miRNA与TSP-1mRNA在肾小管上皮细胞中的表达水平研究

目的糖尿病肾病是一种进展性的肾脏疾病,也是导致终末期肾病的主要病因。目前的研究表明,miRNA在糖尿病肾病的发生及进展过程中起重要的作用。本实验通过研究miR-18a、miR-19a、miR-194及TSP-1在高糖与TGF-β1刺激的肾小管上皮细胞中的表达情况,进一步探索miRNA在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法用半定量RT-PCR监测人肾小管上皮细胞在低糖组(终浓度5 mmol/L)、高糖组(终浓度30 mmol/L)及高糖组+TGF-β1组不同时期TSP1mRNA、miR-18a、miR-19a及miR-194的表达水平。结果TSP1mRNA的表达水平随血糖浓度的升高及培养时间的延长逐渐升高,而miR-194成逐渐下降的趋势,但miR-18a和miR-19a的表达水平并未随血糖浓度改变有明显变化。通过TGF-β1处理的体外培养的肾小管上皮细胞48h,研究结果显示,与未经TGF-β1处理的高糖组相比,TGF-β1+高糖组能进一步升高肾小管上皮细胞TSP1mRNA的表达水平,使肾小管上皮细胞miR-194的表达进一步下降,并具有统计学差异。结论通过研究结果显示,TGF-β1对TSP1的表达水平起正性调节作用,对miR-194的表达水平呈负性调节作用,而针对TSP1是否为miR-194靶向调节基因,还需后续试验进一步验证。     

miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松成骨的研究

目的 研究miR-124-3p靶向Axin1 调控糖尿病骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells ，BMSCs）成骨分化的作用。方法 20只糖尿病大鼠模型-SPF级SD雌性大鼠分为分组对照组10例、实验组10例，经过药物注射，测血生化指标，测骨密度。BMSCs培养，流式细胞学鉴定。检测对照组和实验组miR-124-3p mRNA的表达。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d，检测ALP、茜素红染色成骨能力。第7天检测miR-124-3p mRNA表达水平。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染，分为高糖组和低糖组，检测中Axin1 mRNA水平。构建载体，与模拟物共转染，荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1靶向结合。将实验组BMSCs分为高糖组和低糖组，检测实验组BMSCs高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。检测实验组模拟物在高糖组及低糖组miR-124-3p、Runx2 mRNA的表达及茜素红染色和ALP染色结果。结果 ELISA检测血生化指标，实验组TG、TC、FPG、HbA1C值上调，β-CTX和SOST上调，OC和骨密度下调。BMSCs培养，流式细胞学鉴定显示CD73和CD105的表达为阳性， CD34 和 CD45 的表达呈阴性。符合间充质干细胞的抗原特点，证实为BMSCs。实验组miR-124-3p表达明显低于对照组。过表达miR-124-3p（模拟物）7、14、21 d，ALP、茜素红染色随时间逐渐升高。第7天miR-124-3p表达水平显著升高。实验组细胞用miR-124-3p模拟物转染，结果高糖组Axin1 mRNA表达水平上调，但用miR-124-3p模拟物转染时水平下降。荧光素酶报告基因检测miR-124-3p和Axin1可以靶向结合。RT-qPCR检测实验组BMSCs高糖摄入显著降低了miR-124-3p、Runx2表达；高糖可抑制成骨分化，减少钙沉积，减少ALP表达。高血糖条件下miR-124-3p过表达（模拟物）中Runx2的表达显示，高糖+对照明显低于低糖+对照组；高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。茜素红染色和ALP染色显示，高糖+对照明显低于低糖+对照组；高糖+miR-124-3p模拟物明显高于高糖+对照组。结论 miR-124-3p能通过靶向抑制Axin1促进糖尿病骨质疏松症大鼠BMSC的成骨发生。     

miR-193b在胃癌细胞中对uPA的调控作用及机制

目的：探讨胃癌细胞中miR-193b对根据靶基因预测选出的纤溶酶原活化因子（uPA）的调控作用及机制。方法：胃癌BGC823细胞分别瞬时转染miR-193b正义序列（正义序列转染组）,反义序列（反义序列转染组）及无意义序列（阴性转染组）,以无转染的BGC823细胞为空白对照。用real-time PCR检测各组转染后miR-193b的表达水平,RT-PCR和Western blot法检测各组细胞uPA mRNA和蛋白的表达水平。结果：与空白对照组比较,阴性转染组miR-193b表达水平未见明显改变（P>0.05）,正义序列转染组的miR-193b的表达水平明显上调,反义序列转染组miR-193b的表达水平明显下调（均P<0.05）;各转染组uPA mRNA表达水平均无明显变化;阴性转染组uPA蛋白表达水平无变化,正义序列转染组uPA蛋白表达水平降低,反义序列转染组uPA蛋白表达水平增加。结论：uPA可能是miR-193b的靶基因,miR-193b可能通过抑制其转录后翻译负向调节其表达,从而利于胃癌细胞的侵袭。

     

miR-34a在膀胱癌中下调MTA2表达的研究

目的 研究微小核糖核酸34a（microRNA-34a,miR-34a）在膀胱癌中的表达及临床意义,确定转移相关基因2（metastasis-associated gene2,MTA2）是否为miR-34a调控的下游靶基因,探讨膀胱癌中miR-34a与MTA2的相互作用机制。方法 选取48对膀胱癌根治术后癌组织及癌旁组织,标本来源于2011年5月至2012年5月我科收治的膀胱癌患者。Real-time PCR检测miR-34a和MTA2在组织中RNA的表达情况;荧光素酶实验鉴定MTA2是否为miR-34a下游靶基因;膀胱癌细胞株T24及UMUC3中转入miR-34a后,琼脂糖凝胶电泳、免疫印迹实验检测MTA2的RNA及蛋白表达。结果 Real-time PCR检测表明,膀胱癌组织中miR-34a呈低表达,并且与肿瘤分期有关（P〈0.01）;MTA2在癌组织中表达明显上调。MiRanda、Mirwalk、Targetscan软件预测miR-34a与MTA2的mRNA有结合位点,荧光素酶实验结果表明MTA2可能是miR-34a的潜在靶基因。转染miR-34a后,分别检测MTA2的蛋白和mRNA表达情况,发现MTA2蛋白受到抑制,mRNA表达不受影响。结论 miR-34a在膀胱癌中可能通过作用于其潜在靶基因MTA2而发挥抑癌基因作用。     

肾缺血再灌注损伤后miR-210及其靶基因的变化

目的 观察缺血再灌注损伤(IRI)对小鼠肾脏mir-210及其靶基因Ephrin-A3表达的影响.方法 将10只成年昆明雌鼠随机分为缺血再灌注组(IR)、假手术组(Sham),每组5只.IR组完全阻断双肾蒂40 min后恢复血流,Sham组暴露左右双肾40 min后关闭腹腔.每组在手术4 h后取肾组织标本,采用实时定量聚合酶链反应(PCR)检测mir-210表达水平;RT-PCR和酶标免疫组织化学染色法检测Ephrin-A3基因和蛋白的表达情况.结果 IR组miR-210表达水平明显上升(P<0.05).因miR-210对靶基因Ephrin-A3的负向调节作用,PCR结果显示IR组Ephrin-A3基因表达水平明显高于Sham组(P<0.01).Ephrin-A3蛋白主要表达在肾小管上皮细胞胞质中,Sham组Ephrin-A3蛋白表达水平较IR组明显升高(P<0.01).结论 肾缺血再灌注损伤明显影响miR-210及其靶基因Ephrin-A3的表达,miR-210表达的变化可能与肾缺血再灌注损伤的修复有关.     

KLF4通过mTOR/P70S6K途径激活细胞自噬减轻高糖诱导的足细胞损伤

目的:分析Krüppel样转录因子4(KLF4)对高糖诱导的足细胞损伤的影响及相关分子机制。方法:体外培养MPC5细胞,将MPC5细胞分为对照组(Control组)、高糖组(HG组)、高糖+空载质粒对照组(HG+NC组)、高糖+KLF4过表达组(HG+KLF4组)。采用qRT-PCR法检测细胞中KLF4 mRNA表达水平,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot法检测细胞中相关蛋白表达水平。结果:与Control组比较,HG组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量降低,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率升高,细胞中突触足蛋白(synaptopodin)、足蛋白(podocin)、肾蛋白(nephrin)、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、Beclin1蛋白表达量降低,P62蛋白表达量、磷酸化哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(p-mTOR)/mTOR和磷酸化核糖体40S小亚基S6蛋白激酶(p-P70S6K)/P70S6K比值升高;差异均有统计学意义(P<0.05)。与HG组比较,HG+KLF4组MPC5细胞中KLF4 mRNA和蛋白表达量升高,细胞增...     

LncRNA NORAD通过调节miR-451a对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞EMT的影响

目的:探讨lncRNA NORAD对高糖诱导的人近端肾小管上皮细胞HK-2上皮间充质转分化(EMT)的影响及作用机制。方法:HK-2细胞分为对照组、高糖组、si-NORAD+高糖组、si-NC+高糖组、miR-451a+高糖组、miR-NC+高糖组、si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组及si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组,RT-qPCR检测各组细胞中NORAD和miR-451a表达水平,Western Blot检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证NORAD与miR-451a调控关系。结果:与对照组比较,高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平升高(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P0.05)。与si-NC+高糖组比较,si-NORAD+高糖组NORAD、α-SMA和Vimentin水平降低(P0.05),E-cadherin水平升高(P0.05)。与miR-NC+高糖组比较,miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平降低(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平升高(P0.05)。与si-NORAD+anti-miR-NC+高糖组比较,si-NORAD+anti-miR-451a+高糖组α-SMA和Vimentin水平升高(P0.05),miR-451a和E-cadherin水平降低(P0.05)。NORAD在HK-2细胞中负调控miR-451a表达。结论:下调NORAD表达可抑制高糖诱导的HK-2细胞发生EMT,其作用机制与上调miR-451a表达有关。     

长链非编码RNA PVT1通过调控miR-455的表达影响糖尿病肾病足细胞损伤和凋亡

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA) PVT1通过调控miR-455对糖尿病肾病足细胞损伤和凋亡的影响。方法:采用高糖刺激永生化小鼠足细胞建立糖尿病肾病足细胞损伤模型,实验分为正常糖(NG)组:5.6 mmol/L葡萄糖,高糖(HG)组:30 mmol/L葡萄糖,高糖+转染对照(HG+si-NC)组:30 mmol/L葡萄糖+siRNA control,高糖+转染(HG+siPVT1)组:30 mmol/L葡萄糖+PVT1 siRNA。各组足细胞处理48 h后采用qRT-PCR检测细胞中PVT1和的miR-455的表达水平,荧光素酶报告实验检测PVT1和miR-455的靶向关系,Western blot检测足细胞标记蛋白Nephrin、WT-1和损伤因子Desmin的表达水平,流式细胞术检测足细胞凋亡情况。结果:与NG组相比,HG组足细胞中PVT1的表达明显升高,miR-455的表达水平明显降低,Nephrin、WT-1蛋白表达明显下调,Desmin蛋白表达明显上调,足细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P 0.05);与HG组相比,HG+si-PVT1组足细胞中PVT1的表达水平明显降低,miR-455的表达水平明显升高,Nephrin、WT-1蛋白表达明显上调,Desmin蛋白表达明显下调,足细胞凋亡率明显降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。荧光素酶报告实验结果表明PVT1能够靶向调控miR-455。结论:敲低PVT1可通过上调miR-455的表达抑制高糖诱导的足细胞损伤和凋亡。     

肾移植受者外周血单个核细胞中miR-29与急性排斥反应的相关性研究

目的 了解肾移植受者外周血单个核细胞(P BMC)中的微小RNA(miRNA)-29 (miR-29)家族分子在急性排斥反应(AR)发生及恢复后的变化.方法 15例肾移植后发生AR的受者,分别在AR发生时(AR组)和恢复后(恢复组)采集外周血,提取PBMC的总RNA,共采集30个样本.用实时荧光定量聚合酶链反应方法分别对miR-29a、miR-29b和miR-29c的表达水平进行相对定量.通过PicTar和TargetScan预测miR-29调控的靶基因,再通过组织特异性数据库,对血液中miRNA靶基因进行筛查过滤.对miR-29对应的靶基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路分析,得到miR-29可能的生物学过程和作用通路.结果 miR-29a和-29c在恢复组的表达水平明显高于AR组(P＜0.05),而两组miR-29b的表达的差异无统计学意义(P＞0.05).GO中,有14个生物学过程在预测的靶基因中被有意义的富集(P＜0.05);在KEGG中,3条途径被有效富集(P＜0.05).结论 miR-29通过调控代谢、生物学合成等生物学过程和(或)黏着斑通路等影响AR的恢复.受者PBMC中miR-29的检测未来可能会成为判断AR后移植肾转归的微创检测方法.     

薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭

目的探究薯蓣皂甙元对结直肠癌细胞的影响及其可能的作用机制。方法体外培养人结直肠癌细胞SW480和人正常结肠上皮细胞CCD-841CoN,对数期生长的SW480细胞分组进行转染和慢病毒感染;RT-PCR检测SW480细胞中miR-145-5p表达、KLF5和HIF-1α mRNA表达;Western blotting检测细胞中KLF5和HIF-1α蛋白表达;CCK-8检测细胞活力;细胞克隆形成实验检测细胞增殖能力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;荧光素酶报告实验检测miR-145-5p对KLF5表达的调控作用。结果与正常组相比,癌细胞组中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05),miR-145-5p 表达显著下调(P0.05);与常氧组相比,缺氧组细胞中KLF5、HIF-1α的mRNA和蛋白表达均显著上调(P0.05);薯蓣皂甙元(10、20、40、80、160 μmol/L)可抑制SW480细胞活力(P0.05);与对照组相比,薯蓣皂甙元组SW480细胞中KLF5和HIF-1α的mRNA和蛋白表达、细胞克隆数、迁移和侵袭细胞数均显著下调(P0.05),上调KLF5可逆转薯蓣皂甙元对SW480细胞的作用,上调HIF-1α的表达(P0.05);miR-145-5p靶向调控KLF5;与对照组相比,薯蓣皂甙元组miR-145-5p 表达显著上调(P0.05),KLF5蛋白表达下调(P0.05);与薯蓣皂甙元组相比,薯蓣皂甙元组+miR-145-5p抑制物组miR-145-5p 表达显著下调(P0.05),KLF5蛋白表达上调(P0.05)。结论薯蓣皂甙元通过miR-145-5p/KLF5/HIF-1α轴抑制结直肠癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

miR-210、miR-155和miR-34a在SLE患者外周血中的表达水平及其与病情严重程度的相关性分析

目的:探究miR-210、miR-155和miR-34a在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中的表达情况,并分期三项指标与患者病情严重程度的关系。方法:选择在本院就诊的115例SLE患者进行研究,以同期体检的72例患者作为对照组,依据系统性红斑狼疮疾病活动指数(SLEDAI)评分将患者分为稳定组(SLEDAI评分≤4分,35例)、轻度活动组(5~9分,42例)、中重度活动组(≥10分,38例),采用qRT-PCR法检测外周血中miR-210、miR-155和miR-34a表达情况;分析其与临床参数、病情程度的关系,Pearson相关性分析miR-210、miR-155和miR-34a与SLEDAI评分的相关性,Logistic分析病情活动程度的影响因素。结果:与对照组相比,SLE患者外周血中miR-210、miR-155、miR-34a表达水平均显著升高(P <0. 05)。miR-210、miR-155和miR-34a高表达者尿蛋白量、SLEDAI评分均显著高于低表达组,C3、C4水平均显著低于低表达组(P <0. 05)。随着SLE患者病情程度的增加,外周血miR-210、miR-155、miR-34a表达逐渐升高(P <0. 05)。miR-210、miR-155和miR-34a与SLEDAI评分均呈显著正相关(r=0. 547,r=0. 585,r=0. 432,P均<0. 05)。不同病情程度SLE患者尿蛋白定量、C3、C4、SLEDAI评分、miR-210、miR-155、miR-34a存在显著差异(P <0. 05)。Logistic多因素回归分析,结果显示尿蛋白定量、C3、C4、SLEDAI评分、miR-210、miR-155、miR-34a均为影响SLE患者病情严重程度的独立危险因素。结论:miR-210、miR-155和miR-34a在SLE患者外周血中的表达升高,与患者病情严重程度呈正相关,且是影响病情发展的危险因素。     

miR-23a对人炎症来源牙周膜干细胞成骨分化能力的影响

目的探讨miR-23a对人炎症来源牙周膜干细胞成骨分化的影响。方法分离培养正常牙周组织的牙周膜干细胞(hPDLSCs)和牙周炎来源hPDLSCs(PPDLSCs),qRT-PCR检测miR-23a的表达。下调或上调PPDLSCs中miR-23a的表达并诱导其成骨分化,采用qRT-PCR检测相关蛋白表达,茜素红染色检测各组PPDLSCs的体外成骨分化能力。结果 PPDLSCs中miR-23a的表达水平明显高于hPDLSCs(P0.05);上调miR-23a表达后,成骨分化的标志基因Runx2、ALP、OCN的mRNA水平及钙化结节数明显降低(P0.05);下调miR-23a表达后,Runx2、ALP、OCN的mRNA水平及钙化结节数升高(P0.05)。结论体外条件下miR-23a可以抑制PPDLSCs的成骨分化。     

miR-21和PDCD4mRNA在大肠癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨miR-21和PDCD4mRNA在大肠癌组织中的表达及与其临床病理特征的关系,并阐明在大肠癌活体组织中miR-21与其靶基因PDCD4表达的关系.方法 用荧光定量PCR技术检测43对大肠癌组织及其对应的正常黏膜组织中的miR-21和PDCD4 mRNA表达量;免疫组化SP法检测PDCD4蛋白的表达.结果 大肠癌组织中miR-21的表达升高(P＜0.05),而PDCD4mRNA的表达降低(P＜0.05).miR-21的表达与大肠癌的淋巴结转移、临床分期(Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ)有关(P＜0.05),而与患者的性别、肿瘤位置、肿瘤大小、浸润深度、远处转移、临床分期(Ⅰ、Ⅱ)无关(P＞0.05);PDCD4mRNA的表达与大肠癌的浸润深度、临床分期(Ⅰ、Ⅱ)有关(P＜0.05),而与患者的性别、肿瘤位置、肿瘤大小、淋巴结转移、远处转移、临床分期(Ⅰ+Ⅱ、Ⅲ+Ⅳ)无关(P＞0.05).miR-21的表达与PDCD4蛋白的核表达、核与浆表达之和存在负相关(P＜0.05),而与PDCD4mRNA、PDCD4蛋白的浆表达无相关性(P＞0.05).结论 miR-21和PDCD4mRNA在大肠癌中的异常表达与大肠癌的预后有关;在大肠癌活体组织中,miR-21通过与PDCD4mRNA的3’非编码区结合抑制PDCD4mRNA翻译成蛋白质.     

microRNA-449a靶向Notch1抑制膀胱癌细胞J82的迁移

【摘要】〓目的〓研究microRNA-449a(miR-449a)对膀胱癌细胞J82迁移能力的影响以及对靶基因Notch1表达的影响。方法〓通过mimics转染膀胱癌细胞株J82使其过表达miR-449a,利用Transwell实验、细胞划痕实验观察细胞迁移能力的变化;采用实时定量PCR和蛋白印迹检测细胞Notch1表达水平的变化,并通过荧光素酶实验验证miR-449a与Notch1基因的直接调控关系。结果〓与对照组相比,转染miR-449a组的J82细胞的迁移能力减弱。过表达miR-449a后,J82细胞Notch1的mRNA表达无明显变化(P=0.5739),但Notch1蛋白表达下调(P=0.0135)。荧光素酶报告基因实验显示,miR-449a能明显抑制Notch1-3’UTR的荧光素酶活性(P=0.0016)。结论〓过表达miR-449a可能通过靶向降低Notch1基因的蛋白表达,抑制膀胱癌细胞的迁移。     

miR-126在胃癌中的表达及其靶基因Crk的鉴定

目的:分析miR-126在胃癌中的表达水平并鉴定miR-126的靶基因,以阐明miR-126在胃癌发生机制中的功能。方法:采用qRT-PCR分别检测miR-126在胃癌细胞株、正常胃黏膜组织、永生化胃黏膜上皮细胞、胃癌及配对癌旁组织的表达水平,并与胃癌组织的临床病理指标进行相关性分析。采用生物信息学方法预测出miR-126的靶基因,并通过荧光素酶报告系统加以验证;采用qRT-PCR及Western印迹法检测miR-126对靶基因mRNA及蛋白质表达水平的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-126在胃癌细胞株中的表达水平明显低于其在正常胃黏膜组织及永生化胃黏膜上皮细胞株的表达水平。miR-126在60例病人的胃癌组织中表达的水平显著低于其在配对癌旁组织中表达的水平;且胃癌组织miR-126表达水平低者,肿瘤组织体积较大,胃壁浸润较深,易发生淋巴结转移,病理分期也较晚。生物信息学分析提示Crk mRNA的3′UTR含有miR-126直接作用的靶序列,荧光素酶报告系统检测进一步验证了该靶序列,qRT-PCR及Western印迹法证实miR-126对Crk蛋白表达的调控发生在转录后水平。结论:miR-126有望成为研究胃癌的新型标志物;miR-126通过对其靶基因Crk的调控参与了胃癌的发生、发展过程。     

中药复方含药血清对体外培养的肾小球系膜细胞的作用

目的:观察糖基化终末产物(AGEs)对大鼠肾小球系膜细胞ROS、RAGE mRNA和结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,以及中药复方(由太子参、生黄芪、白术、川连、泽兰、丹参、全瓜蒌5 g等组成)的干预作用。方法:原代培养大鼠肾小球系膜细胞,细胞在DMEM/F12培养液中培养传代(37℃,5%CO2),取5~8代细胞用于实验。随机分为正常糖浓度组(含5.5 mmol/L)、高糖浓度组(30 mmol/L)、AGE-BSA组、中药复方+高糖组、中药复方+AGE-BSA组。分别于培养12、24、48 h时用0.25%胰蛋白酶消化液消化并收集细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖,RT-PCR法检测细胞RAGE mRNA、CTGF mRNA的表达,流式细胞仪检测细胞内ROS表达。结果:高糖作用24 h和48 h的系膜细胞增殖显著高于正常组(P0.05),AGE-BSA组12 h、24 h和48 h的细胞增殖均有明显增加(P0.05),中药复方加高糖组较高糖组细胞增殖显著降低(P0.05);中药复方加AGE-BSA组较AGE-BSA组细胞增殖也有明显下降(P0.05)。高糖组和AGE-BSA组作用12 h、24 h和48 h的系膜细胞ROS表达均明显升高(P0.05);中药复方加高糖组作用12 h、24 h、48 h较高糖组细胞ROS表达均有下降(P0.05)。高糖组和AGE-BSA组作用12 h、24 h和48 h的系膜细胞CTGF mRNA表达均明显升高(P0.05),中药复方加高糖组作用48 h较高糖组细胞CTGF mRNA表达均有下降(P0.05)。中药复方加AGE-BSA组作用48 h较AGE-BSA组细胞CTGF mRNA也有明显下降(P0.05)。高糖组和AGE-BSA组作用12 h、24 h和48 h的系膜细胞RAGE mRNA表达均明显升高(P0.05);中药复方加高糖组作用12 h、24 h、48 h较高糖组细胞RAGE mRNA表达均有下降(P0.05);中药复方加AGE-BSA组作用48 h较AGE-BSA组细胞RAGE mRNA也有明显下降(P0.05)。结论:AGEs可能部分通过诱导细胞内ROS,促进肾小球系膜细胞表达CTGF,从而引起肾小球系膜基质增生,最终导致肾小球硬化,而中药复方可能通过调节AGEs-RAGE介导的氧化应激过程,从而阻止肾小球纤维化的发展进程。     

MiR-155、miR-208和miR-499在川崎病患儿中的表达检测与分析

目的本文探讨心血管疾病相关的miR-155、miR-208和miR-499在川崎病患者中的表达水平及临床意义。方法纳入川崎病患儿52例,正常儿童20例作为对照;收集外周血,提取血浆中的RNA;采用实时荧光定量PCR检测这三种miRNA的表达并以RNU6B作为内参基因进行分析。结果与对照组比川崎病患儿中的miR-155表达水平明显升高(P=0.018),且miR-155表达水平与冠脉损害程度成一定程度的正相关。miR-208和miR-499在川崎病中的表达有一定程度升高,但均无显著性差异。结论 miR-155的高表达与儿童川崎病有关,提示其可以作为诊断川崎病的潜在标志物。     

miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎大鼠模型PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨miR-155靶向调节PIK3R1对类风湿关节炎（rheumatoid arthritis,RA）大鼠PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、模型组、miR-155 agomir组、miR-155 antagomir组、miR-155阴性对照组,诱导RA模型,分组处理后,观察关节症状,检测关节炎指数及后足趾容积;HE染色观察大鼠关节组织病理形态;使用试剂盒检测大鼠关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平;免疫印迹检测大鼠关节组织PI3K/Akt/mTOR信号通路蛋白表达;qRT-PCR实验检测大鼠关节组织miR-155及PIK3R1 mRNA水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-155对PIK3R1的靶向调控作用。结果 与对照组比较,模型组大鼠关节炎症状明显,关节炎指数、后足趾容积、关节组织炎性因子IL-6、IL-17及IL-18水平、关节组织p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt及p-mTOR/mTOR水平、关节组织miR-155水平明显升高（P＜0.05）,PIK3R1 mRNA水平明显降低（P＜0.05）。与模型组、miR-155阴性对照组比较,miR-155 antagomir组大鼠上述指标得到明显改善（P＜0.05）;miR-155 agomir组与miR-155 antagomir组趋势相反（P＜0.05）。结论 miR-155可靶向下调PIK3R1的表达,激活PI3K/Akt/mTOR信号,加重RA大鼠关节炎症损伤,下调miR-155表达,可抑制PI3K/Akt/mTOR信号激活及炎症反应发生发展,改善关节炎症状。     

miR-214和miR-181c在胃癌组织中的表达及预后价值

目的探讨微小RNA-214（miR-214）和miR-181c在胃癌组织中的表达水平及对预后的影响。 方法选取2014年1月至2015年1月于川北医学院附属医院收治的68例胃癌患者为研究对象,均接受手术治疗,出院后随访1~60个月。利用实时荧光定量PCR技术检测患者癌组织和癌旁组织miR-214、miR-181c相对表达量;利用Kaplan-Meier曲线进行生存分析;Cox多因素回归分析影响胃癌患者预后的独立危险因素。 结果胃癌组织中miR-214、miR-181c表达水平均明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P<0.05）。根据miR-214、miR-181c表达均值将患者分为高表达组和低表达组,miR-214、miR-181c表达水平与年龄、性别、淋巴结是否转移无关,与TNM分期、肿瘤分化程度有关（P<0.05）。患者总生存率为44.12%,miR-214低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.71%、57.69%,两组间比较差异有统计学意义（P=0.035）;miR-181c低表达组和高表达组术后5年累积生存率分别为35.55%、60.87%,差异有统计学意义（P=0.024）。Cox多因素回归分析结果显示,TNM分期高（HR=1.569,95% CI：1.029~2.391,P=0.036）、miR-214低表达（HR=1.643,95% CI：1.294~2.087,P<0.001）及miR-181c低表达（HR=1.327,95% CI：1.045~1.685,P=0.021）是影响胃癌患者预后的独立危险因素。 结论miR-214、miR-181c在胃癌组织中表达显著下调,与胃癌患者临床病理参数及不良预后有关,参与胃癌的发生发展过程。     

胃癌组织中miR-497表达及其生物学意义

目的检测胃癌组织和癌旁组织中miR-497的表达差异,寻找其下游作用靶点。方法选取2010-2013年期间在中国医科大学附属第一医院胃肠外科手术切除的94例胃癌及其癌旁组织。用RT-PCR法定量检测miR-497在其中的表达;在线软件预测miR-497靶基因,用阴性对照及miR-497-mimics转染SGC-7901细胞系,RT-PCR及Western检测胃癌细胞miR-497过表达后靶点基因mRNA及蛋白水平的改变;MTT法检测miR-497-mimics组（miR-497过表达）细胞株与阴性对照组间对5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗的敏感性。结果①miR-497表达量在胃癌组织中明显低于癌旁组织,差异有统计学意义（P〈0．01）。②BCL2L2被预测为miR-497的靶基因,miR-497在胃癌SGC-7901细胞中过表达后BCL2L2蛋白表达在miR-497-mimics组细胞中明显弱于阴性对照组细胞,BCL2L2mRNA在2组细胞中的表达差异无统计学意义（P〉0．05）。miR-497-mimics组细胞对5-FU的Ic50值明显低于阴性对照组细胞（P=0．0046）。结论miR-497在胃癌组织中低表达,BCL2L2为miR-497的靶基因,miR-497过表达可提高胃癌细胞对5-Fu的敏感性,这为进一步研究miR-497与BCL2L2在胃癌中的作用及治疗提供了新的方向。