艾灸“足三里”和干姜水提取液对正常大鼠胃能量代谢作用机制差异研究＊

目的 探讨艾灸“足三里”和干姜提取液对正常大鼠胃能量相关因子的影响，采用代谢组学技术探索其对能量代谢的作用机制及物质基础。方法 通过艾灸大鼠“足三里”穴位和灌胃干姜水提液，检测胃组织的能量相关因子、体质量、体温、血清生化指标等，评价艾灸和干姜对胃能量代谢的影响，并通过血清代谢组学探讨其作用机制。结果 艾灸足三里可显著升高胃组织Na⁺-K⁺-ATP酶、Ca²⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶、SDH活性。灌胃干姜提取液可显著升高Mg²⁺-ATP酶、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶、SDH活性。两种方式显著降低大鼠体质量，且对肝肾功能没有显著的影响。艾灸足三里后发现5种差异代谢物，分别为N-乳酸酰亮氨酸、异亮氨酸、D-谷氨酰胺、2-花生四烯酸甘油磷酸胆碱、PC（202（11Z，14Z）/140）。给予干姜提取液后发现5种差异代谢物，分别为黄嘌呤、视黄酯、2-花生四烯酰甘油磷酸胆碱、花生四烯酸、3-羟胆酸。结论 艾灸足三里可通过调节氨基酸代谢、脂质代谢来调控胃的能量代谢，干姜提取液通过调节视黄醇代谢、嘌呤代谢、脂质代谢来调控胃的能量代谢。     

牛磺酸通过调控miR-126对高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响及其作用机制＊

目的 探讨牛磺酸通过调控miR-126对高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 体外培养的大鼠胸主动脉内皮细胞，分为NC组（葡萄糖浓度5.5 mmol·L^-1）、HG组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1）、HG+低浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为5.0 μmol·L^-1）、HG+中浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为10.0 μmol·L^-1）和HG+高浓度牛磺酸组（葡萄糖浓度为30.0 mmol·L^-1，牛磺酸浓度为20.0 μmol·L^-1）。将模拟物（miR-126 mimics）及其阴性对照（miR-NC）、miR-126抑制物（anti- miR-126）及其阴性对照（anti-miR-NC）分别转染至大鼠胸主动脉内皮细胞。细胞计数试剂盒（CCK-8）检测细胞活力；流式细胞术检测细胞凋亡。实时荧光定量PCR（RT-qPCR）检测miR-126表达水平。蛋白质印迹（Western blot）检测细胞裂解的半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3（Cleaved-caspase3）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3前体（Pro-caspase3）蛋白表达。结果 与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞活性显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞活性显著升高（P<0.05）。与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著上升，Pro-caspase3蛋白表达显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低，Pro-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）。与NC组比较，HG组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著降低（P<0.05）；与HG组比较，HG+低浓度牛磺酸组、HG+中浓度牛磺酸组、HG+高浓度牛磺酸组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著升高（P<0.05）。与HG+miR-NC组比较，HG+miR-126组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著升高，细胞活性、Pro-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）；凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著降低（P<0.05）。与HG+牛磺酸组和HG+牛磺酸+anti-miR-NC组比较，HG+牛磺酸+anti-miR-126组大鼠胸主动脉内皮细胞中miR-126表达显著降低，细胞活性、Pro-caspase3蛋白表达显著降低，凋亡率、Cleaved-caspase3蛋白表达显著升高（P<0.05）。结论 牛磺酸通过上调miR-126促进高糖诱导的大鼠内皮细胞凋亡，为治疗糖尿病提供了理论依据。     

基于UPLC-Q-TOF-MS代谢组学技术研究淫羊藿-川芎对骨关节炎大鼠的调控作用

目的 基于超高效液相色谱-四极杆-飞行时间质谱联用仪（ultra performance liquid chromatography-quadrupole time-of-flight mass spectrometry，UPLC-Q-TOF-MS）代谢组学技术探究骨关节炎大鼠的血浆代谢特征及淫羊藿-川芎配伍对骨关节炎大鼠代谢的调控作用。方法 SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、病理经时评价组、淫羊藿组、川芎组、淫羊藿-川芎组（40 g/kg）、阳性药物组（盐酸氨基葡萄糖0.12 g/kg＋塞来昔布1.00 g/kg）。模型组、病理经时评价组和各给药组采用交叉韧带-半月板损伤术建立骨关节炎模型，造模第6周各给药组给予相应药物干预，正常组、模型组给予等体积蒸馏水。采集0、2、4、6、8、10、12、14周大鼠血浆，通过病理组织学及血浆中基质金属蛋白酶-13（matrix metalloproteinase-13，MMP-13）检测结果评价药效，UPLC-Q-TOF-MS技术分析大鼠血浆代谢轮廓，并结合多元统计分析，检测各组大鼠血浆代谢相关生物标志物的变化。结果 造模4周后MMP-13水平明显升高（P<0.01），给药8周后显著下降（P<0.01）。基于代谢组学发现给药组大鼠血浆中2种潜在生物标志物发生明显变化，分别为溶血磷脂酰胆碱（16∶0）、磷脂酰胆碱（18∶0/20∶4），主要涉及磷脂代谢通路。结论 淫羊藿、川芎单用和两者配伍均可回调差异代谢物治疗骨关节炎大鼠，且配伍效果优于单用。     

金匮肾气丸通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬在大鼠慢性阻塞性肺疾病中的作用

[目的] 探究金匮肾气丸对慢性阻塞性肺疾病（COPD）的作用及其可能的作用机制。[方法] 40只SD大鼠随机分为空白对照组、COPD组、金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组,每组各8只。除空白对照组外,其余组大鼠采用烟熏联合气管内滴注脂多糖（LPS）法建立COPD大鼠模型。各组给予相应药处理AniRes2005动物肺功能分析系统检测大鼠肺功能;酶联免疫吸附（ELISA）试剂盒检测白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）和白细胞介素-17（IL-17）水平;苏木精-伊红（HE）染色检测肺组织病理学变化;TUNEL染色检测肺组织细胞凋亡;蛋白质免疫印迹（Western blot）检测自噬及磷酸腺苷活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）途径相关蛋白的表达。[结果] 与空白对照组相比,COPD组大鼠肺功能降低,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显升高（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显升高（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显降低（P<0.05）;与COPD组相比,金匮肾气丸3.7 g/kg组、金匮肾气丸7.4 g/kg组和地塞米松组大鼠肺功能升高,IL-1β、TNF-α、IL-6和IL-17水平明显降低（P<0.05）,炎症评分、细胞凋亡率和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ、Beclin1、p-AMPK/AMPK蛋白表达水平明显降低（P<0.05）,p62和p-mTOR/mTOR蛋白表达水平明显升高（P<0.05）。[结论] 金匮肾气丸可能通过AMPK/mTOR途径抑制肺组织细胞凋亡和自噬,延缓大鼠慢性阻塞性肺疾病进展。     

水蛭、三七及其配伍对慢性肾衰竭大鼠肾纤维化作用机制比较

目的 观察水蛭-三七单味药与药对改善慢性肾衰竭（CRF）大鼠肾脏病理形态及对蛋白磷酸酶2A（PP2A）/腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路的影响。方法 将55只雄性SD大鼠随机分为正常组11只、造模组44只。正常组常规饲养，造模组进行0.25 g·kg^-1·d^-1腺嘌呤连续灌胃28 d复制CRF模型。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、水蛭组（3 g·kg^-1·d^-1）、三七组（3 g·kg^-1·d^-1）与水蛭-三七组（3 g·kg^-1·d^-1），每组9只，正常组和模型组以等体积生理盐水灌胃，连续30 d。实验结束后，测定各组大鼠血清肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）含量；苏木素-伊红（HE）染色、马松（Masson）染色和电镜观察肾脏病理形态学改变；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肾组织PP2A、AMPK、mTOR mRNA的表达；蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肾组织PP2A、AMPK、磷酸化（p）-AMPK、mTOR、p-mTOR蛋白的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠肾脏病理结构变化明显，血清SCr、BUN含量明显升高，肾组织PP2A mRNA表达增加，PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显升高，p-AMPK/AMPK明显降低（P<0.05）；与模型组比较，药物干预治疗后各组大鼠肾脏病理形态学明显改善，血清中SCr、BUN含量均明显降低，肾组织PP2A mRNA表达下降，PP2A蛋白表达和p-mTOR/mTOR均明显降低，p-AMPK/AMPK明显升高（P<0.05），水蛭-三七组效果更为明显。正常组、模型组及治疗各组肾组织AMPK、mTOR mRNA表达差异未见统计学意义。结论 水蛭-三七对改善CRF大鼠肾纤维化的疗效明显优于单味药，其对CRF大鼠肾纤维化的改善可能与调节PP2A/AMPK/mTOR信号通路有关。     

矿物药青礞石对PTZ点燃癫痫大鼠影响的脑组织代谢组学分析

目的 通过青礞石干预戊四氮（PTZ）点燃癫痫大鼠的脑组织代谢组学研究,探讨青礞石治疗癫痫可能的作用机制。方法 运用PTZ点燃法建立大鼠癫痫动物模型,实验分为空白组、模型组、卡马西平组、青礞石组。通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱法（UPLC/Q-TOF-MS）技术检测脑组织样品,利用偏最小二乘法-判别分析（PLS-DA）和SPSS 18.0软件等方式对实验结果进行统计分析。结果 建立了大鼠脑组织代谢指纹图谱、代谢轮廓图,显示各组代谢轮廓发生了明显的变化,各组间均能很好地分开,并且青礞石组较卡马西平组有更靠近空白组的趋势。筛选出了7个差异代谢物,包括磷脂酰丝氨酸（PS）（18∶0/18∶0）,L-谷氨酸,二十二碳六烯酰基乙醇酰胺,花生四烯酸,葡糖鞘氨醇,胆甾烷-3,7,12,24,25-五醇,溶血磷脂酰胆碱（LysoPC）（P-18∶0）。除二十二碳六烯酰基乙醇酰胺和LysoPC（P-18∶0）外,青礞石对其他5个差异代谢物均有显著性干预调节作用。影响PTZ点燃大鼠发生代谢紊乱的可能代谢通路有12条,较为重要的代谢通路有3条,即D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢以及花生四烯酸代谢,其中又以D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢最为重要。结论 从脑组织代谢组学分析来看,青礞石对PTZ癫痫大鼠具有明确的干预作用,这可能与其干预以上差异代谢物含量及相关代谢通路有关,可减少兴奋性神经递质对脑组织神经元的毒性作用以及抑制脑组织炎症的发展以维持脑细胞的生物学功能而减缓癫痫发生。     

加味济生肾气汤对STZ诱导的糖尿病肾病大鼠足细胞及其自噬的影响＊

目的 探究加味济生肾气汤对糖尿病肾病大鼠肾脏足细胞和自噬作用的影响，为糖尿病肾病的中药治疗奠定一定基础。方法 将66只SD大鼠按照随机数字表法分成对照组，模型组，羟苯磺酸钙组，加味济生肾气汤低、中、高剂量组。造模后，各组分别以生理盐水，羟苯磺酸钙，1 mL/kg/d、4 mL/kg/d、10 mL/kg/d药物浓度的加味济生肾气汤处理。6周后，取大鼠肾脏，电镜观察肾脏足细胞形态；免疫组化检测Nephrin的表达；Western blot检测LC3II/I和P62的表达。结果 模型组大鼠肾小球基底膜可见显著增厚，足细胞排列较紊乱，数目减少，足突融合，在加味济生肾气汤中剂量组和高剂量组中上述症状得以缓解；与对照组比较，模型组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显降低，LC3II/I比值显著下降，P62水平显著升高。与模型组比较，加味济生肾气汤高剂量组大鼠肾组织中的Nephrin水平均明显升高，LC3II/I比值均显著升高，P62水平显著降低（P < 0.05）。结论 加味济生肾气汤通过提高自噬水平，减少足突发生融合，提高肾脏的过滤功能。     

基于UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术的肾康注射液在大鼠体内代谢产物的鉴定及代谢途径分析

目的 采用UHPLC-Q-Orbitrap HRMS技术鉴定肾康注射液（Shenkang Injection,SKI）在大鼠体内的代谢产物,并提出可能的代谢途径。方法 SD大鼠经尾iv SKI后,收集其血浆、尿液和粪便样本。以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相,梯度洗脱,Waters BEH C₁₈柱进行色谱分离;使用Q Exactive HRMS和加热电喷雾离子源（HESI）进行正、负离子模式下的质谱扫描分析。根据“提取-化合物筛选-鉴定-验证”的大鼠体内代谢产物的鉴定策略对质谱数据进行分析。结果 在大鼠血浆、尿液和粪便中共鉴定出121种外源化合物,包括29种原型化合物和92种代谢产物。这些代谢产物主要经历的生物转化有羟基化、还原和去饱和等I相代谢反应,以及甲基化、乙酰化、磺酸化、葡萄糖醛酸化、甘氨酸结合、半胱氨酸结合和牛磺酸结合等II相代谢反应。结论 为SKI的体内药理学和作用机制的进一步研究提供了物质基础,所提出的鉴定策略为中药的体内药效物质研究提供了一种系统、全面、可靠的方法。     

基于代谢组学探讨电针对WKY抑郁大鼠的抗抑郁作用＊

目的 采用液质联用非靶向代谢组学技术探究电针抗抑郁的作用机制方法 将24只雄性WKY大鼠随机分为模型组、电针组、假针组，每组８只。Wistar雄性大鼠8只设为对照组。电针组于“百会”“足三里”进行电针治疗，每次20 min，1周5次，连续治疗3周。假针组取穴同电针组，毫针不刺破皮肤，毫针与电针仪导线相连，但无电流通过。最后通过旷场实验、强迫游泳和新奇抑制摄食实验评价行为学改变；对照组、模型组和电针组大鼠粪便采用高效液相-色谱质谱系统分析代谢物及组成的变化，探究抑郁症核心生物标记物的代谢途径差异，以评价电针的抗抑郁作用机制。结果 与对照组相比，模型组在旷场试验中的直立次数减少（P<0.001），中央运动距离减少（P<0.05）；强迫游泳的不动时间延长（P<0.001）；新奇抑制摄食潜伏摄食时间增加（P<0.001）。与假针组相比，电针组在旷场试验中的直立次数增加（P<0.001），中央运动距离增加（P<0.05）；强迫游泳的不动时间减少（P<0.001）；新奇抑制摄食潜在摄食时间减少（P<0.001）。通过模式识别分析发现，WKY大鼠代谢产物发生显著差异，电针后的代谢产物也出现明显差异。对显著性差异代谢产物分析发现，甜菜苷在模型组中升高，在电针组中降低；环己基氨基磺酸酯、10-氢过氧-H4-神经前列腺素、15（S）-羟基二十碳三烯酸、地奥司明在模型组中降低，在电针组中升高。KEGG通路结果发现显著差异代谢产物主要参与了脂质代谢、氨基酸代谢、生物素降解与代谢等代谢途径。结论 电针能改变抑郁大鼠的抑郁样行为，可能是通过调节脂质代谢、氨基酸代谢、生物素降解与代谢等代谢途径发挥抗抑郁的治疗作用。     

桑白皮总黄酮联合知母总皂苷改善高脂血症伴骨质疏松症大鼠的作用机制

目的 探讨桑白皮总黄酮联合知母总皂苷对高脂血伴骨质疏松症大鼠的改善作用及其可能的机制。方法 40只SPF级雄性SD大鼠适应性喂养7 d后，随机分为正常组、模型组、骨化三醇组（45 ng·kg^-1），桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组（0.6 g·kg^-1+0.4 g·kg^-1）和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组（1.2 g·kg^-1+0.2 g·kg^-1）。除正常组外，其余各组大鼠高脂饲喂造模9周；正常组与模型组灌胃给予生理盐水，其他组灌胃给予相应药物；给药12周后，除正常组外，其余各组给药的同时肌肉注射糖皮质激素，给药22周后测定各组大鼠的体质量，生化法检测血清中总胆固醇（TC），甘油三酯（TG），低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C），骨钙素（BGP）及骨碱性磷酸酶（BALP）的含量；苏木素-伊红（HE）染色观察大鼠胫骨病理形态变化；实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠骨组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ），Runt相关转录因子2（Runx2） mRNA的表达水平；免疫荧光法检测大鼠PPARγ，Runx2的表达。结果 与正常组比较，模型组大鼠体质量显著升高（P<0.01），血清中TC，TG，LDL-C含量显著增加（P<0.01）；与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠体质量显著降低（P<0.01），血清中TC，TG，LDL-C含量显著降低（P<0.01），BGP，BALP含量显著升高（P<0.01）。HE染色结果表明，与正常组比较，模型组大鼠胫骨脂肪空泡增多，成骨细胞数量减少；与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组大鼠胫骨脂肪空泡减小，成骨细胞数量增加。免疫荧光与Real-time PCR结果表明，与正常组比较，模型组大鼠Runx2表达减少，PPARγ表达增加（P<0.01），与模型组比较，桑白皮总黄酮-知母总皂苷1∶2组和桑白皮总黄酮-知母总皂苷2∶1组上调Runx2的表达，下调PPARγ的表达（P<0.05，P<0.01）。结论 桑白皮总黄酮联合知母总皂苷可上调Runx2，下调PPARγ mRNA和蛋白的表达，从而影响了血液中TG和TC代谢，达到对骨质疏松的治疗作用，为临床防治高脂血症伴骨质疏松症的治疗提供了实验依据。     

对《伤寒论》与《温疫论》的再思考

通过分析伤寒与温疫的证治特点、《伤寒论》与《温疫论》的篇章结构、张仲景与吴又可所处的时代背景,以及现代医学对出血热与鼠疫的认识,梳理热病证治的发展历史与脉络。     

浅议影响小儿头皮静脉穿刺的因素

头皮静脉穿刺是儿科护士必备的技术，其成功率的高低直接危机患儿的痛苦乃至生命，掌握这门过硬的技术，尽量做到一针见血，是儿科护士的天职，也是衡量合格护士的标准之一。本人从事儿科护理工作已多年，现将这方面的体会做一报告。     

中药蛇床子的研究进展

概述近年来有关蛇床子的化学成分、药理作用和临床应用和研究进展。     

基于效应的针刺穴位组学研究思考

根据“穴位组学概念”的提出,针对针刺机理进行深入研究。目的在于揭示针刺的生物学基础,阐明针刺的科学性,并对相关针刺处方进行优化,围绕临床针刺治疗手段中的关键技术进行标准化与规范化研究,实现针刺科学机理转化为实际应用,从而更好的服务于临床。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之二)

从中华人民共和国建立到文化大革命爆发的近20年间,是新时期仲景学说研究队伍的形成———发展期。在这一时期,对《伤寒论》原著的注释和校正工作,揭开了新中国教材编写的序幕;对《伤寒论》中一些有代表性问题或关键性字词的考订,是一个特点;对《伤寒杂病论》方法论的研究,也是这一时期出现的新特点。此外,这一时期,对六经的研究逐渐深入;对方证的研究仍是热门话题;对伤寒方中用药规律的研究出现热潮;对张仲景治疗方法原理的研究开始活跃;比较性研究热度不减;专题性研究渐成趋势。     

百年以来《伤寒论》理论研究述评(之一)

近百年来,公开发表的研究《伤寒论》的学术论文约3万篇,内容涉及张仲景生平事迹、《伤寒论》版本传承、《伤寒论》学术思想和临床应用研究等多个方面。民国时期是近代仲景学术研究的萌芽——发动期,这一时期的文章具有以下时代特点:①期刊和作者群有明显的地域和社团性;②体现了中西医结合的研究方向;③研究空间不断扩大;④学术争鸣空前活跃。     

辨证施护喘证

喘证的一般护理注意调整病室环境、体位与休息、严密观察生命体征、饮食护理、情志护理;根据中医辨病与辨证相结合的方法,同病异护、异病同护,实施具有针对性、个性化的护理措施,保障治疗措施的实施,促进疾病康复。     

蛇床子素抗凝血作用

目的:研究蛇床子素的抗凝血作用。方法:通过测定小鼠凝血时间(CT)、大鼠的凝血酶原时间(PT)和优球蛋白溶解时间(ELT),观测蛇床子素的抗凝作用。结果:蛇床子素能显著处长CT、PT,缩短ELT。结论:蛇床子素具有明确的抗凝血作用。     

七情学说实验研究相关问题探讨

对近年来有关中医七情学说的实验研究现状进行了简要评述。指出实验研究对七情学说的创新和发展具有重要的意义，并着重对今后开展七情学说实验研究所要解决的关键问题以及七情学说实验研究所涉及的动物模型等问题进行了初步探讨。     

基于《伤寒论》引发古代伤寒学派思考

《伤寒论》这一中医经典著作,指导临床,疗效显著,活人无数,尤其是对外感热病的发展影响颇深.伤寒学派是以研究或阐述张仲景《伤寒论》辨证论治及理法方药为中心的医学学术群体,该学派学术璀璨,连绵千年.现就以古代此派的形成、发展、争鸣3个阶段进行初步探析,认为其形成于晋唐,发展于宋元,争鸣于明清.