SLE患者外周血T细胞bcl-2蛋白的表达

<正>淋巴细胞bcl-2蛋白表达增强能使其对常见的凋亡激发因素如电离辐射,糖皮质激素和多种细胞毒药物产生较强的抵抗性.研究表明bcl-2蛋白在T细胞生长发育、免疫记忆等方面都具有重要作用,其表达异常与SLE疾病的发生发展密切相关.本文应用流式细胞仪定量检测了不同病期SLE患者外周血T细胞bcl-2基因表达情况,旨在从分子水平上探讨SLE免疫功能紊乱的基因调控机制,为今后SLE治疗提供新线索和途径.     

麻风患者外周血B细胞和T细胞及其亚群的研究

麻风患者外周血Ｂ细胞和Ｔ细胞及其亚群的研究何浩明，田小平，徐凤英，庄惠琴，徐宁江苏省连云港市第一人民医院临床免疫研究室连云港２２２００２兰义和，徐东升江苏省连云港市皮肤病防治研究所有关麻风患者外周血Ｔ细胞亚群的研究国内外已有报道，但直接检测外周血Ｂ细...     

人类bcl—2cDNA在NIH／3T3细胞中的表达

将０．９１ｋｂ的含有完整开放阅读框的人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ以正向克隆于逆不病毒载体ｐＬ－ＸＳＮ的ＥｃｏＲ１位点，经ＰＡ３１７细胞包装后感染ＮＩＨ／３Ｔ３细胞，筛选出Ｇ４１８抗性克隆，经免疫印迹证实人类ｂｃｌ－２ｃＤＮＡ在ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中获得了表达，这一表达人类Ｂｃｌ－２蛋白的哺乳类细胞模型的建立探讨ｂｃｌ－２的作用机制及其与其它基因间关系的研究奠定了基础。     

SLE患者外周血T细胞亚群凋亡特点及其相关机制的研究

目的:研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血CD3+、CD4+、CD8+T细胞亚群的凋亡特点及其相关的凋亡机制。方法:采用三色荧光流式细胞术检测高活动性SLE患者、低/非活动性SLE患者以及正常对照者外周血T细胞亚群的百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡(AV+PI-)的情况;采用ABC-ELISA法测定各组SLE患者和正常对照者血清IL-10水平;对10例血清IL-10水平异常升高的高活动性SLE患者进行体外PBMCs培养实验,其中分别加入抗FasL抗体和抗IL-10抗体,48小时常规培养后分别检测PBMCs中T细胞亚群百分比例、T细胞亚群膜表面Fas/FasL的表达率、T细胞亚群早期凋亡的变化。结果:SLE患者外周血T细胞凋亡异常增多,其中以高活动性SLE患者CD4+T细胞亚群的凋亡尤为显著(P0.05),CD4+T细胞的异常凋亡与CD4+和CD8+T细胞膜表面表达增高的Fas/FasL密切相关(P0.05);各组SLE患者外周血血清IL-10水平均明显升高(P0.01),高活动性SLE患者更为明显,血清IL-10水平升高不仅与SLE主要临床检验指标相关,而且与CD4+/CD8+比值减少、CD4+T细胞高表达FasL相关(P0.05);随访研究显示,随着SLE病情好转、稳定,血清IL-10水平下降明显、T细胞亚群Fas/FasL的表达率明显减少、T细胞亚群凋亡逐渐减少,以上变化均在CD4+T细胞亚群中体现得最为明显(P0.05)。结论:SLE患者T细胞活动性异常升高,尤其是CD4+T细胞亚群凋亡增加,是SLE疾病发展的重要病理机制,IL-10作为能诱导T细胞高表达Fas/FasL的重要调节因子,参与了SLE患者CD4+T细胞凋亡的免疫调节,SLE患者异常增高的IL-10很可能通过Fas/FasL途径促进了T细胞尤其是CD4+T细胞亚群的凋亡。     

SLE病人外周血Bcl—2／JH基因重排检测的意义

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测３１例ＳＬＥ病人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象和流式细胞仪间接双标记法分析其Ｔ（ＣＤ３）、Ｂ（ＣＤ１９）细胞Ｂｃｌ－２蛋白的表达。结果显示，ＳＬＥ病人Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于正常人（４２．９５％±２８．４７％对比９．９４％±４．９６％，Ｐ＝０．０００４），尤其以活动期ＳＬＥ病人为明显，而Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达与正常人之间并无统计学差异（７９．２１％±１０．６９％对比８１．９６％±６．９７％；Ｐ＝０．４６０２）。７例ＳＬＥ病人具有典型的Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排（占２２．５８％），且均为ＳＬＥ活动期病人，其Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于无基因重排的ＳＬＥ病人，其Ｂ细胞Ｂｃｌ－２表达并无差异（Ｐ＞０．３９０５）。说明Ｂｃｌ－２／ＪＨ基因重排现象可见于ＳＬＥ，并与Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白高表达有关，表明细胞凋亡抑制基因Ｂｃｌ－２在ＳＬＥ发病机制中具有重要作用。     

T细胞表达Fas用于评价系统性红斑狼疮活动性和疗效的价值

目的：流式细胞术检测系统性红斑狼疮(SLE)患者T细胞表面Fas表达水平，探讨其用于评价疾病活动指数和疗效的价值。方法:对36例活动期SLE患者和18名正常人群，通过流式细胞仪检测T细胞Fas表达和凋 亡率。对SLE患者分别给予泼尼松、甲泼尼龙、环磷酰胺冲击治疗，在入院3 d内、出院时（平均住院天数为22.6 d）、出院后4周分别检测T细胞Fas表达（Fas+T）。结果:活动期SLE患者T细胞表面Fas表达与T细胞凋亡率和SLEDAI之间，具有明显正相关P<0.01），皮质类固醇或免疫抑制剂治疗活动期SLE患者后，出院时T细胞表面Fas 表达（Fas+T）明显升高；出院后4周复诊时呈下降趋势。结论:SLE 患者T细胞表面Fas表达上调,由Fas介导的T细胞凋亡增强,刺激机体产生抗dsDNA等多种自身 抗体,可能是SLE免疫功能紊乱的主要原因。T细胞表面Fas密度可能是评价SLE疾病活动性和 临床疗效的主要参数。     

凋亡相关基因产物Fas抗原及bcl—2蛋白在甲状腺肿瘤组织中？…

目的：了解Ｆａｓ抗原及ｂｃｌ－２蛋白在甲状腺肿瘤组织中表达的意义。方法：用流式细胞技术对１４例乳头状甲状腺癌,１６例甲状腺瘤及３２例结节性甲腺肿组织中Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白的表达进行检测。结果：上述３组织中均测到Ｆａｓ抗原和ｂｃｌ－２蛋白表达没有统计学差异（Ｆ＝２．７８,Ｐ〉０．０５;Ｆ＝２．５６,Ｐ〉０．０５）。乳头状甲状腺癌组织Ｆａｓ抗原表达与ｂｃｌ－２蛋白表达有明显相关性（ｒ＝０．６４６     

CD137在SLE和RA病人外周血T细胞上的表达特点及意义

ＣＤ137是一种新的Ｔ细胞共刺激分子。最近研究显示 ,ＣＤ137和ＣＤ137配体 (ＣＤ137Ｌ)可能为ＣＤ2 8/Ｂ7之外的另一对关键的共刺激信号分子 ,开始引起人们的注意。目前国外有关ＣＤ137的研究主要来自鼠 ,在人方面的研究尚少 (至 1999年 9月仅有 14篇报道 ) ,许多问题尚不清楚。国外虽已研究了ＣＤ137在正常人Ｔ细胞表达 ,但有关ＣＤ137在自身免疫病病人的表达特点尚无报道。我们在研究了ＣＤ137在正常人外周血Ｔ细胞表达的基础上 ,进一步分析了ＣＤ137在系统性红斑狼疮 (ＳＬＥ)和类风湿性关节炎(ＲＡ)病人Ｔ细胞的表达特点。材料和方法材…     

再生障碍性贫血患者外周血T细胞FasL的表达分析

目的 比较分析再生障碍性贫血(AA)患者T细胞上Fas配体(FasL)的表达及其在胞内外的分布情况，观察AAT细胞胞浆FasL的释放特性及细胞毒作用。方法 以正常人“静息”T细胞和人为诱导活化的T淋巴母细胞为参照，采用免疫荧光标记和流式细胞技术，检测FasL在AAT细胞表面及胞浆中的分布；用体外大剂量PHA-过性刺激的方式诱导T细胞胞浆FasL的释放；以Jurkat细胞为靶向，同时辅以单抗阻断及超速离心的方法，观察AAT细胞FasL的释放特性和杀伤效应。结果 AA T细胞表面及胞浆中均有FasL的异常表达，其中胞浆FasL的异常表达尤为显著；高浓度胞浆FasL可在大剂量PHA-过性刺激时迅速向胞外释放；PHA刺激后的AAT细胞培养上清有明显的Jutkat细胞杀伤活性，该效应可被FasL McAb阻断，或经超速离心加以去除。结论 AAT细胞是一种处于预活化状态的细胞，具有与T淋巴母细胞相似的活化特征，含有高浓度、能以细胞外体形式诱导释放、具备完整活性的胞浆FasL是其异常活化的一大特点。     

复发性自然流产患者主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的研究

目的研究复发性自然流产(RSA)患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平,探讨Fas/FasL系统与RSA的发病关系以及主动免疫治疗对RSA患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达水平的影响。方法收集2009年6月至2010年4月在汕头大学医学院附属粤北人民医院妇产科门诊就诊的早孕期RSA患者12例,未孕期RSA患者15例作为研究组,采用荧光标记流式细胞分析技术分别检测主动免疫治疗前后外周血淋巴细胞Fas、FasL表达水平,选择同期正常早孕妇女15例,正常未孕妇女15例作为对照组,比较各组Fas、FasL表达水平的差异。结果 (1)未孕组中,RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas的表达水平均比正常妇女高,NK细胞FasL表达水平比正常妇女低(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比无明显差异(P>0.05);(2)早孕组中,RSA患者外周血NK细胞Fas、FasL的表达水平均比正常妇女低,CD8+T细胞Fas表达水平比正常妇女高(P<0.05),CD8+T细胞FasL、CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平两组相比则无明显差异(P>0.05);(3)主动免疫治疗后RSA患者(早孕组和未孕组)外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas表达水平均较治疗前下降,FasL表达水平均较治疗前上升,差异有统计学意义(P<0.05),CD4+T细胞Fas、FasL的表达水平与治疗前相比无明显差异(P>0.05)。结论 (1)外周血NK细胞和CD8+T细胞Fas表达升高,FasL表达不足是导致RSA发生的重要免疫学因素之一。(2)主动免疫治疗可能通过改变RSA患者外周血NK细胞和CD8+T细胞的Fas/FasL表达水平,改善细胞凋亡状态而取得疗效。     

Activation-induced peripheral blood T cell apoptosis is Fas independent in HIV-infected individuals

T cell apoptosis has been proposed as an Important contributorto the functional defects and depletion of T cells in HIV-lnfectedIndividuals. However, the mechanisms Involved in this apoptosishave not been elucidated. We recently showed that peripheralblood T cells from HIV-infected individuals are especially susceptibleto Fas antigen-induced apoptosis. In this study we examine therole of Fas, CTLA-4, tumor necrosis factor (TNF) receptors (TNFR)and CD30, receptors known to be involved In T cell activation-inducedcell death (AICD), in the spontaneous and activation (anti-CD3)-lnducedapoptosis of peripheral blood T cells from asymptomatic HIV-infectedindividuals. We report here that spontaneous and activation-InducedT cell apoptosis cannot be inhibited by reagents that blockinteractions of Fas, CTLA-4, p55 and p75 TNFR and CD30 withtheir respective ligands. We also show that IL-12, IFN-, IL-4and IL-10 cannot modify spontaneous, activation- and anti-Fas-inducedapoptosis. Anti-Fas preferentially Induced CD4⁺ T cell apoptosiswhereas AICD induced apoptosis equally In CD4⁺ and CD8⁺ T cells.We conclude that T cell AICD In HIV infection Is not mediatedby Fas, thus Indicating that Fas-Induced and activation-InducedT cell apoptosis are independent mechanisms of apoptosis whichmay play different roles in the pathogenesls of HIV infection.     

肾综合征出血热患者外周血淋巴细胞Fas/FasL表达及与血清sFas/sFasL的相关性研究

目的　探讨Fas FasL系统介导的细胞凋亡在肾综合征出血热 (HFRS)致病机理中的作用。方法　采用SABC免疫组化法检测HFRS病人外周血淋巴细胞Fas FasL的表达 ;采用ELISA法测定HFRS病人血清sFas sFasL的浓度。结果　HFRS病人发热期、低血压休克期、少尿期及多尿期外周血淋巴细胞Fas的表达明显增强 ,与正常对照组比较差异有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;发热期、低血压休克期及少尿期淋巴细胞FasL的表达明显增强 ,与正常对照组比较差异有极显著性 (P <0 .0 0 1) ;HFRS病人各期血清sFas的浓度增高 ,与正常对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ,其中少尿期sFas的浓度最高 ,与其它各期比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;发热期与低血压休克期血清sFasL的浓度增高 ,与其它各期及正常对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 1) ;淋巴细胞Fas及FasL的表达经直线相关分析(r=0 .885 5 ,P <0 .0 0 1) ,呈高度正相关 ;淋巴细胞FasL的表达与血清sFasL浓度经直线相关分析(r=0 .480 3,P <0 .0 1) ,呈高度正相关。结论　HFRS的致病过程中存在Fas FasL介导的细胞凋亡 ,sFas浓度的高低与机体损害的程度有关 ;淋巴细胞FasL的高表达及血清sFasL的浓度增高 ,由此而引起的细胞凋亡是机体清除病毒的主要机制之一     

Defective function of Fas in T cells from paediatric patients with autoimmune thyroid diseases

Triggering of the Fas receptor induces T cell apoptosis and is involved in shutting-off the immune response. Inherited defects impairing Fas function cause the autoimmune lymphoproliferative syndrome, and may play a role in other autoimmune diseases. The aim of this work was to analyse the Fas function in paediatric patients with thyroid autoimmunities. We found that T cells from 24/28 patients with Graves' disease (GD) and 12/35 patients with Hashimoto's thyroiditis (HT) displayed defective Fas function. In HT, the defect was more frequent in patients requiring replacement therapy (11/20) than in those not requiring (1/15); moreover, in untreated HT the highest defect was displayed by patients with the highest levels of autoantibodies. Fas was always expressed at normal levels and no Fas mutations were detected. Analysis of the healthy parents of seven Fas-resistant patients showed that several of them were Fas-resistant, which suggests a genetic component. Fusion of Fas-resistant T cells with the Fas-sensitive HUT78 T cell line generated Fas-resistant hybrid cells, which suggests the presence of molecules exerting a dominant negative effect on Fas function. Analysis of Fas-induced activation of caspase-8 and -9 showed decreased activity of both caspases in HT, whereas activity of caspase-9 was increased and that of caspase-8 was decreased in GD. These data suggest that heterogeneous inherited defects impairing Fas function favour the development of thyroid autoimmunities.     

甲状腺乳头状癌中Fas-L和bcl-2表达及其意义

目的　探讨甲状腺乳头状癌细胞凋亡相关蛋白Fas L和bcl 2的表达及其意义。方法　采用免疫组化S P法检测 8例正常甲状腺组织和 2 7例甲状腺乳头状癌中凋亡相关蛋白的表达 ,并分析凋亡相关蛋白的表达与甲状腺乳头状癌发生发展的关系。结果　甲状腺乳头状癌均有强弱不等的Fas L及bcl 2表达 ,有被膜浸润及术后复发者Fas L呈高表达 ,阳性率为81 8% ,预后较好者则为 31 2 % ,二者间差异有显著性 (P <0 0 5 ) ;甲状腺乳头状癌的有明显间质浸润及缺少淋巴细胞反应和邻近正常组织的癌细胞Fas L表达均较强。有被膜浸润及术后复发和预后较好者bcl 2呈高表达 ,阳性率分别为 87 5 % ,4 5 5 % ,二者间差异有显著性 (P <0 0 5 )。结论　甲状腺乳头状癌Fas L的高表达与肿瘤浸润性有关 ,Fas L表达愈强预示其预后不良。甲状腺乳头状癌bcl 2的高表达与其浸润性较弱有关。     

系统性红斑狼疮病人血T,B淋巴细胞Bcl—2的表达

目的：探讨Ｂｃｌ－２在系统性红斑狼疮（ＳＬＥ）发病机制中作用。方法：采用流式细胞仪双标记法检测３１例ＳＬＥ病人外周血Ｔ、Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达。结果：发现活动期ＳＬＥ病人活动期ＳＬＤ病人ＣＤ３＾＋、ＣＤ４＾＋和ＣＤ８＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达明显高于非活动期ＳＬＥ病人、其他疾病组和正常对照组。ＣＤ１９＾＋Ｂ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达在各组之间并无统计学差异。ＣＤ３＾＋Ｔ细胞Ｂｃｌ－２蛋白表达的平均     

Regulation of Fas(Apo-1/CD95)- and perforinmediated lytic pathways of primary cytotoxic T lymphocytes by the protooncogene bcl-2

Cytotoxic T cells (CTL) induce cell death of their target cells either by the surface interaction between Fas ligand and Fas or by the release of perforin and granzymes. Both lytic pathways induce apoptosis yet it is not known whether identical or distinct apoptotic pathways are activated. The protooncogene bcl-2 is known to protect various hematopoietic cells from apoptosis induced by diverse agents. Here we show that overexpression of the Bcl-2 protein in the murine mastocytoma line P815 or in concanavalin A-activated splenocytes suppresses apoptotic cell death induced by allospecific primary cytotoxic T lymphocytes (CTL) in which only the Fas lytic pathway was functional. Bcl-2 also reduced target cell killing induced by CTL whose lytic activity was dependent on the perforin/granzyme pathway only. These data provide evidence that, in the target cells studied here, both perforin/granzyme and Fas apoptotic pathways are modulated by Bcl-2 and suggest that these two pathways converge at a step prior to Bcl-2 inhibition.