF1-interacting，ankyrin-relatedADP-ribosepolymerase1，tankyrase-1）为靶点的舌癌基因治疗的可能性。方法将tankyrase-1的cDNA反向插入逆转录病毒载体pLXRN中，转染包装细胞PT67后获得反义重组病毒，感染舌癌TCCA-8113细胞。采用RT-PCR法检测tankyrase-1表达，端粒酶重复扩增法检测端粒酶活性，绘制生长曲线，了解细胞生长状态，倒置显微镜观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果反义tankyrase-1逆转录病毒载体作用后的舌癌细胞tankyrase-1表达下降，端粒酶活性及细胞生长受到明显抑制，细胞出现凋亡。结论反义tankyrase-1对TCCA-8113细胞的生长和端粒酶活性具有明显的抑制作用，有可能以tankyrase-1为靶点对舌癌进行基因治疗。     

β-胡萝卜素对人舌鳞癌Tca8113细胞增殖和端粒酶活性的影响

目的 观察β-胡萝卜素对体外培养的人舌鳞癌Tca8113细胞的细胞毒性、细胞周期、细胞凋亡以及端粒酶活性的影响.方法 四唑蓝法检测30、 50、 60和70 μmol/L 4种浓度β-胡萝卜素对Tca8113细胞增殖的抑制作用,流式细胞仪观察β-胡萝卜素处理后Tca8113细胞周期改变及细胞凋亡,端粒重复片段扩增银染法检测细胞端粒酶活性的变化.结果 从50 μmol/L开始,随β-胡萝卜素浓度的提高,对Tca8113细胞增殖抑制作用越来越强.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞4 d后,抑制率超过50%,细胞生长曲线的"S"形趋于平缓.70 μmol/L β-胡萝卜素作用Tca8113细胞3 d后,流式细胞仪检测未出现亚二倍体的"凋亡峰".与空白对照组相比,实验组S期细胞减少约50%(P<0.05),G0/G1期细胞同时显著增加(P<0.05),G2/M期细胞变化无统计学意义(P>0.05).β-胡萝卜素处理Tca8113细胞后,端粒酶活性显著下调.结论 β-胡萝卜素可以通过减少DNA合成,阻滞细胞于G0/G1期,抑制舌癌Tca8113细胞的增殖,抑制效果随浓度的增加而明显.作用机制可能与下调肿瘤细胞端粒酶活性、导致细胞死亡有关.     

阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡对端粒酶及端粒结合蛋白的影响

目的 探讨端粒酶和端粒结合蛋白（TRF）在细胞凋亡过程中的作用机制。方法 甲基噻唑四唑法（MTT）检测阿霉素对舌鳞癌Tca8113细胞的抑制作用。通过姬姆萨染色和流式细胞仪观察和检测5mg／L阿霉素诱导凋亡情况；利用酶联免疫吸附实验分析端粒酶活性；采用免疫组化和免疫荧光标记法观察和检测TRF表达及其水平。结果 5mg／L阿霉素处理Tca8113细胞5d和7d后，出现明显凋亡；端粒酶活性降低呈时间依赖性；TRF在细胞核内表达，其表达水平无统计学意义（P〉0．05）。结论 阿霉素诱导Tca8113细胞凋亡可降低端粒酶活性，但不改变TRF表达水平。     

羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌细胞的抑制作用及端粒酶活性的影响

目的 :观察体外羟基喜树碱、平阳霉素单独和联合应用对人舌癌Tca 8113细胞的生长抑制及端粒酶活性的影响。方法 :采用MTT法、软琼脂克隆形成法、透射电镜观察法、流式细胞术 ,TRAP PCR ELISA法研究。结果 :羟基喜树碱、平阳霉素单用及合用对Tca 8113细胞均有很好的抑制作用 ,且以合用效果最强 ,羟基喜树碱、平阳霉素使Tca 8113细胞的克隆形成率降低 ,超微结构、细胞周期发生明显变化 ,抑制端粒酶活性且有一定的时间依赖性。结论 :羟基喜树碱、平阳霉素对人舌癌Tca 8113细胞在体外有很好的抑制作用且联合应用效果更佳。     

岩黄连脱氢卡维丁体外抑制Tca8113增殖及对端粒酶活性影响的研究

目的：研究中草药岩黄连脱氢卡维丁（Tetradehydroscoulerine，YHL－1）对人舌鳞状细胞癌Tca8113细胞增殖的抑制作用，及其对端粒酶活性和端粒酶催化亚基（hTERT）表达的影响，探讨其抗癌机制。方法：采用噻唑蓝比色法（MTT法）检测不同浓度的YHL-1对Tca8113细胞增殖的影响，同时以TRAP—ELISA法检测Tca8113细胞端粒酶活性改变情况，并用Western blotting法半定量检测端粒酶hTERT的表达。结果：YHL-1能明显抑制Tca8113细胞增殖，且随时间延长和药物浓度的增高，抑制作用增强。72h时，0．200、0．100、0．050、0．025 g／LYHL-1组细胞增殖抑制率分别为（64．1±1．5）％、（47．3±3．3）％、（35．6±5．0）％、（31．8±5．87）％。72 h时，0．100、0．050 g／L组端粒酶活性和hTERT蛋白含量均低于空白对照组（P〈0．05）。结论：岩黄连脱氢卡维丁可以明显抑制Tca8113细胞的增殖，并显著降低其端粒酶活性及hTERT的表达，这可能是其抗舌癌的机制之一。     

反义hTR对舌鳞癌细胞系Tca8113作用的初步探讨

目的：观察反义hTR对人舌鳞癌细胞系Tca8113的影响及其与细胞周期和凋亡的关系。方法：脂质体介导真核表达载体PBBS212－hTR转染Tca8113细胞系，运用流式细胞仪技术观察细胞周期的改变和凋亡，并结合免疫组化和原位杂交技术分析转染前后某些基因表达的变化，结果：转染反义hTR的Tca8113细胞克隆生长减缓，群体倍增时间较未转染和转染空质粒组明显延长，流式细胞仪显示转染细胞PI指数下降，有亚二倍体凋亡峰出现，转染后细胞p21基因表达水平显著增高，裸鼠移植瘤实验显示转染后的Tca8113致瘤性减弱，结论：反义hTR可引起细胞通过细胞周期关卡受阻而显著抑制Tca8113细胞的生长，同时激活了某些凋亡程序而导致细胞凋亡，端粒酶可能是肿瘤基因治疗的理想靶点。     

细胞周期蛋白A正反义基因对人舌癌细胞增殖的影响

目的 探讨细胞周期蛋白A（cyclinA）正、反义基因对人舌鳞状细胞癌（Tca8113）细胞系增殖的影响及调控,为肿瘤基因治疗提供新思路。方法 通过脂质体介导的基因转染方法,将正、反义cycliA基因分别导入Tca8113细胞系,观察转染和未转染细胞的生长情况、体内外增殖变化以及cyclinA和Ki-67蛋白的表达情况。结果 转染反义cyclinA基因的细胞系,其细胞生长速度、DNA合成、细胞增殖及代谢能力均下降;而转染了正义cyclinA基因的细胞系则有相反结果。结论 反义cyclinA以有效抑制靶基因的表达,使舌癌细胞恶性表型部分逆转。     

端粒酶抑制剂对口腔肿瘤细胞生长的影响

目的　探讨端粒酶抑制剂作为肿瘤治疗药物的可行性。方法　选择人口腔鳞状细胞癌KB细胞株作为靶细胞 ,观察端粒酶抑制剂 3′叠氮3′脱氧胸腺核苷 （AZT）和人端粒酶模板区的硫代反义寡核苷酸片断（ASONS）对上述肿瘤细胞株的作用 ,用MTT试验测定细胞毒作用 ;3HTdR掺入试验测定细胞增殖速度 ;用端粒重复序列扩增法 （TRAP）半定量方法测定细胞染毒前后端粒酶活性的变化 ;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期。结果　ASONS和AZT在一定剂量范围内有抑制肿瘤细胞株繁殖的作用 ,在抑制细胞生长的同时 ,端粒酶活性降低。此外 ,ASONS和AZT还有诱导细胞凋亡以及使细胞阻滞在G1 期的作用。结论　AZT和ASONS在体外有抑制端粒酶活性和抗肿瘤细胞增殖的作用 ,这种作用可能与细胞凋亡的诱导和细胞周期的阻滞有关。     

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目的    探讨姜黄素对人口腔鳞癌细胞的增殖抑制作用及作用机制。方法    2009年3—12月于青岛大学医学院选用人舌鳞癌细胞系Tca8113及其脑转移亚系Tb为研究对象,分别用6.25、12.5、25、50 μmol／L姜黄素处理,阴性对照仅加入RPMI1640培养液,用MTT法测定细胞增殖抑制率;以免疫细胞化学方法检测25 μmol／L姜黄素处理后细胞内β-连环蛋白和Notch1的表达。结果    姜黄素对口腔鳞癌细胞Tca8113及Tb增殖有明显抑制作用,并呈剂量依赖性。免疫细胞化学检测结果表明,25 μmol／L姜黄素作用口腔鳞癌细胞系Tca8113及Tb 24 h后即可明显下调β-连环蛋白的表达水平（P < 0.05）,上调Notch1表达水平（P < 0.05）。结论    姜黄素对人口腔鳞癌细胞系Tca8113及Tb的增殖具有抑制作用,其作用机制可能与细胞内β-连环蛋白表达水平下调和Notch1表达水平上调有关。     

TGF-β_1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖和凋亡影响的研究

目的　研究TGF β1对耐药细胞系Tca8113/CDDP增殖与凋亡的影响。方法　以人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113诱导产生的耐药细胞系Tca8113/CDDP为研究对象。应用ELISA法检测转化生长因子TGF β1在Tca8113/CDDP细胞中的表达水平。另在体外用不同浓度的TGF β1对Tca8113/CDDP细胞进行作用 ,通过吉姆萨(Giemsa)染色、MTT比色法和DNA琼脂糖凝胶电泳 ,观察Tca8113/CDDP细胞的凋亡情况。结果　ELISA检测可知Tca8113/CDDP细胞内和无血清培养液中的TGF β1的表达水平均低于Tca8113(P <0 .0 1)。体外诱导凋亡实验 ,TGF β1的浓度高于 0 .1ng/ml时 ,Tca8113/CDDP即有显著的凋亡特征出现 ,细胞皱缩脱落。Geimsa染色可见凋亡小体形成 ;MTT法显示Tca8113/CDDP细胞的凋亡与TGF β1的浓度有一定的相关性 ;DNA琼脂糖凝胶电泳有典型的梯状条带。结论　Tca8113/CDDP自身的TGF β1的表达水平与其增殖状态有关 ;外源TGF β1(0 .1ng/ml)可以显著的诱导Tca8113/CDDP凋亡。