shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性的实验研究

目的:研究shRNA靶向沉默E盒结合锌指蛋白2（zinc finger E-box binding homeobox,ZEB2）表达对肺癌细胞增殖活性的影响。方法:用shRNA-ZEB2慢病毒和shRNA阴性对照慢病毒感染肺癌细胞,Real time PCR和Western blot检测沉默效果。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、β-连环蛋白（β-catenin）、C-myc蛋白水平。用Wnt/β-catenin信号通路抑制剂处理沉默ZEB2的肺癌细胞,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测细胞中激活型Caspase-3、β-catenin、C-myc蛋白水平。结果:shRNA-ZEB2慢病毒可以明显沉默肺癌细胞中ZEB2的表达和转录,shRNA阴性对照慢病毒对肺癌细胞中ZEB2的表达没有影响。沉默ZEB2后的肺癌细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中激活型Caspase-3蛋白水平升高,β-catenin、C-myc蛋白水平降低。Wnt/β-catenin信号通路抑制剂下调沉默ZEB2的肺癌细胞株中Wnt/β-catenin信号通路的激活水平,同时可以降低细胞存活率,诱导细胞凋亡,促进细胞中激活型Caspase-3的表达。结论:shRNA靶向沉默ZEB2表达通过Wnt/β-catenin信号通路降低肺癌细胞增殖活性。     

Wnt10a及Wnt/β-catenin信号通路促进宫颈癌细胞增殖及其机制研究

目的:探讨Wnt10a及其Wnt/β-catenin信号通路在宫颈癌中的作用及其机制。方法:qPCR检测Wnt10a在正常宫颈细胞和不同宫颈癌细胞系中的表达,选取Wnt10a高表达细胞进行后续实验。构建Wnt10a过表达质粒,将细胞分为对照组、Wnt10a过表达组、LGK-974(Wnt抑制剂)组和Wnt10a过表达+LGK-974组。qPCR和Western blot检测细胞中Wnt10a mRNA和蛋白的表达,CCK-8检测细胞增殖能力,Western blot检测细胞中凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3和Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc的表达。结果:Wnt10a在C-33 A、Ca Ski、HeLa、HeLa 229宫颈癌细胞中的表达均显著高于正常宫颈细胞(P<0.05),且在C-33 A细胞中的表达水平最高。与对照组相比,Wnt10a过表达组细胞增殖能力、细胞中Wnt10a mRNA及蛋白水平显著升高(P<0.01),Bcl-2、Wnt1、β-catenin、Cyclin D1、c...     

桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路影响胶质瘤U251细胞增殖的实验研究

目的 探讨桑根皮素调控Wnt/β-catenin信号通路对脑胶质瘤U251细胞增殖的影响.方法 体外培养人脑胶质瘤细胞U87,采用不同浓度桑根皮素(1、5、25、50、100μmol/L)作用于U87细胞,分别采用MTT法、细胞集落形成法、流式细胞术检测细胞增殖和凋亡活性.采用Western blotting法和细胞免...     

Wnt/β-catenin信号通路在食管癌变中的作用

Wnt家族基因编码一组糖蛋白信号分子,这些分子激活的信号通路在人类不同肿瘤细胞中的作用相互交织,β-catenin是Wnt信号通路正向调节的重要效应分子,该分子在细胞质内降解的失调可于细胞核内累积激活一系列靶基因的转录,导致肿瘤发生.近来,Wnt信号通路及其关键组分β-catenin在食管癌形成过程中的作用越来越受到重视,阻断Wnt途径,在食管癌治疗中可能是一个新的靶点.     

HPV16感染与宫颈鳞癌的相关性及对Wnt/β-catenin信号转导通路表达的影响

目的 探究人乳头瘤病毒16(HPV16)感染与宫颈鳞癌(SCC)的相关性及对Wnt/β-catenin信号转导通路表达的影响。方法 收集手术切除获得的106例SCC组织、76例宫颈上皮瘤变(CIN)组织和54例正常宫颈组织,采用荧光定量PCR及免疫组化法检测各组HPV16感染及宫颈组织中Wnt-3a、β-catenin蛋白表达情况,分析HPV16感染与Wnt-3a、β-catenin蛋白表达关系。结果 Wnt-3a蛋白在各宫颈组织中均表达在胞质;而β-catenin蛋白在正常宫颈组织中表达在细胞膜,在CIN组织和SCC组织中主要异常表达在胞质和胞核。HPV16感染率、Wnt-3a、β-catenin蛋白阳性表达率在各组织中比较存在显著差异(P<0.05);FIGO分期Ⅱ期、中低分化、淋巴结转移患者HPV16感染率分别高于FIGO分期Ⅰ期、高分化、淋巴结未转移患者(P<0.05);FIGO分期Ⅱ期、中低分化患者Wnt-3a、β-catenin蛋白阳性表达率分别高于FIGO分期Ⅰ期、高分化患者(P<0.05)。Pearson相关性分析显示,HPV16感染与宫颈鳞癌分化程度...     

Gab2基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt/β-catenin信号通路的影响

摘 要：［目的］ 探讨Gab2结合蛋白2（Gab2）基因在肺癌细胞表达及对癌细胞凋亡及Wnt信号/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响。［方法］ 以人胚肺成纤维细胞MRC5作为对照细胞,通过Western bloting检测肺癌H322、A549、PC9、H1299、SPC-A-1细胞中Gab2的蛋白表达;转染48h后Western bloting检测Gab2、Cleaved Caspase-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1（cyclin D1）、c-myc蛋白表达;流式细胞术检测各组细胞的凋亡情况。［结果］ 与MRC5细胞比较,Gab2在肺癌细胞中的表达显著性升高（P<0.05）。与对照组比较,Gab2-siRNA组Gab2 的蛋白表达降低,细胞凋亡率升高,Cleaved caspase3和Bax蛋白上调表达,Bcl-2、β-catenin、cyclin D1、c-myc蛋白表下调表达,差异均具有统计学意义（P<0.05）。［结论］ 抑制肺癌细胞Gab2表达能诱导细胞凋亡,机制是下调Wnt/β-catenin信号通路。     

miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌的发展和转移

目的 :研究在卵巢癌发展转移进程中miRNA-15a的作用, 并探讨其作用机制。 方法 :收集锦州医科大学附属第一医院2012年5月至2015年6月32例卵巢癌患者的手术切除标本, 采用RT-PCR检测miRNA-15a表达。将培养的卵巢癌SKOV-3细胞分为转染miRNA-15a模拟物的实验组和转染无义miRNA的对照组, 采用CCK8、Transwell及流式细胞术检测细胞增殖、侵袭和凋亡的变化, 采用Western blot法检测相关蛋白表达。通过生物信息学方法预测miRNA-15a靶基因, 采用双荧光素酶报告基因实验结合Western blot法验证miRNA-15a对靶基因的调控。检测Wnt3a与miRNA-15a模拟物共转染SKOV-3细胞后对细胞增殖和侵袭的影响。 结果 :与癌旁组织中的miRNA-15a相对表达量0.692±0.228相比, 显著低于卵巢癌组织中的0.911±0.209, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组细胞增殖能力相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组细胞增殖能力, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。与对照组189.667±14.742相比, miRNA-15a过表达显著抑制实验组的细胞侵袭能力96.667±13.614, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a过表达实验组的细胞凋亡率27.400%±0.854%显著高于对照组细胞凋亡率6.933%±0.379%, 差异具有统计学意义(P < 0.05)。miRNA-15a模拟物下调Wnt3a和β-catenin的表达, 抑制细胞周期蛋白(Cyclin D1)和血管内皮生长因子(vascu-lar endothelial growth factor, VEGF)的表达, 促进E-钙离子依赖的细胞黏附素(E-calcium-dependent adhesion, E-cad)的表达。双荧光素酶报告基因实验和Western blot结果表明miRNA-15a靶向抑制Wnt3a表达。上调Wnt3a能显著降低miRNA-15a对卵巢癌细胞增殖、侵袭和对Wnt/β-catenin信号通路的抑制作用。结论:miRNA-15a通过靶向Wnt3a调控Wnt/β-catenin信号通路的激活以抑制卵巢癌的发展和转移。      

黄腐酚类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌细胞增殖降低对顺铂的耐药性

目的:探究黄腐酚（xanthohumol,XN）类似物通过cAMP/Wnt/β-catenin信号通路调控卵巢癌细胞增殖的作用及对顺铂耐药性的影响。方法:以人卵巢癌细胞株HO-8910为研究材料,分为不同浓度(0、5、7.5、15、20 μmol/L)黄腐酚类似物组、对照组、顺铂组、黄腐酚类似物+顺铂组。采用四甲基偶氮唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法、实时荧光定量酶链式反应（quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR）、蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测黄腐酚类似物对HO-8910细胞增殖及对顺铂耐药性的影响。结果:与对照组比,黄腐酚类似物能够明显抑制HO-8910细胞增殖,差异具有统计学意义（P<0.05）;黄腐酚类似物a13+顺铂组HO-8910细胞对顺铂的半数抑制浓度（half maximal inhibitory concentration,IC50）显著低于顺铂组,细胞活性抑制率（inhibition rate,IR）显著高于顺铂组,差异具有统计学意义（P<0.05）;PKIβ（cAMP抑制剂）、IWP-2（Wnt/β-catenin抑制剂）可降低黄腐酚类似物a13对HO-8910细胞增殖的抑制作用,逆转黄腐酚类似物a13抑制HO-8910细胞对顺铂的耐药作用,差异具有统计学意义（P<0.05）。结论:黄腐酚类似物可提高顺铂对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,降低细胞对顺铂的耐药性,作用机制与激活cAMP/Wnt/β-catenin信号通路有关。     

紫杉醇通过抑制Wnt/β-catenin信号通路抑制鼻咽癌细胞增殖的实验研究

目的：探究紫杉醇对人鼻咽癌细胞株HONE1增殖、凋亡及对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法用终浓度为1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇处理HONE1细胞,分别在培养0、12、24、48 h后,用CCK-8检测HONE1细胞的增殖情况。培养48 h后,用平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成数;流式细胞术检测细胞凋亡情况;Western Blot检测细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt4、β-catenin及凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax表达情况。用终浓度为10 ng/ml的紫杉醇及100 ng/ml的Wnt阻断剂DKK-1单独或共同处理HONE1细胞48 h后,用CCK-8和流式细胞术分别检测细胞增殖和凋亡情况。结果1、5、10、20 ng/ml的紫杉醇能够不同程度地抑制HONE1细胞的增殖,减少HONE1细胞的克隆形成数目,促进HONE1细胞发生凋亡,下调Wnt4、β-catenin和Bcl-2蛋白表达,上调Bax蛋白表达,与对照组相比差异均有统计学意义（P﹤0.05）;用DKK-1抑制Wnt/β-catenin信号通路能够增强紫杉醇对细胞增殖的抑制作用及对细胞凋亡的促进作用,与紫杉醇处理组相比差异有统计学意义（P﹤0.05）。结论紫杉醇能够抑制人鼻咽癌细胞株HONE1增殖,并促进其发生凋亡,作用机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路对胃癌发生发展的影响

目的:探讨lncRNA BCAR4通过调节Wnt/β-catenin信号通路调控胃癌细胞的增殖和凋亡。方法:通过实时定量PCR法检测lncRNA BCAR4在胃癌组织和胃癌细胞中的表达;免疫组化方法分析胃组织中c-myc和cyclin D1蛋白的表达;通过MTT、克隆形成和流式细胞术分别检测lncRNA BCAR4对胃癌细胞SGC7901增殖和凋亡的影响,并通过Western blot法检测lncRNA BCAR4敲除前后对SGC7901细胞中c-myc、cyclin D1蛋白以及Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果:相比于癌旁组织以及胃黏膜上皮细胞,lncRNA BCAR4在人胃癌组织和胃癌细胞中表达显著升高（P＜0.01）;同时,c-myc和cyclin D1蛋白的表达在胃癌组织和胃癌细胞中也有所增加,尤其在SGC7901胃癌细胞中上调最为显著（P＜0.01）; lncRNA BCAR4敲除能够显著降低细胞活力,促进细胞凋亡（P＜0.01）。lncRNA BCAR4敲除能够显著抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化（P＜0.01）,进而降低其下游增殖相关蛋白c-myc和cyclin D1的表达（P＜0.01）。结论:降低lncRNA BCAR4能够通过抑制Wnt/β-catenin信号通路的活化,从而降低下游c-myc和cyclin D1蛋白表达,导致胃癌细胞的增殖抑制,促进细胞凋亡。     

Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌细胞VEGF表达的调控作用

背景与目的:血管新生是导致大肠癌向其他脏器组织侵袭、转移的重要原因。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)是重要的促血管生成因子之一,但其过表达机制尚不清楚。Wnt/β-catenin信号通路在大肠癌发生中存在过度激活,故与大肠癌的发生、发展密切相关。本研究旨在探讨Wnt/β-catenin信号通路对人肠癌VEGF表达的调控作用,揭示大肠癌血管新生的部分机制。方法:分别采用GSK-3β抑制剂SB-216763激活人肠癌HCT-116细胞Wnt/β-catenin信号通路和β-catenin/tcf抑制剂FH-535抑制Wnt/β-catenin信号通路,蛋白质印迹法(Western blot)法检测β-catenin蛋白表达,ELISA法检测细胞培养上清液中VEGF表达。结果:GSK-3β抑制剂SB-216763作用人肠癌HCT-116细胞后,β-catenin在细胞总蛋白、细胞质蛋白和核蛋白中的表达均明显升高,12 h达到最大值,分别是对照组的4.3、3.6和3.7倍(P<0.01);同时,激活Wnt/β-catenin信号通路能够上调人肠癌HCT-116细胞VEGF表达水平,并在24 h时差异最显著,是对照组的1.85倍(P<0.01);而抑制Wnt/β-catenin信号通路能够显著下调VEGF表达,是对照组的0.68倍(P<0.01)。结论:Wnt/β-catenin信号通路能够调控人肠癌细胞VEGF表达。     

Wnt/β-catenin信号通路在肿瘤耐药中的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路参与肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移,并且诱导肿瘤的耐药,是介导组织癌变的关键通路.体外实验表明,靶向抑制Wnt/β-catenin能够增强化疗药物的敏感性.因此对Wnt/β-catenin介导肿瘤耐药的深入研究将为肿瘤的治疗提供可能途径和潜在靶点.     

姜黄素通过调节Wnt/β-catenin信号通路抑制结肠癌细胞上皮间质转化

[目的]探讨姜黄素对结肠癌细胞上皮间质转化(EMT)的作用机制。[方法]通过MTS检测姜黄素对HCT116细胞活性的影响;运用Western-blot、Real-time q PCR检测不同浓度姜黄素对HCT116细胞Wnt相关基因(β-catenin、TCF4)及EMT相关基因(E-cadherin和Vimentin)的表达情况。[结果 ]姜黄素能明显抑制HCT116细胞的增殖活性,在12h、24h和48h的IC50分别是61.98±2.68μmol/L,19.64±1.29μmol/L和17.84±1.25μmol/L。姜黄素能下调HCT116细胞内β-catenin和TCF4的表达水平;同时显著性上调E-cadherin及下调Vimentin表达水平,且呈剂量依赖性。Wnt信号通路活化剂能上调姜黄素处理后细胞内的β-catenin表达和下调E-cadherin表达水平。[结论]姜黄素通过抑制Wnt/β-catenin信号通路,从而抑制肿瘤细胞上皮间质转化。     

miR-181通过Wnt/β-catenin信号通路调控对B-ALL细胞增殖及凋亡的影响

目的:探究miR-181在急性B淋巴细胞白血病Nalm-6细胞中表达及其过表达对细胞增殖及凋亡的影响。方法:利用实时荧光定量PCR检测miR-181在急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中的表达水平,利用慢病毒转染技术使miR-181过表达,利用CCK-8实验检测过表达miR-181对人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6增殖的影响,利用流式细胞仪检测过表达miR-181对Nalm-6细胞凋亡的影响,利用蛋白印迹实验检测Wnt/β-catenin信号通路中关键蛋白的表达水平。结果:实时荧光定量PCR结果显示,与正常人相比,急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平显著下调;CCK-8检测细胞增殖结果显示,过表达miR-181显著抑制了人急性 B 淋巴细胞白血病细胞Nalm-6的增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡结果显示,过表达miR-181显著促进了Nalm-6细胞的凋亡;Western blotting 结果显示,miR-181过表达,Wnt1、β-catenin、cyclin D1 和c-myc蛋白的表达均显著下调。结论:急性B淋巴细胞白血病患者骨髓单个核细胞中miR-181的表达水平下调,过表达miR-181抑制Nalm-6细胞增殖、促进Nalm-6细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin信号转导通路的受抑有关。     

miRNA-101通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化

目的 探讨miRNA-101（miR-101）通过靶向CDK8对结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路激活的影响。方法 采用qRT-PCR和Western blot测定结肠癌组织、癌旁正常组织及五种结肠癌细胞株中miR-101和CDK8的表达。双荧光素酶报告实验测定其相互作用关系。通过miR-101 mimic、pBabe-CDK8转染调控CDK8表达并测定其对肿瘤细胞侵袭和Wnt/β-catenin激活的影响。结果 与癌旁正常组织相比,miR-101在结肠癌组织中表达水平显著降低,而CDK8的表达显著增加。双荧光素酶报告实验证实miR-101可直接与CDK8 3'UTR的结合位点作用调节荧光素酶的活性。转染miR-101 mimic组细胞的侵袭能力比阴性对照组和CDK8组明显下降。转染miR-101 mimic后TOP/FOP荧光素酶活性显著降低,β-catenin的蛋白表达也出现下降。CDK8过表达载体转染能显著减弱miR-101 mimic对荧光素酶活性和β-catenin蛋白表达的作用。结论 miRNA-101可通过靶向CDK8调控结肠癌细胞侵袭和Wnt/β-catenin通路活化。     

Wnt/β-catenin信号通路及其抑制剂在消化道肿瘤中作用的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育、细胞周期、炎症反应和肿瘤形成等过程中具有不可或缺的作用。在消化道肿瘤 中,存在Wnt/β-catenin信号通路的显著异常激活。随着对Wnt/β-catenin信号通路的深入了解,Wnt/β-catenin信号通路抑制剂的 研发也取得了显著的成效,已有部分Wnt/β-catenin信号通路抑制剂在临床试验中显示出良好的抗肿瘤效果。并且,一些最初用 于治疗其他疾病的药物最近被发现可阻断Wnt/β-catenin信号通路,提示它们在治疗Wnt/β-catenin依赖性癌症中的潜力。本文对 Wnt/β-catenin信号通路抑制剂在消化道肿瘤中作用的研究现状进行简要概述。     

过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT和细胞周期的实验研究

目的:探讨过表达KLF4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞上皮-间质转化和细胞周期的作用机制。方法:将课题组前期已成功转染过表达KLF4的BGC-823细胞分为KLF4过表达载体组(BGC823-OE组)、空病毒载体组(BGC823-NC组)和未经处理的BGC-823细胞组（BGC823-Ctrl组）。Western blot和qRT-PCR检测KLF4、EMT和Wnt信号通路相关蛋白和mRNA在三组细胞中的表达水平。CCK-8实验、划痕实验、Transwell迁移实验、平板克隆实验和流式细胞术观察各组细胞的增殖能力、迁移能力、克隆形成能力和细胞周期变化情况。结果:Western blot和qRT-PCR实验结果显示BGC823-OE组KLF4蛋白和mRNA表达水平明显升高。上皮-间质转化的上皮标志物E-cadherin蛋白和mRNA表达水平升高,间质标志物N-cadherin蛋白和mRNA表达水平降低。Wnt信号通路下游靶基因β-catenin和Cyclin D1的蛋白和mRNA表达水平降低。CCK-8增殖实验结果显示BGC823-OE组的增殖能力下降。划痕实验和Transwell迁移实验结果显示BGC823-OE组的迁移能力下降。平板克隆结果显示BGC823-OE组的克隆能力下降。流式细胞术结果显示BGC823-OE组G0/G1期比例增高,S期比例降低。结论:过表达KLF4可能通过Wnt/β-catenin信号通路抑制胃癌细胞EMT及阻滞胃癌细胞的细胞周期。     

Wnt/β-catenin信号通路在非小细胞肺癌中作用的研究进展

Wnt/β-catenin信号通路在胚胎发育和细胞增殖、分化等生理过程中扮演着重要角色,同时它在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)的肿瘤干细胞(cancerstemcell, CSCs)的维持、血管生成和上皮间充质转化(epithelial-mesenchymaltransition, EMT)中起着至关重要的作用。有多项研究证实Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC中被显著激活,随着对Wnt/β-catenin信号通路的研究,靶向Wnt/β-catenin信号通路疗法在NSCLC的治疗中取得了显著成效。本文对Wnt/β-catenin信号通路在NSCLC发生和发展中的作用以及治疗研究进行概述。     

Wnt/β-catenin信号通路相关长链非编码RNA在肿瘤进展中的功能与机制

长链非编码RNA（lncRNA）是一类长度大于200 nt、且不编码的RNA。lncRNA 已被证明与人类疾病紧密相关,尤其是肿瘤发生发展。研究表明,肿瘤中一些异常表达的lncRNA 可以通过不同的信号通路,如Wnt/β-catenin 信号通路,促进肿瘤进展过程。在不同肿瘤组织中具有特异性表达特征的lncRNA与Wnt/β-catenin 信号通路之间的相互作用显示出其作为新的生物标志物和治疗靶点的潜能。本文就Wnt/β-catenin 信号通路相关lncRNA 通过调控Wnt/β-catenin 信号转导,影响不同肿瘤类型发生发展的作用进行综述。本文结果或可为临床肿瘤诊断和治疗提供新的思路。