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盐析法快速提取口腔拭子DNA 总被引:2,自引:2,他引:0
目的建立盐析法快速从口腔拭子中提取基因组DNA的方法。方法首先以细胞裂解液和蛋白酶K消化口腔上皮细胞,然后用5 mol/L NaCl沉淀蛋白质,用异丙醇沉淀DNA,最后用70%乙醇洗涤得到的DNA并将其溶于TE(10mmol/L Tris-HCl,1 mmol/L EDTA,pH 8.0)中。用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术对TP53基因的rs1042522和CHRNA3基因的rs12910984位点进行分型。对不同基因型的样本测序验证。结果单支口腔拭子提取得到的DNA量在0.68~2.56μg之间,D260/D280比值在1.77~1.94之间。经PCR扩增和酶切消化,10个样本的两个单核苷酸多态性都得到了清楚分型。酶切结果与测序结果吻合。结论本实验所建立的盐析法可以快速、简便、经济地从口腔拭子得到高质量的基因组DNA。 相似文献
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目的探讨线粒体DNA调控区基因多态性与飞行员飞行耐力的关系。方法利用聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析(PCR—RFLP)分析86例飞行员和80例普通人群线粒体调控区基因多态性。结果飞行员线粒体DNA调控区RFLP分布与普通人群有统计学差异。结论线粒体DNA调控区基因多态性可能在飞行员的飞行耐力中起重要作用。 相似文献
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目的:建立区别动物亲缘关系的分子生物学方法以选择建立葡萄胎动物模型所需的近交系小鼠。方法:用人肌红蛋白基因内含子中重复序列的多聚体为探针,经α32PdCTP标记,与近交系小鼠BALB/C和昆明小鼠的DNA限制性片段作Southern杂交,探讨该序列在鼠基因组中是否同源分布及其多态性。结果:所用的两种鼠在2~23kb间都出现了多条杂交带,两者的带纹分布有明显差别,表现出高度的多态性。结论:人类的这一DNA序列在小鼠中有广泛的分布,并且存在着不同的拷贝数,表现出了鼠间DNA多态性的不同,这对进一步研究鼠间亲缘关系和种系鉴别以恰当选择实验所需动物以及实验动物的遗传监测具有理论和实际意义 相似文献
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目的 探讨自然杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因(KIR3DL2)第3外显子52位点(A/G)和第9外显子32位点(C/T)突变与子痫前期发病的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,对95例子痫前期患者和91名正常妊娠妇女的KIR3DL2基因第3外显子A52G、第9外显子C32T突变进行检测.结果 KIR3DL2基因第3外显子52位点基因型频率分布及等位基因的频率分布在两组间比较差异均有统计学意义(均P<0.05).子痫前期组第9外显子基因型频率与对照组的基因型频率比较差异有统计学意义(P<0.05).轻度子痫前期与重度子痫前期在上述两位点的基因型频率分布及等位基因的频率分布比较差异均无统计学意义.结论 KIR3DL2基因第3外显子A52G突变与子痫前期的发病有关,第9外显子32位点基因型频数分布与子痫前期发病有关,但与子痫前期的发病程度无关. 相似文献
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[目的]观察棘阿米巴土壤分离株CJY/S3的线粒体DNA限制性片段长度多态性.[方法]从棘阿米巴CJY/S3提取线粒体DNA,用EcoRI进行酶切,与广东地区土壤分离株CG/S1进行比较观察限制性片段长度多态性.[结果]延吉市土壤分离株CJY/S3与广东地区土壤分离株CG/S1具有相同的片段模式.[结论]延吉市棘阿米巴土壤分离株CJY/S3与CG/S1具有密切的亲缘关系,而线粒体DNA限制性片段长度多态性分析是棘阿米巴分类简便且有效的方法. 相似文献
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目的:探讨雌激素受体α基因PvuII和XbaI位点的单核苷酸多态性与良性前列腺增生(BPH)发病风险的关系。方法:收集112例BPH患者和111例健康对照人群的外周血标本,应用PCR-RFLP技术分析雌激素受体α基因PvuII和XbaI的单核苷酸变异,采用非条件logistic回归分析和计算其基因型和等位基因频率。结果:PvuII和XbaI位点基因型符合Hardy-Weinberg平衡检验;PvuII位点以杂合子基因型Pp占多数(占44.84%),基因型PP最少(占14.35%);XbaI位点以纯合子基因型xx为主,为64.13%;XX最少,为4.48%;比较PvuII和XbaI位点的基因型和等位基因在BPH患者和健康对照中的分布频率,差异均无显著性(P〉0.05);雌激素受体α基因PvuII与XbaI位点间具有较强的连锁不平衡效应(D’=0.958,r2=0.398)。单体型分析显示pX在BPH患者中的分布显著高于健康对照人群(P=0.032108,OR=6.394,95%CI:0.919~44.517),提示单体型pX是BPH发生的易感因素。结论:雌激素受体α基因的单核苷酸多态性与前列腺增生发病存在一定的相关性。 相似文献
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目的:探讨在中国北方汉族人群中PTGER3基因rs12026099、rs2250312和rs1022528基因多态性与精神分裂症的关系。 方法:采用聚合酶链式反应-限制性内切酶片段长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测中国北方汉族240个由精神分裂症患者及其健康父母组成的核心家系的基因型,应用遗传统计学方法进行单倍型相对风险分析(HRR)、传递不平衡检验(TDT)、单倍型分析和临床症状关联分析。 结果:患者组和父母组PTGER3基因的rs12026099、rs2250312和rs1022528基因型频数分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律(P>0.05);HRR分析结果显示,父母传递和未传递给患病子女的3个位点的等位基因频数分布差异均无显著性(χ2= 1.396,P>0.05;χ2= 0.042,P>0.05;χ2= 0.119,P>0.05);TDT分析结果显示,杂合子父母双亲的3个位点的不同等位基因传递概率均未偏离50% (χ2= 1.380,P>0.05;χ2= 0.043,P>0.05;χ2= 0.126,P>0.05);单倍型分析结果显示,rs2250312和rs1022528位点等位基因位于同一单倍型域结构内,但两位点所形成的单倍型与精神分裂症无关联(χ2=6.500,P>0.05);单核苷酸多态性(SNPs)位点与精神分裂症临床症状的关联性χ2检验结果显示,rs12026099位点与精神分裂症的情感淡漠和偏执型精神分裂症的思维逻辑障碍有
关联(χ2=4.578,P=0.032;χ2=6.100,P=0.047),rs2250312位点与偏执型精神分裂症的思维逻辑障碍和意志贫乏有关联(χ2=4.471,P=0.034;χ2=4.206,P=0.040),rs1022528位点与偏执型精神分裂症的思维逻辑障碍有关联(χ2=4.108,P=0.043)。结论:在中国北方汉族人群中PTGER3基因上的rs12026099、rs2250312和rs1022528位点可能与精神分裂症的发病无关联,而与精神分裂症的临床症状有关联。 相似文献
关联(χ2=4.578,P=0.032;χ2=6.100,P=0.047),rs2250312位点与偏执型精神分裂症的思维逻辑障碍和意志贫乏有关联(χ2=4.471,P=0.034;χ2=4.206,P=0.040),rs1022528位点与偏执型精神分裂症的思维逻辑障碍有关联(χ2=4.108,P=0.043)。结论:在中国北方汉族人群中PTGER3基因上的rs12026099、rs2250312和rs1022528位点可能与精神分裂症的发病无关联,而与精神分裂症的临床症状有关联。 相似文献
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广西壮、汉族绝经后妇女维生素D受体基因多态性的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 探讨维生素D受体 (vitaminDreceptor,VDR)基因多态性 ,以获得在广西壮、汉族妇女VDR受体基因频率分布数据。方法 用聚合酶链反应 -限制性片段长度多态性 (polymerasechainreaction ristrictionfragmentlengthpolymorphism ,PCR RFLP)方法检测壮、汉族绝经后妇女各 80例的VDR基因型。结果 壮、汉族绝经后妇女BB、Bb和bb基因型频率分别为 0 0 6 5比 0 0 5 4、0 739比 0 6 6和 0 1 96比 0 2 86 (P >0 0 5 ) ;壮、汉族绝经后妇女B和b等位基因频率分别为 0 4 31比 0 381和 0 5 6 9比0 6 1 9(P >0 0 5 )。结论 广西壮、汉族绝经后妇女VDR基因多态性无显著性差异。 相似文献
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Establishment and analysis of specific DNA patterns in 16S-23S rRNA gene spac er regions for differentiating different bacteria 总被引:3,自引:0,他引:3
Objective To establish the specific 16S-23S rRNA gene spacer regions in different bacteri a using polymerase chain reaction (PCR), restriction fragment length polymorphis m (RFLP), DNA cloning and sequences analysis.
Methods A pair of primers were selected from highly conserved sequences adjacent to the 16S-23S rRNA spacer region. Bacterial DNA from sixty-one strains of standard bacteria and corresponding clinical isolates representative of 20 genera and 26 species was amplified by PCR, and further analyzed by RFLP, DNA cloning and se quences analysis. Furthermore, all specimens were examined by bacterial cultur ing and PCR-RFLP analysis. The evaluation of these assays in practical clinic practice was also discussed.
Results Restriction enzyme analysis revealed one, two or three bands or more observed am ong the 26 different standard strains. The sensitivity of PCR reached 2.5 colony-forming unit (CFU), and there was no cross reaction with human genomic DNA, fungus or virus. Fourt ee n species could be distinguished immediately by PCR, while another 10 species we re further identified by Hinf Ⅰ or Alu Ⅰ digestion. The only difference betwe en K.pneumoniae and E.durans was located at the site of the 779th nucleot ide according to the sequence analysis and only XmaⅢ digestion could distingui sh one from another. Of 42 specimens from septicemic neonates, 15 were identifi e d as positive by blood culture at a rate of 35.7%. However, 27 specimens ident ified as positive by PCR, with a rate of 64.2%, a method significantly more eff ective than blood culture (P<0.01). Of 6 cerebrospinal fluid (CSF) specim ens, one tested positi ve for S.epidermidis was also positive by PCR, two culture negative were po sitive by PCR and diagnosed as S.epidermidis according to the DNA pattern. One positive for C.neoformans was negative by PCR. The other two specimen s were negative by both PCR and culture.
Conclusions The method of detecting bacterial 16S-23S rRNA spacer regions using PCR-RFLP t echniques was specific, sensitive, rapid and accurate in providing a new techniq ue for detecting pathogens in clinical bacterial infections. 相似文献
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从人血凝块中提取基因组DNA 总被引:2,自引:0,他引:2
目的从人血凝块中提取基因组DNA。方法室温自然解冻,机械磨碎,高盐、高EDTA提取液处理,消化液消化,酚氯仿抽提。结果用改良酚氯仿法从人血凝块中成功提取基因组DNA,提取的DNA浓度为:(32±10)mg/L,且光吸收比值A260/A280>1.8。结论用改良法提取的基因组DNA的总量较高,提取效率高,PCR扩增效果好,可很好的用于血凝块基因组DNA的提取。 相似文献
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目的 研究单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)-2518位点功能多态性在山东省汉族群体系统性红斑狼疮(SLE)及狼疮肾炎(LN)中的表达.方法 通过聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析检测72例SLE病人及59例健康体检者(对照组)MCP-1基因多态性.结果 对照组A/A型基因型频率显著高于SLE患者组(P=0.001),A/G型(P=0.024)、G/G型(P=0.020)多见于SLE患者.与无狼疮肾炎SLE患者相比,患狼疮肾炎的SLE患者较常见基因型为A/G(P=0.024) 和G/G(P=0.015)型基因型.相反,无狼疮肾炎的SLE患者65%基因型为A/A型,而患狼疮肾炎的SLE患者仅19%基因型为A/A(P=0.000).结论 山东省汉族群体患SLE的患者MCP-1基因型为A/G或G/G者易发生狼疮肾炎. 相似文献
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Zhang Dan Cao Zhenqiang Zhang Guizhen Wu Mei Zhang Yucheng Du Zhenwu Zhang Xuewen 《中华医学杂志(英文版)》2014,127(11):2191-2193
Epidermal growth factor receptor (EGFR) is frequently overexpressed in non-small-cell lung cancer (NSCLC) and plays a key role in tumorigenesis.1 Small molecule tyrosine kinase inhibitors (TKIs),such as gefitinib,erlotinib,and icotinib,which can inhibit receptor tyrosine kinase activity of EGFR become clinically available for the treatment of non-small-cell lung cancer (NSCLC).2 NSCLC patients with EGFR mutation have experienced a marked response to EGFR-TKIs therapy.3 Detection of mutations of the EGFR gene is critical for predicting the response to therapy with TKIs.4 相似文献