简易骨切片制作法

脱灰骨切片的制作,一般采用火棉胶切片或冰冻切片,用特殊方法染色,在切片制作上都比较麻烦,而骨磨片是将未脱钙的骨,经过仔细研磨制成不染色的较薄磨片,用空气封闭法封片或用特殊染色法染色均能显示骨陷窝及骨小管.这种方法在磨片过程中比较困难,费时费力.作者从以上两种方法得到启发,用脱钙骨切片,并用空气封闭法封片,显示骨陷窝及骨小管,此法操作简便,易掌握,结果优良,与骨磨片相一致.1 材料与方法取人的新鲜肱骨一块,用10%福尔马林固定1周左右,中间换几次固定液,然后锯成1～2mm厚的骨片.流水冲洗24小时,进入100%酒精充分脱脂后,再浸入100%酒精数次,将最后一次酒精倒出50%于水中,与水充分混合,若无脂类悬浮物存在,说明脱脂充分,蒸馏水洗.入下列脱钙液快速脱钙:7.5%硝酸3小时,10%盐酸3小时,5%蚁酸5小时,三氯醋酸3小时     

骨磨片封片技术改良

骨为最坚硬的结缔组织。镜下观察骨磨片的骨组织结构，必须使骨小管和骨陷窝内充满空气而成黑色，这样镜下观察时才能清晰可见，因此封片是制作骨磨片技术的难点之一。骨磨片一般不能用液体树胶封片，因为树胶中二甲苯会使骨小管及骨陷窝透明，结构反而不清晰。传统骨磨片封片通常使用石蜡或白漆将盖玻片四周封固或用浓稠的树胶封固，但是这两种方法容易使骨磨片发生移位，而从载玻片与盖玻片的空隙处滑落出来。     

一种改良的骨磨片封片方法

骨为最坚硬的结缔组织,众所周知,镜下观察骨磨片的骨组织结构,必须使骨小管和骨陷窝内充满空气而成黑色,这样镜下观察时就能清晰可见,因此封片是制作骨磨片技术的难点之一.     

多尺度分析骨质疏松大鼠骨微结构变化

目的 多尺度分析骨质疏松大鼠的骨微结构变化。 方法 20只5月龄雌性SD大鼠随机选取12只实施双侧去卵巢(ovariectomy, OVX)手术,术后 8 周形成骨质疏松大鼠模型,另外 8 只作为假手术( SHAM) 对照组。 利用Micro-CT 和 SR-Nano-CT 定量分析骨质疏松大鼠在组织尺度下皮质骨和松质骨以及细胞尺度下骨细胞、骨陷窝小管和细胞外基质的微结构变化。 结果 组织尺度下,OVX 组皮质骨的截面积较 SHAM 组显著增大(P<0. 05),皮质骨骨密度和厚度较 SHAM 组虽有变化,但不显著;OVX 组骨小梁的骨密度、体积分数、厚度和骨小梁数量较 SHAM组显著降低(P<0. 01),骨小梁分离度显著增加(P<0. 01)。 细胞尺度下,OVX 组骨陷窝半轴长较 SHAM 组没有显 著差异,但 OVX 组骨陷窝厚度和骨小管直径较 SHAM 组显著增大(P<0. 05);同时,细胞尺度下 OVX 组皮质骨孔隙率较 SHAM 组显著增大(P<0. 05)。 结论 OVX 大鼠骨在组织和细胞尺度出现不同程度的微结构变化。 其中,组织尺度主要是松质骨丢失,皮质骨变化不大;细胞尺度骨陷窝小管网络孔隙显著增大,将直接影响皮质骨骨密度和强度。 多尺度分析骨质疏松大鼠骨微结构变化对于骨质疏松症的临床诊断及病理分析有潜在的应用价值。     

浅谈骨磨片制作技术的改进

对于骨组织结构的了解一般是通过对骨磨片或骨切片的观察来认识的。在组织学教学中骨磨片是一个比较重要的标本,然而由于标本制作过程复杂且技术性要求较高,要制作较高质量的骨磨片并不很容易。作者通过一段时间对骨磨片制作技术的摸索,利用一些技术手段使骨磨片制作过程趋于简便,标本的质量也相对有所提高。1 骨的选择与骨片 所选用的骨为陈旧性长骨骨干,表面光滑、无细小裂缝,且略带一些油性。用纱布包绕     

可注射原位交联海藻酸钙骨修复材料小鼠体内异位成骨研究

目的对复合了人重组骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)的可注射原位交联海藻酸钙骨修复材料在小鼠体内异位成骨进行评估。方法实验组为含0．1mg rhBMP-2的材料0．1ml,空白对照组为不含rhBMP-2 的材料0．1ml,分别注射到小鼠左后肢大腿肌陷窝中,对照组植入含0．1mg rh BMP-2的骨优导,21天后, 影像学检查成骨情况,解剖称骨湿重,同时在注射后7天,14天,21天解剖实验组动物各三只,取注射部位进行HE染色组织学检查。结果 21天影像学检查显示实验组小鼠左后肢肌陷窝处有骨痂生成,解剖取异位成骨称湿重实验组为239．2±59．7mg,对照组为225．5±56．9mg,无显著性差异,2周后组织学检查有大量骨髓细胞及骨小梁生成。结论该材料有良好的诱导新骨生成的能力。     

CaMKIIδ在破骨细胞分化不同阶段表达规律的研究

目的:研究钙离子/钙调蛋白依赖性蛋白激酶II(Ca MKII)δ在破骨细胞分化不同阶段的表达规律,以揭示其在破骨细胞分化中的作用。方法:应用50μg/L核因子κB受体激活因子配体(RANKL)诱导小鼠RAW264.7细胞向破骨细胞分化;通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色及骨磨片吸收陷窝检测评价破骨细胞生成情况;同时于诱导第0、1、3、5天末通过免疫荧光细胞化学、RT-q PCR和Western blot法检测Ca MKIIδ的mRNA及蛋白表达水平。结果:TRAP染色及骨吸收陷窝检测显示于诱导第5天有多核破骨细胞生成。第0、1、3、5天Ca MKIIδ的mRNA表达水平分别为1.028±0.041、2.478±0.087、10.524±1.284和42.914±2.667,蛋白相对水平分别为0.762、0.963、1.802和3.136,免疫荧光细胞化学检测显示Ca MKIIδ的荧光6强度呈时间依赖性递增。结论:Ca MKIIδ的表达随破骨细胞分化逐步增高,提示Ca MKIIδ在破骨细胞分化中可能起着关键调控作用。     

一种骨磨片标本制作法—复红酒精浸染油磨法

对骨磨片的浸染,White用复红稀火棉胶液浸染骨磨片;Matschinsky用硝酸银液浸染骨磨片;Cowdry用酸性复红水溶液浸染;还有用大理紫酒精溶液漫染骨磨片的方法。 (我们曾用美兰、伊红液浸染骨磨片。)孟瑞朝也推荐复红稀火棉胶液和硝酸银液浸染骨磨片。上述诸法,各有其优点,特别是大理紫法。但也各有其不足之处,如硝酸银法的封片快而容易,但由于标本制作过程处理不当,或经过使用和光线照射之后,标本的黑色有普遍加深的现象。复红稀火棉胶法,则由于浸液中有火棉胶,浸透力弱,浸染的时间较     

耐力运动对青年与老年小鼠股骨组织微结构变化的影响

目的　应用原子力显微镜（atomic force microscope,AFM）观察中等强度耐力运动后青年与老年小鼠股骨组织微结构的变化,并探讨耐力运动对预防和改善骨质疏松的适宜年龄阶段。 方法　不同月龄清洁级雄性C57小鼠40只,平均分为3月龄青年组和16月龄老年组,每组再平均分为对照组和运动组。青年及老年运动组使用转棒仪跑步运动12周,运动参数15 r/min,25 min/日。对照组正常饲养。实验结束后处死各组小鼠取股骨,石蜡包埋切片后通过AFM观察小鼠股骨皮质骨组织微结构。 结果　青年对照组可见骨陷窝环绕哈弗系统排列规则,有骨小管与其相沟通,钙磷晶体部分呈小柱状,部分呈团状分布;与青年对照组相比青年运动组可见骨陷窝数量及大小变化,表面粗糙度显著降低（P＜0.05）,提示骨组织表面平滑度增加,骨量增加;与青年对照组相比老年对照组可见骨陷窝数量大小变化,钙磷晶体数量减少,表面粗糙度显著增高（P＜0.05）,提示存在骨质疏松;与老年对照组相比老年运动组可见骨陷窝及钙磷晶体数量及大小无明显改变,表面粗糙度改变无统计学意义。 结论　中等强度耐力运动可以改善青年小鼠骨组织微结构,提高骨质量,但对已经发生骨质疏松的老年小鼠骨微结构无明显改善。提示老年骨质疏松的运动预防可能需要从成年开始。     

大鼠破骨细胞体外分离培养和鉴定

采用机械分离方法，从新生大骨长管骨分离破骨细胞获得成功。分离的破骨细胞具有如下特性：１．在体外迅速贴附于盖玻片或骨片；２．多核（一般为３￣１０个细胞核）；３．伪足运动活跃，降钙素或降钙素基因相关肽可以抑制其伪足运动；４．酸性磷酸酶染色强阳性，酸性醋酸酯酶弱阳性，ＰＡＳ中等阳性；５．细胞悬液与骨磨片共同培养，可以形成骨吸收陷窝。由此可见，本研究分离的细胞，符合破骨细胞的公认特性，故本法分离培养破骨细     

双膦酸盐对破骨细胞分化及抗酒石酸酸性磷酸酶的影响

背景:抗酒石酸酸性磷酸酶是破骨细胞分化及骨吸收功能的特异性标志酶,是破骨细胞分化成熟的标志。目的:观察双膦酸盐对破骨细胞分化及骨吸收功能相关因子抗酒石酸酸性磷酸酶的影响。方法:小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组:对照组开始时加入质量浓度100μg/L核因子kB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,免疫荧光检测两组抗酒石酸酸性磷酸酶表达的差异,Western blot检测抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白表达情况。结果与结论:各组细胞均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P0.01)。免疫荧光检测显示,对照组抗酒石酸酸性磷酸酶表达均强于双膦酸盐组(P0.01)。Western blot检测显示,双膦酸盐组抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达低于对照组(P0.01)。说明双膦酸盐通过抑制抗酒石酸酸性磷酸酶蛋白的表达,阻碍破骨细胞分化生成及骨吸收功能。     

破骨细胞TRPV5通道对体外降解生物珊瑚人工骨的影响

背景：生物珊瑚人工骨是一种修复长段骨缺损的良好替代材料,但其在体内的降解吸收速率与新生骨的生长速率不够匹配,因而其在临床上的应用受到限制。目的：探讨破骨细胞TRPV5通道对生物珊瑚人工骨降解的影响。方法：取生长状态良好的小鼠单核巨噬细胞株RAW264.7,接种于生物珊瑚人工骨片上,加入破骨细胞诱导分化培养液,观察有破骨细胞出现后,分别加入含0,50,500,5 000μmol/L钌红(TRPV5通道抑制剂)的破骨细胞诱导分化培养液。培养一定时间后,激光共聚焦显微镜下观察TRPV5通道蛋白表达,扫描电镜下观察生物珊瑚人工骨片上的吸收陷窝,应用Western Blot检测细胞TRPV5通道蛋白表达。结果与结论：(1)激光共聚焦显微镜：TRPV5表达于破骨细胞的胞浆和胞膜,随着钌红浓度的增加,破骨细胞上TRPV5表达减少;(2)扫描电镜：0 nmol/L钌红组骨片上可见大片连续的骨吸收陷窝,其他浓度钌红组骨片上的骨吸收陷窝减少,并散在分布,并且随着钌红浓度的升高,骨陷窝面积逐渐减少;(3)Western Blot检测：与0 nmol/L钌红组比较,其他浓度钌红组TRPV5通道蛋白表达明显降低...     

阿仑膦酸钠对兔破骨细胞功能的影响

用骨陷窝形成分析法观察阿仑膦酸钠对体外培养破骨细胞功能的影响，探讨可能的作用机制。在建立兔破骨细胞培养方法的基础上，用不同浓度的阿仑膦酸钠分别与骨片或成骨细胞提前作用，然后再将骨片或成骨细胞分别与破骨细胞共同培养。结果发现当阿仑膦酸钠（10^-11,10^-9,10^-7mol/L)与骨片预处理后，破骨细胞在骨片上形成的骨吸收陷窝数目减少，其抑制率分别为19．5％（P＜0．05）、49．0％（P＜0．01）和74．5％（P＜0．01）。用阿仑膦酸钠（10^-9,10^-7,10^-5mol/L)预处理成骨细胞后，仅在高浓度（10^-5mol/L）时可见破骨细胞骨吸收陷窝的数目明显减少，其抑制率为62．8％（P＜0．01）。结果表明阿仑膦酸钠能直接或通过成骨细胞间接抑制破骨细胞的骨吸收活性。     

内减张技术辅助前交叉韧带重建对滇南小耳猪关节软骨的保护作用

背景：内减张技术可通过分担膝关节内部负荷有效减轻前交叉韧带重建移植物的松弛及微动，取得了较好的生物力学结果及临床疗效，但其是否能通过分担应力减轻前交叉韧带重建后的软骨退变尚不清楚。目的：观察内减张技术对前交叉韧带重建滇南小耳猪关节软骨退变的作用。方法：取10头成年雌性滇南小耳猪，左后膝采用自体跟腱移植进行前交叉韧带重建(普通组)，右后膝采用内减张增强系统联合自体跟腱进行前交叉韧带重建(减张组)。术后1年，取小耳猪膝关节软骨组织，分别进行苏木精-伊红染色、番红-固绿染色、国际骨关节炎研究协会评分及软骨Ⅱ型胶原、白细胞介素1β、肿瘤坏死因子α免疫组化染色分析。结果与结论：(1)苏木精-伊红染色显示，减张组可见轻微骨关节炎病理改变，空骨陷窝数量少，无明显纤维化、细胞层断裂等病理改变；普通组软骨损伤程度较重，空骨陷窝数量增多，靠近骨质部分软骨细胞缺失，甚至形成形态裂隙。番红-固绿染色显示，减张组软骨组织厚度正常，软骨面平整，细胞排列呈整齐呈极性，细胞无肿胀及凋亡；普通组软骨组织厚度明显变薄，细胞排列紊乱，极性丧失，细胞数量减少，有明显软骨裂隙及软骨空泡形成，靠近中央骨质部分细胞缺失明显。减张组...     

双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能的影响

背景:有研究表明双膦酸盐可抑制破骨细胞的骨吸收功能,但对其骨吸收功能关键细胞因子组织蛋白酶K是否产生作用,至今少有报道。目的:观察双膦酸盐对破骨细胞分化中组织蛋白酶K及骨吸收功能影响。方法:用小鼠单核巨噬细胞RAW264.7诱导培养破骨细胞。实验分2组:对照组加入质量浓度100μg/L核因子κB受体活化因子配体进行诱导至收获细胞,双膦酸盐组在对照组的基础上加入10-7 mol/L阿仑膦酸盐处理至收获细胞。培养第7天检测各组破骨细胞生成和骨吸收功能,培养72 h免疫荧光检测两组组织蛋白酶K表达差异,Western blot检测组织蛋白酶K蛋白表达情况。结果与结论:两组均有抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核破骨细胞生成,并在牙本质磨片上形成吸收陷窝;但对照组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞数目、吸收陷窝数目及陷窝面积均大于双膦酸盐组(P0.01)。免疫荧光检测组织蛋白酶K表达对照组强于双膦酸盐组(P0.01);Western blot检测组织蛋白酶K表达双膦酸盐组低于对照组(P0.01)。结果证实,双膦酸盐通过抑制组织蛋白酶K因子的表达,阻碍破骨细胞的骨吸收功能。     

骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞的作用

目的验证骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞形成及其生物学活性的影响。方法体外培养外周血单核细胞并加入巨噬细胞克隆集落刺激因子及核因子B激活因子配体诱导破骨细胞分化,实验组中分别加入含有或不含有硫酸钡的骨水泥颗粒。以抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞及象牙磨片上虫蚀样骨吸收陷窝的形成昨作为检测破骨细胞形成及其骨吸收活性的检测指标,检验骨水泥中的硫酸钡对破骨细胞的影响。结果含或不含硫酸钡的骨水泥颗粒组抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞形成均早于无骨水泥颗粒的对照组（4天vs6天）,而骨水泥颗粒中是否含有硫酸钡的两组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞形成的时间无明显差异。各组间抗酒石酸酸性磷酸酶阳性多核细胞的数量无显著差异;含硫酸钡的骨水泥颗粒组象牙磨片上骨吸收陷窝的面积较不含硫酸钡的骨水泥颗粒组及阴性对照组均增大（28.26±4.98vs22.28±3.49vs14.58±2.82,〈0.05）。结论骨水泥颗粒中的硫酸钡能够促进破骨细胞分化并促进成熟破骨细胞的骨吸收活性。     

EXAKT切磨系统在带金属种植体软硬组织切片中的应用

背景：目前常用的Polycut硬组织切片机难以制作皮质骨或含坚硬植入物组织的薄层切片,近年来这些切片多用EXAKT硬组织切磨系统进行制作。 目的：实验采用EXAKT切磨系统制作含金属内植物的软、硬组织薄层切片。 方法：取大鼠股骨远端、小鼠股骨干骨折部、带有钛合金种植体的犬下颌骨和带有钴铬支架的猪冠状动脉标本,经多聚甲醛固定和丙酮脱水后用有机玻璃(甲基丙烯酸甲酯)浸透包埋。组织包埋块用EXAKT系统作厚度约300 μm的切片,然后磨片至厚5~10 μm的切片。不同切片用苏木精-伊红和甲苯胺蓝染色后在光学显微镜下观察形态。 结果与结论：甲苯胺蓝染色显示,大鼠股骨远端骨组织切片中干骺端矿化骨小梁呈浅蓝色、皮质骨结构完整,无碎裂。含带有钛合金种植体的犬下颌骨切片浅蓝色宿主骨与黑色金属种植体密切结合,形成牢固的界面。四环素标记的小鼠股骨干骨折部骨痂切片,在荧光显微镜(紫外光)下显示明显的双层荧光带。苏木精-伊红染色的包裹钴铬合金支架材料的猪冠状动脉组织切片显示,支架材料维持在原位,与血管壁无脱离或游移现象,组织无皱缩或折叠。结果提示,采用EXAKT切磨系统技术能制作出高质量的软、硬组织薄层切片,可清晰显示各种组织结构和人工植入物。     

骨陷窝-骨小管系统内液体的流动

Cowin曾指出,在密质骨的生理结构中,由骨陷窝和骨小管组成的孔隙系统具有重要的生理意义。其内部组织液的流动,将影响其内部骨细胞的生理活动。因此,关于该系统的研究,成为当今生物力学的热点问题之一。Cowin曾估计了该系统的渗透系数和内部的压力,但忽略了该系统内部骨细胞的存在。本文则是考虑了该系统的内部组织液对骨细胞的作用,建立了相应的模型。利用该模型,求得：①骨小管内液体的流量q与压力梯度dp／dX之间的关系。并提出了上式的一种近似形式：其中,11为组织液的粘度,a和b分别是骨小管及骨细胞突起的半径。5＝a七。②…     

白细胞相关免疫球蛋白样受体-1在破骨细胞发育中的作用

目的 研究白细胞相关免疫球蛋白样受体-1(LAIR-1)在破骨细胞(0C)发育过程中的表达规律及影响.方法 PCR检测小鼠LAIR-1(mLAIR-1)分子在体外诱导OC生成过程中mRNA水平的变化;重酒石酸盐抗性酸性磷酸酶(TRAP)染色观察OC的数量;Coming Osteo Assay surface检测OC骨吸收陷窝的形成;ELISA检测类风湿性关节炎(RA)患者血清可溶型LAIR-1(sLAIR-1)与疾病的炎症状态和活动度是否相关.结果 PCR结果显示在OC形成过程中,LAIR-1 mRNA显著降低;TRAP染色和骨吸收陷窝实验均显示加入mLAIR-1单克隆抗体后,OC数量明显减少.RA病人类风湿因子高低水平组之间的血清sLAIR-1水平存在显著差异.结论 LAIR-1分子可能参与了OC的发育过程,并且与RA疾病的炎症状态有一定关系.     

抗骨松丹杞颗粒含药血清对成骨-破骨细胞共培养体系中破骨细胞功能的影响

目的:观察补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在成骨-破骨细胞共同培养体系中对大鼠破骨细胞(OC)骨吸收功能的影响。方法:取1 d龄SD大鼠的胎鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞,建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨-破骨细胞共育体系,实验分为不同浓度(低、中、高)的补肾方含药血清组和对照组进行比较,用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)和光镜观察骨陷窝数。结果:25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、96 h成骨-破骨细胞共育体系中OC分泌TRAP的活性明显降低于对照组;25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、120 h所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P0.01)。结论:补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在共育体系中能够抑制OC活性。