蛋白质组学在放射生物学研究中的应用

蛋白质组(proteome)一词由Wilkin’s等于1996年首先提出，用来描述一个细胞、组织或有机体所表达的所有蛋白质。蛋白质组学(pmteomics)则是研究生物系统内特定时间或特定条件下蛋白质表达规律的科学。     

线粒体蛋白质组分离鉴定策略及数据诠释

线粒体功能和蛋白质组的改变可以导致各种退化性疾病如心肌病、衰老和癌症的发生，因此线粒体蛋白质组研究日显重要。线粒体纯度是困扰线粒体蛋白质组研究的一个基本但却关键的问题，也是线粒体蛋白质组数据诠稃及亚细胞定位的关键。对线粒体蛋白质一般采用质谱鉴定，鉴定前的分离纯化是高效鉴定的前提。线粒体蛋白质的分离有基于凝胶电泳和液相色谱的两种策略，它们可以以合理的方式组合达到最佳分离效果。对鉴定的线粒体蛋白质数据的合理诠释是解读线粒体表达谱和不同生理状态功能的最终目标。     

氨基酸组成分析直接鉴定SDSPAGE分离的研究简报蛋白质

蛋白质组学是后基因组时代研究的重要领域。蛋白质组研究的基本技术包括双向凝胶电泳分离技术、蛋白质鉴定技术、计算机图像数据处理与蛋白质组数据库构建等。氨基酸组成分析[1,2 ] 作为蛋白质组研究中的鉴定方法之一 ,对质谱鉴定、Ｎ端氨基酸序列鉴定等具有补充及验证作用。蛋白质是由 2 0种氨基酸通过肽键连接起来的生物大分子 ,测定蛋白质的氨基酸组成可获得蛋白质的基本信息。本研究以马心肌红蛋白和细胞色素Ｃ为样品 ,优化实验条件 ,以此建立一种高灵敏度、高准确度的鉴定双向凝胶电泳分离后的蛋白质点方法。该方法还可用于分析天然蛋…     

脑损伤后大鼠海马差异蛋白质组学分析

目的 研究脑损伤后大鼠海马组织蛋白质组差异表达变化情况.方法 采用侧方液压冲击装置,建立大鼠中度脑损伤模型,分别取外伤组(3只)与假手术组(3只)大鼠海马组织总蛋白,通过差异荧光双向凝胶电泳(DIGE)分离蛋白,获得蛋白质分离图谱,经胶内酶切、抽提酶解肽段、MALDI-TOF/TOF质谱分析研究差异的蛋白质点,鉴定出变化的蛋白质.结果 经De-Cyder 5.0及BVA图像分析软件比较,发现17个蛋白点表达水平具有显著差异变化.鉴定出的蛋白质考染点含有14个蛋白质,2个为同一种蛋白,实际差异蛋白数为13个.依其功能属于细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成及氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白. 结论脑损伤后大鼠海马组织蛋白质表达谱存在差异,并初步鉴定出脑损伤后差异表达蛋白,为深入研究脑损伤的病理机制奠定基础.     

蛋白质组学在结核杆菌研究中的应用

1953年DNA双螺旋结构模型的提出,极大的促进了生命科学的发展。其中蛋白质作为生命活动的重要物质基础,使之成为生命科学的研究热点。1994年澳大利亚学者Wilkins和Williams提出了蛋白质组学的概念,即“一个基因组或一个细胞、组织在特定时间及空间上表达的全部蛋白质”。蛋白质组学则以基因组转录而成的所有蛋白质为研究对象,动态分析蛋白质在时间和空间上的变化,了解蛋白质之间的相互作用与联系。     

结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织相关差异表达蛋白研究

目的探讨结直肠癌原发灶和正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异。方法采用双向荧光差异凝胶电泳法(2-DDIGE),对比分析结直肠癌原发灶、癌旁正常肠黏膜组织中蛋白质组的表达差异,经质谱分析鉴定差异蛋白点;采用细胞转染方法,将差异蛋白基因导入结直肠癌细胞,观察细胞生物学行为的改变。结果结直肠癌原发灶与正常肠黏膜组织中蛋白质组分有明显差别。结直肠癌原发灶组织与正常肠黏膜组织比较,差异倍数为1.5倍,差异点数目为60个。共分析了8个差异蛋白点,其中2个蛋白点在原发灶组织中表达下调,6个蛋白点在原发灶组织中表达上调。经质谱鉴定,碳酸酐酶Ⅱ(CAⅡ)、蛋白质二硫键异构酶(PDI)在原发性组织中表达下调,醛缩酶A等在原发灶中表达上调。将CAII cDNA克隆转染结直肠癌细胞后,癌细胞侵袭、趋化运动能力及耐药性均明显降低。结论结直肠癌原发灶和正常肠黏膜蛋白质组表达有显著差异,CAⅡ、PDI表达降低和醛缩酶A表达增强可能与结直肠癌的发生相关。     

两种原发大肠肿瘤细胞株蛋白质表达谱差异初步分析

目的应用双向电泳技术分析大肠侧向发育型肿瘤(LST)细胞株和结肠肿瘤SW480细胞株间的蛋白质表达谱差异。方法以双向电泳技术分离两种细胞株总蛋白质,银染显色,进行差异蛋白质分析。结果LST和SW480细胞株双向电泳图谱蛋白质点数分别为1285±51和1184±47,共获得96±7的蛋白质差异点,其中50±6个点仅在LST细胞株中表达或表达明显增强,47±5个点仅在SW480细胞中表达或表达明显增强。结论大肠LST细胞株与SW480细胞株的蛋白质表达谱存在一定的差异,对这些蛋白质点进行鉴定将为研究大肠LST特殊性生物学行为提供一定的线索。     

中医的辨证论治与肿瘤的代谢组学

代谢组学是通过研究机体受外界影响后其内在环境代谢产物的变化来研究生物体系的代谢通路的一种技术,可以对生物机体内或者是细胞中所有低分子量代谢物进行定性、定量分析。代谢产物的变化能够体现细胞或组织对外来刺激或基因改变的应答规律,从而找到疾病及药物作用在体内的变化规律。辨证论治是中医诊治疾病的基本原则,整体化及个体化治疗是其精髓,这与代谢组学的研究本质相通,掌握他们之间的关系有助于更好的建立临床思维。     

蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳系统在多蛋白质复合体研究中的应用

多蛋白质复合体（MPCs）是蛋白质在体内发挥功能的重要形式之一。鉴定MPCs对于整体理解决定蛋白质功能和细胞行为的蛋白质-蛋白质相互作用网络具有至关重要的意义。鉴定MPCs的限制因素之一是MPCs的分离方法。蓝色非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（BN-PAGE）系统是研究这些复合体的强有效的工具。BN-PAGE系统是一种依赖于染料考马斯亮蓝（CBB）G-250给蛋白质加上负电荷的非变性蛋白分离方法,适用于分离相对分子质量10×103至10×106范围的MPCs。近年来,有关BN-PAGE系统用于哺乳动物细胞MPCs研究的报道有了很大的增长。本文重点对BN-PAGE系统的原理、发展及应用进行综述。     

低剂量辐射对小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响

目的　研究低剂量电离辐射对昆明小鼠胸腺细胞浆和细胞核蛋白质表达的影响。方法　在分离 75mGy照射组和假照射组小鼠胸腺细胞浆和细胞核的基础上 ,采用SephadexG 10 0凝胶过滤和高效液相分析两组小鼠胸腺细胞蛋白质的表达 ,通过小鼠脾淋巴细胞转化和人外周血淋巴细胞染色体畸变检测这些蛋白质表达的生物活性。结果　胸腺细胞浆相对分子质量为 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核相对分子质量 30 4× 10 3的蛋白质照射组比假照射组明显增加。并且这些增加的蛋白质组分对ConA刺激正常小鼠脾淋巴细胞转化和X射线损伤人外周血淋巴细胞所致染色体畸变具有刺激和保护作用。结论　低剂量辐射兴奋效应可能与胸腺细胞浆 6 1 4× 10 3的蛋白质和胸腺细胞核 30 4× 10 3的蛋白质表达增高有关。     

小鼠不同发育阶段脑蛋白质组学初步研究

目的:本研究为国际脑蛋白质组计划(HUPO BPP)的预实验部分,旨在获得可靠的小鼠脑蛋白质组数据库,比较和评估小鼠不同发育阶段的脑蛋白质组,为下一步进行神经系统疾病的蛋白质组学研究奠定基础。方法:样品来源于国际脑蛋白质组委员会所提供的胚胎16 d、出生后7 d及生后60 d等3个发育时期的C57/B l6雌性小鼠脑组织。常规方法提取组织总蛋白,采用固相pH梯度的二维电泳分离和串联质谱分析等进行鉴定,使用M ascot软件搜索Un iProt数据库,鉴定蛋白种类。结果:获得3个不同发育时期小鼠脑组织蛋白质表达谱,完成国际脑蛋白质组计划的预实验所要求的质量控制,鉴定出各发育阶段均有稳定表达的4个蛋白点,包括α烯醇酶、磷蛋白质P19及2个肌动蛋白。经进一步评估后鉴定出随年龄增大而丰度减低的C14orf166同源蛋白、28×103热/酸稳定的磷蛋白、3-巯基丙酮酸硫基转移酶、40S核糖体蛋白S3 a等4个蛋白。其中α烯醇酶及C14orf166同源蛋白曾有文献报道与神经发育及组织发生密切相关。结论:蛋白质组学的方法为脑发育研究提供了有参考价值的数据,其差异蛋白的发现可促进对神经发育机制的了解,并将为后续启动神经系统疾病蛋白质组学研究提供参考。     

大鼠烫伤后肠黏膜上调蛋白质组的分离鉴定及其功能分析

目的　观察严重烧伤后早期肠黏膜上调蛋白的整体变化特性 ,并对明确的蛋白质进行功能分析 ,为探讨严重烧伤后肠黏膜损害的发病机制提供理论依据。　方法　采用大鼠Ⅲ度烫伤模型 ,利用高分辨双向电泳 ( 2 -DE)对肠黏膜组织进行蛋白质分离 ,ImageMaster 2DElite图像分析软件进行分析 ,应用生物质谱、蛋白质库及文献分析等技术对差异蛋白质中的上调蛋白质组进行鉴定、功能和临床意义分析。　结果　 ( 1)烧伤后 6和 12h两组明确下调的蛋白质点数为34,进行检测及功能分析的蛋白质 2 2个 ;( 2 )糖调控蛋白前体 78、蛋白质二硫化物异构酶A3(PDIA3)前体、基质金属蛋白酶 11、α -烯醇酶和鸟氨酸转化酶等参与了对应激反应的调控。有其他蛋白质 ,如白蛋白、乳酸脱氢酶A、T细胞活化连接蛋白、辅酶Q和eps8捆绑蛋白呈现上调表达。　结论　这些上调的蛋白质的表达改变主要参与了肠黏膜的应激反应及其他病理反应的调控。     

137Cs γ射线累积照射大鼠后血清蛋白质组分析

目的 探讨¹³⁷Cs γ 射线累积照射对SD大鼠血清蛋白质的影响。方法 将30只SD大鼠按随机数字表法分为3个剂量组：0.2 Gy累积照射组、2 Gy累积照射组和健康对照组。采用¹³⁷Cs γ 射线累积照射SD大鼠,剂量率为0.336 mGy/min。利用同位素标记的相对和绝对定量技术（iTRAQ）分析累积受照大鼠的血清蛋白质表达,筛选出差异蛋白质。对差异表达的蛋白质进行GO注释分析及相互作用网络分析。结果 在3组样品中共鉴定到363种蛋白;与健康对照组相比,0.2 Gy照射组差异蛋白质有50种,16种蛋白质上调,34种下调;2 Gy照射组有64种差异蛋白质,31种上调,33种下调;两组共同表达差异的蛋白质有29种,其中,10种蛋白表达上调,19种下调。根据细胞组成注释,多数蛋白为胞质蛋白、膜蛋白;根据分子功能注释,差异蛋白以蛋白质结合和酶活性调节等为主。两个剂量组共同差异表达的蛋白质构成相互作用网络。GSTP1、PGK1、P4HB、CAPZA1是蛋白质相互作用网络的关键性节点,这几个蛋白质直接或间接地与其他差异蛋白存在相互作用。结论 不同剂量累积照射可诱导大鼠血清蛋白质组的改变,GSTP1、PGK1、P4HB、CAPZA1蛋白可能在累积照射的损伤机制中发挥作用。     

细胞粘附分子的电离辐射效应研究进展

细胞粘附分子是调节细胞间及细胞与细胞外基质相互作用的一类膜型或跨膜糖蛋白，其作用涉及细胞的粘附、迁移、分化和信号转导。正常组织或肿瘤组织受电离辐射后会导致细胞粘附分子表达的改变。照射方式不同，受照组织不同，粘附分子的表达也不同，有些粘附分子的表达与受照剂量存在良好的量效关系。受照后，粘附分子的改变具有作为一种新的辐射生物剂量仪的潜能。     

细胞粘附分子的电离辐射效应研究进展

细胞粘附分子是调节细胞间及细胞与细胞外基质相互作用的一类膜型或跨膜糖蛋白,其作用涉及细胞的粘附、迁移、分化和信号转导。正常组织或肿瘤组织受电离辐射后会导致细胞粘附分子表达的改变。照射方式不同,受照组织不同,粘附分子的表达也不同,有些粘附分子的表达与受照剂量存在良好的量效关系。受照后,粘附分子的改变具有作为一种新的辐射生物剂量仪的潜能。     

瘦素对呼吸系统的影响及与肺部病变的研究进展

瘦素（leptin）是由脂肪细胞分泌的一种由167个氨基酸组成的具有广乏生物学活性的蛋白质，是肥胖基因（ob基因）的表达产物，其受体在肺组织中有广泛表达。日渐增多的研究表明其与多种肺部疾病密切相关。深入研究leptin的生物学活性及对肺部多种疾病的作用机制可为防治肺部难治性肺疾病提供新的策略或途径。本文就近年来有关瘦素对呼吸系统的作用及与肺部疾病关系的研究作一综述。     

表皮生长因子、基质金属蛋白酶与汗腺发生相关性的实验研究

探讨胚胎期汗腺发生过程中表皮生长因子（EGF），基质金属蛋白酶－2（MMP－2）和MMP－7与汗腺发生的相关性。为诱导表皮干细胞向汗腺细胞定向分化奠定基础，分别取13－31周胚龄人胎儿背部全层皮肤，以免疫组织化学染色法（SP法）动态观察汗腺胚芽细胞或汗腺细胞及其周围局部基质对基质金属蛋白酶MMP－2，MMP－7与EGF及汗腺胚芽细胞或汗腺细胞对细胞角蛋白－7（K7）蛋白质表达情况，并以原位杂交法动态观察汗腺芽细胞或汗腺细胞MMP－2，MMP－7的mRNA信号特征，结果显示，MMP－2，MMP－7，EGF在14－20周于汗腺细胞及避部基质蛋白质表达逐渐加强，20－22周达峰值，并维持至所观察的全时段，MMP－2，MMP－7的mRNA信号强弱在汗腺胚芽细胞或汗腺细胞中与其蛋白质表达相吻合；K7始于14－16周在汗腺芽细胞内表达，并持续存在，研究表明，汗腺于胚龄14－16周开始发生，至第24周基本成熟，汗腺发生与MMPs所致细胞外基质改建，EGF间的相互作用密切关联。     

异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2155细胞蛋白双向电泳图谱的差异分析

目的利用蛋白质组学方法,识别异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2 155细胞(SM细胞)后差异表达的蛋白质,为进一步深入探讨异烟肼抑制分枝杆菌生长的作用机制及寻找新的抗结核药物作用靶标奠定基础。方法观察不同浓度的异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌生长曲线,确定药物处理SM细胞的最佳时间和浓度,并提取在最佳处理时间和浓度条件下的SM细胞总蛋白,采用载体两性电解质pH梯度双向凝胶电泳技术分离异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2 155细胞的总蛋白质,用PDuest7.3.1图像分析软件比较分析,以识别差异表达的蛋白质。结果在空白对照组检出159个蛋白斑点,在异烟肼处理组检出221个蛋白斑点,在相对分子质量30 000~90 000和pH值4.5~6.0范围内,异烟肼处理组蛋白斑点数均多于空白对照组。结论异烟肼处理前后耻垢分枝杆菌mc2155细胞的蛋白质组具有差异,提示异烟肼处理后促进了某些特定基因的表达。     

长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5在糖尿病肾病进展中作用机制研究

目的 探讨长链非编码RNA生长停滞特异性转录本5(LncRNA GAS5)在糖尿病肾病(DN)进展中的作用机制。方法 选取10只健康5周龄大鼠为研究对象。将大鼠分为模型组与对照组,每组各5只。构建DN细胞模型,并分为LncRNA GAS5干扰组、LncRNA GAS5过表达组与阴性对照组。通过实时荧光定量聚合酶链式反应及蛋白质印迹法检测LncRNA GAS5、miR-135a-5p及沉默信息调节因子2相关酶1(SIRT1)的表达水平。采用双荧光素酶报告实验验证miR-135a-5p与LncRNA GAS5、SIRT1之间的相互作用。结果 模型组肾组织、血清外泌体、人肾小球系膜细胞(HMC)及上清外泌体中LncRNA GAS5表达水平均低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。敲减或过表达LncRNA GAS5后,LncRNA GAS5过表达组HMC细胞中miR-135a-5p表达水平相应高于或低于阴性对照组,而SIRT1表达水平相应低于或高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。感染miR-135a-5p或转染siSIRT1后,LncRNA GAS5过表达组...     

夹层胶原"三明治"法冻存复苏肝细胞的实验研究

目的 研究胶原、表皮生长因子对新鲜分离及冻仔复苏后Sprague-Dawley（SD）大鼠肝细胞活率、形态和功能的影响,期望建立一种较为完善的肝细胞体外培养及冻存复苏体系,为肝细胞移植、生物人工肝及相关肝细胞研究获取充足有效的肝细胞来源提供必须的技术支持和理论依据。方法 采用胶原酶二步原位循环肝脏灌注法分离SD大鼠肝细胞,测定不同条件培养及冻存复苏后各组肝细胞的活性及功能。结果 双层胶原及双层胶味＋表皮生长因子组细胞活率、蛋白质含量及细胞功能均优于普通组（P〈0．05）。结论 双层胶原体外培养体系更接近于肝细胞体内生长环境,能有效的减少各种理化因素对肝细胞的损伤,有利于肝细胞在体外长期保存,是一种较为理想的培养及冻存复苏体系。