DNA甲基转移酶基因在MDS患者中的表达及其临床意义

研究DNA甲基转移酶（DNA methyltransferase,DNMT）基因在骨髓增生异常综合征（MDS）患者中的表达及其与抑癌基因p15INK4B甲基化状态的相关性,并进一步探讨其与临床预后的关系。方法:采用SYBR Green I实时定量逆转录聚合酶链反应（Real-time RT-PCR）方法对48例初治MDS患者和20例正常人骨髓进行DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA水平检测;采用甲基化特异性PCR（MSP-PCR）方法检测48例初治MDS患者和20例正常人p15INK4B基因的甲基化状态。结果:低危组MDS患者3种DNMTs mRNA与正常对照组相比,表达水平差异均无统计学意义（P>0.05）;高危组MDS患者3种DNMTs mRNA表达显著高于低危组和正常对照组（P均<0.01）;MDS患者DNMTs mRNA表达水平与p15INK4B基因甲基化程度呈正相关。12例高危MDS患者接受了地西他滨治疗,另外15例高危MDS患者接受了IA/DA联合化疗,地西他滨组疗效与联合化疗组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论:DNMTs基因的异常高表达,导致细胞周期调控相关的p15INK4B等抑癌基因启动子CpG岛过甲基化失活,在MDS患者由低危向高危转变乃至进展为急性髓系白血病（AML）过程中,起着至关重要的作用,DNMTs mRNA表达水平可以作为一种判断MDS预后的指标。      

乳腺癌组织中DNA甲基化转移酶与多药耐药基因ABCG2表达的关系

背景与目的:研究乳腺癌组织中DNA甲基化转移酶(DNA methyltransferase,DNMT)与多药耐药基因ABCG2表达的关系,以进一步探讨ABCG2表达的表观遗传学机制.材料与方法:用实时定量RT-PCR法检测22例乳腺癌及其匹配的癌旁组织中DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和ABCG2的表达.并采用Spearman等级相关分析DNMTs与ABCG2基因表达的相关性.结果:乳腺癌组织中ABCG2、DNMT1、DNMT3A、DNMT3B mRNA表达量显著高于癌旁组织(P<0.01),并且DNMT3B表达量显著高于DNMT1和DNMT3A(P<0.01),与ABCG2基因表达呈负相关性(r=-0.664,P<0.01). 结论:乳腺癌组织中DNMT3B可能参与了ABCG2基因的表达调控,这为寻找药物靶点并逆转其介导的药物耐受提供了新的科学依据.     

肝细胞癌p16基因甲基化及其对mRNA表达的影响

目的:探讨肝细胞癌p16基因甲基化状态和对mRNA表达的影响。方法:采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)法和逆转录聚合酶链反应技术(RT-PCR)分别检测了25例肝细胞癌及其相应的癌旁组织p16基因甲基化和mRNA表达状况。结果:25例肝细胞癌组织中检出13例甲基化,甲基化率为52.0%,相应的癌旁组织有6例甲基化,甲基化率为24.0%;25例肝细胞癌组织中,mRNA表达10例(表达率40.0%),相应的癌旁组织其mRNA表达19例(表达率76.0%),肝细胞癌组织和癌旁组织的甲基化率及mRNA表达,两者之间差异有显著性。结论:p16基因甲基化是肝细胞癌频发事件,p16基因甲基化导致mRNA表达缺失,p16基因甲基化检测可作为肝细胞癌分子诊断标志。     

甲基转移酶DNMT3b和SPG20甲基化在肺腺癌中的相关性研究

  目的  探讨肺腺癌组织中DNA甲基转移酶3b（DNMT3b）表达与SPG20甲基化水平,分析二者相关性及在肺腺癌发病机制中的临床意义。  方法  收集2020年4月至2021年4月于承德医学院附属医院收集的70例肺腺癌和癌旁组织,采用焦磷酸测序检测SPG20基因甲基化水平,采用实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测SPG20和DNMT3b mRNA的表达,采用免疫组织化学法及Western blot检测SPG20和DNMT3b的蛋白表达。统计分析SPG20甲基化水平与DNMT3b相关性及两者与临床病例特征的相关性。构建DNMT3b下调si-RNA,采用脂质体介导法,将DNMT3b si-RNA、阴性对照si-RNA和空白对照组转染A549细胞。使用RT-qPCR和Wesrern blot检测DNMT3b mRNA和蛋白表达水平,采用焦磷酸测序检测各组SPG20基因甲基化水平。  结果  在癌组织和癌旁组织中,SPG20基因甲基化率分别为76.25%±5.74%和13.45%±2.41%,SPG20 mRNA相对表达量为0.18±0.03和1.21±0.17,差异具有统计学意义（均P<0.05）。DNMT3b mRNA相对表达量为1.62±0.27,高于癌旁组织的0.32±0.05;免疫组织化学检测结果显示SPG20蛋白表达阳性率分别为27.14%和72.86%,差异具有统计学意义（P<0.05）;DNMT3b蛋白表达阳性率分别为75.71%和22.86%,差异具有统计学意义（P<0.05）。Western blot检测结果显示DNMT3b在癌组织中表达为68.57%±3.18%,高于癌旁组织25.29%±1.35%;SPG20在癌组织中表达为16.87%±1.56%,低于癌旁组织的58.75%±2.68%,差异均具有统计学差异（均P<0.05）。肺腺癌组织中SPG20甲基化和DNMT3b具有相关性（r=0.437,P<0.05）;SPG20甲基化和DNMT3b与肿瘤TNM分期、组织分化和淋巴结转移密切相关（P<0.05）。体外实验显示,RNA干扰后DNMT3b si-RNA组中DNMT3b mRNA表达量最低,SPG20基因甲基化率明显下降。  结论  在肺腺癌病变过程中,DNMT3b与SPG20基因甲基化存在明显的相关性,DNMT3b高表达可能是SPG20基因甲基化前重要的分子事件,在肺腺癌早期病变诊治中具有潜在应用价值。      

肝细胞癌多基因甲基化异常及其临床意义

目的 探讨肝细胞癌中多基因甲基化异常的发生率,研究肝细胞癌中多基因甲基化异常的临床意义.方法 收集60例肝细胞癌及相应的癌旁组织、16例肝炎后肝硬化组织、5例慢性肝炎和5例正常肝组织,筛选消化道肿瘤中APC、RASSF1A、p16、GSTP1、MGMT、DAPK、SOCS-1和RIZ18个甲基化异常频率高的肿瘤抑制基因,应用甲基化特异件聚合酶链反应(MSP)检测8个肿瘤抑制基因在所有标本中的甲基化状态.比较不同基因甲基化与非甲基化肝细胞癌患者的临床病理特征和生存情况.结果 肝细胞癌组织中,RASSF1A、APC、GSTP1、p16、RIZ1和MGMT基因的甲基化率分别为95.0%、90.0%、73.3%、65.0%、61.6%和60.0%,均高于相应的癌旁组织(均P＜0.05);癌旁组织中,MGMT、GSTP1和RIZ1基因的甲基化率分别为41.6%、40.0%和25.0%,均高于肝硬化组织(均P＜0.05).p16基因甲基化的肝细胞癌患者的平均年龄大于非甲基化者;巨块性肝细胞癌中,MGMT基因甲基化者的比例高于非甲基化者;MGMT基基甲基化者的无瘤生存期短于非甲基化者.结论 不同基因在肝细胞癌、癌旁和肝硬化组织中的甲皋化率差异显示了肝细胞癌发生中渐进的表观遗传学改变;GSTP1、RIZ1和MGMT基因的甲基化异常具有肿瘤风险评估和早期诊断价值,而MGMT基因的甲基化异常同时具有预后评估价值.     

胃癌弱差异基因表达谱中DNMT3A基因表达和生物学作用的探讨

目的:明确胃癌差异基因表达谱中弱差异表达基因的敏感性和特异性;探讨胃癌弱差异表达基因DNMT3A在胃癌发生发展中的生物学作用和意义.方法:利用半定量RT/PCR方法验证了胃癌弱差异基因表达谱中DNMT3A基因的表达水平,并利用GoMiner软件研究了DNMT3A的生物学功能.结果:DNMT3A基因在胃癌组织中比癌旁正常组织表达微弱升高,基因表达变化倍数为1.13,与基因芯片的表达变化(1.10)一致GoMiner软件功能注释表明DNMT3A在甲基化和转录调控等方面具有重要生物学功能.结论:可以在实验室中利用分子生物学方法验证胃癌差异基因表达谱中的弱差异表达基因;弱差异表达基因DNMT3A的异常表达与多种肿瘤的发生有密切的联系,并且可能在胃癌的发生发展中具有重要的生物学作用.     

肝癌组织中1433sigma启动子异常甲基化及基因转录水平检测

 目的探讨肝癌14-3-3σ基因启动子异常甲基化状况及其与转录水平的关系。方法14-3-3σ启动子甲基化用甲基化特异性PCR检测;14-3-3σ mRNA的表达水平用实时定量PCR检测。结果14-3-3σ启动子甲基化在肝癌患者癌旁组织、肝硬化组织和癌组织中的阳性率分别为6.8%(3/44)、56.1%(23/44)和93.2%(41/44)。不同性别、分化程度和乙型肝炎病毒状态的组织中14-3-3σ甲基化频率无显著差异(P>0.05);发生甲基化的组织标本中90.6%(58/64)转录缺失,10.4%转录水平下降,而未发生甲基化的标本14-3-3σ mRNA表达水平基本正常。14-3-3σ甲基化与其mRNA水平明显负相关(P<0.05)。14-3-3σ甲基化与其mRNA表达水平下降密切相关(P<0.05)。结论从癌旁组织、肝硬化组织到癌组织,14-3-3σ基因启动子甲基化频率逐步升高,且与其mRNA表达相关,提示14-3-3σ启动子甲基化可能在肝癌形成过程中是一个早期事件,与肝癌发生有一定关系。     

食管鳞癌中p16基因启动子区甲基化及其表达

 目的探讨食管鳞癌（ESCC）p16基因甲基化的状况及其表达与食管鳞癌临床病理特征之间的关系。方法采用甲基化特异性PCR方法（MSP）分别检测75例食管癌组织、癌旁组织和切缘组织p16基因启动子区域CpG岛甲基化状态。采用Envision免疫组化法检测食管癌组织及癌旁组织的p16蛋白的表达。结果75例标本中，食管癌组织、癌旁组织和切缘细织p16基因甲基化率分别为41．3％（31／75）、13．3％（10／75）和6．67％（5／75）。癌组织和癌旁组织P16蛋白的阳性表达率分别为29．3％（22／75）和56．7％0（17／30）。31例癌组织p16基因甲基化阳性标本中有2例（6．4％）检测到P16蛋白的表达，而44例癌组织p16基因甲基化阴性标本中有20例（45．5％）检测到P16蛋白的表达。食管癌组织p16基因甲基化率显著高于癌旁组织和切缘组织（P〈0.01），P16蛋白表达与p16基因甲基化呈负相关。p16基因启动子区甲基化与食管癌的组织学分级、肿瘤部位无明显相关，与临床分期、淋巴转移密切相关。结论p16基因甲基化在食管癌发生发展中起着重要作用，食管鳞癌的分期和淋巴结转移与p16基因甲基化之间有密切关系。     

肝细胞癌ASC基因启动子区甲基化及其mRNA表达研究

目的:探讨肝细胞肝癌(HCC)ASC基因启动子区甲基化与mRNA表达及其临床病理特征的关系.方法:运用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)和实时荧光定量PCR技术,检测58例肝细胞癌及其相应癌旁组织、15例肝硬化肝组织、5例慢性病毒性肝炎肝组织和5例正常肝组织中ASC基因启动子区甲基化状态及其mRNA的表达水平.结果:58例肝细胞癌组织中有40例(69.0%)发生ASC基因启动子区甲基化,其相应癌旁组织中有27例(46.6%)发生该基因启动子区甲基化,而在肝硬化、肝炎和正常肝组织中均未检测到该基因启动子区甲基化.ASC基因在肝细胞癌组织中甲基化频率高于其相应癌旁组织(P=0.015).ASC基因启动子区甲基化与肿瘤直径(P=0.001)、生长方式(P=0.003)以及国际抗癌联盟第6版TNM(TNM6)分期(P=0.001)有关.以ASC基因在正常肝组织中的表达量为参照,58例肝细胞癌组织中有33例出现ASC基因mRNA低表达或表达缺失,其相应癌旁组织中有14例出现低表达或表达缺失,而在肝硬化及肝炎肝组织中ASC基因mRNA均呈正常表达.与癌旁组织相比,肝细胞癌组织中ASC基因mRNA表达明显下调(P<0.05).在发生ASC基因启动子区甲基化的40例肝细胞癌组织中有26例出现mRNA低表达.结论:ASC基因启动子区甲基化是肝细胞癌中的频发事件,可能在肝细胞癌的进展中起重要作用.     

原发性肝癌术后晚期复发相关基因的研究

目的：研究与肝癌术后晚期复发（术后1年后复发者）相关的基因。方法：将42例肝癌术后晚期复发患者按复发时间分为两组，早于3年组（EN组）：术后复发时间〉1年且≤3年；迟于3年组（LN组）：术后复发时间〉3年。对两组患者癌组织及癌旁组织应用免疫组织化学法检测p53、p21、p16及c-erbB-2基因表达。结果：两组病例癌组织p53、p21、p16及c-erbB-2基因表达差异无统计学意义，P〉0．05；癌旁组织p21、c-erbB-2基因表达差异无统计学意义，P〉0．05。p53基因表达EN组高于LN组（P=0．030），p16基因表达EN组低于LN组（P=0．021）。结论：肝癌术后晚期复发可能与残肝内p53基因的异常表达及p16蛋白表达缺失相关。