西罗莫司对肝癌HepG2细胞中HIF-1α表达影响

目的 研究西罗莫司对氯化钴(CoCl2)诱导的肝癌Hep2细胞中缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 用CoCl2诱导细胞模拟缺氧微环境,并根据CoCl2浓度不同分为0、50、100、200及00 μmol/L组;选择CoCl2浓度为200 μmol/L来模拟肿瘤内缺氧微环境,同时分别联合0、10、20、30、0 nmol/L的西罗莫司作用于细胞2 h.应用逆转录-聚合酶链反应检测HIF-1α mRNA的表达.结果 随CoCl2浓度提高,HIF-1α mRNA的表达升高(F=103.67,q=.83～2.15,P<0.05),其中CoCl2浓度为200和00 μmol/L两组比较差异无显著性(q=0.69,P>0.05);西罗莫司可使Hep2细胞HIF-1α mRNA的表达降低并呈剂量依赖性(F=127.90,q=.2～28.28,P<0.05).结论 缺氧微环境可以促进Hep2细胞中HIF-1α mRNA的表达,HIF-1α可能通过在细胞缺氧调控中起作用而参与了肿瘤的发生发展.西罗莫司可以抑制HIF-1α mRNA的表达,这可能是其抗肿瘤的机制之一.     

电离辐射对缺氧条件下肝癌细胞HIF-1α及VEGF表达的影响

目的 探讨缺氧条件下电离辐射对肝癌细胞HepG2中缺氧诱导因子(HIF)-1α及血管生成因子(VEGF)表达的影响,从理论上寻找一种提高放射治疗肿瘤有效性的方法.方法 将HepG2肝癌细胞分为对照组、缺氧组、单纯照射组和缺氧加照射组.缺氧组:氯化钴处理细胞模拟缺氧条件;单纯照射组:按照照射率4 Gy/min,共8 Gy的剂量利用X射线照射细胞;缺氧加照射组:氯化钴处理细胞一定时间后,按照与单纯照射组相同的剂量照射细胞.利用荧光显微镜观察各组肝癌细胞的凋亡情况,MTT法分析细胞存活分数,RT-PCR技术检验各组肝癌细胞中的HIF-1α和VEGF表达情况.结果 (1)细胞凋亡情况:对照组未观察到细胞凋亡,缺氧组中少部分肝癌细胞出现凋亡,单纯照射组中大量肝癌细胞出现凋亡,但缺氧加照射组肝癌细胞凋亡情况较单纯照射组明显减少(P＜0.05).(2)MTT检测结果:细胞存活分数排列顺序为:对照组＞缺氧组＞缺氧加照射组＞单纯照射组.(3)HIF-1α表达情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞正常组(P＜0.05).单纯照射组与正常组无明显差异;VEGF表达变化情况:缺氧加照射组＞缺氧组＞单纯照射组＞正常组(P＜0.05).结论 提示HIF-1α可能通过VEGF发挥重要的保护作用,从而降低实体瘤中内部癌细胞对辐射的敏感性.     

HIF-1α在原发性肝癌中表达的意义

0引言研究表明，大多数肿瘤特别恶性肿瘤在发生发展过程中，其肿瘤组织内部普遍存在相对缺氧区域．缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）是细胞在缺氧条件下产生的一种核转录因子，与肿瘤生长浸润转移、血管生成密切相关．我们应用免疫组织化学（sP法）检测原发性肝癌及其相应癌旁肝组织、正常肝组织中HIF-1α的表达情况，探讨其在原发性肝癌的发生发展中的意义．     

间歇性缺氧对SW480细胞生长及HIF-1α表达的影响

目的:研究间歇性缺氧(Intermittent hypoxia,IH)对SW480细胞生长及缺氧诱导因子-1α(Hypoxia inducibh factor-1α,HIF-1α)表达的影响,探讨肿瘤的间歇性缺氧现象及与HIF-1α的关系.方法:采用氯化钴(coCI2)模拟缺氧环境,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察间歇性缺氧对SW480细胞生长的影响,逆转录聚合酶链反应(BT-PCB)及westem blot检测间歇性缺氧对HIF-1α表达的影响.细胞分组:A组:常氧组;B组:间歇性缺氧2h组;C组:间歇性缺氧3 h组;D组:持续性缺氧3h组.结果:MTT结果显示3个缺氧组与常氧组相比,SW480细胞增殖活性均受到抑制,C组和D组较B组增殖活性亦降低,而C组和D组之间无差异.RT-PCR检测HIF-1αmRNA发现C组高于A组、B组及D组.而其余各组之间无差异.Westem blot检测HIF-1α蛋白发现C组高于其余各组,D组高于B组及A组,而B组与A组无差异.结论:相同缺氧时间,不同缺氧方式使SW480细胞生长受到同等程度抑制.一定程度的间歇性缺氧可以上调HIF-1α mRNA及蛋白水平.     

HIF-1α在肝癌组织中表达及临床意义

目的:探讨缺氧诱导因子-1α(H IF-1α)在肝癌组织中表达的意义。方法:采用免疫组化S-P法检测75例石蜡包埋的人体肝癌组织(术前均未行放疗及化疗)H IF-1α的表达。结果:H IF-1α主要表达于肝癌细胞浆,部分于胞核,肿瘤间质细胞也可见少量表达。肿瘤坏死区周围及肿瘤浸润边缘部的癌细胞H IF-1α表达明显增多。H IF-1α的表达强度与肝癌细胞恶性程度、淋巴结转移及预后有关,而与病人年龄、性别及原发肿瘤大小均无关。其阳性强度随癌细胞分化程度的降低、淋巴结转移、术后生存期短而增高。结论:H IF-1α可作为评估肝癌淋巴结转移和预后的重要指标之一。     

亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响

目的 探讨亚砷酸对人肝癌细胞HepG2中HIF-1α表达的影响.方法 以0、0.25、0.5、1、2和4μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧环境中培养8 h;1μmol/L的亚砷酸处理人肝癌细胞HepG2缺氧培养0-10h,WST-8法和台盼蓝染色法分析细胞增殖和活力,采用RT-PCR和Western Blot方法检测肝癌细胞中HIF-1 α的表达.结果 ①不同剂量的亚砷酸和不同缺氧时间下对肝癌细胞活力和增殖率的影响与对照组相比差异无显著性(P＞0.05).②随着亚砷酸浓度的增加,HIF-1α蛋白表达逐渐降低,与对照组相比差异呈显著性(P＜0.01).③不同剂量的亚砷酸对HIF-1α mRNA表达的影响与对照组相比无差异显著性(P＞0.05).结论 亚砷酸抑制人肝癌细胞HepG2中HIF-1α蛋白表达是通过转录后机制.     

甘草酸二铵对人肝癌细胞SMMC-7721增殖和p53表达的影响

目的探讨甘草酸二铵(DG)对人肝癌细胞SMMC-7721增殖的抑制作用及对p53表达的影响。方法实验分对照组及DG干预组,采用MTT比色法测定细胞的生长情况,检测DG对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR检测DG对p53mRNA表达水平的影响;通过Western blot测定DG对p53蛋白表达的影响。结果 DG(0.50、1.00、2.00、4.00、8.00、16.00mg/L)呈浓度依赖性降低人肝癌细胞存活率,作用48h时IC50值为(4.31±0.21)mg/L;DG可明显抑制肝癌细胞增殖,剂量为4.00、8.00、16.00mg/L时,其抑制率分别为44.52%、66.78%、91.24%;低、中、高浓度组DG(2.0、4.0、8.0mg/L)可明显提高肝癌细胞中p53mRNA及其蛋白表达,并呈浓度依赖性增强。结论 DG对人肝癌细胞SMMC-7721具有明显细胞毒性和抑制增殖作用,其机制可能与上调p53表达有关。     

皮肤鳞癌组织HIF-1α和MMP-2表达及意义

目的研究缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)在皮肤鳞癌组织表达及相关性。方法应用免疫组化法检测42例皮肤鳞癌、13例BOWEN病、11例正常皮肤组织中HIF-1α、MMP-2的表达。结果 HIF-1α和MMP-2在正常皮肤、BOWEN病及皮肤鳞癌组织中的表达率分别为0、61.54%、73.81%及0、38.46%、50.00%,差异有统计学意义(χ2=23.675、12.955,P<0.05)。HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌和BOWEN病组织中的表达均高于正常皮肤组织,差异有统计学意义(χ2=16.638、7.139,P<0.05;P=0.02、0.04)。在皮肤鳞癌组织中HIF-1α与MMP-2的表达呈正相关(rs=0.379,P<0.05)。结论 HIF-1α、MMP-2在皮肤鳞癌组织高度表达,且两者的表达密切相关。     

化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210的表达

目的探讨不同浓度CoCl2对人肝癌细胞SMMC-7721乏氧诱导因子-1α（HIF-1α）和miR-210表达的影响以及RNA干扰HIF-1α基因对miR-210表达的影响。方法采用Western blot法检测不同浓度CoCl2培养24 h后SMMC-7721细胞HIF-1α蛋白表达变化,实时定量PCR检测miR-210相对表达量。脂质体介导靶向HIF-1α基因的RNA干扰质粒pGenesil-HIF转染SMMC-7721细胞后,乏氧培养24、48和72 h,分别采用Western blot法和实时定量PCR检测细胞HIF-1α蛋白表达变化和miR-210相对表达量。结果 50和100μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量与0μmol/L组相比,差异均无统计学意义（均P〉0.05）;150和200μmol/L CoCl2培养24 h后细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量均显著高于0μmol/L组（P〈0.05或P〈0.01）。转染质粒pGenesil-HIF后乏氧培养24、48和72 h,细胞HIF-1α蛋白表达和miR-210相对表达量显著低于阴性干扰组（均P〈0.01）。结论化学乏氧人肝癌细胞SMMC-7721中HIF-1α和miR-210表达明显上调,RNA干扰HIF-1α基因可明显下调乏氧细胞miR-210表达。     

原发性肝癌中HIF-1α、P-gp的表达及相关性的研究

目的：观察HIF-1α和P-gp在原发性肝癌（HCC）中的表达,探讨两者相互作用的关系。方法：采用免疫组织化学法检测36例HCC及20例非肿瘤肝组织中P-gp和HIF-1α的表达,对两者均表达阳性的病例,进行免疫组织化学双标记染色。结果：36例HCC中HIF-1α和P-gp高表达,阳性率分别为58.33%和77.78%,明显高于非肿瘤肝组织（P＜0.001）。两者表达呈正相关（r=0.388,P＜0.05）。18例两者均表达阳性的病例中,免疫双标共表达率为61.1%。结论：HCC中HIF-1α和P-gp的表达密切相关,HIF-1α可通过上调P-gp的表达实现对化疗药物的耐受,HIF-1α有望成为评价及逆转肿瘤多药耐药的新指标。     

肾癌患者血清VHL和HIF-1α与HIF-2α的表达及其与预后的相关性

【摘要】目的 探讨肾癌患者血清希佩尔 林道基因(VHL)、缺氧诱导因子 1(HIF 1α)和缺氧诱导因子 2(HIF 2α)的表达及与预后的相关性分析。 方法 选取2015年3月~2016年3月我院收治的82例肾癌患者为肾癌组,同时选取51例健康者为对照组。利用酶联免疫吸附法(ELISA)测定两组的VHL、HIF 1α及HIF 2α水平。结果 肾癌组患者VHL水平比对照组明显降低,HIF 1α、HIF 2α水平比对照组明显升高（P＜005）;Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ期肾癌患者术后VHL水平均高于术前,且Ⅰ/Ⅱ期高于Ⅲ期（P＜005）;Ⅰ/Ⅱ、Ⅲ期肾癌患者术后HIF 1α、HIF 2α水平均低于术前,且Ⅰ/Ⅱ期低于Ⅲ期（P＜005）;肾癌患者血清VHL、HIF 1α及HIF 2α表达水平与年龄、性别无关(均P＞005),与病灶直径、淋巴结转移、病理分级、TNM分期相关(均P＜005);肾癌患者3年生存率与患者年龄、性别无关(均P＞005),患者VHL高表达的3年生存率明显高于VHL低表达(P＜005),患者HIF 1α、HIF 2α高表达的3年生存率明显低于HIF 1α、HIF 2α低表达(均P＜005);血清VHL低表达、血清HIF 1α、HIF 1α高表达是肾癌患者术后肾衰竭的独立危险因素;患者VHL水平与发生肾癌呈负相关,HIF 1α、HIF 2α水平与发生肾癌呈正相关（P＜005）;血清VHL、HIF 1α、HIF 2α预测肾癌患者的最佳截值分别为37978、771、095,三者联合预测的AUC大于VHL（Z=8268,P＜005）,HIF 1α（Z=8268,P＜005）,HIF 2α（Z=8268,P＜005）。结论 血清VHL、HIF 1α和HIF 2α对肾癌患者具有较好的预后预测价值,可作为肾癌患者发生、发展的重要指标及预后预测的分子标志物,三者联合应用能提高其预后预测能力。     

乳腺癌组织中ABCG2和HIF-1α的表达及临床意义

目的探讨乳腺癌耐药相关蛋白(ABCG2)、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)蛋白的表达与乳腺癌病理特征及预后之间的关系。方法选取122例接受乳腺癌手术治疗患者的乳腺癌组织石蜡标本,用免疫组化SP法检测ABCG2、HIF-1α蛋白的表达情况。结果122例乳腺癌组织ABCG2、HIF-1α的阳性表达率分别为40.2%和59.0%。ABCG2表达与肿块大小呈正相关(P=0.018);HIF-1α表达与肿块大小(P<0.01)、淋巴结转移(P<0.01)、临床分期呈正相关(P=0.022)。ABCG2表达与122例患者的无病生存期有负相关趋势,无统计学意义(P=0.052),与106例接受了以蒽环类化疗药为主的辅助化疗患者的无病生存期呈负相关(P=0.033)。HIF-1α表达与122例患者的无病生存期呈负相关(P=0.030)。HIF-1α和ABCG2共表达与122例患者的无病生存期呈负相关,有明显统计学意义(P=0.004)。结论ABCG2表达阳性是接受以蒽环类化疗药为主的辅助化疗的乳腺癌患者的预后不良指标。HIF-1α与ABCG2表达明显相关。HIF-1α与ABCG2共检验可以更好的判断乳腺癌患者预后。     

HIF-2α及ABCG2在人乳腺癌细胞微球体裸鼠移植瘤组织中的表达及其意义

目的： 研究缺氧诱导因子2α（HIF-2α）及三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）在原代无血清悬浮培养人乳腺癌细胞微球体（MSs）裸鼠移植瘤组织中的表达,并探讨MSs具有高动物成瘤性的可能机制。方法： 原代乳腺癌组织无血清悬浮培养法获得MSs,将其植入裸鼠体内观察成瘤情况,同时采用人乳腺癌MCF-7细胞悬液种植于同一裸鼠的右侧背部作为实验对照。免疫组织化学法观察移植瘤组织中HIF-2α及ABCG2的表达,Western blotting及RT-PCR技术检测HIF-2α及ABCG2蛋白及mRNA在移植瘤组织中的表达水平。结果： 原代MSs具有较强的动物成瘤性。免疫组织化学法,在移植瘤组织中HIF-2α与ABCG2均有表达。Western blotting及RT-PCR,HIF-2α及ABCG2蛋白在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）;HIF-2α mRNA及ABCG2 mRNA在MSs移植瘤组织中的表达量明显高于MCF-7细胞移植瘤组织及瘤旁组织中的表达量（P<0.05）。结论： HIF-2α与ABCG2在MSs裸鼠移植瘤中高表达,推测其为导致MSs具有高动物成瘤性的可能机制。     

重组表达质粒pcDNA3/HIF-1α的构建及其在人肝癌细胞株HepG2的稳定表达

目的:构建缺氧诱导因子(HIF-1α)基因的表达质粒,经脂质体转染人肝癌细胞株HepG2,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞模型,为肝癌研究提供有效工具。方法:采用RT-PCR方法扩增肝癌细胞株HepG2内HIF-1α基因功能区片段,克隆至真核表达载体pcDNA3上,转染HepG2细胞后,经G418筛选,建立稳定表达HIF-1α基因的细胞株,免疫荧光染色和Western-blot分析HIF-1α蛋白的表达。结果:通过酶切鉴定,凝胶电泳分析,两条带大小分别位于5.3kb和2.55kb,与预期结果符合,序列测定证实HIF-1α与GeneBank公布的序列一致。经脂质体包裹转染HepG2后,免疫荧光染色和Western-blot分析证实HIF-1α蛋白的表达明显上调。结论:经脂质体途径成功构建稳定表达HIF-1α的细胞模型,为肝癌研究提供了一个有效的工具。     

HIF-2α在宫颈癌组织中的表达及意义

目的:探讨低氧诱导因子2α(HIF-2α)在宫颈癌组织中的表达以及在宫颈癌发生发展中的作用。方法:采用免疫组化法检测HIF-2α在正常宫颈及宫颈癌组织中的表达,并将HIF-2α表达与宫颈癌的临床病理特征进行相关分析;采用siRNA技术干扰HIF-2α在宫颈癌细胞HeLa、SiHa的表达,Western blot技术检测HIF-2α蛋白在宫颈癌细胞的表达;MTT试验检测HeLa、SiHa细胞增殖情况。结果:HIF-2α在宫颈癌组织的表达明显高于正常宫颈组织,经χ2检验,有统计学意义,并且HIF-2α表达与宫颈癌的淋巴转移呈正相关,但与宫颈癌患者的年龄、病理分级以及临床分期无显著性相关。低氧可诱导HIF-2α表达增加,并促进HeLa、SiHa细胞增殖,而干扰HIF-2α表达后,则抑制HeLa、SiHa细胞增殖,经t检验,具有统计学意义。结论:HIF-2α在宫颈癌中的表达升高,其对宫颈癌的发生发展起促进作用。     

间断性缺氧对结肠癌SW480细胞HIF1-α和生存素表达的影响

目的 模拟肿瘤缺氧环境,观察缺氧诱导因子1-α(hypoxia inducible factor 1-α,HIF1-α)和生存素在结肠癌SW480细胞中的表达变化.方法 用三气培养箱模拟肿瘤间断性缺氧环境,免疫荧光检测HIF1-α和生存素蛋白的表达部位,RT-PCR和Western blot检测HIF1-α和生存素m...     

HIF-1α和 VEGF 在喉癌组织中的表达及其意义

【目的】探讨缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）,血管内皮生长因子（VEGF）在喉癌中的表达及与临床病理特征的关系。【方法】采用免疫组化染色检测62例喉癌组织及46例癌旁组织中HIF-1α和VEGF的表达情况,并结合相关临床病理参数进行分析。【结果】HIF-1α和VEGF在喉癌中阳性表达率分别为67．74％和62．90％,均高于癌旁组织中的表达（ P ＜0．05）,且两者表达呈显著正相关性（ P ＜0．05）。HIF-1α表达与TNM 分期和临床分期相关,VEGF表达则与临床分期和淋巴结转移相关（ P ＜0．05）。生存分析表明 HIF-1α、VEGF阳性和阴性表达患者无瘤生存率和总生存率差异显著（ P ＜0．05）。【结论】HIF-1α和VEGF在喉癌的发生发展中发挥着重要作用,且两者存在相互协同作用。HIF-1α可能通过上调VEGF的表达,促进肿瘤血管生成,并导致肿瘤浸润和淋巴结转移,两者可作为判断喉癌生物学行为和预后的重要指标。     

缺氧应激对HepG-2增殖活性和HIF-1α、MMP-2表达的影响

目的研究缺氧应激对人肝癌细胞HepG-2增殖和缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、基质金属蛋白-2(MMP-2)表达的影响。方法将缺氧(5%O2、5%CO2、90%N2)和常氧环境中培养的HepG-2细胞,在相差显微镜下观察细胞形态变化;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖活性;用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法测定常氧组和缺氧4、12、24h组HepG-2细胞HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA的表达量;用双抗体夹心酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定常氧和缺氧12、24h组细胞培养上清MMP-2蛋白含量。结果同时相缺氧组HepG-2细胞增殖活性与常氧组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。常氧下HepG-2细胞不表达HIF-1αmRNA,缺氧4h时HIF-1αmRNA表达量最高,随后下降(P<0.01),但仍高于常氧组;缺氧4h时MMP-2mRNA表达量最高,随后下降,但仍高于常氧组(P<0.01);缺氧组HIF-1αmRNA和MMP-2mRNA呈高度正相关关系。缺氧24h组HepG-2细胞培养上清液中的MMP-2蛋白含量与常氧24h组含量比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论缺氧应激(5%O2)促进人肝癌细胞HepG-2的增殖作用并上调HIF-1α和MMP-2的表达量。     

HIF-1α和HIF-2α在人肾透明细胞癌中的表达及意义

目的探讨低氧诱导因子HIF-1α和HIF-2α在人肾透明细胞癌组织中的表达及其临床意义。方法应用RT-PCR的方法从转录水平检测了56例原发性散发肾细胞癌和52例正常肾组织中HIF-1αmRNA及HIF-2αmRNA的表达情况,应用Western-Blot方法从蛋白质水平检测了HIF-1α和HIF-2α的表达情况。结果HIF-1αmRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为87.5%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05);HIF-2αmRNA在肾透明细胞癌标本组织中的表达率为94.6%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。56例CCRCC组织标本中52例表达HIF-1α蛋白,阳性率为92.9%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。56例CCRCC组织标本中54例表达HIF-2α蛋白,阳性率为96.4%,较对照组织中增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论HIF-1α和HIF-2α的表达可能对肾透明细胞癌的发生和发展有重要作用。