缺氧条件下YC-1对人胰腺癌细胞VEGF和GPI基因的抑制效应

目的探讨缺氧条件下3-(5’-hydroxymethyl-2’-furyl)-1-benzylindazole(YC-1)对人胰腺癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)和磷酸葡萄糖异构酶(GPI)基因的调控作用及其机制。方法缺氧条件下体外培养胰腺癌PC-3细胞株,免疫细胞化学染色法检测常氧和缺氧条件下缺氧诱导因子- 1α(HIF-1α)的表达。半定量RT-PCR检测YC-1对PC-3细胞VEGF、GPI、HIF-1αmRNA表达的调节作用。Western blot检测YC-1对PC-3细胞HIF-1α蛋白表达的调节作用。MTT法检测YC-1对缺氧PC-3细胞恶性增殖的影响。结果缺氧条件下,HIF-1α主要表达于PC-3细胞胞核内。随着YC-1浓度升高,VEGF和GPI mRNA表达、HIF-1α蛋白表达逐渐受抑,并呈明显的剂量依赖性;实验组HIF- 1αmRNA均呈强表达,其表达水平不随YC-1作用浓度的升高而降低。缺氧条件下,实验组细胞增殖抑制率均增高,100μmol／L YC-1组细胞增殖抑制率达73．28%±2．01％。结论缺氧状态下,YC-1抑制人胰腺癌PC-3细胞VEGF和GPI基因转录与其抑制HIF-1α蛋白的表达有关,YC-1能够抑制PC-3细胞生长和增殖。     

骨肉瘤miR-96的表达与细胞增殖和凋亡

背景与目的:微小RNA(microRNA,miRNA)是一类内源性的非编码小分子RNA,其主要通过与靶mRNA作用抑制转录后的翻译。miR-96是在多类肿瘤细胞中高表达的小RNA分子。本研究旨在检测miR-96在骨肉瘤组织中的表达,并研究其在骨肉瘤细胞的增殖、细胞周期及凋亡中的意义。方法:运用TagMan MGB探针法检测40例骨肉瘤组织及对应的骨组织中miR-96的表达;应用反义技术降低骨肉瘤细胞(U2-OS和MG-63)中miR-96的表达;采用MTT比色法检测细胞增殖的改变;应用流式细胞技术检测骨肉瘤细胞细胞周期和凋亡情况。结果:在40例骨肉瘤组织中,62.5%(25/40)的骨肉瘤组织miR-96表达明显高于对应骨组织(P<0.05);反义miR-96转染骨肉瘤细胞U2-OS和MG-63后,miR-96的表达明显降低,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞生长受到明显抑制,其生长主要停滞在G0/G1期,而S期和G2/M期细胞的比例下降。另外,降低miR-96的表达,U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞早期凋亡明显增加。结论:miR-96在骨肉瘤组织中表达明显上调,降低其表达能明显抑制U2-OS和MG-63骨肉瘤细胞的生长,并诱导细胞早期凋亡增加,miR-96可能成为骨肉瘤基因表达调控的新靶点。     

促凋亡基因PDCD5在骨肉瘤U2-OS细胞表达及对其促凋亡作用的研究

目的:观察外源性PDCD5基因对骨肉瘤细胞系U2-OS的促凋亡作用。方法:扩增重组质粒PCI-neo-PDCD5,采用脂质体转染的方法,将PDCD5基因转染骨肉瘤细胞U2-OS,RT-PCR检测转染后表达情况;撤除血清培养16h后,四甲基偶氮唑盐MTT法检测目的基因转染后细胞的增殖情况;An-nexinV-染色流式细胞仪检测细胞凋亡;蛋白质印迹法分析凋亡通路。结果:转染骨肉瘤细胞U2-OS后,RT-PCR检测到PDCD5的表达,MTT实验发现撤除血清后转染重组质粒组细胞的增殖被明显抑制。于转染空载体和对照组细胞相比,存活细胞明显减少,P<0.001。AnnexinV染色,流式细胞仪检测可见明显的凋亡细胞,与转染空质粒组(凋亡率为1.47%)相比,其凋亡率为10.28%。经PDCD5处理的细胞中,Bcl-2、Caspase-3和Caspase-9的表达与对照组比较,差异均有统计学意义。结论:PDCD5基因可以在转染的骨肉瘤细胞系U2-OS细胞中表达,并在撤出血清因素的诱导作用下可显著抑制转染细胞的生长,并通过线粒体激活途径发挥促凋亡作用并诱导细胞发生凋亡。     

常春藤皂苷元影响内质网相关途径阻滞骨肉瘤细胞周期的实验研究

目的:研究常春藤皂苷元对骨肉瘤细胞周期的影响及机制。方法:用0、5、10、20、40 μg/ml的常春藤皂苷元处理骨肉瘤细胞,CCK-8法检测细胞增殖情况,细胞克隆实验测定细胞克隆形成能力,计算其半数抑制浓度。用半数抑制浓度的常春藤皂苷元处理骨肉瘤细胞,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,荧光探针法测定细胞内Ca2+浓度。用Western blot法检测细胞中结合免疫球蛋白（BIP）、内质网氧化还原酶1-Lα（Erol-Lα）、蛋白质二硫键异构酶（PDI）、剪切型Caspase-12（Cleaved Caspase-12）、细胞周期蛋白D1（Cyclin D1）蛋白水平。结果:5、10、20、40 μg/ml的常春藤皂苷元均可以抑制骨肉瘤细胞的增殖和克隆形成能力,与0 μg/ml常春藤皂苷元作用组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。半数抑制浓度的常春藤皂苷元处理后的骨肉瘤细胞G1期比例升高,细胞凋亡率也升高,细胞内Ca2+浓度升高,细胞中BIP、Erol-Lα、PDI、Cleaved Caspase-12蛋白水平升高,Cyclin D1蛋白水平降低,与0 μg/ml常春藤皂苷元作用组比较,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论:常春藤皂苷元通过影响内质网相关途径将骨肉瘤细胞周期阻滞在G1期,诱导细胞凋亡发生。     

YC-1抑制人类白血病细胞株 U937、THP-1增殖作用的研究

 【摘要】　目的　探讨YC-1对人类白血病细胞株U937和THP-1增殖、凋亡、周期及Caspase-3、-8、-9蛋白表达的影响。方法　实验分为YC-1组（1.0、3.0、10.0 μmol／L）,以不加YC-1组为对照。四甲基偶氮唑蓝比色（MTT）法检测细胞增殖;流式细胞术（FCM）检测细胞凋亡及周期;Western blot检测Caspase-3、-8、-9蛋白表达的变化。结果　1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1以剂量依赖方式抑制U937、THP-1细胞增殖,24 h细胞存活率分别为（76.5±4.4）%、（68.7±6.8）%、（60.9±13.2）%,（94.1±1.4）%、（81.4±2.0）%、（72.7±3.0）%,与对照组的100 %比较差异均有统计学意义（F＝15.870、126.629,均P＜0.01）。U937、THP-1细胞经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,凋亡率分别为（40.7±1.0）%、（55.6±2.3）%、（71.8±1.5）%,（34.6±2.0）%、（50.3±3.5）%、（59.6±4.6）%,与对照组的（4.7±1.4）%、（1.8±1.0）%比较差异均有统计学意义（F＝937.229、200.447,均P＜0.01）,但细胞周期无明显变化。经1.0、3.0、10.0 μmol／L YC-1作用24 h后,U937细胞Cleaved Caspase-3、-8蛋白表达上调,Caspase-9无变化,THP-1细胞Cleaved Caspase-3蛋白表达上调,Caspase-8、-9无变化。结论　YC-1能够抑制U937、THP-1细胞增殖,诱导细胞凋亡,但对周期无影响,其诱导白血病细胞凋亡的机制可能与Caspase蛋白活化有关。     

miR-186通过下调垂体瘤转化基因1的表达抑制骨肉瘤细胞的增殖侵袭并诱导其凋亡

目的:探讨miR-186对骨肉瘤细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响,并探讨其可能机制.方法:实时荧光定量PCR检测骨肉瘤细胞HOS、U2-OS、Saos-2及成骨细胞NHOst中miR-186表达,并运用人工合成的miR-186模拟片段及对照scramble mimic转染至人骨肉瘤HOS及U2-OS细胞内,运用实时荧光定量PCR检测转染后细胞中miR-186的表达水平;分别运用CCK-8法、流式细胞检测技术及Transwall体外侵袭实验检测过表达miR-186对HOS及U2-OS细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响;运用Westem blotting及实时荧光定量PCR检测miR-186过表达对细胞中垂体瘤转化基因1(pituitary tumor transforming gene 1,PTTG1)的蛋白及mRNA表达水平的影响.结果:骨肉瘤细胞中miR-186呈现低表达;转染人工合成的miR-186片段可上调HOS及U2-OS细胞中miR-186的表达;miR-186过表达组细胞的增殖能力较scramble组明显下降(P＜0.01),转染组HOS[(16.9±2.1)％ vs(10.4±1.6)％,P＜0.05]及U2-OS[(22.6±2.9)％ vs (14.1±2.2)％,P＜0.05]细胞的凋亡比例明显高于scramble组,转染组HOS及U2-OS细胞的穿膜数明显低于scramble组(P＜0.01);转染组细胞中PTTG1的蛋白及mRNA表达水平均明显下降(P＜0.01),而scramble组无明显变化(P＞0.05);结论:miR-186能够抑制骨肉瘤细胞的增殖及侵袭并促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制PTTG1表达相关.     

敲低EN2诱导肝癌细胞凋亡并提高PTEN蛋白的表达

 目的 探讨EN2对肝癌细胞凋亡及细胞中PTEN蛋白表达的影响。方法 用EN2 siRNA慢病毒感染肝癌细胞HuH-7，qRT-PCR和Western blot方法检测干扰效果。MTT方法测定细胞活力变化，PI单染法测定细胞周期分布，Annexin V-FITC/PI双染法测定细胞凋亡变化，Western blot测定细胞中激活型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、激活型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）、第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白（PTEN）及细胞周期素B 1( Cyclin B l)蛋白水平，JC-1法测定线粒体膜电位变化，Western blot测定胞浆中细胞色素C（Cytochrome C）蛋白水平。结果 EN2 siRNA慢病毒感染可明显下调肝癌细胞中EN2的表达。沉默EN2表达后的肝癌细胞活力降低，细胞凋亡率升高，细胞G2/M期比例升高，细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、PTEN蛋白水平明显升高，Cyclin B1蛋白水平明显降低，线粒体膜电位下降，胞质中Cytochrome C蛋白水平升高。结论 敲低EN2可以阻滞肝癌细胞周期，诱导肝癌细胞凋亡，其作用机制可能与PTEN、线粒体凋亡途径有关。     

下调Akt1表达对胆管癌HUCCA-1细胞增殖、凋亡的影响

目的:观察Akt1干扰后胆管癌HUCCA-1细胞增殖、细胞周期及凋亡变化,及其与下游蛋白的相关性.方法:构建干扰质粒siAkt1转染胆管癌HUCCA-1细胞,Western印迹法及qRT-PCR法检测转染效率及Akt1下调后凋亡相关基因表达.MTT法检测细胞增殖,PI法检测细胞周期,流式细胞术检测细胞凋亡.结果:MTT显示,与MOCK组和siRNA control组对比,siAkt1转染后HUCCA-1细胞增殖能力减弱,在72h及96h差异均具有显著性(P＜0.05);转染siAkt1细胞停留在G1期比例增高,G2及S期比例减少(P＜0.05);转染后早期凋亡及晚期凋亡率均升高(P ＜0.05;P ＜0.01).在siAkt1转染后,凋亡相关基因p85mRNA及p-Akt1(磷酸化的Akt1)mRNA表达水平降低(P＜0.05),Cleaved Caspase-9 mRNA及Cleaved Caspase-8mRNA表达升高(P＜0.05).凋亡相关基因p85及p-Akt1蛋白表达降低(P＜0.05),Cleaved Caspase-9及Cleaved Caspase-8蛋白表达水平升高(p＜0.05).结论:对胆管癌HUCCA-1细胞中Akt1表达进行下调导致细胞增殖能力下降,促进细胞进入G1期,凋亡率升高,机制与其下游Cleaved Caspase基因表达具有相关性.     

APE1基因沉默增强骨肉瘤U2-OS细胞硼替佐米治疗敏感性的实验研究

  目的  探讨脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶1(APE1)基因沉默对蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib, PS-341)抑制骨肉瘤U2-OS细胞增殖作用的影响及其生物学机制。  方法  将APE1特异性shRNA的重组质粒, 稳定转染人骨肉瘤U2-OS细胞, 采用聚合酶链反应和免疫印迹法检测转染前后U2-OS细胞中APE1的表达, 采用四甲基偶氮唑盐法观察PS-341和APE1-siRNA对人骨肉瘤U2-OS细胞生长的抑制作用, 采用免疫印迹法检测PS-341和APE1-siRNA对U2-OS细胞中APE1和胞核NF-λB的表达的影响。  结果  细胞稳定转染APE1-siRNA重组质粒后, APE1mRNA和蛋白表达分别下降约46.1%和62.6%, MTT法检测U2-OS细胞增殖受到抑制。转染前后U2-OS细胞PS-341的IC50值分别为371.54 nmoL/L与109.64 nmoL/L, 两者比较差异有统计学意义(P < 0.01)。Western blot结果显示PS-341和APE1-siRNA均抑制U2-OS细胞胞核中NF-λB的表达, 两者联合应用抑制效果更明显。  结论  APE1-shRNA质粒转染骨肉瘤U2-OS细胞后, 肿瘤细胞的增殖率降低, 对PS-341抑制U2-OS细胞的增殖具有协同作用。      

YC-1对人低氧HepG-2细胞系内HIF-1稳定性及其促靶基因转录活性抑制效应的观察

目的:观察3-(5'-羟甲基-2'-呋喃)-1-苄基吲唑(YC-1)对低氧肝癌HepG-2细胞系缺氧诱导因子-1(HIF-1)稳定性和其促靶基因转录活性的调节作用,以及对细胞增殖活性的影响,探讨将HIF-1作为肿瘤治疗新靶点的可能性.方法:低氧条件下培养肝癌HepG-2细胞,应用RT-PCR和蛋白质印迹法分别检测不同YC-1作用浓度下HIF-1α及其靶基因mRNA和蛋白产物的表达.MTT检测YC-1时低氧HepG-2细胞恶性增殖力的影响.结果:低氧引起HIF-1α、VEGF和GPI mRNA表达显著增加,与常氧组比较差异有统计学意义,P<0.05.低氧条件下,YC-1以剂量依赖性方式抑制VEGF、GPI mRNA与蛋白表达,与对照组比较差异有统计学意义,P<0.05.低氧条件下,YC-1浓度升高不影响HIF-1α mRNA表达量,却以剂量依赖性方式抑制HIF-1α蛋白表达.低氧条件下,YC-1显著抑制HepG-2细胞生长,且呈现剂量依赖效应.结论:低氧状态下,Yc-1抑制人肝癌HepG-2细胞系内HIF-1稳定性和转录活性,且呈剂量依赖性.YC-1抑制HepG-2细胞生长,且呈现剂量依赖效应.     

miRNA-130b在骨肉瘤组织中的表达及其对骨肉瘤细胞增殖与凋亡的影响北大核心CSCD

目的探讨骨肉瘤组织中miRNA-130b的表达及其对骨肉瘤细胞增殖、细胞周期以及凋亡的影响。方法用Real-time PCR法检测48例骨肉瘤患者肿瘤组织与癌旁组织中miRNA-130b的表达水平。用脂质体法将miRNA-130b inhibitor瞬时转染入U2人骨肉瘤细胞,实时定量RT-PCR检测U2细胞miRNA-130b的表达,CCK8增殖实验检测各组细胞的增殖情况,流式细胞仪检测各组细胞周期及细胞凋亡率,荧光素酶基因报告实验检测miRNA-130b与RUNX3之间的调控机制、荧光素酶的相对活性和转染后RUNX3及miRNA-130b的表达水平。结果骨肉瘤组织中miRNA-130b的表达明显高于癌旁组织,转染miRNA-130b inhibitor后U2细胞miRNA-130b的表达水平明显受抑制,人骨肉瘤细胞U2转染miRNA-130b inhibitor的细胞增殖速度明显下降,细胞周期阻滞在G0/G1期,凋亡率增高,细胞中RUNX3蛋白及m RNA表达水平明显升高;miRNA-130b显著抑制野生型RUNX3-3’UTR表达载体的荧光素酶活性;抑制miRNA-130b表达后,RUNX3表达明显升高;抑制RUNX3表达后,miRNA-130的表达无明显变化。结论 miRNA-130b在骨肉瘤中呈高表达水平,抑制miRNA-130b可能通过调控RUNX3抑制骨肉瘤细胞的增殖,并促进细胞凋亡。     

低氧对顺铂诱导的人喉鳞癌Hep2细胞凋亡及细胞周期分布的影响及其机制

目的:建立体外低氧模型,探讨低氧对人喉鳞癌细胞Hep2细胞周期以及顺铂对其诱导的凋亡的影响。方法:将体外培养的人喉鳞癌细胞分为4组:A组(对照组)、B组(低氧培养组)、C组(常氧培养加顺铂组)、D组(低氧培养加顺铂组)。流式细胞仪检测HIF-1α蛋白表达、细胞凋亡及细胞周期变化;MTT法检测C、D两组在不同浓度顺铂作用24h后的细胞抑制率;RT-PCR检测各组细胞HIF-1αmRNA的表达水平。结果:低氧能明显增加Hep2细胞HIF-1α蛋白表达,而对HIF-1αmRNA的表达无明显影响。B、D组的Hep2细胞发生G0/G1期细胞周期阻滞,顺铂5"g/ml作用24h后C组细胞凋亡及抑制率(%)显著高于D组(P<0.05)。结论:低氧使Hep2细胞产生化疗抵抗,其中HIF-1α蛋白表达水平升高以及低氧造成的G0/G1期细胞周期阻滞可能在顺铂诱导的人喉鳞癌细胞凋亡中发挥重要的抗凋亡作用。     

LncRNA DARS-AS1靶向miR-758-3p促进骨肉瘤细胞增殖并抑制凋亡

目的:探讨LncRNA DARS-AS1对骨肉瘤细胞增殖及凋亡的影响及其可能作用机制。方法:qRT-PCR法检测骨肉瘤组织、瘤旁组织、人成骨细胞hFOB 1.19、人骨肉瘤细胞Saos2、U2OS、HOS中LncRNA DARS-AS1、miR-758-3p的表达量;对Saos2细胞进行转染,根据不同转染物分为si-NC组、si-LncRNA DARS-AS1组、miR-NC组、miR-758-3p组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-NC组、si-LncRNA DARS-AS1+anti-miR-758-3p组;MTT法、流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡;双荧光素酶报告实验检测LncRNA DARS-AS1与miR-758-3p的靶向调控关系。结果:与瘤旁组织比较,骨肉瘤组织中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P<0.05);与hFOB 1.19细胞比较,Saos2、U2OS、HOS细胞中LncRNA DARS-AS1的表达量升高(P<0.05),miR-758-3p的表达量降低(P&...     

下调fascin抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变的实验研究

目的:研究下调聚束蛋白（fascin）对卵巢癌细胞周期、增殖和凋亡的影响。方法:卵巢癌细胞SKOV3感染阴性对照慢病毒载体、shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体,用Real-time PCR和Western blot检测干扰效果。MTT检测增殖活性,克隆形成实验检测细胞克隆形成能力,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡,Western blot检测细胞中活化型Caspase-3（Cleaved Caspase-3）、细胞周期依赖性蛋白激酶4(cyclin-dependent kinase 4,Cdk4)、活化型Caspase-9（Cleaved Caspase-9）和p21蛋白水平。结果:shRNA fascin 1慢病毒载体、shRNA fascin 2慢病毒载体感染后的SKOV3细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平均降低,并且shRNA fascin 1慢病毒载体感染后细胞中fascin mRNA和蛋白表达水平下降更多。下调fascin后的卵巢癌细胞增殖能力降低,细胞克隆形成能力也降低,细胞G0/G1期比例升高,细胞凋亡率升高,细胞中活化型Caspase-3、活化型Caspase-9蛋白水平升高,p21蛋白水平也升高,Cdk4蛋白水平降低,与感染阴性对照慢病毒载体和未经感染的细胞比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论:下调fascin可降低卵巢癌细胞增殖能力、抑制卵巢癌细胞从G0/G1期向S期转变并诱导卵巢癌细胞凋亡。     

抑制缺氧诱导因子1α表达对原代血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的:探讨抑制缺氧诱导因子1α（HIF-1α）基因表达对体外培养的血管瘤内皮细胞增殖、凋亡的影响。方法:用组织块结合酶消化法提取原代血管瘤内皮细胞,取第3代细胞用于实验。实验分为空白组、阴性对照组和HIF-1α转染组,转染48 h后Western bloting检测各组细胞中HIF-1α、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved caspase3）、Fas、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶（p-AKT）的蛋白表达;CCK8和流式细胞仪分别检测细胞的增殖及凋亡情况。结果:阴性对照组HIF-1α的蛋白表达与空白组比较差异无统计学意义（P>0.05）,而HIF-1α转染组HIF-1α的蛋白表达显著低于空白组（P<0.05）;HIF-1α转染组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cleaved caspase3、Fas蛋白显著上调表达,PI3K、p-AKT蛋白显著下调表达,与空白组比较差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:抑制HIF-1α基因表达可降低血管瘤内皮细胞增殖及诱导细胞凋亡,其机制与下调PI3K/AKT信号通路有关。     

蟾毒灵诱导骨肉瘤U-2OS和U-2OS/MTX300细胞系的凋亡

目的 研究蟾毒灵对人骨肉瘤细胞株的增殖抑制和诱导凋亡作用.方法 以不同浓度的蟾毒灵分别作用于骨肉瘤细胞U-2OS和甲氨蝶呤(MTX)耐药骨肉瘤细胞U-2OS/MTX300.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖,Hoechst 33258荧光染色检测细胞凋亡,流式细胞仪检测细胞周期,DNA琼脂糖凝胶电泳检测DNA ladder凋亡条带,Western blot法检测凋亡相关蛋白p53、bax和bcl-2的表达.结果 蟾毒灵能明显抑制骨肉瘤细胞的增殖,其对U-2OS和U-2OS/MTX300细胞的IC50值分别为(8.49±2.1)ng/ml和(10.19±1.7)ng/ml(P＞0.05).蟾毒灵处理U2OS和U-2OS/MTX300细胞48 h后,细胞均出现明显的染色质凝集,有典型的凋亡小体产生.同时,蟾毒灵能诱导骨肉瘤细胞凋亡,其作用机制是通过阻滞细胞周期于G2/M期、上调p53、bax表达和下调bcl-2的表达来实现.结论 蟾毒灵能显著抑制人骨肉瘤细胞U-2OS和U-2OS/MTX300的生长,并诱导细胞凋亡,其抗骨肉瘤作用不受MTX耐药的影响.     

氯化镉诱导骨肉瘤细胞凋亡的效应及其分子机制

目的 通过观察氯化镉诱导的骨肉瘤细胞凋亡与细胞特异性周期阻滞及caspase活化的影响,阐明氯化镉诱导的细胞凋亡效应及其分子机制.方法 应用AnnexinV/PI和API等标记,流式细胞仪对人骨肿瘤细胞凋亡及周期特异性的检测,运用RT-PCR的方法检查Caspase-3、Caspase-9活化情况.结果 处于静止期的外周血对氯化镉凋亡诱导不敏感,而G1期氯化镉诱导骨肉瘤细胞出现了明显的细胞凋亡.氯化镉诱导的细胞凋亡主要是在细胞周期的G1期发生.观察组采用氯化镉凋亡诱导,对照组未做处理,结果显示观察组的Caspe-3、Caspase-9 mRNA的表达值显著高于对照组.结论 氯化镉诱导的细胞凋亡与骨肉瘤细胞的细胞周期相关,存在G1期细胞周期阻滞的周期特异性,且此过程中发生了caspase活化,参与细胞凋亡.     

松油烯-4-醇对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨松油烯-4-醇（T4O）对人多发性骨髓瘤U266细胞增殖及凋亡的影响及其作用机制。 方法 不同浓度（5~80 μmol/L）T4O体外作用于U266细胞。CCK-8法检测增殖抑制率;AO/EB染色,倒置显微镜观察细胞凋亡形态;比色法检测Caspase-3酶活性;流式细胞术检测细胞凋亡及周期;JC-1染色检测细胞线粒体膜电位。结果 T4O对U266细胞有增殖抑制作用,呈时间-剂量依赖性（P<0.05）。T4O诱导U266细胞凋亡,呈剂量依赖性（P<0.05）,随药物浓度增加,Caspase-3酶活性逐渐增强（P<0.05）, 线粒体膜电位逐渐降低（P<0.05）,细胞周期被阻滞在G2期。结论 T4O对U266细胞有抑制增殖及促凋亡作用,其机制是激活细胞凋亡途径关键酶Caspase-3,使细胞线粒体膜电位降低,并且使细胞周期阻滞在G2期,进而抑制肿瘤细胞分化与增殖。     

盐酸罗哌卡因对胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的作用

目的:探讨盐酸罗哌卡因对人胃癌MGC-803细胞增殖和凋亡的影响。方法:细胞计数试剂盒（CCK-8）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞增殖能力的影响,并确定盐酸罗哌卡因的用药浓度,流式细胞术检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞周期的影响,Annexin V-FITC/PI法检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞凋亡的影响,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测盐酸罗哌卡因对MGC-803细胞中B细胞淋巴瘤/白血病-2（Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（Cleaved Caspase-3）蛋白表达水平。结果:随着盐酸罗哌卡因用药浓度的升高,MGC-803细胞增殖能力逐渐降低,根据CCK-8实验结果分别筛选出浓度为10、50 μg/ml和100 μg/ml的盐酸罗哌卡因用于后续实验。盐酸罗哌卡因能够明显阻滞细胞周期于G2期,诱导细胞凋亡,抑制Bcl-2蛋白表达,促进Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达。结论:盐酸罗哌卡因能够抑制胃癌MGC-803细胞增殖,阻碍MGC-803细胞周期进程,诱导细胞凋亡,该过程可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax和Cleaved Caspase-3蛋白表达有关。     

缺氧条件下缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1对人卵巢癌Skov3干细胞耐药的逆转作用

目的:探讨缺氧诱导因子-1α抑制剂YC-1在缺氧条件下逆转人卵巢癌干细胞Skov3耐药的机制。方法:选用人卵巢癌Skov3细胞通过无血清悬浮培养法富集肿瘤干细胞。分别于常氧及缺氧条件下检测不同浓度顺铂干预Skov3贴壁细胞及干细胞后测定顺铂对于两种细胞的抑制作用,及缺氧后干性指标、耐药指标ABCG2及HIF-1α的表达。当给予HIF-1α抑制剂YC-1后,测定顺铂对Skov3干细胞的抑制作用。并且检测干细胞干性指标、ABCG2及HIF-1α的mRNA表达。结果:悬浮培养的Skov3干细胞的干性指标CD44、NANOG、OCT-4及耐药指标ABCG2较贴壁细胞升高,且缺氧培养后,随着HIF-1α表达的升高,CD44、NANOG、OCT-4及ABCG2的表达也明显升高,P<0.05。干细胞的耐药性高于贴壁细胞,且缺氧培养耐药性增加。当给予YC-1后,干细胞耐药性下调,HIF-1α出现抑制,同时其干性指标CD44、NANOG、OCT-4、耐药ABCG2明显下调,P<0.05。结论:YC-1在缺氧条件下通过抑制HIF-1α下调ABCG2的表达逆转Skov3干细胞耐药。