法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨法舒地尔对胃癌MGC-803细胞增殖、侵袭和迁移的影响及可能机制。方法 采用不同浓度的法舒地尔处理胃癌MGC-803细胞,检测细胞数目;选择无显著细胞毒性的3组浓度（10、25、50 μmol／L）法舒地尔进行后续实验,将经药物处理的胃癌MGC-803细胞作为处理组,而未经药物处理的胃癌MGC-803 细胞作为对照组;细胞培养0、24、48、72、96 h后,CCK-8法检测细胞增殖倍数;划痕实验检测细胞迁移能力;Transwell法检测细胞侵袭能力;Western blotting检测细胞中血管内皮细胞生长因子（VEGF）、基质金属蛋白酶9（MMP-9）、基质金属蛋白酶14（MMP-14）和上皮间质转化（EMT）的标志蛋白波形蛋白（Vimentin）和上皮型钙黏蛋白（E-cadherin）的表达水平。结果 CCK-8法检测结果显示,法舒地尔以剂量依赖性的方式抑制胃癌MGC-803细胞的生长,法舒地尔浓度越高,处理组的细胞数量越少,增殖倍数明显降低（P＜0.01）;划痕实验结果表明,处理组伤痕愈合率明显较对照组降低,且法舒地尔浓度越高,处理组伤痕愈合率越低（P＜0.01）;Transwell结果显示,与对照组比较,处理组侵袭的细胞数目明显减少（P＜0.01）;与对照组比较,法舒地尔明显下调VEGF、MMP-9、MMP-14和Vimentin蛋白的表达水平,而上调E-cadherin蛋白的表达水平。结论 法舒地尔可抑制胃癌MGC-803细胞的的增殖、迁移和侵袭能力,降低MMP-9、MMP-14、VEGF表达水平,为胃癌的治疗研究提供新思路和理论基础。     

去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化的影响及对癌细胞迁移、侵袭的作用

摘 要：［目的］ 观察去泛素化酶USP33对胃癌上皮细胞-间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）及细胞迁移侵袭能力的影响,并探究其作用机制。［方法］ qRT-PCR法检测胃癌上皮细胞MGC-803、SGC-7901和人胃黏膜上皮细胞GES-1中去泛素化酶USP33的表达。MGC-803和SGC-7901细胞转染USP33-siRNA沉默USP33基因表达,qRT-PCR检测沉默效率,使用转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）信号通路抑制剂SB431542处理沉默USP33后的MGC-803和SGC-7901细胞,MTT法检测细胞增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot法检测细胞E-钙黏蛋白（E-cadherin）、N-钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）、TGF-β、Smad2和α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）的表达水平。［结果］ qRT-PCR检测结果显示,与GES-1细胞比较,MGC-803、SGC-7901细胞中USP33表达水平显著性降低。MTT实验、划痕实验和Transwell实验检测结果显示,USP33基因敲低后,MGC-803、SGC-7901细胞的增殖、迁移和侵袭能力显著性提高。Western blot检测结果显示,沉默USP33可使MGC-803和SGC-7901细胞E-cadherin表达降低,N-cadherin、Vimentin、TGF-β、Smad2和α-SMA表达升高,而TGF-β抑制剂SB431542则逆转了这一现象,上述指标差异均有统计学意义（P＜0.05）。［结论］ USP33能够抑制胃癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT转化,沉默USP33可增加其增殖、迁移和侵袭能力并促进EMT转化过程,其作用机制与抑制TGF-β信号通路的活化有关。     

姜黄素对人胃癌细胞SGC-7901的影响

目的 探讨姜黄素对人胃癌细胞SGC-7901的影响.方法 人胃癌细胞SGC-7901接受不同浓度姜黄素处理,然后采用MTT法测定人胃癌细胞SGC-7901的增殖,Boyden chamber侵袭小室测定细胞侵袭能力,划痕实验测定细胞迁移能力.结果 姜黄素能够抑制人胃癌细胞SGC-7901增殖,且作用与药物浓度有关(P＜0.05),浓度越大,抑制能力越强;姜黄素能够抑制人胃癌细胞SGC-7901侵袭、迁移,且作用与药物浓度有关(P＜0.05),浓度越大,抑制能力越强.结论 姜黄素能够抑制人胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭、迁移,且这种作用具有剂量依赖性.     

lncRNA 00707 通过miR-613 调控胃癌MGC-803、SGC-7901 细胞的恶性生物学行为

[摘要] 目的:探讨长链非编码RNA 00707（lncRNA 00707）和微小RNA-613(miR-613)对胃癌细胞增殖和转移的调控作用及其相关机制。方法：收集2014 年1 月至2018 年6 月青海省人民医院肿瘤外科89 例原发性胃癌组织及癌旁组织标本以及胃癌MGC-803、SGC-790、BGC-823 细胞,采用qPCR实验检测胃癌组织和细胞系中lncRNA 00707、miR-613 的表达水平。分别建立lncRNA00707 低表达和过表达细胞模型,采用CCK-8 实验检测MGC-803、SGC-7901 细胞增殖能力,Transwell 法检测MGC-803、SGC-7901 细胞迁移和侵袭能力。用双荧光素酶基因报告实验验证lncRNA 00707 与miR-613 的靶向关系。结果：与癌旁组织相比,胃癌组织中lncRNA 00707 呈明显高表达(P<0.01),lncRNA 00707 表达水平与WHO分期呈正相关(P<0.05);与正常细胞系GES-1 相比,胃癌细胞系中lncRNA 00707 表达明显上调(P<0.05)。敲低lncRNA 00707 可明显抑制SGC-7901 细胞的增殖、侵袭和迁移能力(均P<0.05);lncRNA 00707 过表达可明显提高MGC-803 细胞的增殖和迁移能力(P<0.05)。与阴性对照组相比,lncRNA00707 过表达显著降低了miR-613 荧光素酶报告载体的荧光素酶活性,而下调MGC-803 和SCG-7901 细胞中lncRNA 00707,miR-613 的表达显著增加（均P＜0.01）。结论：lncRNA 00707 在胃癌组织和细胞系中发挥促癌效应,其可以通过抑制miR-613 而促进胃癌MGC-803 和SCG-7901细胞的增殖和转移。     

川陈皮素抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的机制探讨

目的:观察川陈皮素（nobiletin,Nob）对胃癌SGC-7901细胞侵袭能力的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:不同浓度的川陈皮素（0、30、60、120 mg/L）体外处理SGC-7901细胞。CCK8法检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测细胞侵袭能力的改变;免疫印迹法检测细胞上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物（E-cadherin、Vimentin、Fibronectin）蛋白、MMP-9、STAT3、p-STAT3蛋白表达的改变。结果:CCK8和Transwell小室法检测结果显示,与对照组（0 mg/L）比较,川陈皮素可显著抑制SGC-7901细胞的增殖和侵袭能力;免疫印迹结果显示,随着川陈皮素浓度的增加,SGC-7901细胞E-cadherin蛋白表达逐渐上调,同时Vimentin、Fibronectin蛋白的表达量降低,MMP-9蛋白表达下调,STAT3总量未发生变化,但p-STAT3表达逐渐降低。结论:川陈皮素可降低胃癌SGC-7901细胞侵袭能力,其机制可能为通过抑制STAT3通路,继而抑制EMT。     

胃癌细胞外泌体调控M2型巨噬细胞极化及对胃癌细胞增殖和迁移的影响

目的:探究胃癌细胞外泌体调控M2型巨噬细胞极化及对胃癌细胞增殖和迁移能力的影响。方法:差速离心法提取胃黏膜上皮细胞GES-1和胃癌细胞株MGC-803、SGC-7901外泌体,透射电镜和Western blot鉴定外泌体,将U937细胞与PMA共孵育诱导U937细胞分化为巨噬细胞的同时分别与PBS、GES-1 exo、MGC-803 exo、SGC-7901 exo、IL-4孵育48 h,流式细胞术检测孵育后各组细胞CD206和HLA-DR表达,qRT-PCR检测CCL17、CXCL8、IL-10、TGF-β、TNF-α、IL-6、IL-1β表达,Western blot检测p-NF-κB、NF-κB、IκBα表达水平,将各组诱导后的U937细胞与MGC-803、SGC-7901共培养后,收集MGC-803、SGC-7901细胞,MTT检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法检测各组细胞的迁移能力。结果:差速离心法提取的外泌体符合外泌体的形态特征,并且在激光共聚焦显微镜下观察到外泌体可被U937细胞摄取,与MGC-803 exo、SGC-7901 exo共孵育后的U937细胞CD206显著高表达,HLA-DR低表达（P＜0.05）,CCL17、CXCL8、IL-10、TGF-β表达显著上调（P＜0.05）,TNF-α、IL-6、IL-1β表达显著下调（P＜0.05）,NF-κB磷酸化水平显著增加（P＜0.05）,IκBα表达显著增加（P＜0.05）,并且与MGC-803 exo、SGC-7901 exo诱导极化后的巨噬细胞共培养组MGC-803、SGC-7901细胞增殖和迁移能力显著增强（P＜0.05）。结论:胃癌细胞能够通过激活NF-κB信号通路促进M2型巨噬细胞极化进而诱导MGC-803、SGC-7901细胞增殖和迁移能力的增强。     

康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用

目的探讨康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的抑制作用。方法胃癌细胞SGC-7901接受不同浓度康艾注射液,然后采用MTT法测定各组胃癌细胞SGC-7901的增殖情况,Boyden chamber侵袭小室测定各组胃癌细胞SGC-7901侵袭能力,划痕实验测定各组胃癌细胞SGC-7901迁移能力。结果康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901增殖的抑制与药物浓度有关(P<0.05),浓度越大,抑制能力越强;康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901侵袭、迁移的抑制与药物浓度有关(P<0.05),浓度越大,抑制能力越强。结论康艾注射液对胃癌细胞SGC-7901的增殖、侵袭、迁移均有抑制作用,且具有剂量依赖性。     

HDAC在PPARγ途径抑制胃癌SGC-7901细胞侵袭中的作用

背景与目的:有研究表明组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)能抑制过氧化物酶体增殖物激活受体-γ(peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)促进脂肪细胞分化的能力;最近发现PPARγ活化后,能够抑制多种肿瘤细胞的生长与侵袭.本研究旨在观察HDAC在PPARγ途径影响胃癌细胞株SGC-7901侵袭能力中的作用及机制.方法:用不同浓度的HDAC抑制剂曲古抑菌素A(TSA)和PPARγ配体罗格列酮(ROZ)分别作用于SGC-7901细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测两种药物对细胞增殖的抑制作用,以筛选出合适的联合浓度.将SGC-7901细胞随机分为对照组、TSA组、ROZ组和TSA与ROZ联合组.MTY法检测细胞增殖抑制率,Transwell小室法检测各组胃癌细胞侵袭能力,RT-PCR法检测各组细胞PPARγ、MMP-2 mRNA表达情况,Western blot检测MMP-2蛋白的表达.结果:5 μmol/L ROZ和40 nmol/LTSA为无明显细胞毒性作用的最高浓度,低于此浓度的ROZ及TSA可减弱SGC-7901细胞的侵袭能力(P<0.01).5 μmol/L ROZ与20 nmol/L TSA联合作用对SGC-7901细胞的侵袭抑制旱协同作用(q=1.41>1.15).ROZ可以下调SGC-7901细胞MMP-2 mRNA和蛋白的表达(P<0.01),TSA与ROZ联合处理组细胞MMP-2表达下调较单用ROZ组明显(P<0.01).RT-PCR结果显示,TSA作用SGC-7901细胞后,可使PPARγ表达增加(P<0.01).结论:HDAC通过一系列分子机制限制PPARγ的激活,应用TSA抑制HDAC活性后,可以使ROZ抑制胃癌细胞的侵袭活性增强.     

干扰FBXO2表达对胃癌细胞增殖、侵袭、迁移及EMT的影响

目的：探讨F框蛋白2（F-box only protein 2,FBXO2）基因在人胃癌细胞系中表达及其对胃癌细胞增殖、迁移、侵袭和EMT 的影响。方法：选择胃癌细胞系 MGC-803、AGS、SGC-7901、MKN-28以及正常胃黏膜上皮细胞株 GES-1,qPCR 法检测细胞中FBXO2 mRNA表达水平。设计靶向抑制FBXO2表达的特异siRNA,并瞬时转染MGC-803细胞,转染siRNA无义序列的为阴性对照。qPCR法检测转染48 h后MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达水平;用MTT法、细胞划痕愈合法、Transwell小室法检测降低 FBXO2表达对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,WB 法检测细胞中 EMT 相关蛋白 E-cadherin、N-cadherin、vimentin的表达。结果：4种胃癌细胞中FBXO2 mRNA表达水平显著高于胃黏膜上皮细胞GES-1（P<0.05或P<0.01）。与阴性对照组相比,siRNA[1]FBXO2组MGC-803细胞中FBXO2 mRNA表达下调（P<0.01）,该细胞的增殖、迁移和侵袭能力受到显著抑制（P<0.05或P<0.01）,E-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.01）,N-cadherin、vimentin蛋白表达显著降低（均 P<0.01）。结论：低表达的 FBXO2可抑制胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,该抑制作用可能与EMT过程有关。     

CDKL1对胃癌细胞迁移及侵袭的作用

目的:探讨细胞周期素依赖激酶样蛋白1(CDKL1)对胃癌细胞系SGC7901迁移及侵袭的作用.方法:将胃癌细胞系SGC7901分为实验组及对照组,采用慢病毒转染siRNA至胃癌细胞构成实验组,转染无意义序列作为对照组.通过细胞划痕实验检测胃癌SGC7901细胞的迁移能力;Transwell小室实验检测其侵袭能力;Western blot检测CDKL1低表达后对胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白表达的影响.结果:与对照组相比,CDKL1低表达后实验组细胞迁移及侵袭能力明显降低(P＜0.05),实验组胃癌细胞中AEG-1和MMP-9蛋白的表达水平明显下降(P＜0.05).结论:特异性下调CDKL1基因可抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,表明CDKL1基因可促进胃癌细胞的侵袭以及转移,并且与AEG-1和MMP-9密切相关.     

Src激酶抑制剂PP2对人胃癌细胞生物学行为的影响

目的:探讨Src激酶抑制剂PP2对人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.方法:通过Western印迹法检测PP2作用对SGC-7901细胞中Src激酶活化的影响;分别采用MTT法、划痕实验、Transwell小室法和体外诱导血管形成分析实验观察PP2对SGC-7901细胞生长、迁移、基质侵袭和诱导血管形成等生物学行为的影响.结果:MTT法检测结果提示,15 μmol/L PP2作用人胃癌SGC-7901细胞12 h时能明显抑制细胞的增殖;5和10 μmol/L PP2均能抑制SGC-7901细胞的迁移、侵袭和诱导血管的形成,且其抑制能力随PP2浓度的增加而逐渐增强.结论:Src激酶抑制剂PP2具有抑制人胃癌SGC-7901细胞生长、迁移、侵袭和诱导血管形成的能力,可能对胃癌具有一定的治疗效果.     

阿苯达唑对胃癌细胞MKN-45迁移及侵袭能力的影响

目的:阿苯达唑(Albendazole ,ABZ)是一种苯并咪唑类广谱抗寄生虫药物,已在多种癌细胞中证实具有抗肿瘤作用,但其对胃癌细胞的作用鲜有报道。本文探讨其对人胃癌细胞MKN-45的迁移、侵袭能力的影响以及可能的分子机制。方法:用不同浓度ABZ处理人胃癌MKN-45细胞,采用细胞划痕实验,Transwell 小室实验检测细胞的迁移侵袭能力, Western blot法检测MKN-45细胞中E-cadherin和MMP-9蛋白的表达水平,ELISA法检测细胞VEGF分泌水平。结果:阿苯达唑作用于人胃癌细胞MKN-45后,细胞划痕愈合的程度及Transwell穿膜细胞数随浓度增加有不同程度的改变,0.25、0.5μmol/L ABZ可显著抑制细胞迁移率（F=39.311,P＜0.01）,减少迁移细胞数（F=11.331,P＜0.01）及侵袭细胞数（F=7.671,P＜0.01）;经ABZ处理的MKN-45细胞E-cadherin蛋白表达水平上调而MMP-9蛋白表达水平明显下调,VEGF分泌水平明显下降。结论:阿苯达唑可能通过上调E-cadherin及下调MMP-9表达水平来抑制胃癌细胞的迁移及侵袭能力,并能抑制胃癌细胞VEGF的分泌。     

蒿甲醚对胃癌细胞增殖、侵袭和迁移的抑制作用研究

目的:研究蒿甲醚对胃癌细胞（AGS和SGC-7901）的增殖、侵袭以及迁移的影响并探讨其分子机制。方法:分别利用MTT、集落形成试验检测胃癌细胞的活力和生长;流式细胞技术检测胃癌细胞的凋亡率;利用细胞侵袭和划痕愈合试验检测胃癌细胞的侵袭和迁移;Western blot检测相关蛋白的表达水平。结果:蒿甲醚（0~800 μmol/L）能够浓度和时间依赖性的抑制 AGS和SGC-7901细胞的增殖（P＜0.05）。集落形成试验以及流式细胞术结果显示蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的生长以及促进细胞凋亡（P＜0.05）。细胞侵袭和划痕愈合试验发现蒿甲醚（400 和 600 μmol/L）能够抑制AGS和SGC-7901细胞的侵袭和迁移（P＜0.05）。Western blot结果显示蒿甲醚(400 和 600 μmol/L)能够增加AGS和SGC-7901细胞的cleaved caspase-3,cleaved caspase-9以及Bax的蛋白水平（P＜0.05）;同时能够抑制N-cadherin 和vimentin的蛋白表达并促进E-cadherin蛋白的表达。结论:蒿甲醚可以显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭以及迁移,其机制可能是与促进细胞凋亡以及抑制上皮间质转化有关。     

阿苯达唑抑制结肠癌SW480细胞的侵袭和迁移能力及其可能的机制

目的：探索阿苯达唑（albendazole）抑制结肠癌SW480细胞侵袭和迁移能力及其可能的机制。方法：体外培养人结肠癌SW480细胞,用不同质量浓度(0、1.0和2.0 mg/ml)的albendazole处理人结肠癌SW480细胞,CCK-8法检测albendazole对结肠癌SW480细胞增殖能力的影响,采用细胞划痕实验、Transwell小室实验检测细胞的迁移侵袭能力,免疫细胞化学及Western blotting检测SW480细胞中E-cadherin、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,albendazole各质量浓度（1.0和2.0 mg/ml）组细胞的增殖能力明显降低,SW480细胞侵袭细胞数显著下降\[ （51.33±3.96）、（23.42±403）vs （80.76±7.18）个/视野,F=3.975, P=0.026\];而且细胞迁移能力显著下降\[（9.6±1.13）、（6.4±0.81）vs （19.6±1.41） mm;F=5.012, P=0.023\];E-cadherin蛋白表达水平上调,MMP-2、MMP-9蛋白表达水平明显下调。结论：Albendazole能显著抑制SW480细胞增殖,并通过上调E-cadherin的表达水平和下调MMP-2和MMP-9的分泌水平抑制细胞的侵袭和迁移能力。     

胃癌细胞基质金属蛋白酶-2、9的表达及对细胞迁移的影响

 目的 研究基质金属蛋白酶 2、9(matrix metalloproteinase 2、9, MMP-2、9)在胃癌细胞株HGC-27和SGC-7901的表达及对细胞迁 徙转移的影响。 方法 采用Real time PCR检测MMP-2、9 mRNA的含量;以ELISA检测培养上清液中 MMP-2、9的相对浓度;通过明胶酶谱法测定培养上清液中的MMP-2、9比活。用Transwell小室迁徙实验、同质黏附和异质黏附实验比较两株细胞体外迁徙黏附能力。 结果 HGC-27中 MMP-2 和MMP-9 mRNA含量高于SGC-7901。HGC-27上清液 MMP-2、9相对浓度均高于SGC-7901,且MMP-2比活高于SGC-7901,两株细胞MMP-9比活相近。HGC-27穿膜细胞数和异质黏附细胞数高于SGC-7901,同质黏附细胞数低于SGC-7901,差异均有统计学意义（P<0.05）。 结论 迁徙和异质黏附能力较强、同质黏附能力较弱的胃癌细胞HGC-27的MMP-2、9表达较强,提示MMP-2、9高表达可能促进胃癌细胞迁徙转移。     

肿瘤相关巨噬细胞对胃癌MGC-803 细胞恶性生物学行为的影响

[摘要] 目的：探讨肿瘤相关巨噬细胞（tumor-associated macrophage，TAM）对胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移、侵袭、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法：体外培养人单核细胞株THP-1，加入佛波酯（PMA）和IL-4 后，用ELISA法检测细胞培养上清液中IL-12、IL-10 的水平。取对数生长期MGC-803 细胞和M2 型TAM，根据培养方式不同分为单独细胞培养组、非接触共培养组和接触共培养组，用MTT法、Transwell小室法分别检测MGC-803 细胞的增殖、迁移和侵袭能力，用AnnexinV-FITC/PI 双染流式细胞术检测MGC-803 细胞的凋亡和细胞周期变化，用qPCR、Western blotting 分别检测MGC-803 细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平。结果：与PMA组相比，PMA+IL-4 组细胞上清液中IL-12 水平显著降低、IL-10 水平显著升高（均P<0.05），成功将THP-1细胞诱导分化为M2型TAM。与单独细胞培养组相比，非接触共培养组、接触共培养组（: 1）MGC-803细胞的增殖率显著升高（均P<0.05）；（2）细胞的迁移、侵袭数量升高（均P<0.05）；（3）细胞凋亡率显著降低（均P<0.05）；（4）S、G2 期细胞的数量升高、G1 期数量降低（均P<0.05）；（5）细胞中MMP-9、MMP-2 mRNA和蛋白的表达水平均显著升高（均P<0.05）。结论：TAM可促进胃癌MGC-803 细胞增殖、迁移和侵袭，解除细胞G1期阻滞，减少细胞凋亡，其机制可能与上调胃癌细胞MMP-9、MMP-2表达有关。     

干扰LOX表达对MDA-MB-231细胞侵袭迁移影响及其机制的探讨

目的:研究干扰赖氨酰氧化酶(LOX)基因表达对乳腺癌细胞MDA-MB-231体外侵袭迁移能力的影响,并探讨相关机制及意义。方法:设计合成特异性慢病毒干扰载体(LOX-RNAi-LV)转染MDA-MB-231细胞,实时定量PCR检测LOX mRNA和侵袭转移相关因子MMP-2、MMP-9和HIF-1α的mRNA表达,蛋白质印迹法检测LOX蛋白表达,细胞侵袭迁移实验(Transwell)检测细胞侵袭迁移能力。结果:转染LOX-RNAi-LV后,乳腺癌MDA-MB-231细胞LOXmRNA和蛋白表达水平明显降低,与空白组相比,抑制率分别为89.2%和82.97%。MMP-2(F=225.271,P=0.0000)、MMP-9(F=35.373,P=0.000 01)和低氧诱导因子HIF-1α(F=341.081,P=0.0000)的mRNA表达均明显降低。细胞侵袭迁移实验显示,干扰组穿过Transwell小室滤过膜的细胞数明显少于对照组(侵袭实验F=269.557,P=0.000 5;迁移实验F=164.321,P=0.000 3)。结论:转染LOX-RNAi-LV能有效地干扰LOX在乳腺癌细胞MDA-MB-231中表达,抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力,其作用机制可能与下调MMP-2、MMP-9和HIF-1α表达有关。     

丙酮酸乙酯通过下调蛋白激酶B通路抑制人胃癌细胞侵袭转移的研究

目的探讨丙酮酸乙酯（EP）对人胃癌SGC-7901细胞侵袭转移的抑制效果及机制。方法噻唑蓝比色分析法 (MTT法)测定EP在胃癌SGC-7901细胞中的半数抑制浓度(IC50)。不同浓度EP加入到胃癌细胞后,实时定量PCR检测蛋白激酶B（Akt）的mRNA表达水平;Western blot检测Akt、p-Akt、基质金属蛋白酶-2 (MMP-2)和MMP-9的蛋白表达水平。划痕和Transwell实验评价胃癌细胞侵袭转移的能力。通过建立裸鼠皮下移植瘤模型,免疫组织化学进一步验证以上蛋白的表达水平。结果EP在胃癌SGC-7901细胞中的IC50为36.73 mmol/L。EP抑制Akt mRNA的表达及下调Akt、p-Akt、MMP-2和MMP-9的蛋白表达。划痕实验显示EP可抑制胃癌细胞的迁移运动能力;Transwell显示,与对照组（93.33±4.16）相比,EP 10 mmol/L组（75.34±4.73）、EP 20 mmol/L组（61.34±3.06）及EP 40 mmol/L组（39.00±3.00）的侵袭转移细胞数明显减少 (P均<0.001)。免疫组组织化学进一步证实了Western blot的检测结果。结论EP通过下调Akt通路抑制人胃癌细胞的侵袭和转移,对癌症具有一定的治疗效果。     

沉默乙酰肝素酶对人胃癌细胞侵袭迁移能力的影响

目的:探讨RNA干扰沉默乙酰肝素酶(heparanase, HPA)基因表达对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移的影响.方法:根据人HPA基因序列转录RNA的位置及小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)设计原则,设计了4个靶位点,并构建了4个分别针对靶位点的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)的质粒表达载体,同时合成了阴性和阳性对照质粒表达载体.采用阳离子脂质体法将以上质粒转染入人胃癌SGC-7901细胞,分别采用RT-PCR和Western印迹法检测转染前后HPA mRNA和蛋白表达的变化,选出对HPA沉默效果最佳的质粒,再应用Transwell小室基质侵袭实验和划痕损伤实验分别研究HPA表达沉默后对人胃癌SGC-7901细胞侵袭和迁移能力的影响.结果:质粒载体pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085沉默人胃癌SGC-7901细胞HPA mRNA和蛋白表达的效果最好.pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组中穿透Transwell小室基质的SGC-7901细胞数(289.90±18.11)明显高于对照组(44.00±15.22) (P<0.05),SGC-7901细胞的迁移距离在48、72和96 h内 pGPU6/GFP/Neo-HPA-1085转染组明显低于对照组(P<0.05). 结论:RNA干扰技术可沉默人胃癌SGC-7901细胞中HPA mRNA和蛋白表达,从而抑制SGC-7901细胞的侵袭和迁移能力.HPA可能是治疗胃癌侵袭和转移的一个新靶点.     

miR-99b通过下调mTOR的表达抑制胃腺癌细胞系SGC-7901的增殖及迁移

目的:探讨hsa-miR-99b在胃腺癌细胞系的表达及其影响胃腺癌细胞系增殖和迁移的潜在作用机制.方法:Real-time PCR检测miR-99b在人胃上皮细胞系GES-1和人胃腺癌细胞系SGC-7901、BGC-823、MGC-803中的表达.用人工合成的miR-99b模拟物转染SGC-7901细胞构建过表达miR-996细胞系,转染对照模拟物作为对照组,CCK-8法检测过表达miR-99b的SGC-7901细胞的增殖情况,Transwell法检测SGC-7901细胞系的迁移情况,Western blotting检测SGC-7901细胞系中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)的表达情况.结果:miR-99b在胃腺癌细胞系中的表达水平显著低于胃上皮细胞系,其中以SCG-7901细胞最甚.转染miR-99b模拟物48 h后,实验组SCG-7901细胞增殖能力低于对照组(0.20±0.00 vs 0.27±0.02,P＜0.05);与转染对照模拟物的细胞相比,转染24 h后,实验组SCG-7901穿膜细胞数低于对照组[(226.67 ±25.17) vs (523.33±25.17)个,P＜0.05].miR-99b可下调人胃腺癌细胞系SGC-7901中mTOR蛋白的表达.结论:miR-99b在胃腺癌细胞系中的表达明显下调,miR-99b抑制人胃腺癌细胞系SGC-7901增殖和迁移的作用可能与下调mTOR表达有关.