白藜芦醇对人胃癌SGC7901细胞的抑制及其可能的机制

目的:探讨白藜芦醇(resveratrol,Res)对人胃癌SGC7901细胞的抑制及其可能的作用机制.方法:以Res(10、20、40 μg/ml)作用人胃癌SGC7901细胞,同时设溶剂二甲亚砜(DMSO)和培养液作用为对照组;采用MTT法检测Res对人胃癌SGC7901细胞生长的抑制情况,相差显微镜观察细胞形态变化,比色法检测Res对SGC7901细胞Caspase-3活性的影响,流式细胞术检测Res对SGC7901细胞周期的影响.结果:Res对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,且有剂量和时间依赖性,最大抑制率达(53.39±5.32)%;Res作用于SGC7901细胞后可见悬浮细胞增多,细胞胞体缩小、变圆、碎裂,细胞内出现颗粒样物质,在40 μg/ml作用48 h变化最明显;Res能明显上调SGC7901细胞Caspase-3活性,这种作用呈时间与浓度依赖性;流式细胞术发现,Res通过阻滞SGC7901于S期而抑制细胞分裂.结论:Res明显抑制人胃癌SGC7901细胞的生长,其机制可能是与激活Caspase-3从而诱导细胞凋亡、以及影响肿瘤细胞周期有关.     

rAd-p53联合顺铂对胃癌细胞生长及 KAI1／CD82蛋白表达的影响

目的：观察rAd-p53、顺铂（ DDP）单独及联合作用于人胃癌SGC7901细胞后,对肿瘤细胞增殖凋亡情况、KAI1／CD82蛋白表达情况的影响。方法 rAd-p53、DDP单独及联合作用于胃癌SGC7901细胞株24、48、72 h后,CCK-8法测定SGC7901细胞体外增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡率,免疫组化法检测KAI1／CD82蛋白表达情况。结果rAd-p53、DDP单独及联合作用于SGC7901细胞后,细胞增殖被抑制,并呈剂量和时间依赖性,且两药联合组细胞增殖抑制率明显高于单用组,与阴性对照组相比差异均有统计学意义（ P＜0．05）;rAd-p53、DDP单独及两药联合作用SGC7901细胞48h后,细胞凋亡率为36．94％±0．78％、28．79％±2．37％,69．26％±0．63％;rAd-p53、DDP单独及两药联合均可上调KAI1／CD82蛋白表达,且两药联合组更明显。结论 rAd-p53、DDP单独及两药联合均可抑制胃癌SGC7901细胞的生长,诱导其凋亡,二者联合对胃癌细胞的抑制作用增强,rAd-p53可能通过上调KAI1／CD82的表达诱导SGC7901细胞凋亡,同时增强DDP的抗肿瘤作用。     

神经酰胺促胃癌SGC7901细胞凋亡的实验

目的探讨神经酰胺(Ceramide,Cer)对胃癌SGC7901细胞的促凋亡作用及可能作用机制。方法体外培养人胃癌SGC7901细胞,分别给予Cer、顺铂（DDP）;DDP联合Cer作用后,MTT检测单独使用Cer及联合DDP应用对SGC7901细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组织化学染色、Western blot 检测SGC7901细胞NF-κB、Bcl-2、Bax蛋白表达。结果Cer 2.5 μmol/L及以上时可以抑制细胞增殖,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。Cer联合DDP后,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05),q值在24、48、72 h分别为1.05、1.01、0.99。Cer、DDP作用48h可诱导SGC7901细胞凋亡,Cer 5 μmol/L、DDP 2.5 mg/L单独用药组及Cer 5 μmol/L 联合DDP 2.5 mg/L组凋亡率分别为：（39.23±1.62）%、（4727±113）%、（50.13±2.76）%,与对照组［（1846±1.64）%］相比差异有统计学意义（P<0.05）,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05)。NF-κB、Bcl-2在SGC7901细胞中较高表达［（74.10±2.69）%、（69.37±4.54）%］,Bax在SGC7901细胞中表达较低［（2460±373）%］,Cer 5 μmol/L、DDP 25 mg/L单独用药组及Cer 5 μmol/L 联合DDP 2.5 mg/L组NF-κB、Bcl-2阳性表达率降低(65.13±1.71、 62.17±2.12, 44.8±3.65;57.70±2.22、55.13±5.77、37.67±2.14),Bax表达率上调(33.80±1.10、35.50±2.27、51.73±3.76),Bcl-2/Bax 比值降低(1.71±0.10、1.56±0.26、0.73±0.09),与对照组相比差别有统计学意义（P<0.05）,联合用药作用强于单独DDP及Cer组(P<0.05)。相关性分析显示NF-κB与Bcl-2呈正相关（Spearman^,s rho =0.9510,Prob>|t|=0.0000）。结论Cer通过下调NF-κB进而调节Bcl-2/Bax比值诱导SGC7901细胞凋亡。     

CA11对胃癌细胞SGC-70901的放疗增敏作用

目的研究CA11基因对人胃癌细胞株SGC7901放疗增敏的作用。方法以pcDNA3.1-CA11质粒转染人胃癌细胞株SGC7901后对细胞株行放射处理,Western blot、RT-PCR检测凋亡相关酶Caspase-3的表达,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果 pcDNA3.1-CA11质粒转染的SGC7901放疗72 h后Caspase-3在mRNA、蛋白水平表达明显上调,CA11转染组细胞增殖抑制率为(35.41±3.78)%,较对照组的(7.32±0.92)%、空质粒转染组的(10.06±1.47)%,明显升高(均P0.05);CA11转染组细胞凋亡率为(42.19±7.17)%,较对照组的(7.79±1.01)%、空质粒转染组的(20.43±6.24)%,明显升高(均P0.05)。结论 CA11基因对胃癌细胞株SGC7901细胞具有放疗增敏作用。     

多西紫杉醇对胃癌细胞作用及其机制的研究

目的:研究多西紫杉醇对人胃癌中分化细胞株SGC7901的作用效果及机制。方法:MTT法检测多西紫杉醇对胃癌细胞株SGC7901的增殖抑制作用。AnnexinV方法检测药物作用后胃癌细胞的凋亡。PI染色法检测凋亡晚期的胃癌细胞。采用流式细胞仪检测多西紫杉醇作用前后细胞凋亡相关分子Fas蛋白、Bcl2蛋白表达水平的变化。结果:0.92、3.7、14.8、59.2μg/mL多西紫杉醇作用于SGC7901细胞72h,抑制率分别为13.3%、21.6%、57.5%、61.0%。多西紫杉醇可诱导胃癌细胞株SGC7901发生细胞凋亡。多西紫杉醇使SGC7901凋亡分子Fas表达增加,作用前后分别为(26.5±7.2)%、(37.9±7.0)%;多西紫杉醇作用SGC7901前后Bcl2表达分别为(38.9±9.1)%、(31.2±5.6)%,差异无显著性。结论:多西紫杉醇对胃癌中分化细胞株SGC7901生长有明显的抑制作用,可诱导胃癌细胞系SGC7901凋亡,凋亡作用的发生可能与多西紫杉醇诱导Fas分子表达有关。     

重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡影响的观察

目的:观察重楼醇提取物含药血清对胃癌SGC7901细胞增殖和凋亡的影响。方法:以重楼醇提取物不同浓度含药血清培养SGC7901细胞后,以MTT法检测对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测细胞周期和细胞凋亡变化。结果:不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24、48和72h后,细胞生存率显著降低,且与时间和剂量呈依赖关系。不同给药剂量组含药血清作用于SGC7901细胞24h后,细胞阻滞发生在S期;凋亡率分别为(6.67±1.34)%、(13.12±1.34)%和(20.43±1.24)%,联合用药组为(22.61±3.01)%,空白组动物血清组凋亡率(4.35±1.09)%及氟尿嘧啶(5-FU)组(19.22±1.66)%比较,差异均有统计学意义,P<0.01。结论:重楼醇提取物含药血清对SGC7901细胞生长有明显抑制作用,并可诱导SGC7901细胞凋亡。     

氯喹促进顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡及其机制

  目的  研究自噬对顺铂（cisplatin,DDP）诱导的胃癌SGC7901细胞凋亡的影响,并初步探讨其可能机制。  方法  DDP和（或）氯喹处理胃癌SGC7901细胞,MTT法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,MDC染色后荧光显微镜观察自噬囊泡,West. ern Blot检测自噬和凋亡相关蛋白。  结果  5 mg/L的顺铂作用于胃癌SGC7901细胞24 h,细胞凋亡率为21.07%±2.12%,同时观测到自噬囊泡增多和LC3-Ⅱ蛋白表达升高;氯喹特异性抑制自噬活性后,提高了顺铂诱导的细胞凋亡率（30.16%±3.54%,P < 0.05）;检测到凋亡相关蛋白Caspase-3和P53表达增加,Bcl-2蛋白表达下降。  结论  自噬在顺铂诱导胃癌SGC7901细胞凋亡的过程中起保护作用,氯喹抑制自噬后,可能通过激活P53蛋白及灭活Bcl-2蛋白的表达来促进细胞凋亡,联合应用顺铂和氯喹有望成为胃癌治疗的新策略。      

热效应对SGC7901/ADM细胞株耐药基因表达影响及生物学意义的研究

目的:了解热效应对胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM各种多药耐药基因的影响。方法:RT-PCR法检测在不同温度下,对不同药物组的人胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM和对照的人胃癌敏感细胞株SGC7901中多药耐药基因1(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)的mRNA表达。结果:胃癌敏感细胞株SGC7901未检出MDR1、MRP和LRP基因的mRNA,而胃癌耐药细胞株SGC7901/ADM中MDR1增加的倍数最多,MRP次之,LRP无表达。高温43℃下,药物多柔比星(ADM)、5-氟尿嘧啶(5-FU)、紫杉醇(TAX)和顺铂(DDP)组MDR1mRNA表达水平分别下降0.19(P=0.000 1)、0.13(P=0.012 1)、0.15(P=0.000 4)和0.12(P=0.000 4),与未加温组相比差异有统计学意义,P<0.05。高温后5-FU、TAX组MRP的mRNA表达水平均降低0.04(P值分别为0.013 4和0.019 6),而ADM、DDP组差异无统计学意义,P值分别为0.633 5和0.664 1。结论:高温的短期处理对MDR mRNA的表达有明显的抑制作用,对MRP则为部分抑制作用,LRP无表达。     

下调RPL23对胃癌耐药细胞SGC7901/ADR药物敏感性的影响

目的:检测人胃癌细胞系SGC7901及其阿霉素（ADR）耐药细胞系SGC7901/ADR中RPL23的表达差异,探讨胃癌细胞中RPL23表达对ADR耐药的影响。方法:qPCR检测RPL23在SGC7901/ADR与SGC7901两种细胞系中的表达差异;MTT法检测下调RPL23后SGC7901/ADR细胞对ADR的敏感性;流式细胞仪检测下调RPL23后对细胞凋亡的影响;Western Blot检测凋亡相关分子Bcl-2和Caspase-3蛋白的表达。结果:qPCR结果显示,RPL23在 SGC7901/ADR细胞系中的表达高于其在SGC7901细胞系中的表达(P＜0.001)。MTT法结果显示,下调RPL23后,在SGC7901/ADR细胞系中ADR的IC50明显升高(P＜0.001)。凋亡检测结果显示,下调RPL23后,SGC7901/ADR细胞凋亡率明显增加(P＜0.001)。Western Blot结果显示,下调RPL23后,细胞中Caspase-3表达明显升高,Bcl-2表达明显降低。结论:RPL23在SGC7901/ADR中的表达高于SGC7901细胞,下调RPL23表达可提高其对ADR的敏感性并促进细胞凋亡,提示RPL23可能通过作用于Bcl-2调节细胞凋亡。     

MicroRNA-130a调节胃癌细胞SCG7901/DDP的耐药机制研究

目的:探讨microRNA-130a（miR-130a）在胃癌耐药细胞中的表达,并对进一步作用的机制进行研究。方法:采用体外转染法将miR-130a模拟物或抑制剂分别瞬时转染到SCG7901和SCG7901/DDP细胞后,应用Real-time PCR检测转染前后细胞中miR-130a的表达情况;CCK8实验检测转染前后细胞对顺铂（DDP）敏感性的变化;并用Western blot检测转染前后细胞中PETN的表达变化。结果:MiR-130a在SGC7901／DDP中的表达水平是SGC7901细胞的（8.33±1.21）倍（P＜0.01）。SGC7901转染miR-130a mimics后,细胞中miR-130a表达水平是转染前的（5.52±1.65）倍（P＜0.01）,DDP对SGC7901增殖的抑制率较转染前明显下降（P＜0.01）,细胞内PTEN表达水平较转染前明显下降（P＜0.01）。SCG7901/DDP在转染miR-130a inhibitor 后,细胞中miR-130a表达水平是转染前的（0.18±0.04）倍（P＜0.01）,DDP对SCG7901/DDP增殖的抑制率与转染前比较明显增加（P＜0.01）,细胞内PTEN表达水平较转染前明显增高（P＜0.01）。结论:MiR-130a通过下调PTEN的表达来调节胃癌细胞对DDP的耐药。