miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移

目的探讨miR-21诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。方法人工合成miR-21 mimic/inhibitor及其对照组序列,分别转入前列腺癌细胞株C4-2、DU145中,收集细胞行RT-qPCR检测miR-21、FOXO1 mRNA表达,行Western blot检测FOXO1、E-cadherin和N-cadherin表达,行Transwell试验检测转染后前列腺癌细胞侵袭透膜能力变化。结果前列腺癌细胞株C4-2、DU145转染miR-21 mimic/inhibitor及对照序列后,RT-qPCR检测miR-21表达升高/降低明显(P0.05),RT-qPCR检测FOXO1 mRNA表达与miR-21一致。在Western blot结果中,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达高于对照组,E-cadherin表达相反;转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞FOXO1、N-cadherin表达低于对照组,E-cadherin表达相反。Transwell试验显示,转染miR-21 mimic前列腺癌细胞侵袭透膜能力较对照组增强(P0.01),转染miR-21 inhibitor前列腺癌细胞侵袭能力较对照组减弱(P0.01)。结论 miR-21通过诱导FOXO1调控前列腺癌细胞EMT及侵袭转移。     

MicroRNA-613靶向Frizzled7对裸鼠人前列腺癌细胞移植瘤增殖和侵袭的影响

目的观察microRNA-613(miR-613)对裸鼠人前列腺癌细胞移植瘤生长及侵袭的影响。方法在4组裸鼠腋下皮下分别注射对数生长期的前列腺癌细胞PC3-miR-NC、DU145-miR-NC和稳定表达miR-613的PC3-miR-613、DU145-miR-613细胞,建立裸鼠移植瘤模型。采用免疫组化检测FZD7的表达,采用Western blot检测FZD7、β-catenin、p-β-catenin、E-cadherin、Vimentin蛋白的表达。结果PC3-miR-613、DU145-miR-613组移植瘤体积分别小于PC3-miR-NC、DU145-miR-NC组(P<0.05),且FZD7、β-catenin、p-β-catenin、Vimentin蛋白相对表达量降低,E-cadherin相对表达量增高。结论miR-613靶向FZD7抑制裸鼠人前列腺癌细胞移植瘤生长和侵袭进程。     

胸腺素β4基因沉默对膀胱移行细胞癌上皮间质转化的逆转作用

目的 观察胸腺素β4(Tβ4)基因沉默对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其在肿瘤侵袭转移中的作用机制.方法 使用针对Tβ4的慢病毒载体(knti-Tβ4)转染膀胱癌细胞株T24.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测Tβ4、整合素连接激酶(ILK)和上皮性标记基因E-cadherin、β-catenin的表达改变;Immunofluorescence法检测ILK、E-cadherin、β-catenin在转染后124细胞中的表达改变;细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验、AO/EB荧光染色法反映细胞转移潜能和凋亡的变化.结果 转染后48 h的T24细胞,Tp4、ILK、β-catenin mRNA或蛋白表达开始下降,以转染后96 h明显;而上皮标记基因E-cadherin在转染96h后,表达显著增加(P<0.05);Immunofluorescence显示ILK和β-catenin在细胞质、细胞核中表达减弱,而E-cadherin在胞膜中表达增强,细胞形态向正常上皮细胞转化;转染后的324细胞体外迁移能力与侵袭力下降[(10.4±1.2)%比(73.5±1.4)%],细胞凋亡增多(12.3%比36.6%).结论 肿瘤细胞中的Tβ4表达下调可以逆转肿瘤细胞的间质表型,而向正常上皮表型转化,降低肿瘤转移潜能.     

miR-21在TGF-β1引起的肝卵圆细胞上皮间质转化中的作用

[摘 要] 目的 探讨microRNA-21（miR-21）在TGF-β1引起的肝卵圆细胞（hepatic oval cell,HOC）上皮间质转化（epithelial mesenchymal transition,EMT）中的作用。方法 体外培养大鼠肝卵圆细胞,用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,Western blotting检测EMT相关蛋白（E-cadherin、N-cadherin和Vi-mentin）表达情况;用10 ng/mL TGF-β1刺激HOC 5 d后,实时荧光定量PCR检测miR-21的表达情况;分别用miR-21增强和抑制慢病毒转染HOC构建稳定的细胞株,PCR检测miR-21的表达情况;接着用TGF-β1刺激miR-21抑制慢病毒转染的HOC 5 d,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达;用miR-21增强慢病毒转染HOC后,Western blotting检测E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达。结果 TGF-β1刺激HOC 1、3、5、7 d后,E-cadherin逐渐减低,N-cadherin和Vimentin逐渐升高。TGF-β1刺激HOC 5 d后miR-21的表达增强了4.32倍。分别用增强和抑制慢病毒转染HOC后,miR-21的表达增强了3.82倍和抑制了0.22倍。下调miR-21表达后,TGF-β1致HOC的EMT作用减弱。miR-21过表达后,HOC发生了EMT。结论 抑制miR-21的表达可以减少TGF-β1引起的HOC的EMT作用,从而减轻肝纤维化。     

RNASET2过表达对人前列腺癌细胞生物学行为的影响

目的研究RNASET2在前列腺肿瘤内的表达情况及其过表达对人前列腺肿瘤细胞系DU145细胞生物学行为的影响。方法通过Western blot及免疫组化检测RNASET2蛋白在人前列腺癌组织与癌旁组织中的表达情况;通过慢病毒转染方法在DU145细胞中过表达RNASET2,以Quantitive realtime PCR、激光共聚焦显微镜检测转染效率;通过CCK-8方法检测转染后细胞活力;通过细胞划痕实验和transwell实验检测细胞迁移和侵袭力;通过微丝染色检测细胞骨架结构变化。结果 (1)RNASET2在人前列腺肿瘤组织中表达明显低于癌旁组织;(2)DU145细胞过表达RNASET2后,细胞活力显著降低,细胞迁移及侵袭力下降,细胞形态和细胞微丝骨架显著变化。结论 RNASET2可能在前列腺癌的发生、发展中起重要作用,与肌动蛋白结合可能是其抑制肿瘤细胞侵袭的关键。     

Wnt/β-catenin信号通路在多种人前列腺癌细胞系中的表达研究及意义

目的:检测多种不同上皮细胞间质转化(EMT)特性的人前列腺癌细胞Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白的表达,对细胞中Wnt/β-catenin信号通路的功能状态进行鉴定,分析其在前列腺癌EMT现象中可能的作用。方法:用Western印迹法鉴定LNCaP及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B和ARCaP亚细胞系IF11、IA8,以及PC-3、DU145细胞中β-连环素(β-catenin),糖原合成酶3β(t-GSK3β),磷酸化糖原合成酶3β(p-GSK3β)的表达差异情况。结果:β-catenin和p-GSK3β在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中表达较高,在PC-3中表达较低,在DU145中表达缺失,t-GSK3β在上述所有细胞中表达无明显差异。p-GSK3β/t-GSK3β比值在LNCaP、C4、C4-2、C4-2B、IF11、IA8中较高,在PC-3和DU145中较低。结论:8种不同EMT特性的前列腺癌细胞系中,Wnt/β-catenin信号通路的功能状态存在差异。     

雄激素受体在人前列腺癌LNCaP细胞和DU145细胞中的表达

目的 探讨雄激素受体(AR)在前列腺癌激素依赖特性转变过程中的可能作用.方法 分别应用Western Blot和RT-PCR法检测人前列腺癌LNCaP和DU145细胞株的AR蛋白表达差异和转录活性差异状况,并初步分析其在前列腺癌雄激素依赖特性转化过程中所发挥的作用.结果 与雄激素依赖的低转移性细胞株LNCaP细胞相比,AR在雄激素非依赖的高转移性细胞株DU145细胞株中的蛋白表达和转录活性下调.结论 结合我们前期研究,可能存在多重机制引起前列腺癌激素依赖特性改变.     

生长抑素受体-2基因逆转上皮-间充质转化抑制肝癌细胞侵袭转移机制的研究

目的 观察生长抑素受体-2(SSTR2)基因对肝癌细胞株MHCC-97H侵袭转移及上皮-间充质转化(EMT)特性的影响.方法 构建慢病毒3FLAG-puromycin-LV及SSTR2-LV,转染肝癌细胞株MHCC-97H,噻唑蓝(MTT)、免疫荧光检测转染效率.采用Transwell侵袭实验和迁移实验分别检测未转染细胞(空白对照组)、转染3FLAG-puromycin-LV细胞(阴性对照组)和转染SSTR2-LV细胞(实验组)侵袭转移能力的强弱.镜下观察转染前后细胞形态的变化,免疫荧光检测转染前后细胞上皮表型蛋白和间质表型蛋白的定位和表达,实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测转染后细胞SSTR2的表达,Westem blot检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)蛋白的表达.结果 SSTR2-LV可以有效转染肝癌细胞株MHCC-97H,稳定表达SSTtR2的mRNA和蛋白.转染SSTR2-LV的肝癌细胞株MHCC-97H较空白对照组和阴性对照组侵袭迁移能力明显受到抑制(P＜0.05).镜下观察肝癌细胞株MHCC-97H转染SSTR2-LV后,由成纤维细胞样、排列分散,转变为细胞排列紧密如铺路石.免疫荧光染色结果可见肝癌细胞株MHCC-97H转染后细胞膜表达的E-cadherin荧光由胞质转移至细胞周边浓聚,而Vimentin的荧光强度较前下降.采用Western blot进行蛋白定量分析,转染后MHCC-97H细胞上皮表型标志性蛋白E-cadherin、β-连环蛋白(β-catenin)表达量增高,间质表型标志性蛋白N-cadherin、Vimentin表达量减少,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 转染再表达SSTR2MHCC-97H细胞可以增加上皮表型蛋白表达,减少间质表型蛋白,从而逆转肝癌细胞EMT,导致肿瘤细胞侵袭能力减弱.     

粘附分子E-钙粘素/β-连环素在LNCaP和ARCaP亚细胞系中的差异性表达及意义

目的:检测粘附分子E-钙粘素/β-连环素(E-cadherin/β-catenin)复合体在LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中的差异性表达,以探讨E-cadherin/β-catenin复合体与前列腺癌转移侵袭的关系。方法:用Western印迹及免疫荧光鉴定LNCaP和ARCaP亚细胞系IF11、IA8中E-cadherin、β-catenin的表达以及分布情况。结果:Western印迹显示E-cadherin在LNCaP细胞系中表达较高,在IF11、IA8中表达缺失,β-catenin在IF11、IA8中表达显著高于LNCaP(P<0.01)。免疫荧光显示β-catenin在LNCaP细胞系中主要分布在细胞膜上,而在ARCaP亚细胞系IF11、IA8中,主要分布于细胞核中;E-cadherin在LNCaP细胞中主要分布在细胞膜上。结论:不同上皮细胞间质转化态(EMT)特性的前列腺癌细胞系中E-cadherin/β-catenin表达以及分布存在差异,β-catenin的核转位可能是诱发前列腺癌细胞系发生EMT改变的机制之一。     

E2F1对前列腺癌的细胞周期与凋亡的调控

目的探讨E2F1转录因子对前列腺癌细胞的细胞周期及凋亡的影响。方法从高通量基因芯片结果中获得前列腺癌相关差异表达基因E2F1,进一步通过E2F1抑制及过表达质粒转染前列腺癌细胞,运用流式细胞技术检测转染后前列腺癌细胞的细胞周期及细胞凋亡变化。结果DU145/LNCa P转染质粒后,对照于空白组,转染si E2F1的细胞株,E2F1表达量明显下降(DU145:抑制率=77.30%,P0.01;LNCa P:抑制率=79.89%,P0.01);转染了Hi-E2F1的细胞株,E2F1表达量明显升高(DU145:倍数=8681,P0.01;LNCa P:倍数=14424,P0.01)。细胞周期实验结果显示,与空白组对比,抑制E2F1表达后的DU145及LNCa P细胞株细胞周期明显被抑制(P0.05);高表达E2F1的LNCa P细胞株的细胞周期缩短(P0.05),而在DU145细胞株中无明显差异。细胞凋亡实验发现,抑制E2F1表达后的DU145和LNCa P细胞株细胞凋亡明显增加(DU145 P0.01;LNCa P P0.05);相反,高表达E2F1后,细胞凋亡明显减少(P0.05)。结论 E2F1可使前列腺癌细胞的细胞周期缩短,并抑制前列腺癌细胞凋亡,这说明E2F1在前列腺中确实起着促癌的作用。     

过表达肌球蛋白磷酸酶靶亚基1对前列腺癌细胞迁移侵袭能力的影响

目的探讨前列腺癌细胞内肌球蛋白磷酸酶靶亚基1(MYPT1)的表达变化及其对侵袭转移能力的影响。方法设计合成过表达MYPT1基因的慢病毒质粒(pLenti6.3-MYPT1), 转染前列腺癌PC3及DU145细胞48 h, 设定对照组(转染对照pLenti6.3-Ctrl)和过表达组(转染pLenti6.3-MYPT1);采用细胞划痕和Transwell实验检测24 h及48 h细胞迁移和侵袭能力;免疫荧光(IF)染色检测细胞骨架变化;蛋白质印迹法(Western blot)和定量聚合酶链式反应(qPCR)检测细胞株(PC3、DU145)转染后MYPT1和上皮-间充质转化(EMT)相关分子标志物:N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、锌指结构蛋白(Snail)和E盒结合锌指蛋白1(ZEB-1)的mRNA及蛋白相对表达水平。组间统计分析采用独立样本t检验。结果转染pLenti6.3-MYPT1后, PC3和DU145细胞内MYPT1相对表达水平明显上调, 差有统计学意义(Western blot:0.834±0.055、0.8...     

SPAG9调控前列腺癌迁移侵袭能力的研究

目的探讨SPAG9对前列腺癌细胞迁移、侵袭能力的影响及其分子机制。方法应用RNA干扰技术下调SPAG9在前列腺癌细胞中的表达,采用Western blot方法评估SPAG9基因干扰效果。采用Transwell实验比较SPAG9干扰前后前列腺癌细胞DU145、PC3的迁移与侵袭能力的改变。用CCK8细胞增殖实验分析SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞DU145、PC3增殖能力的影响。用Western blot实验研究SPAG9基因沉默对前列腺癌细胞中MMP-2及TIMP-2蛋白表达的影响。结果特异性SPAG9基因的干扰RNA(siRNA)能够有效沉默DU145、PC3前列腺癌细胞株中SPAG9蛋白的表达。SPAG9敲低后的前列腺癌细胞株迁移与侵袭能力显著降低,差异有统计学意义(P0.05)。siSPAG9组DU145和PC3细胞中MMP-2的蛋白表达水平比siCtrl组显著降低,两组比较差异有统计学意义(P0.05),而TIMP-2的表达量显著升高,差异有统计学意义(P0.05)。SPAG9基因沉默后并不影响DU145及PC3细胞的增殖,组间差异无统计学意义(P0.05)。结论SPAG9基因通过激活MMP-2信号通路增强前列腺癌细胞的迁移与侵袭能力。     

稳定沉默Rictor表达的前列腺癌CWR22RV1的构建

目的 应用RNA沉默技术下调前列腺癌CWR22RV1细胞株的Rictor基因表达,并筛选具有稳定转染Rictor-shRNA的细胞株,为进一步研究Rictor在前列腺癌中的作用打下基础.方法 针对Rictor基因设计合成siRNA序列;鉴定、测序并转染293T细胞观察基因表达情况;构建Rictor-shRNA慢病毒载体;进行Rictor-shRNA慢病毒包装及滴度测定;筛选稳定表达Rictor-shRNA的前列腺癌CWR22RV1细胞株;Western blot检测稳定转染前列腺癌CWR22RV1细胞株Rictor的表达水平.结果 Rictor-shRNA慢病毒成功包装后转染前列腺癌CWR22RV1细胞,进行嘌呤霉素筛选,获得沉默Rictor基因的前列腺癌CWR22RV1细胞株,Western blot检测显示该细胞株Rictor水平明显降低(P＜0.01).结论 成功构建了稳定沉默Rictor表达的前列腺癌CWR22RV1细胞株,为后续的实验了打下坚实的基础.     

槲皮素通过G3BP1调控Wnt/β-catenin信号通路对前列腺癌细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化的影响

目的探讨槲皮素对前列腺癌(PCa)细胞迁移、侵袭及上皮-间充质转化(EMT)的影响,并分析其可能机制。方法人前列腺癌细胞(PC-3)随机分为空白对照组及槲皮素低、中、高浓度组,转染GTP酶激活蛋白-Src同源结构域3-结合蛋白1(G3BP1)siRNA及其阴性对照、pcDNA3.1-G3BP1及其阴性对照至PC-3细胞,并用槲皮素处理。分别采用细胞划痕试验和Transwell小室法检测细胞迁移、侵袭能力,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测G3BP1 mRNA表达,Western blot法检测G3BP1蛋白、EMT相关蛋白及Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路蛋白表达。结果槲皮素抑制PC-3细胞迁移、侵袭,上调E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达,下调N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)、转录因子Snail表达;槲皮素下调PC-3细胞G3BP1 mRNA和蛋白表达,下调Wnt家族成员3A(Wnt-3α)、β-catenin、磷酸化糖原合成酶激酶3β(Glycogen synthase kinase-3β,p-GSK-3β)表达,上调GSK-3β表达;沉默G3BP1增强槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用,过表达G3BP1逆转槲皮素对PC-3细胞及Wnt/β-catenin通路的作用。差异均有统计学意义(P<0.05)。结论槲皮素可通过抑制EMT抑制PCa细胞的迁移、侵袭能力,其作用机制可能与其靶向G3BP1抑制Wnt/β-catenin信号通路相关。     

DNA甲基转移酶1对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响

目的探究DNA甲基转移酶1(DNMT1)对前列腺癌细胞增殖和迁移侵袭的影响。方法采用小干扰RNA(siRNA)沉默前列腺癌细胞株(PC3和DU145)中DNMT1表达, 通过定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测沉默效率。细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞的体外增殖能力;TransWell检测细胞体外迁移和侵袭能力;Western blot检测si-DNMT1细胞后上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达。组间比较采用t检验。结果 qPCR和Western blot实验结果显示DNMT1在前列腺癌细胞中高表达, 并成功构建siDNMT1 PC3和DU145细胞系。4 d后, CCK-8结果显示, siDNMT1细胞增殖能力低于相应对照组[PC3:1.27±0.71和1.44±0.48比1.66±0.58, t=7.268、5.108, P<0.01;DU145:1.43±0.12和1.27±0.10比1.80±0.06, t=4.841、7.493、P<0.01]。Transwell显示, 与对照组细胞比较, siDNMT1细胞迁移和侵袭...     

前列腺癌DU145细胞增殖和克隆形成与延伸因子1α基因表达的关系

目的 探讨延伸因子1α(EF-1α)基因表达与前列腺癌细胞株DU145细胞增殖、克隆形成等功能的关系. 方法 DU145细胞株分3组:对照组(未转染siRNA),转染对照组(转染随机siRNA)和实验组(转染EF-1α-siRNA).应用RNA干扰技术特异性调低DU145细胞株EF-1α蛋白质水平,并通过蛋白质印迹法验证.应用体外细胞功能分析技术,比较EF-1α蛋白质水平调低后DU145细胞增殖、克隆形成能力的变化和差异. 结果 应用RNA干扰技术实现了特异性调低前列腺癌细胞株DU145中EF-1α的水平.转染随机siRNA不影响DU145细胞中EF-1α蛋白质水平.调低DU145细胞EF-1α蛋白质水平后,实验组DU145细胞第4～7天增殖率较对照组下降45.9%、53.5%、35.3%和38.1%(P<0.05).实验组DU145细胞形成克隆数较对照组减少67.0%(P<0.01). 结论 调低EF-1α表达水平对前列腺癌细胞增殖、克隆形成等肿瘤相关生物学行为产生负面影响.EF-1α基因在前列腺癌靶向治疗中可能成为适当的靶基因.     

Gli-1基因的RNAi对前列腺癌DU145细胞的影响

目的研究胶质瘤相关癌基因1(Gli-1)对前列腺癌DU145细胞的生物学影响。方法通过脂质体介导的方法将Gli-1 SiRNA转染前列腺癌DU145细胞,RT-PCR检测Gli-1 mRNA变化,Western Blot法检测其蛋白的表达,CCK-8法检测转染后细胞增殖,运用Transwell小室法检测细胞侵袭能力的变化。结果转染Gli-1SiRNA的细胞Gli-1的表达明显低于阴性对照组(NC)与空白组(P﹤0.05),Gli-1SiRNA抑制细胞增殖并降低细胞的侵袭能力。结论 Gli-1 SiRNA可抑制前列腺癌DU145细胞中Gli-1的表达,降低细胞增殖率和侵袭能力,提示Gli-1可能在前列腺癌的恶性进展中起着重要作用。     

缺氧诱导因子1α诱导人前列腺癌细胞上皮间质化改变的研究

目的:研究人前列腺癌细胞在缺氧诱导因子1α(HIF-1α)诱导下能否发生上皮细胞间质转化态(EMT)改变,进而致侵袭能力增强,并初步分析其分子机制。方法:应用RT-PCR技术检测LNCaP细胞及其亚细胞系C4、C4-2、C4-2B这4种EMT阴性的人前列腺癌细胞中波形蛋白(vimentin)mRNA表达情况,并凭此筛选出适合于进一步作转染诱导试验的细胞。用脂质体Lipofectamine2000包装重组真核表达载体pCDNA3.1(-)/HIF-1α和pCD-NA3.1(-)空质粒后,分别转染上步试验所挑选出的人前列腺癌细胞LNCaP,600μg/mLG418筛选抗性克隆。免疫荧光及Western印迹法鉴定HIF-1α表达,Western印迹法检测EMT标志蛋白——上皮型钙粘素(E-cadherin)和vimentin的表达,Transwell验证转染后LNCaP细胞侵袭能力的改变。结果:RT-PCR证实4种EMT阴性的细胞中,仅LNCaP表达有vimentin编码基因,适合作转染诱导试验。免疫荧光也观察到HIF-1α转染细胞胞质中荧光亮度较空质粒转染细胞和未转染细胞明显增强。Western印迹法证实HIF-1α转染细胞发生了EMT转化,其E-cad-herin表达缺失,而vimentin表达增加。同时,Transwell体外侵袭试验也发现,LNCaP/HIF1α细胞的体外侵袭能力显著高于LNCaP细胞和LNCaP/pCDNA3.1(-)细胞。结论:HIF-1α过表达可以通过调节两种EMT相关蛋白诱导人前列腺癌细胞LNCaP发生EMT改变并致其侵袭能力增强。     

微小RNA-20b-5p/E2F转录因子5介导转化生长因子-β1调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化的作用机制研究

目的探讨前列腺癌细胞中微小RNA(miR)-20b-5p/E2F转录因子5(E2F5)介导转化生长因子-β1(TGF-β1)调节前列腺癌细胞上皮-间充质转化(EMT), 从而促进前列腺癌发生发展的作用机制。方法分析数据库, 预测miR-20b-5p的靶基因, 双荧光报告基因检测miR-20b-5p对E2F5 mRNA的3’UTR的靶向抑制。E2F5的野生型(WT)及突变型(Mut)的3’端非编码区(3’UTR)分别转染PC3和DU145细胞后, 再做TGF-β处理, 双荧光报告基因检测E2F5是否是TGF-β和miR-20b-5p的共同靶点。蛋白质印迹法(Western blot)检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。PC3和DU145细胞分别转染miR-20b-5p抑制剂和模拟物及其对照RNA后, Western blot检测miR-20b-5p对E2F5的靶调节。分别取两组前列腺增生和前列腺癌组织进行mRNA基因测序, 比较两者E2F5的表达。PC3细胞敲低miR-20b-5p的同时也敲低E2F5, Western blot检测EMT相关基因E-钙黏蛋白(E-cadherin...     

TGF-β/Smads通路关键蛋白在5种前列腺癌细胞株中表达的鉴定及意义

目的:对多种不同人前列腺癌细胞株TGF-β/Smads信号通路的"开放"或"关闭"状态进行鉴定,初步探讨此通路在前列腺癌侵袭、转移中的作用及可能的机制。方法:用Western印迹法检测LNCaP、PC-3、DU145及AR-CaP亚细胞系IF11、IA8细胞中TGF-β/Smads通路的关键蛋白TGF-βⅡ型受体(TβRⅡ)、Smad2/3、磷酸化Smad2(p-Smad2)、Smad4的差异表达。结果:TβRⅡ在PC-3、DU145、IF11、IA8中表达较高,在LNCaP中表达极低;Smad2/3在所有细胞中表达均较高,但活性成分p-Smad2仅在PC-3、DU145中表达;Smad4在LNCaP、PC-3、DU145中表达较高,IF11、IA8中表达缺失。结论:不同转移潜能的前列腺癌细胞株TGF-β/Smads通路的"开闭"状态存在差异,仅PC-3、DU145细胞处于开放状态;前列腺癌细胞可能通过不同的方式改变TGF-β/Smads通路状态参与晚期肿瘤的侵袭、转移过程。