长链非编码RNA HOTAIR对非小细胞肺癌迁移和侵袭能力的影响

目的 探讨长链非编码RNA HOTAIR在非小细胞肺癌（NSCLC）组织及4株细胞系（A549、SPC-A1、SK-MES-1和16HBE）中的表达,并分析其对细胞侵袭和迁移能力的影响。方法通过定量反转录PCR（qRT-PCR）检测HOTAIR在38例NSCLC组织及4株细胞系中的表达水平,并进一步利用过表达和RNA干扰技术探讨HOTAIR的生物学功能。通过分别转染pcDNA-HOTAIR或si-HOTAIR来上调或下调HOTAIR的表达,以空载体（pcDNA3.1-NC）和阴性对照（si-NC）作为对照组,用qRT-PCR检测转染效率。用MTT法和Transwell法评估异常表达的HOTAIR对NSCLC细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响。结果 38例NSCLC组织中HOTAIR相对表达水平为24.48±59.55。与正常支气管上皮细胞系16HBE相比,HOTAIR在SPC-A1和SK-MES-1细胞中相对高表达,而在A549细胞中相对低表达。转染HOTAIR siRNA 48h后,A549和SPC-A1细胞中HOTAIR表达下调;转染pcDNA3.1 HOTAIR 48h后,A549细胞中HOTAIR表达上调。MTT实验显示,通过RNAi技术来抑制HOTAIR的表达,对NSCLC细胞的增殖能力无明显影响。Transwell实验显示,通过转染si-HOTAIR来下调HOTAIR表达可抑制癌细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）;相反,过表达HOTAIR可以显著促进癌细胞的迁移和侵袭（P＜0.05）。结论 HOTAIR在NSCLC中异常高表达,能显著增强NSCLC细胞的迁移和侵袭能力,提示可能与不良预后相关。     

长链非编码RNA RP11-554D14.7对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡能力的影响

目的:研究lncRNA RP11-554D14.7在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达情况,及其对NSCLC细胞功能的影响和分子机制.方法:实时定量PCR用于检测lncRNA RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中的表达水平;CCK8、集落形成实验检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞增殖能力的影响;流式细胞技术检测RP11-554D14.7对NSCLC细胞凋亡能力的影响;生物信息学分析和荧光素酶报告基因技术研究RP11-554D14.7对miR-21的调控.结果:RP11-554D14.7在NSCLC组织及细胞中表达下调,上调RP11-554D14.7的表达抑制NSCLC细胞增殖并诱导细胞凋亡;miR-21可直接结合到RP11-554D14.7的序列中.结论:下调的RP11-554D14.7在NSCLC的发生发展过程中可能是一个抑癌基因,可作为NSCLC一个候选的治疗靶点.     

长链非编码RNA LOC101927476抑制卵巢癌细胞侵袭迁移和增殖

目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)LOC101927476在卵巢癌细胞中的表达及其对卵巢癌生物学特征的影响。方法选取2018—2019年于中国医学科学院肿瘤医院手术治疗的卵巢癌患者。采用实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测卵巢癌细胞系3AO、OVCA429、TOV21G、A2780、SKOV3以及22例卵巢癌原发瘤和转移瘤组织中LncRNA LOC101927476的表达水平, 采用TCGA数据库中卵巢癌转录组测序数据验证LncRNA LOC101927476和GATA4的表达, 采用慢病毒包装体系构建过表达LOC101927476(OE-LOC101927476组)和空载(OE-EV组)慢病毒并转染至3AO细胞。设计单链向导RNA(sgRNA), 利用CRISPR/Cas9构建LncRNA LOC101927476敲除细胞系。采用Transwell法和划痕实验检测LncRNA LOC101927476对卵巢癌细胞侵袭和转移能力的影响。采用细胞计数盒8(CCK-8)法检测细胞的增殖能力。结果 real-time PCR显示, 22例卵巢癌患者中, 20例转移灶中L...     

长链非编码 RNA FENDRR 对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的：检测长链非编码 RNA FENDRR 基因在非小细胞肺癌（non －small cell lung cancer,NSCLC）组织中的表达及其对 A549细胞增殖及凋亡的影响。方法：Real －time PCR 检测 FENDRR 基因在 NSCLC 组织中的表达;构建 FENDRR 基因表达载体 pcDNA －FENDRR 并转染 A549细胞,Real －time PCR 检测转染效果;MTT 法检测 A549细胞的增殖活力;流式细胞术测定 A549细胞的凋亡率。结果：FENDRR 基因在 NSCLC 组织中的表达显著下调,为癌旁正常组织中 FENDRR 的37．24％（P ＜0．01）,FENDRR 的低表达与 NSCLC 的低分化及高 T 分期相关。pcDNA －FENDRR 的转染能够显著上调 A549细胞中 FENDRR mRNA 的表达（P ＜0．01）,而 FENDRR 过表达能够显著抑制 A549细胞的增殖活力,并诱导凋亡由3．41％升高至8．47％（P＜0．01）。结论：FENDRR 基因的表达下调与 NSCLC 的发生和进展相关,其在 NSCLC 中发挥肿瘤抑制基因的作用,抑制细胞增殖并诱导细胞凋亡。     

长链非编码RNA SPRY4-IT1对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭的影响及机制

目的:探讨长链非编码RNA SPRY4-IT1在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织和细胞系中的表达水平,以及SPRY4-IT1对NSCLC细胞增殖和侵袭功能的影响及分子机制.方法:用实时定量PCR技术检测SPRY4-IT1在NSCLC组织及细胞系中的表达水平.将pCDNA-SPRY4-IT1转染SPC-A1和A549细胞,过表达SPRY4-IT1,用MTT法和克隆形成实验检测SPRY4-IT1对SPC-A1和A549细胞增殖和克隆形成能力的影响.Transwell实验评价SPRY4-IT1对细胞迁移、侵袭能力的影响.qPCR和Western blot检测过表达SPRY4-IT1对上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)标志物上皮性钙粘蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响.结果:SPRY4-IT1的表达在NSCLC组织和细胞系中出现显著下调(P<0.01).过表达SPRY4-IT1能降低SPC-A1细胞和A549细胞的增殖和侵袭能力.过表达SPRY4-IT1显著上调E-cadherin的水平、抑制Vimentin的表达,从而影响肿瘤细胞EMT过程.结论:长链非编码RNA SPRY4-IT1表达下调可能通过调控EMT机制促进NSCLC细胞的增殖和侵袭.     

基因间长链非编码RNA152靶向微小RNA?103a?3p对非小细胞肺癌细胞增殖和侵袭迁移的影响

目的探讨基因间长链非编码RNA 152(LINC00152)靶向调控微小RNA-103a-3p(miR-103a-3p)表达及对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖和侵袭迁移的影响。方法采用实时定量PCR(QPCR)检测正常肺上皮细胞BEAS-2B及NSCLC细胞(ANIP-973、NCI-H157、A549和NCI-H1975)的LINC00152水平。选取LINC00152水平最高的细胞分别转染LINC00152特异性小干扰RNA(si-LINC00152组)或无关序列(si-NC组),另设未转染细胞为对照组。QPCR检测LINC00152水平,活细胞计数CCK-8法、Transwell小室和划痕实验测定细胞增殖、侵袭和迁移能力,Western blotting检测基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN)的水平;荧光素酶报告实验验证LINC00152靶向结合miR-103a-3p的能力。结果NSCLC细胞的LINC00152水平均高于BEAS-2B细胞(P<0.05),尤其是NCI-H1975细胞的最高。si-LINC00152组的LINC00152水平为0.352±0.087,低于对照组的1.058±0.219和si-NC组的1.126±0.139(P<0.05)。与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组NCI-H1975细胞转染48、72 h的增殖活力下降(P<0.05);si-LINC00152组的划痕愈合率和穿膜细胞数分别为(27.386±2.428)%和(78.840±5.031)个,低于si-NC组的(77.675±4.803)%和(179.208±13.264)个及对照组的(76.371±5.385)%和(174.003±15.678)个(P<0.05);与si-NC组和对照组相比,si-LINC00152组的MMP-2和MMP-9水平均降低,而PTEN水平升高(P<0.05)。对照组和si-NC组上述指标的差异无统计学意义(P>0.05)。双荧光素酶报告分析证实,miR-103a-3p模拟物降低了野生型LINC00152的荧光素酶活性(P<0.05),但对突变型无影响(P>0.05)。结论LINC00152在NSCLC细胞中高表达并发挥促癌作用,与NSCLC的迁移侵袭密切相关,LINC00152与miR-103a-3p间的相互作用在NSCLC靶向治疗中有一定潜能。     

长链非编码RNA HCG4通过Wnt/β-catenin通路对垂体腺瘤细胞增殖、迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA HLA复合体4(HCG4)调控Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路对垂体腺瘤细胞增殖、迁移和侵袭生物学行为的影响。方法 实时荧光定量PCR(q PCR)检测35对垂体腺瘤和正常垂体组织的HCG4水平。培养垂体腺瘤HP75细胞并分为Control组(无转染)、NC组(转染空载体pc DNA3.1)、HCG4组(转染过表达质粒pc DNA3.1-HCG4)和HCG4+Wnt激动剂组(同时转染过表达质粒pc DNA3.1-HCG4和Wnt激动剂SKL2001)。CCK-8法、划痕实验和Transwell小室实验分别检测HP75细胞的增殖、迁移和侵袭的情况。q PCR和Western blotting检测HP75细胞的β-catenin和基质金属蛋白酶(MMP)-9水平。结果 垂体腺瘤组织的HCG4水平低于正常组织(0.616±0.044 vs. 1.000±0.071,P<0.05); 21例Ⅰ～Ⅱ期垂体腺瘤患者(0.712±0.053)和14例Ⅲ～Ⅳ期垂体腺瘤患者(0.473±0.060)垂体腺瘤组织的HCG4水平均低于正常组织(P<0.0...     

基因间长链非编码RNA 113靶向微小RNA-493-3p对肺癌细胞侵袭和迁移的影响

目的 探讨基因间长链非编码RNA 113(LINC00113)调控微小RNA-493-3p(miR-493-3p)在非小细胞肺癌(NSCLC)细胞侵袭迁移过程中的分子功能.方法 采用实时定量PCR(qPCR)检测LINC00113和miR-493-3p在50对NSCLC癌组织和癌旁组织及4株NSCLC细胞株(A549、...     

长链非编码RNA与肺癌

长链非编码RNA（lncRNA）是一类转录本长度超过200个核苷酸的小分子RNA,不具有蛋白编码功能,起初被认为是基因组转录的“噪音”,近年来却被证实在生物体内对基因的表达具有调控作用,与肿瘤的发生发展密切相关。肺癌是一种严重危害人们健康的恶性肿瘤性疾病,研究发现lncRNA在肺肿瘤中表达失调,异常表达的lncRNA能作为关键的调控因子,参与多种生物学过程,影响肿瘤转移与侵袭、肺癌细胞的增殖和凋亡、肿瘤血管生成及调节肿瘤耐药,为肺癌临床治疗提供新思路。此外,lncRNA还可作为潜在的生物标志物用于肺癌早期诊断及评估肺癌预后。本文就lncRNA在肺癌研究中的进展进行综述。     

长链非编码RNA LINC01018在非小细胞肺癌中的表达与意义

目的:探讨长链非编码RNA LINC01018在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达水平和临床意义,以及LINC01018对NSCLC细胞增殖的影响.方法:用qRT-PCR检测60例NSCLC组织和癌旁肺组织中LINC01018的表达,分析LINC01018表达与非小细胞肺癌临床特征的相关性.通过转染pcDNA-LINC01018上调 LINC01018的表达水平,采用qRT-PCR方法检测重组质粒在细胞中的表达水平.CCK8检测NSCLC细胞增殖能力的变化,Western blot法检测LINC01018对RAC1蛋白的影响.结果:相比癌旁肺组织,在NSCLC组织中LINC01018的表达出现显著下调.肺癌组织中LINC01018的表达水平与患者性别、肿瘤大小、分化程度及淋巴转移和远端转移明显相关(P<0.05).LINC01018的过表达能降低肺癌细胞的增殖能力并下调RAC1的表达.结论:LINC01018表达随着女性患者、肿瘤直径大、分期晚及分化差而显著下调.LINC01018可通过影响RAC1,抑制NSCLC细胞的增殖.     

lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的影响

目的:探究长链非编码RNA(long-nocoding RNA,lncRNA) HOXA11-AS在骨肉瘤中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法:采用2012年1月至2015年12月浙江省人民医院骨外科13例骨肉瘤组织及癌旁正常组织,以及骨肉瘤细胞系MG63、U20S和人成骨细胞株hFOB1.19,用实时荧光定量PCR检测骨肉瘤组织和骨肉瘤细胞系MG63和U20S中lncRNA HOXA11-AS的表达水平.用慢病毒载体构建稳定过表达lncRNA HOXA11-AS的骨肉瘤MG63及U20S细胞,用CCK-8和克隆形成实验、Transwell小室法分别检测过表达lncRNA HOXA11-AS对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响.建立过表达lncRNA HOXA11-AS MG63骨肉瘤细胞裸鼠移植瘤模型,以空载体慢病毒Lv-NC转染的细胞作为对照,观察过表达lncRNA HOXA11-AS对裸鼠移植瘤生长的影响.结果:lncRNA在骨肉瘤组织和MG63及U20S细胞中表达水平显著下调(P＜0.01).与hFOB1.19细胞比,过表达lncRNA HOXA11-AS细胞后,(1)显著抑制骨肉瘤MG63及U20S细胞的增殖[(4.03 ±0.98) vs(6.96 ±0.54),(4.68±0.77) vs (8.87±1.23),均P＜0.01]、迁移细胞数[(83.00 ±6.03) vs(168±12.54),(96.00 ±8.77)vs(184.00±14.63)个,均P＜0.01]和侵袭细胞数[(35.00±3.48) vs (97.00±8.32),(38.00±1.73) vs (87.00±6.37)个,均P＜0.01];(2)显著抑制骨肉瘤裸鼠皮下移植瘤的生长(P＜0.01).结论:lncRNA HOXA11-AS在骨肉瘤细胞中低表达,且lncRNA HOXA11-AS过表达对骨肉瘤的发生发展具有抑制作用,可以作为骨肉瘤治疗潜在的分子靶点.     

非小细胞肺癌的潜在生物标记物:长链非编码RNA

非小细胞肺癌是常见的肺癌类型之一,筛选可用于诊断、治疗和预后判断的生物标志物是近年来非小细胞肺癌研究的热点之一。我们已知,基因和表观遗传学改变是非小细胞肺癌发展的重要因素,近期研究发现,基因组的非蛋白质编码区域可以作为各种RNA的转录模板,统称为非编RNA。包括长链非编码RNA在内的非编码RNA,在多种细胞功能中发挥了重要作用。研究表明,长链非编码RNA的表达异常与肿瘤的发生关系密切,包括非小细胞肺癌。在本篇综述中,我们将总结长链非编码RNA作为非小细胞肺癌潜在生物标志物的最新研究进展。     

长链非编码 RNA DRAIC 通过抑制 miR-223-3p 促进肺癌细胞增殖和转移

目的 探究长链非编码 RNA(IncRNA)DRAIC 对 miR-223-3p 的调节作用及对肺癌细胞增殖和转移的影响。 方法 选取 2019 年 1 月至 2020 年 6 月河北工程大学附属医院收治的 90 例非小细胞肺癌患者的癌组织和癌旁组织,分析癌症基因 组图谱(TCGA)数据中肺癌组织 lncRNA DRAIC 的表达及其与患者预后生存期的关系,实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检 测肺癌组织 lncRNA DRAIC 和 miR-223-3p 的表达水平并进行 Pearson 相关性分析;Starbase 数据库预测及双荧光素酶实验验 证 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 的靶向关系;将经慢病毒包装的 lncRNA DRAIC 和 miR-223-3p 慢病毒质粒分别转染至肺 癌细胞 A549 和 H520 中,分为对照组、si-NC 组、si-DRAIC 组、pcDNA 组、pcDNA-DRAIC 组、DRAIC+miR-NC 组、DRAIC+miR223-3p 组;MTT 法和集落形成实验、划痕实验和 Transwell 小室实验分别检测细胞增殖能力、迁移能力和侵袭能力;RT-qPCR 和蛋白印迹法检测 JAK2 和 STAT3 的 mRNA 和蛋白的表达;裸鼠成瘤实验检测移植瘤的发展。 结果 TCGA 数据显示肺癌组 织 lncRNA DRAIC 的表达水平高于癌旁组织,且预后生存期与 lncRNA DRAIC 的表达水平呈负相关;与癌旁组织相比,肺癌组 织中 lncRNA DRAIC 水平升高,miR-223-3p 水平降低,且 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 呈负相关;lncRNA DRAIC 水平与肿 瘤大小、TNM 分期、淋巴结转移、分化程度呈正相关(P<0. 05)。 lncRNA DRAIC 与 miR-223-3p 存在结合位点,lncRNA DRAIC 过表达抑制 miR-223-3p 的表达(P<0. 05);lncRNA DRAIC 过表达能够上调 JAK2 和 STAT3 的 mRNA 和蛋白水平,促进细胞 增殖、划痕愈合和增加侵袭细胞数,促进移植瘤生长(P<0. 05)。 另外,miR-223-3p 可部分逆转 lncRNA DRAIC 对肺癌细胞的 恶性表型。 结论 lncRNA DRAIC 通过抑制 miR-223-3p 促进肺癌细胞的增殖、迁移、侵袭及体内移植瘤的发展,且可能通过激 活 JAK2 / STAT3 信号通路发挥作用。     

lncRNA RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中的表达及其对MCF-7 细胞增殖和迁移的影响

目的:观察长链非编码RNA（long non-coding RNA,lncRNA）RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中的表达及其对乳腺癌MCF-7 细胞增殖和迁移的影响,并探讨其可能的作用机制。方法：收集湖北医药学院附属人民医院肿瘤中心2017 年1 月至2017 年9月13 例行乳腺癌根治术切除的癌组织及相应的癌旁组织标本,采用qRT-PCR检测13 例乳腺癌组织及癌旁组织、乳腺癌细胞株和正常乳腺上皮细胞中RP3-340N1.2 的表达差异。使用Lipofectamine 3000 转染试剂分别将RP3-340N1.2 质粒（实验组）和阴性对照质粒（对照组）转染至乳腺癌MCF-7 细胞,CCK-8 法和Transwell 迁移实验检测RP3-340N1.2 过表达对MCF-7 细胞增殖、迁移能力的影响。qRT-PCR检测RP3-340N1.2 过表达对miR-134-5p 和OPCML mRNA表达的影响,Western blotting 检测OPCML相关蛋白的表达水平。结果：RP3-340N1.2 在乳腺癌组织中表达明显低于癌旁组织（P<0.01）,其在乳腺癌细胞株中表达水平明显低于正常乳腺上皮细胞（P<0.01）。上调RP3-340N1.2 的表达抑制MCF-7 细胞的增殖和迁移能力（均P<0.05）。过表达RP3-340N1.2 后MCF-7 细胞中miR-134-5p 表达水平明显降低（P<0.01）、OPCML mRNA 和蛋白的表达水平升高（P<0.01）,而周期调控蛋白CDK4、Cyclin D2 的表达水平下调,细胞迁移调控蛋白Vimentin 和N-cadherin 蛋白表达下调（均P<0.01）。结论：RP3-340N1.2 在乳腺癌组织和细胞株中低表达,上调RP3-340N1.2 的表达可引起miR-134-5p 的表达降低、OPCML mRNA表达升高,从而抑制乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。     

长链非编码RNA lnc-CDH11-3在胃癌组织中的表达及其干预效应分析

摘 要：［目的］分析胃癌标本中长链非编码RNA lnc-CDH11-3的表达与临床病理特征的相关性,并在细胞水平上分析其对胃癌细胞的细胞活力、侵袭力及迁移能力的影响,探讨其在胃癌发生、发展中可能的调控及意义。［方法］ 收集46例胃癌组织及其癌旁正常组织标本,采用荧光实时定量PCR检测胃癌标本及癌旁正常胃黏膜组织中lnc-CDH11-3的表达量,并进一步分析临床病理特征与其表达水平的关系;利用慢病毒转染技术,建立lnc-CDH11-3表达量不同的胃癌稳定转染细胞株,运用CCK-8、Transwell跨膜实验检测细胞增殖活性、侵袭能力相关生物学功能;利用核浆分离及RT-PCR方法探究lnc-CDH11-3在细胞中的表达定位。［结果］ Lnc-CDH11-3在癌组织的表达量高于所对应的癌旁正常胃黏膜组织(P<0.05)。 Lnc-CDH11-3表达水平与肿瘤分化程度、区域淋巴结转移、TNM分期相关;而与年龄、性别、肿瘤大小、部位等其他因素无明显联系。稳定转染胃癌细胞株,成功构建lnc-CDH11-3低表达细胞株,CCK-8增殖实验结果显示下调lnc-CDH11-3可显著降低胃癌细胞株的增殖能力;Transwell跨膜实验显示沉默lnc-CDH11-3可显著降低胃癌细胞株的侵袭能力。用RT-PCR技术检测发现lnc-CDH11-3主要表达于细胞核中,仅少许表达于胞浆中。［结论］ Lnc-CDH11-3可作为促癌基因影响胃癌细胞增殖、侵袭等生物学特性,其表达量的变化与胃癌的发生发展密切相关。     

长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达与功能

目的：探讨长链非编码 RNA MEG3在非小细胞肺癌中的表达情况及其分子机制。方法：采用 qRT -PCR 方法检测肺癌组织中 MEG3的相对表达量,分析其与临床病理资料的相关性。将 MEG3转染到肺癌A549细胞后,应用 qRT - PCR 检测 A549细胞中 MEG3的表达;MTT 检测细胞转染后肿瘤细胞增殖的变化;并用 Western blot 检测转染后细胞中凋亡相关蛋白（BCL -2和 BCL - XL）表达。结果：肺癌组织中 MEG3的相对表达水平显著低于正常肺组织（P <0.05）。各肺癌细胞株中 MEG3的表达水平均低于肺上皮细胞株（P <0.05）。MEG3的表达水平与肿瘤大小、临床分期以及淋巴结转移之间有显著相关性（P <0.05）。MEG3转染A549细胞48h 和72h 后,A549细胞的增殖率明显低于空白对照组和阴性对照组（P <0.05）。其 BCL - XL 蛋白表达水平相较于空白对照组和阴性对照组表达明显下调（P <0.05）。结论：MEG3在 NSCLC 肿瘤组织中表达下调,可能部分通过下调 BCL - XL 的表达而抑制肺癌细胞的增殖。