蛇葡萄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响

目的研究蛇葡萄素对人乳腺癌MCF-7细胞增殖与凋亡的影响。方法用MTT比色法检测蛇葡萄素对MCF-7细胞的增殖抑制作用,绘制量效曲线并计算IC50,流式Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果蛇葡萄素能明显抑制MCF-7细胞增殖,IC50为19.15μg/mL;蛇葡萄素对MCF-7细胞作用6 h后,细胞凋亡率显著增加,且呈量效关系。结论蛇葡萄素能显著抑制MCF-7细胞的增殖,诱导细胞凋亡。     

卷柏多糖对肠道病毒71型复制的体外抑制作用

目的研究卷柏多糖对EV71病毒复制的体外抑制活性。方法将卷柏多糖不同提取物设置不同剂量作用于人恶性横纹肌肉瘤细胞(RD),采用细胞病变效应(CPE)及细胞计数试剂盒(CCK8法)检测细胞存活率,并计算药物的半数中毒浓度(CC50);培养EV71感染的RD细胞,建立体外病毒感染模型,并设立正常细胞对照组和阳性药物对照组(利巴韦林3.2mg/L),将卷柏多糖不同提取物设置不同剂量作用于EV71感染后的RD细胞,应用CCK8法检测药物抗病毒抑制率,并计算药物的半数抑制浓度(IC50);收集药物作用于感染后RD细胞的培养液上清,进行荧光定量PCR检测,观察药物对EV71病毒RNA表达的影响。结果卷柏30%醇沉多糖和50%醇沉多糖对RD细胞的CC50值分别为396和142 mg/L,抑制EV71病毒致CPE的IC50值分别为40.8和26.2 mg/L。与病毒感染对照组相比较,卷柏30%和50%醇沉多糖作用后,经EV71感染的RD细胞培养液中病毒RNA拷贝数显著降低(P<0.05)。结论卷柏及其30%和50%醇沉多糖可以作为新的抗EV71的潜在药物。     

重组蓝藻抗病毒蛋白N抗柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的:研究重组蓝藻抗病毒蛋白N (CV-N)体外抗柯萨奇病毒B组3型(CVB3)的作用. 方法:通过观察药物毒性、细胞病变效应(CPE)、MTT比色法检测细胞增殖,判断CV-N的细胞毒性及抗病毒效果. 结果:CV-N对Vero细胞毒性较低(TC50为359 μg/ml),对CVB3无直接灭活作用,对阻止CVB3病毒吸附细胞的作用优于病毒唑,而对病毒的复制无明显抑制作用. 结论:CV-N作用于CVB3病毒感染的早期,有可能作为柯萨奇病毒感染的预防药物.     

栀子等中药抑制柯萨奇B3病毒的体外实验研究

目的探讨栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂在体外抗柯萨奇B3病毒(CVB3)的作用。方法用细胞培养技术比较栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂等药物对CVB3引起的细胞病变的抑制作用。结果黄芩抗病毒作用最强,治疗指数(TI)为35.09;黄连抑制病毒增殖的作用最强,TI为83;栀子抑制病毒吸附和增殖作用最强,TI为238.09。结论栀子、黄连、黄芩、大青叶及复方制剂等药物对CVB3增殖的不同环节均有抑制作用。     

大黄提取液抗柯萨奇病毒B3的实验研究

采用微量细胞培养法观察细胞病变效应 (Cytopathiceffect,CPE) ,测定经不同剂量大黄提取液作用后的病毒滴度 ,用逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR)检测药物作用后细胞冻融液中的病毒核酸(CVB RNA) ,研究大黄提取液的抗柯萨奇病毒B组 (CVB)作用 ,探讨其抗病毒作用机制。结果 :不同剂量大黄提取液和病毒作用后 ,细胞均出现CPE ;不同剂量药物作用于细胞后 ,不能阻止CVB3感染 ;当CVB3感染细胞后 ,大黄提取液能阻止病毒增殖 ,并表现出一定的量效关系 ,其治疗指数(TI) =10。提示大黄提取液不能直接杀灭CVB3,不能阻止CVB3吸附、穿入易感细胞 ,而通过阻止CVB3核酸复制或 /和以后环节发挥抗病毒作用。     

异搏定对非p-gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用

目的 :观察异搏定 (verapamil ,Ver)对非p -gp高表达细胞株的增敏及耐药逆转作用。方法 :使用二甲氧唑黄比色法 (XTT法 )检测药物敏感性 ,观察Ver对鬼臼乙叉甙 (etoposide ,VP16)的增敏及耐药逆转作用。结果 :单独Ver对HL 60和HL 60 /Adr细胞株的IC50 分别为 2 6.13mg·L-1和 3 9.0 0mg·L-1,单独VP 16对HL 60细胞的IC50 为 2 47.17μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,VP16对HL 60细胞的IC50 值下降为原来的 1/1.73 ;单独VP 16对HL -60 /Adr细胞的IC50 为872 .97μg·L-1,而加用Ver 5mg·L-1预处理 1h后 ,IC50 下降至 2 0 8.45 μg·L-1,为原来的 1/4.19,与VP16对HL 60敏感株的IC50 接近。结论 :Ver对非p gp高表达细胞株具有增敏及耐药逆转作用     

车前草对呼吸道合胞病毒体外抑制作用的研究

目的：研究车前草醇提液体外对呼吸道合胞病毒（ RSV）的作用。方法采用细胞培养技术,以利巴韦林为对照,通过观察细胞病变效应（CPE）,测定细胞半数中毒浓度（TC50）、药物半数抑制浓度（IC50）和抗病毒指数（ TI）,评判车前草抗RSV作用。结果车前草体外有抗RSV作用,浓度在0．0625～8．0 g／L呈量效关系。车前草的TC50＝4．57 g／L,IC50＝0．285 g／L,TI＝16．04。车前草与利巴韦林抗RSV作用差异无统计学意义（ P＞0．05）,但比利巴韦林毒性小,抗病毒指数大,安全范围大。结论车前草在 Hep－2细胞中对RSV有明显的抑制作用,既能抑制病毒的吸附和增殖,又能直接杀死病毒。     

真菌提取物JN219抗病毒谱的初步研究

目的：探讨真菌提取物JN219的体外抗病毒谱。方法：采用体外细胞病变法，研究JN219对疱疹病毒科病毒（HCMV、HSV-1、HSV-2）、腺病毒科病毒（Ad3）、副粘病毒科病毒（RSV）、呼肠病毒科病毒（RV SA11）、正粘病毒科病毒（流感甲地方株、流感乙地方株）、小RNA病毒科病毒（COX B1-6）、弹状病毒科病毒（VSV）共15株病毒的抗病毒活性。将JN219与以上病毒作用1h后接种于相应宿主细胞（同时设有病毒对照和细胞对照），当病毒对照病变达到90％以上时终止培养，宿主细胞用1％中性红染色，在450nm处读取吸光度A值，计算细胞存活率、半数中毒浓度（TD₅₀）、半数有效浓度（IC₅₀）和抑毒指数（TI）。并根据TI判断JN219的抗病毒活性，确定其抗病毒谱。结果：JN219对HCMV、RV（SA11）、VSV有抑制作用，其IC50分别为1.42、0.96和1.22μg/ml，TI分别为35.26、52.30、40.82；对HSV-1、HSV-2、RSV、流感病毒甲、流感病毒乙有部分抑制作用；对COX B1-6、腺病毒（Ad3）无作用。结论：JN219抗病毒谱比较广泛。     

双黄连、鱼腥草注射液抗鼠肝炎病毒3型的体外实验研究

目的:探讨双黄连、鱼腥草在细胞水平对鼠肝炎病毒3型(murine hepatitis virus,MHV-3)是否具有抑制作用。方法:细胞培养、蚀斑试验测定病毒滴度;MTT法进行药物毒性试验;蚀斑抑制试验检测双黄连、鱼腥草的抗MHV-3活性。结果:双黄连半数中毒质量浓度(TC50)为6 100μg.m l-1,抗MHV-3病毒的半数抑制质量浓度(IC50)为304.9μg.m l-1;鱼腥草的分别为500、22.06μg.m l-1。治疗指数(TI)双黄连为20.07,鱼腥草为22.67。两种中药成分对MHV-3病毒的抑制作用均存在明显的量效反应关系(P<0.01)。结论:双黄连、鱼腥草在细胞水平有显著的抗MHV-3作用。     

黄芩主要成分体外抗甲型流感病毒作用的研究

目的比较黄芩的主要成分黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素体外抗甲型流感病毒FM1感染的作用,明确黄芩抗流感病毒的主要有效成分。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对狗肾细胞株(MDCK)的最大无毒浓度(TC0)及半数中毒浓度(TC50),通过细胞病变效应(CPE)法观察药物对病毒致细胞病变作用的影响。MTT法检测药物不同浓度的抗病毒有效率,Probit回归法计算黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素对病毒感染的半数抑制浓度(IC50)及治疗指数(TI),荧光法检测黄芩苷对病毒神经氨酸酶活力的影响。结果黄芩苷对流感病毒所致的细胞病变作用有明显的抑制作用,当黄芩苷浓度在0.0156～0.1250g/L时,细胞存活率明显高于病毒感染组,其中以0.1250g/L组的细胞存活率最高,抗病毒有效率达94.6%,其IC50为0.0162g/L,TI为21.34;黄芩素对流感病毒所致的细胞病变有一定的抑制作用,当黄芩素浓度在0.0860g/L时,抗病毒有效率达48.72%,其IC50为0.0778g/L,TI为8.89;汉黄芩素对流感病毒所致的细胞病变无抑制作用,其IC50为0.0236g/L,TI为0.051。当黄芩苷浓度?0.0313g/L时,能明显降低病毒神经氨酸酶的活力。结论黄芩主要成分中抗流感病毒的作用为黄芩苷黄芩素汉黄芩素,说明黄芩抗流感病毒的主要有效成分是黄芩苷。     

小剂量茶碱对大鼠气道上皮细胞NF-κB活性的影响

目的 :观察小剂量茶碱是否对体外培养的哮喘模型大鼠气道上皮细胞中NF κB的活性存在影响。以进一步阐明茶碱类药物抗炎作用和免疫调节作用的机制。方法 :雄性Wistar大鼠随机分为 2组 ,对照组 (5只 ) ,哮喘模型组 (15只 ) ;模型组以卵清蛋白致敏和激发 ,建立哮喘模型。体外培养哮喘模型组和对照组大鼠的气道上皮细胞。分别观察加入脂多糖 (LPS)刺激前后NF κB活性的变化 ;在哮喘模型组大鼠的气道上皮细胞中加入不同浓度的氨茶碱与LPS(1μg·ml- 1 )共同培养 4h后 ,以及加入同一浓度氨茶碱和LPS(1μg·ml- 1 )共同培养不同时间后NF κB活性的变化。NF κB活性采用免疫组织化学方法检测 ,以细胞核染色作为阳性标准 ,以细胞核阳性的百分比表示NF κB的活性。结果 :经LPS刺激前 ,对照组和哮喘组大鼠气道上皮细胞胞浆NF κB均有一定程度的表达。细胞核表达的细胞 ,哮喘组为 (6 .4 %± 1.2 ) % ,而对照组为 (4 .7%± 1.7) % ,二者相比较 ,其差异具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。经 1μg·ml- 1 脂多糖刺激 2h后 ,两组细胞胞核NF κB表达均明显上升 ,哮喘组为 (82 .5± 5 .2 ) % ,对照组为(79.3± 3.4 ) % ,两者相比 ,无统计学差异 (P >0 .0 5 )。在哮喘组大鼠上皮细胞中加入 1μg·ml- 1 脂多糖及各种浓度氨茶碱     

木犀草素抗肿瘤细胞增殖及增敏抗肿瘤药物作用研究

目的:研究黄酮类化合物木犀草素(Luteolin)对体外抗肿瘤细胞增殖,以及其与抗肿瘤药联用的增敏作用.方法:选用5 μmol/L或10 μmol/L木犀草素与不同浓度抗肿瘤药联合作用肿瘤细胞24 h后,用MTS法检测其体外抗增殖作用.结果:5 μmol/L木犀草素对人非小细胞肺癌细胞(A549)、人子宫颈癌细胞(Hela)、人乳腺癌细胞(MCF-7)、人胃腺癌细胞(AGS)、人胃癌细胞(MGC-803)的抗增殖作用均<20%,对人结肠癌细胞(Caco2)和人肝癌细胞(HepG2)的抗增殖作用约20%.Bexarotene单一用药时对Hela细胞抑制率达50%(IC_(50))的浓度约为2 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约0.2 μmol/L,5 μmol/L木犀草素与0.1 μmol/L Bexarotene联用对Hela细胞的抗增殖作用达44%,Bexarotene与木犀草素联用在MGC-803、HepG2、A549细胞中增敏较小,在Caco2和MCF-7细胞中无增敏作用;顺铂单一用药时对Hela细胞的IC_(50 )>30 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后IC_(50)约3 μmol/L,联用后在MGC-803、HepG2和A549中增敏较小;博来霉素单一用药时对Hela细胞的IC_(50)>100 μmol/L,对A549细胞的IC_(50)约为100 μmol/L,与5 μmol/L木犀草素联用后Hela细胞的IC_(50)约为1 μmol/L,与10 μmol/L木犀草素联用后A549细胞的IC_(50)约为10 μmol/L.木犀草素与格列卫联用在MGC-803、HepG2、A549和AGS中增敏较小.结论:木犀草素在低于10 μmol/L浓度时,对肿瘤细胞体外抗增殖作用较小.低浓度(5 μmol/L~10 μmol/L)的木犀草素在不同的肿瘤细胞中对抗肿瘤药的增敏作用强度不同,在Hela细胞中增敏作用最显著.     

中药“口康”含漱液体外抑菌试验和毒性试验研究

目的 :研究中药“口康”含漱液的抑菌作用及毒性 ,为临床治疗口腔感染疾病提供实验依据。方法 :用琼脂稀释法测定“口康”含漱液对 4 9株口腔致病菌的最低抑菌浓度 ,并进行了急性毒性试验。结果 :4 9株口腔致病菌中 ,2 7株革兰阴性杆菌最低抑菌浓度 (MinimalinhibitoryconcentrationMIC)范围 0 .0 3～ 1.0g·ml-1,抑制 5 0 %被试菌株的MIC(MIC50 )均为 0 .12 5g·ml-1,抑制 90 %被试菌株的MIC(MIC90 )为 0 .12 5～ 0 .5g·ml-1;2 1株革兰氏阳性球菌MIC范围0 .0 0 8～ 0 .5g·ml-1,MIC50 为 0 .0 15～ 0 .12 5g·ml-1,MIC90 为 0 .0 15～ 0 .5g·ml-1;1株白色念珠菌MIC为 0 .0 15g·ml-1。急性毒性试验显示 :最大耐受量为生药 4 17.6g·kg-1,达到临床日剂量 2 10倍 ,未见动物死亡和明显毒性反应。结论 :“口康”含漱液对各类不同口腔致病菌株均有抑菌作用 ;对革兰阳性球菌抑菌作用更佳 ,为革兰阴性杆菌的 2～ 8个对比倍数 ;对念珠性霉菌抑菌作用较强。该制剂毒性较小 ,可供临床使用     

普卢利沙星片的药代动力学研究

目的:建立人血浆中普卢利沙星活性代谢产物NM394的HPLC测定法,并用于普卢利沙星片在中国健康志愿者体内药动学特征的研究。方法:健康志愿者10名(男女各半),单次和连续口服普卢利沙星片(200 mg/片),反相高效液相色谱法测定给药后血药浓度,DAS 2.1软件计算药代动力学参数。前处理采用高氯酸沉淀蛋白外标法,色谱柱为Lichrospher C18(150 mm×4.6 mm,5μm);流动相为0.025mol/L NaH2PO4(pH为2.75);流速1 ml/min;检测波长275nm。结果:NM394在0.03～3μg/ml范围内线性良好(r2=0.9987),血浆中低、中、高3种质量浓度的相对回收率在91.2%～113.2%之间;批内RSD≤6.8%、批间RSD≤8.5%。主要药动学参数为单次给药,女:t1/2(5.24±0.58)h、Cmax(1.64±0.76)μg/ml、AUC(0-18)(7.11±2.10)μg.h/ml;男:t1/2(5.22±0.74)h、Cmax(1.89±0.68)μg/ml、AUC(0-18)(7.80±0.93)μg.h/ml;两者无明显差异。多次给药达稳态后,女:t1/2(5.15±1.18)h、AUCss(9.26±1.35)μg.h/ml、DF(1.94±0.10);男:t1/2(5.10±0.27)h、AUCss(8.31±1.98)μg.h/ml、DF(2.04±0.60);两者无明显差异。单次给药与连续给药达稳态后药动学参数无明显差异。结论:本法简便、快速、稳定;无论单次给药还是连续给药,普卢利沙星的药动学特征无明显性别差异;多次用药后体内无明显蓄积现象;本品无明显肝药酶诱导或抑制作用。     

黄芩素抗人巨细胞病毒的体外实验研究

目的体外研究黄芩素抗人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）的效果和安全性。方法细胞病变法和噻唑蓝（MTT）法检测各浓度黄芩素对人胚肺成纤维细胞（HEL）存活率及HCMV抑制率的影响,并与更昔洛韦进行比较。数据输入SigmaPlot软件,经Hill方程曲线拟合计算药物的半数毒性浓度（TC50）和半数有效浓度（EC50）。结果更昔洛韦和黄芩素的TC50分别为353.1＂g/ml和151.4＂g/ml,EC50分别为62.98＂g/ml和14.47＂g/ml,治疗指数分别为6和10。结论黄芩素具有体外抗HCMV作用,值得进一步研究。     

转化生长因子β1对巨噬细胞清道夫受体A和B(CD36)功能的影响

目的：探讨转化生长因子β1（TGF-β1）对巨噬细胞清道夫受体A（ScR-A） 和B（ScR-B,CD36）的影响,为阐明动脉粥样硬化(AS)的形成(尤其形成早期)提供依据并为防治AS提供理论支持。 方法： 人类单核细胞株（THP-1）源性巨噬细胞分成对照组和实验组。实验组加3.0 mg•L^-1抗 TGF-β1 抗体 (Anti TGF-β1 Ab),对照组加用3.0 mg•L^-1　IgG,利用巨噬细胞摄取和Northern blotting法,同步检测对乙酰化和氧化低密度脂蛋白（LDL）摄取（结合、摄入和分解）以及ScR-A 和CD36 mRNA表达。结果：实验组¹²⁵I-Ac-LDL的结合、摄入和分解量分别为（48.67±6.52）、（412.30±12.21）及（896.48±32.74） μg•g^-1 protein,与对照组［(8.23±1.24）、（45.69±6.92）及（112.18±20.15) μg•g^-1 protein］比较,差异均具有显著性（P<0.01）;实验组¹²⁵I-Ox-LDL的结合、摄入和分解量分别为（102.32±3.11）、（412.94±15.21)和（788.94±31.16) μg•g^-1 protein,与对照组［(78.56±2.81)、（123.94±12.11)及（345.38±27.17) μg•g^-1 protein］比较,差异均具有显著性（P<0.01）。实验组ScR-A 和CD36 mRNA的表达均较对照组增强。 实验组与对照组ScR-A mRNA比值为1.7,CD36 mRNA比值为1.12。结论： TGF-β1通过抑制ScR-A和CD36表达干预AS的形成及其发展过程,这种作用主要是通过ScR-A实现的。     

瑞芬太尼引起呼吸抑制时的靶控血浆浓度

目的观察瑞芬太尼靶控输注(TCI)时患者呼吸抑制的50%有效靶控血浆浓度(CP50)。方法择期硬膜外-腰麻联合麻醉患者80例(ASAⅠ~Ⅱ),应用TCI靶控输注系统,按不同血浆靶控浓度随机分为8组(n=10):Ⅰ组(1.0μg.L-1)、Ⅱ组(1.5μg.L-1)、Ⅲ组(2.0μg.L-1)、Ⅳ组(2.5μg.L-1)、Ⅴ组(3.0μg.L-1)、Ⅵ组(3.5μg.L-1)、Ⅶ组(4.0μg.L-1)、Ⅷ组(4.5μg.L-1)。应用半数效量序贯法计算瑞芬太尼TCI时患者呼吸抑制的CP50及其95%可信区间(95%CI)。结果瑞芬太尼TCI时患者呼吸抑制的CP50为2.48μg.L-1,CP50的95%CI为2.24~2.74μg.L-1。结论瑞芬太尼TCI时患者呼吸抑制的CP50为2.48μg.L-1。     

NGF诱导PC12细胞向神经元的分化

目的：研究NGF诱导PC12细胞向神经元的分化情况。方法：实验分为10、20、50和80 μg•L^-1 NGF组及含10%胎牛血清的对照组。不同浓度的NGF组均诱导PC12细胞72 h,在24、48和72 h分别观察细胞的突起长度和细胞最大直径的变化情况;在诱导72 h后利用免疫细胞化学技术,观察不同剂量NGF作用后PC12细胞向MAP2阳性细胞分化的情况。 结果： 20、50和80 μg•L^-1 NGF组MAP2阳性细胞数明显高于对照组,且以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.05）。与对照组比较,加入NGF组分化的细胞其突起和细胞直径明显增长和增大,以50 μg•L^-1 组最为明显（P<0.01）。结论：NGF能够诱导PC12细胞向神经元分化,50 μg•L^-1 的NGF浓度是诱导PC12细胞向神经元分化的最适浓度。     

二乙酰二脱水卫矛醇抗瘤作用的实验研究

目的　探讨二乙酰二脱水卫矛醇 (1 ,2 :5 ,6 -Dianhydro - 3 ,4-diacetylgalactitol,DADAG)的体内外抗肿瘤作用。方法　用MTT法观察DADAG对人肿瘤细胞株的抗增殖作用 ;以小鼠脑内移植艾氏腹水癌 (Ehrlichascitescarcinoma,EAC)和DBA/ 2小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0为移植瘤模型 ,观察DADAG的体内抗瘤效果。结果　DADAG对HL60细胞和K562细胞有较强的抑制作用 ,IC50 值分别为 3 .7μg·ml- 1 和 2 5 .5μg·ml- 1 。DADAG的高剂量(1 0 .0mg·kg- 1 )对小鼠脑内移植EAC有一定的抑制作用 ,对小鼠的生存期延长率 (increaseoflifespan ,ILS)是 30 % (P <0 .0 5) ;而DADAG的低剂量 6 .4mg·kg- 1 、中剂量 8.0mg·kg- 1 和高剂量 1 0 .0mg·kg- 1 对小鼠脑内移植白血病L1 2 1 0均有明显的抑制作用 ,ILS分别为 35 %、47%和 55 % (P值均 <0 .0 1 )。结论　DADAG有较强的体内外抗瘤作用     

999感冒灵颗粒抗呼吸道合胞病毒的初步研究

目的 探究999感冒灵颗粒在体外抗呼吸道病毒的作用.方法 采用细胞病变抑制法(CPE)及CCK-8法,观察在999感冒灵颗粒作用下,感染呼吸道合胞病毒( RSV)的HEp-2细胞的CPE变化情况以及吸光值,从而比较不同给药方式(直接灭活、抑制吸附、抑制增殖和阻断作用)及不同给药浓度下对 RSV的抑制作用.测定细胞的半数中毒浓度(TC50)、药物半数抑制浓度(IC50)以及治疗指数(TI).结果 细胞的TC50为25 mg/ml;直接灭活和抑制增殖均对RSV有明显作用( P ＜0.01 );采用直接灭活方式时,其 IC50为7.43 mg/ml,TI为3.36;采用抑制病毒增殖时,其IC50为4.42 mg/ml,TI为5.66. CCK-8 法结果显示,在阻断以及抑制吸附两种给药方式下,病毒抑制率与病毒对照组之间差异无统计学意义.结论 999 感冒灵颗粒在直接灭活以及抑制病毒增殖两种给药方式下对RSV有一定的抑制作用.