FITC—PSA荧光标记法在检测人精子顶体结构中的应用

目的：探讨ＦＩＴＣ－ＰＳＡ荧光标记法在检测人精子顶体结构中的临床应用价值。方法：应用络合异硫氰酸荧光素的碗豆凝集素（ＦＩＴＣ－ＰＳＡ）进行精子顶体荧光标记,分别测定５８例不育患者及４６例正常生育男子的精液标本,比较两组间精子顶体完整率的差异。结果：正常生育组的精子顶体完整率显著高于不育组（Ｐ〈０．０１）。结论：ＦＩＴＣ－ＴＳＡ荧光标记法操作简单,技术结果可靠,特异性强,可作为评价人精子授精能力的一     

应用FITC—PSA荧光标记法检测人精子顶体结构及功能的初 …

目的：测定人类精子顶体结构及功能来探讨人精子的授精能力。方法：应用络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素（ＦＩＴＣ－ＰＳＡ）进行精子顶体荧光票标记，分别测定５６例不育患者及３８例正常生育男子的精液标本，比较两组间精子顶体完整率，精子－透明带结合的差异。结果：正常生育组的顶体寒带率及精子－透明带结合率均显著高于不育组（Ｐ〈０．０１）。结论：ＰＩＴＣ－ＰＳＡ荧光标记法操作简便，技术结果可靠，特异性强，具有良好     

精液白细胞与精子形态学参数的关系

目的：探讨精液白细胞与精子形态学参数之间关系。 方法：对278例不育患者采用精子形态检测系统下人工修正方法进行精子形态分析,采用精液白细胞计数法检测精液白细胞,采用改良巴氏染色法分析精子顶体形态。结果：白细胞精子症组形态正常精子率和顶体完整率均低于非白细胞精子症组（P<0.05）;形态正常精子率与精液白细胞浓度呈负相关关系（r=-0.243,P<0.01）;顶体完整率与精液白细胞浓度亦呈显著负相关关系（ r=-0.248,P<0.01）。结论：精液白细胞增多可能影响精子的形态和顶体的完整。     

精子形态学分析中染色方法的比较

目的：评价改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对形态正常精子率和顶体完整率检测结果影响。方法：分别采用改良巴氏染色法、瑞-吉染色法和考马斯亮蓝染色法对55例男性不育症患者精液涂片染色,计算形态正常精子率和顶体完整率。结果：①3种染色方法检测的形态正常精子率两两比较,差异均无显著性(P>0.05),瑞-吉染色法评价颈部和中段缺陷精子率及尾部缺陷精子率显著低于改良巴氏染色法和考马斯亮蓝染色法（P<0.05）。②3种染色方法检测的Ⅰ型、Ⅳ型顶体完整率两两比较,差异均无显著性 (P>0.05),改良巴氏染色法检测的Ⅱ型和Ⅲ型顶体完整率明显高于考马斯亮蓝染色法和瑞-吉染色法（P<0.05）。③3种染色方法检测的形态正常精子率间均呈显著正相关关系(r=0.535、P<0.01, r=0.601、P<0.01,r=0.329、P<0.05)。3种染色方法检测的顶体完整率间均呈显著正相关关系（r=0.604,P<0.01, r=0.682、P<0.01, r=0.446、P<0.01）。结论：3种染色方法均可作为检测人精子形态和顶体完整率实用方法,其中改良巴氏染色法更适于精子形态学分析,瑞-吉染色法更适于顶体完整率判读。     

顶体形态与精子活力、活率关系分析

目的探讨精子顶体形态与精子活力、活率关系.方法123例男性不育患者,采用精子自动分析质量检测系统检测精液常规,采用伊红Y水实验分析精子活率,采用联苯胺染色计数精液白细胞浓度,用改良巴氏染色法分析精子形态及顶体形态.结果精子活率正常组顶体完整率明显高于精子活率异常组(P＜0.05);精子活力正常组与精子活力异常组顶体完整率比较差异无显著性(P＞0.05);精液参数正常组顶体完整率明显高于精液参数异常组(P＜0.05);顶体完整率与正常形态精子百分率、精子活率呈显著正相关关系(P＜0.05,P＜0.01),与白细胞浓度呈显著负相关关系(P＜0.05).结论顶体形态分析可以在一定程度上反映男性生育力,是男性不育症诊断的一个有价值指标.     

精子 DNA 完整率和精子顶体完整率及反应率对卵胞浆内单精子注射术结局的影响

目的：研究精子 DNA 完整率和精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率对卵胞浆内单精子注射术（ICSI）结局的影响。方法分析行 ICSI 治疗的102对不孕不育夫妇,观察精子 DNA 完整率[用精子 DNA 断裂指数（DFI）表示]、精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率对 ICSI 结局的影响。结果DFI、精子顶体完整率及反应率与 ICSI 受精率、卵裂率、优胚率均无相关性（P ＞0.05）;妊娠患者 DFI 低于未妊娠患者,差异有统计学意义（P ＜0.05）;妊娠患者精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率均高于未妊娠患者,差异有统计学意义（P ＜0.05）。结论精子 DNA 完整率高（即 DFI 低）、精子顶体完整率及受精后精子顶体反应率高有利于提高行 ICSI的临床妊娠率。     

两种处理方法对精子顶体完整性和DNA损伤的影响

目的研究上游法和密度梯度离心法处理对精液常规参数、顶体完整性及DNA损伤的影响。方法 90例男性精液标本用上游法和密度梯度离心法处理,检测处理前后精液常规参数、精子顶体完整率及精子DNA碎片指数。结果两种方法处理后,精子浓度明显下降（P〈0.01）,精子活率、活力明显提高（P〈0.01）;正常形态精子比例和顶体完整率显著提高（P〈0.05）,DNA碎片指数显著降低（P〈0.01）,两种处理方法比较差异无统计学意义。结论两种处理方法均可以使顶体完整精子比例较处理前明显提高,DNA损伤精子比例较处理前明显降低,但两法之间无统计学差异。两种处理方法均可以不同程度优化精液质量,实验室可根据精液情况选择处理方法。     

三种精子染色法的染色效果比较

目的评价一种新的精子染色方法BASO（改良Diff-Quik）法在精子顶体检测中的应用。方法收集60例不育症男性精液,用BASO法、改良巴氏法和瑞姬氏混合染色法,同时进行染色,比较其固定和染色时间均数,并分析其精子顶体不完整率检测的差异。结果BASO法固定和染色约需7min,明显短于改良巴氏法和瑞姬氏混合染色法,而精子顶体不完整率检测的差异无显著性。结论BASO法操作步骤简单省时,可用于临床精子标本的染色,分析精子形态及精子顶体完整性。     

沙眼衣原体感染对精子顶体完整率的影响

目的探讨精液沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis,CT）感染对精子顶体的影响。方法收集100例精液标本,其中CT阳性70例,CT阴性30例,采用精子顶体染色法检测精子顶体完整率。结果 CT阳性组和CT阴性组比较精子顶体完整率比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论 CT感染导致精子顶体完整率明显降低而使男性生育力下降。     

慢性饮酒对雄性大鼠精子顶体完整率及精子动态参数的影响

目的探讨不同剂量乙醇对大鼠精子顶体完整率及精子动态参数的影响。方法 40只健康雄性成年Sprague-Dawley大鼠随机分为4组,每组10只。对照组大鼠给予蒸馏水灌胃,乙醇低、中、高剂量组分别给予无水乙醇0.5、2.5、5.0 g·kg-1·d-1灌胃,连续20周。比较各组大鼠精子顶体完整率及精子密度、平均速率、直线运动速率、曲线运动速率、精子头侧摆幅度、鞭打频率、前向性、直线性的变化。结果乙醇低、中、高剂量组大鼠精子顶体完整率均明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组精子顶体完整率均明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,乙醇低、中、高剂量组大鼠的精子动态参数均明显下降(P<0.05或P<0.01);与低剂量组比较,中、高剂量组大鼠精子动态参数均明显下降(P<0.01)。结论慢性饮酒可导致大鼠精子顶体完整率与精子动态参数出现不同程度异常。     

附睾蛋白RhoA参与人精子顶体反应

目的:研究RhoA在男性生殖系统中的表达和功能.方法:采用RT-PCR来检测RhoA的mRNA表达,Western blot和免疫组化用来检测RhoA蛋白在人睾丸,附睾及成熟精子中的表达.免疫荧光用来观察这个蛋白在人精子上的定位.豌豆凝集素(PSA)染色用来确定精子顶体反应率.结果:只能在附睾中检测到RhoA的mRNA,而RhoA蛋白不仅在附睾上皮中表达,在人精子上也有表达.它位于人精子的顶体和尾部,并且随着顶体反应转移到精子的赤道部及顶体后区.同时特异的RhoA抗体能够显著地抑制精子发生顶体反应(P<0.01).结论:结果表明RhoA可能是在附睾成熟过程中带到人精子质膜表面,从而使精子获得发生顶体反应的能力.     

跨膜蛋白CMTM2在人睾丸和精子中的表达及定位

目的：通过研究跨膜蛋白CMTM2在睾丸和精子中的表达来探讨CMTM2蛋白在男性生殖系统中潜在的功能。方法：Western blot方法检测CMTM2在人睾丸及精子中的表达,免疫组织化学及组织免疫荧光方法检测CMTM2在人睾丸组织中的定位,TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位。结果：CMTM2在人睾丸及精子中均有表达,在睾丸组织中CMTM2定位于各级生精细胞的细胞膜,睾丸组织冰冻切片免疫荧光检测的结果与免疫组织化学一致,进一步证实CMTM2存在于睾丸各级生精细胞的细胞膜,在精子中则定位于核后区附近。以TRITC-CMTM2及FITC-Hoechst免疫荧光双染法检测CMTM2在人精子顶体反应前后的定位,在顶体反应前后,CMTM2在人精子的定位及表达量未发生改变。结论：CMTM2在人睾丸和精子中均有表达,其表达定位具有细胞特异性和区域特异性,提示其可能在人睾丸精子发生和精卵融合过程中发挥作用,是男性不育研究的靶基因。CMTM2在男性生殖系统中的表达呈现细胞与生精区域的特异性,提示其高度参与生精功能,但目前针对CMTM2在男性生殖系统与精子生成过程中的作用仍未明确,今后可以采用体外受精 胚胎移植等技术进一步研究CMTM2的作用。     

精子DNA完整率、精子顶体完整率及反应率对补救卵泡浆内单精子注射术的影响

目的探讨精子DNA完整率、精子顶体完整率及反应率对补救卵胞浆内单精子注射（ICSI）结局的影响。方法回顾性分
析我院生殖中心行常规试管受精（IVF）失败需行补救ICSI的97对不孕不育夫妇,根据妊娠情况分为妊娠组（41例）及未妊娠组
（56例）,分析两组患者精子DNA完整率(用精子DNA断裂指数DFI表示)、精子顶体完整率及反应率对ICSI结局的影响。结果
两组患者男方年龄、睾酮值、睾丸体积、FSH值、女方年龄、获卵数均无显著差异（P>0.05）,但不育年限未妊娠组长于妊娠组,差
异有统计学意义（P<0.05）。两组患者行补救ICSI时受精率及卵裂率无显著差异（P>0.05）,但优胚率妊娠组高于未妊娠组,差异
有统计学意义（P<0.05）。两组精子DNA完整率（DFI）、顶体反应率均无显著差异（P>0.05）,但顶体完整率妊娠组高于未妊娠
组,差异有统计学意义（P<0.05）;精子DNA完整率、顶体完整率、顶体反应率分别与受精率、卵裂率、优胚率均无显著相关性（P>
0.05）。补救ICSI临床妊娠率为42.3%,双胎率为10.3%,单胎率为32.0%。结论补救ICSI是体外受精-胚胎移植受精失败后有
效的补救方案,精子顶体完整率与其妊娠结局相关。
     

游离细胞甘露糖受体的亲和细胞化学电镜观察

目的 对小鼠腹腔巨噬细腻及人精子的甘露糖受体（ＭＲ）进行超微结构定位。方法 采用甘露糖基化牛血清白蛋白（ＤＭＡ）结合１０ｎｍ胶体金制备探针ＤＭＡ－Ｇ１０,以此探针标记小腹腔巨噬细胞和获能前后的人精子,并用疼爱 射电子显微民制备的ＤＭＡ－Ｇ１０具有基露糖基结合特性。小鼠腹腔巨噬细胞可分为明、暗中类型。“暗细胞”不含ＭＲ,“明细胞”细胞膜表面含ＭＲ,该受体与ＤＭＡ－Ｇ１０结合后内化入细胞内。人 子发生     

杜仲叶提取物对人精子膜功能损伤的保护作用

目的 探讨杜仲叶提取物对人精子膜功能氧化损伤的保护作用。方法 应用梯度离心法,分离出正常精子作为模型,在采用次黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶体系产生活性氧(reactive oxygen species, ROS)环境下,使用维生素C(0.15mg/ml)及小、中、大剂量杜仲叶提取物(150、300、600mg/L)共同孵育精子悬液,检测精子膜中的丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)活力,通过精子尾部低渗膨胀试验、精子顶体完整率评估精子膜功能。结果 与模型组相比,维生素C和小、中、大剂量杜仲叶提取物在相同的条件下,均可提高精子悬液SOD活力,降低MDA含量(P<0.01)。与维生素C比较,小、中剂量的杜仲叶提取物对ROS所致精子膜的氧化损伤的保护作用差异无统计学意义(P>0.05),大剂量的杜仲叶提取物明显优于维生素C(P<0.01)。与模型组比较,小、中、大剂量杜仲叶提取物组的精子顶体完整率和精子尾部低渗膨胀试验结果均有统计学意义(P<0.01),大剂量杜仲叶提取物对精子的保护作用最显著(P<0.01)。结论 杜仲叶提取物对人精子膜结构和功能损伤具有显著的保护作用。     

Evaluation on Sperm Acrosome Integrity of Infertile Men with Varicocele

Objective To determine the sperm acrosome integrity of samples from infertile men with varicocele. Methods Forty-nine infertile men with varicocele were divided into three groups according to the grade of varicocele. Group A （grade Ⅰ）, B （grade Ⅱ）, and C （grade Ⅲ） consisted of 15, 18, and 16 cases, respectively. Besides, 15 semen samples from normospermic donors were used as the control. The acrosome integrity of sperm was examined with fluorescein-labeled Pisum sativum agglutinin. Acrosomal ultrastructure was observed with transmission electron microscopy. Results In three varicocele groups, most samples had high sperm abnormal morphology rates. There were significant differences in acrosome integrity rates between each varicocele group and the control （P〈0.01）. Group C had the lowest acrosome integrity rate among the three groups. Ultrastructural observation showed that acrosome malformations revealed acrosomal membranes defects, swelling, hypoplasia, and dissolution of the matrix. Conclusions Infertile men with varicocele had low level of acrosome integrity. Severe varicocele for infertile men might be associated with severe acrosomal defects. Evaluating sperm acrosome should aid the understanding of the sperm structural state and benefit the treatment for infertile men.     

Fertilizing capacity of human sperm preserved in cold electrolyte-free solution.

OBJECTIVE: To assess the fertilizing capacity of human sperm preserved in electrolyte-free (EF) solution at 4 degrees Celsius. METHODS: The motility, acrosome status and fertility index of human sperm were respectively assessed before and after preservation in cold EF solution. RESULTS: The motility of human sperm so preserved for one week was significantly higher than that of the sperm preserved in modified human tubal fluid (43.4+/-7.9% vs 9.5+/-2.5%, P<0.01). Although acrosome status of human sperm in EF solution before reinitiation differed little from that of fresh sperm (capacitated sperm: 7.6+/-1.8% vs 6.4+/-1.8%; acrosome-reacted sperm: 3.0+/-1.7% vs 2.4+/-1.1%, P>0.05), the percentage of capacitated and acrosome-reacted sperm in the EF solution significantly increased after reinitiation (16.0+/-2.3% vs 7.6+/-1.8% and 9.4+/-2.1% vs 3.0+/-1.7% respectively, P<0.01). The penetration rate and fertility index of the sperm in EF solution were comparable with those of fresh sperm (48.1% vs 50.9%; 1.38+/-0.16 vs 1.29+/-0.13, respectively). CONCLUSIONS: Preservation in cold EF solution does not induce human sperm to undergo capacitation and acrosome reaction, and the sperm so preserved for one week possesses comparable fertilizing capacity as fresh sperm does.     

解脲支原体感染治疗前后精子膜功能完整性的研究

目的 :研究解脲支原体感染治疗前后精子膜功能完整性的变化。方法 :应用精子尾部低渗肿胀试验对 46例UU感染者的精子于治疗前后分别进行测定。结果 :治疗前精子膜功能完整性显著低于治疗后 ,两者有非常显著性差异 (P <0 0 1)。结论 :解脲支原体感染使精子膜功能完整性明显降低 ,经药物有效治疗后 ,较短期内精子膜功能完整性可达到正常水平。     

应用FITC-PSA荧光标记法检测人精子顶体结构及功能的初步研究

目的 :测定人类精子顶体结构及功能来探讨人精子的授精能力。方法 :应用络合异硫氰酸荧光素的豌豆凝集素 ( FITC-PSA )进行精子顶体荧光标记 ,分别测定 5 6例不育患者及 38例正常生育男子的精液标本 ,比较两组间精子顶体完整率 ,精子-透明带结合的差异。结果 :正常生育组的顶体完整率及精子 -透明带结合率均显著高于不育组 ( P <0 .0 1)。结论 :FITC-PSA荧光标记法操作简便 ,技术结果可靠 ,特异性强 ,具有良好的应用价值