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1.
目的 筛选日本血吸虫雌虫抗原的模拟表位 ,并探讨其抗日本血吸虫的免疫保护效果。 方法 用日本血吸虫雌虫免疫兔血清IgG作配体对噬菌体随机 12肽库进行 3轮亲和筛选 ,随机挑取 18个噬菌体克隆用Dot ELISA检测其特异性 ,并对其中的 4个阳性克隆进行测序。分别在 0、2、4周用混合噬菌体克隆免疫小鼠 3次 ,第 6周每鼠经腹部感染 40条日本血吸虫尾蚴 ,42d后剖杀冲虫 ,计数虫数和每克肝卵数。 结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体富集了 2 0 0多倍 ,随机挑取的 18个克隆经Dot ELISA鉴定有 17个能与雌虫抗原免疫兔血清呈阳性反应。DNA自动测序的 4个序列与GenBank的已知序列均无同源性。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率为 2 6.5 7% ,减卵率为 65 .3 4%。 结论 采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟日本血吸虫雌虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫。  相似文献   

2.
目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,探讨其抗血吸虫的交叉免疫保护效果。 方法 以纯化的旋毛虫感染鼠血清IgG为配基 ,亲合筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用ELISA检测其特异性 ;混合噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染后第 4 5天剖杀小鼠 ,观察减虫和减卵效果。 结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效的富集 ,第三轮洗脱噬菌体的产量约为第一轮的 15 0倍。随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 1个克隆能与旋毛虫感染鼠血清IgG特异性反应。与对照组相比 ,混合噬菌体克隆免疫小鼠的减虫率与减卵率分别为 4 2 8%与 6 6 3% (P <0 0 0 1)。 结论 利用噬菌体随机肽库技术可获得模拟旋毛虫特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导明显的抗血吸虫的保护性免疫。  相似文献   

3.
噬菌体表达短肽模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的研究   总被引:16,自引:0,他引:16  
目的 从噬菌体随机肽库中筛选模拟血吸虫致弱尾蚴特异性抗原表位的噬菌体克隆 ,并探讨其免疫保护效果。方法 用紫外线致弱尾蚴免疫兔血清IgG筛选以融合蛋白形式在丝状噬菌体外壳蛋白Ⅲ表达的随机 7肽库 ,三轮免疫筛选后获得的噬菌体克隆经皮下免疫小鼠 3次 ,攻击感染 45d后剖杀 ,观察减虫和减卵效果。结果 经三轮筛选 ,特异性结合的噬菌体富集增加了 10 0多倍 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆经ELISA测定 ,有 2 2个克隆能与致弱尾蚴免疫兔血清IgG特异性反应。混合噬菌体克隆免疫小鼠试验的减虫率与减卵率分别为 33.5 7%和 5 6 .0 7% (P均 <0 .0 0 1)。结论 采用噬菌体随机肽库技术可获得模拟致弱尾蚴特异性抗原表位的短肽分子 ,这些短肽分子能诱导一定程度的保护性免疫  相似文献   

4.
目的从噬菌体表面显示随机肽库中筛选日本血吸虫辐照尾蚴抗原模拟表位。方法用Sepharose4B亲和层析法,从日本血吸虫辐照尾蚴免疫鼠血清中纯化抗体,经正常血吸虫尾蚴抗原吸收后,用于12肽噬菌体随机肽库的免疫筛选。经三轮筛选,随机挑取20个噬菌体克隆,经DNA序列分析后,对各独立表位进行免疫学鉴定。结果DNA序列分析,获得4个有序列重复的噬菌体克隆;Dot-ELISA分析显示,4个克隆均能被辐照尾蚴免疫血清中IgM型抗体识别,反应强度有一定差别;P1和P2克隆还能被IgG型抗体识别。结论从噬菌体随机肽库中成功筛选到日本血吸虫辐照尾蚴抗原模拟表位。  相似文献   

5.
日本血吸虫抗原模拟表位免疫学活性的初步研究   总被引:5,自引:0,他引:5  
目的研究从噬菌体12肽库中筛选得到的日本血吸虫抗原模拟表位的免疫学活性。方法以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)作为靶分子,筛选噬菌体12肽库。经过3轮吸附-洗脱-扩增的淘筛过程.在筛选得到的阳性噬菌斑中随机挑取42个扩增,用ELISA检测不同寄生虫病患者和正常人血清,以分析其敏感性和特异性。并进一步免疫昆明株小鼠,经日本血吸虫尾蚴攻击感染后剖检,计算减虫率和减卵率,以分析其在小鼠体内诱导的免疫保护性。结果在挑取的42个阳性克隆中,有9个与日本血吸虫急感患者血清有不同程度的结合(6.25%~100%)。除其中1个灵敏性较低的克隆与其它寄生虫病患者血清有一定的交叉反应外,其余均未发现。而经其免疫后的小鼠也分别获得了29.3%减虫率和35.9%减卵率。结论从噬菌体12肽库中筛选到的日本血吸虫抗原模拟表位具有较高的特异性和敏感性,并能够在小鼠体内诱导一定的免疫保护力。  相似文献   

6.
目的 研究从噬菌体 12肽库中筛选得到的日本血吸虫抗原模拟表位的免疫学活性。 方法 以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白 (Ig)作为靶分子 ,筛选噬菌体 12肽库。经过 3轮吸附 -洗脱 -扩增的淘筛过程 ,在筛选得到的阳性噬菌斑中随机挑取 42个扩增 ,用ELISA检测不同寄生虫病患者和正常人血清 ,以分析其敏感性和特异性。并进一步免疫昆明株小鼠 ,经日本血吸虫尾蚴攻击感染后剖检 ,计算减虫率和减卵率 ,以分析其在小鼠体内诱导的免疫保护性。 结果 在挑取的 42个阳性克隆中 ,有 9个与日本血吸虫急感患者血清有不同程度的结合 (6.2 5 %~ 10 0 % )。除其中 1个灵敏性较低的克隆与其它寄生虫病患者血清有一定的交叉反应外 ,其余均未发现。而经其免疫后的小鼠也分别获得了 2 9.3 %减虫率和 3 5 .9%减卵率。 结论 从噬菌体 12肽库中筛选到的日本血吸虫抗原模拟表位具有较高的特异性和敏感性 ,并能够在小鼠体内诱导一定的免疫保护力。  相似文献   

7.
日本血吸虫模拟短肽诱导小鼠的免疫保护性研究   总被引:1,自引:1,他引:1       下载免费PDF全文
目的 研究日本血吸虫模拟短肽对小鼠的免疫保护效果,预测其在抗血吸虫感染中的作用。 方法 用粗提纯大鼠血清IgG为配基对噬菌体肽库进行3轮免疫学筛选。随机挑取噬菌体克隆,检测其特异性并进行序列分析;用阳性克隆免疫小鼠,以40条日本血吸虫尾蚴攻击感染,感染后42d剖杀取虫,计算减虫率和减卵率;用ELISA测定免疫鼠抗体反应。 结果 经过3轮筛选,特异性噬菌体得到有效富集;自动测序仪测序获得2个模拟肽分子;将其用于免疫小鼠后,各免疫组与对照组相比,2个模拟肽混合免疫组的减虫率为34.9%P<0.05,肝内减卵率为67.6%(P<0.001)。 2个模拟肽分子分别免疫小鼠 ,各组的减虫率为31.0%(P<0.05)和14.5%(P>0.05)及肝内减卵率为61.2%(P<0.001)和35.7%(P<0.05)。ELISA检测其免疫组鼠血清特异性IgG抗体滴度均大于1∶6 400以上。 结论 利用噬菌体表面呈现技术获得的2个模拟肽分子均可诱导部分抗日本血吸虫感染的免疫保护力  相似文献   

8.
目的在前期已建立日本血吸虫感染兔新模型的基础上,用该血清从噬菌体随机12肽库中筛选阳性单克隆噬菌体,并鉴定其诱导小鼠的免疫保护效果。方法通过给感染日本血吸虫家兔注射酚氧化酶抑制剂,抑制其体内日本血吸虫雌虫产卵,建立无虫卵肉芽肿的日本血吸虫感染动物新模型,用其血清筛选出阳性多克隆噬菌体,经与可溶性虫卵抗原(SEA)免疫兔血清充分吸附后,从中随机挑取14个单克隆分别纯化、扩增,用常规ELISA法检测阳性单克隆噬菌体的抗原性;挑选出与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性或弱阳性反应的单克隆噬菌体,按1×1015pfu/次剂量,0-2-4周方案,皮下多点注射免疫小鼠。末次免疫4周后,每鼠经腹部皮肤攻击感染(40±1)条日本血吸虫尾蚴,感染42d后观察减虫率及减卵率。结果所选14个单克隆噬菌体均能与新模型兔血清和常规感染模型兔血清反应,尤其是第8号和第13号2个克隆与新模型兔血清呈强阳性反应,但与SEA免疫兔血清呈阴性反应;8号、13号单克隆噬菌体及原始噬菌体肽库免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为35.81%和63.32%、32.09%和52.02%、14.90%和30.64%。结论阳性多克隆噬菌体与SEA免疫兔血清免疫吸附后能去除大部分表达SEA抗原模拟表位的克隆,所选14个单克隆噬菌体均表达  相似文献   

9.
目的在建立一种有成虫寄生但无虫卵肉芽肿形成的日本血吸虫感染小鼠及家兔新模型,并观察其具有较高的抗攻击感染保护力的基础上,用新模型兔血清筛选噬菌体随机12肽库,并初步鉴定阳性噬菌体克隆诱导小鼠抗日本血吸虫感染的免疫保护作用.方法用大肠杆菌抗原吸收后的新模型兔血清,经抗体捕获法筛选噬菌体12肽库,经3轮亲和筛选、富集后获得阳性多克隆.用常规ELISA法检测阳性多克隆噬菌体的抗原性.用滴度为1×1014pfu的阳性多克隆噬菌体按0-2-4周方案皮下多点注射免疫小鼠,末次免疫4周后,用日本血吸虫尾蚴攻击感染,同时设立常规感染兔血清筛获的阳性克隆免疫组、原始肽库免疫组、攻击感染对照组.结果①新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体(滴度为1×1014pfu)与新模型兔血清(稀释度为1:400)反应为强阳性,与常规感染兔血清(1:400)反应为弱阳性,与正常兔血清(1:400)反应为阴性.②用新模型兔血清筛获的多克隆噬菌体、常规感染兔血清筛获的多克隆噬菌体及原始肽库分别免疫小鼠后诱导抗攻击感染的减虫率及每克肝脏减卵率分别为27.2%和38.8%、17.8%和35.0%、4.5%和6.0%.结论与用日本血吸虫常规感染模型兔血清筛获的多克隆噬菌体比较,经新模型兔血清筛获的含有模拟日本血吸虫抗原表位的多克隆噬菌体能诱导小鼠更高的抗攻击感染减虫率(P<0.05)及相似的减卵率(P>0.05);与原噬菌体随机肽库相比较,能诱导小鼠较高的抗攻击感染减虫率(P<0.01)及减卵率(P<0.05).  相似文献   

10.
目的 从噬菌体随机肽库中筛选出模拟弓形虫特异性抗原表位的短肽分子 ,并探讨其对弓形虫的保护性效果。方法 以纯化的弓形虫免疫兔血清IgG为配基 ,亲和筛选法富集特异性噬菌体 ,随机挑取噬菌体克隆用夹心ELISA法和Dot-ELISA法检测其特异性 ,混合 4个阳性克隆免疫小鼠 ,1月后攻击感染 ,观察小鼠发病时间和死亡时间。结果 经 3轮筛选 ,特异性噬菌体得到了有效富集 ,第 3轮洗脱噬菌体的产量为第 1轮的 16 7倍 ,随机挑取 2 7个噬菌体经Dot -Bloting和夹心ELISA法检测 ,有 2 4个能与弓形虫免疫兔血清及单克隆抗体特异反应。用致死量弓形虫攻击感染经阳性克隆免疫的小鼠 ,存活时间明显长于对照组。结论 免疫筛选噬菌体随机多肽库可获得具有保护性的弓形虫抗原表位 ,为弓形虫疫苗研制提供了新途径。  相似文献   

11.
以弓形虫感染兔血清免疫球蛋白(Ig)作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机7肽库和12肽库。经3轮筛选,随机挑取70个噬菌体克隆用ELISA检测其特异性,共获得43个阳性克隆。对23个ELISA反应较强的克隆进行测序,根据序列分析选择有代表性的克隆A7作为模拟表位抗原进行ELISA检测。对47份弓形虫感染兔血清进行ELISA检测,结果32份为阳性,敏感性为68.1%;155份健康人血清中弓形虫抗体呈阳性者10份,特异性为93.5%。从噬菌体随机肽库中能筛选到弓形虫抗原模拟表位有诊断弓形虫病的潜在价值。  相似文献   

12.
目的筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫表膜特异性结合的多肽并鉴定。方法利用噬菌体十二肽库与日本血吸虫活童虫靶分子之间的亲和力结合,经3轮吸附-洗脱-扩增,从末次回收的结合噬菌体中随机挑取20个克隆进行测序。根据测序结果 ,选取出现次数最多的噬菌体克隆作为目标噬菌体,免疫组化检测目的噬菌体,并回输到已感染日本血吸虫的小鼠体内,2.5h后处死小鼠,回收肝脏和日本血吸虫童虫,分别洗脱与肝脏和童虫结合的噬菌体,进行统计学分析。结果经3轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的0.77×10-8到第3轮的0.75×10-5,说明噬菌体得到了有效富集。DNA测序结果表明,20个噬菌体克隆中的15个克隆呈现QHPRIRKOOOOO序列。免疫组化结果显示,表达该序列的噬菌体能与童虫表膜有效结合;体内回输试验证实,该噬菌体能有效地靶向结合于体内日本血吸虫童虫表膜。结论筛选获得的短肽QHPRIRKOOOOO能有效地靶向结合日本血吸虫童虫表膜。  相似文献   

13.
目的从噬菌体随机12肽库中筛选日本血吸虫(Schistosoma japonicum,S.j)具有保护性的细胞免疫原模拟表位,为进一步阐明其免疫保护性分子机制提供依据。方法用具有保护性的S.j12d童虫培养细胞(S.jC-12)免疫鼠血清中的IgG对随机12肽库作亲和筛选,随机挑取20个噬菌体克隆用ELISA检测其特异性;对阳性克隆进行测序,采用ELISA和Western blot检测阳性克隆免疫鼠血清中的特异性抗体及其识别天然抗原的特性。结果经过4轮免疫淘洗,洗脱的噬菌体得到了有效富集(16 250倍)。20个噬菌体克隆经检测有15个能被S.jC-12免疫鼠血清识别,有12个序列不同的噬菌体克隆;ELISA检测显示有11个阳性噬菌体克隆诱导小鼠产生IgG应答,其中含精氨酸的阳性噬菌体克隆免疫血清中IgG水平与不含精氨酸克隆免疫鼠比较差异有统计学意义(P〈0.01)。结论利用噬菌体展示技术可筛选出S.jC-12免疫原的部分模拟表位且能在小鼠模型中诱导免疫应答。  相似文献   

14.
日本血吸虫特异性IgE抗体相关肽表位的筛选与免疫学鉴定   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 从噬菌体表面显示肽库筛选并鉴定日本血吸虫特异性IgE抗体相关表位。 方法用ABC 酶联免疫吸附 (ELISA)法检测日本血吸虫病流行区居民血清 15 0份 ,选择其中 15份具高滴度血吸虫特异性IgE抗体的血清 ,混合后经蛋白G柱亲和层析祛除IgG抗体 ,用于对 12肽的噬菌体表面显示肽库进行 5轮免疫亲和淘筛。从所获噬菌体克隆中挑取 35个克隆 ,经DNA序列测定 ,对各独立肽表位进行免疫学鉴定。结果 经 5轮筛选 ,DNA序列测定显示共有 4个独立噬菌体克隆 ,其中 phage 3和 phage 6有较多重复克隆存在 ,为优势克隆 ;Westernblot分析显示 ,筛库血清中特异性IgE抗体能有效识别各噬菌体克隆。分别用各克隆噬菌体免疫小鼠 ,均能诱导特异性IgE抗体产生。结论 从 12肽噬菌体表面显示肽库中成功筛选到日本血吸虫特异性IgE抗体相关肽表位。  相似文献   

15.
目的比较两种不同方法筛选噬菌体肽库所获得的日本血吸虫抗原模拟表位的抗原性.方法以日本血吸虫病患者血清免疫球蛋白(Sj-Ig)作为靶分子, 分别以噬菌体12肽库(SjA)和经过蚯蚓免疫兔血清免疫球蛋白(L-Ig)筛选一轮后的噬菌体12肽库(SjB)为原肽库,进行3轮吸附-洗脱-扩增免疫筛选.随机挑取SjA和SjB蓝色噬菌斑各24个, 扩增后用ELISA方法检测其抗原性.结果 24个SjA克隆中有6个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的2个克隆具有较好的特异性和敏感性;24个SjB克隆中有10个可以与Sj-Ig特异结合, 其中A491 nm值较高的5个克隆具有较好的抗原性.比较SjA 和SjB两组间克隆的抗原性,结果显示SjB的目的克隆具有更好的特异性和敏感性.结论从SjA 和SjB中均筛选到了对日本血吸虫病具有较高潜在诊断价值的抗原模拟表位,提示以异源性抗体结合后的肽库作为原肽库来筛选寄生虫抗原模拟表位是可行的,同时也为从噬菌体肽库中筛选抗原模拟表位提供了一个新的实验方法.  相似文献   

16.
用噬菌体十二肽库筛选日本血吸虫病诊断抗原   总被引:4,自引:1,他引:4       下载免费PDF全文
目的 从噬菌体十二肽库中筛选出特异、灵敏的日本血吸虫病诊断抗原。 方法 以日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)作为靶分子,免疫筛选噬菌体随机十二肽库。经过3轮吸附洗脱扩增的淘筛过程,随机挑取10个蓝色噬菌斑扩增,用ELISA检测其免疫活性,并通过对并殖吸虫病及旋毛虫病患者血清的检测分析其诊断日本血吸虫病的价值。 结果 6个克隆可以与日本血吸虫急感患者血清免疫球蛋白(Ig)特异结合。其中A492值最高的克隆(SjA1)具有较好的特异性和灵敏性。 结论 从噬菌体随机十二肽库中筛选到的克隆对日本血吸虫病具有较高的诊断价值。  相似文献   

17.
日本血吸虫22.6kDa有效抗原表位对小鼠免疫保护性的研究   总被引:14,自引:1,他引:13  
目的研究日本血吸虫(中国大陆株)22.6 kDa有效抗原表位对小鼠的免疫保护性,预测其在抗血吸虫感染中的作用.方法用纯化的抗Sj 22.6 kDa的多克隆抗体IgG对噬菌体12肽库进行5轮免疫学筛选,挑取克隆,经Western-blot免疫识别、动物初筛及序列分析后,将获得的阳性克隆免疫BABL/c小鼠.结果共获得4个有效抗原表位,各免疫组和对照组相比,4种表位混合免疫组小鼠,获得了39.5%(P<0.05)的减虫率及57.1%(P<0.01)肝总减卵率;4种表位分别免疫4组小鼠,各组分别获得了27.5%(P<0.05)、5.4%(P<0.05)、22.8%(P<0.05)、11.6%(P<0.05)的减虫率及41.4%(P<0.01)、29.7%(P<0.05)、32.2%(P<0.05)、30.9%(P<0.05)肝总减卵率.结论所获得4种有效抗原表位均可诱导宿主抗血吸虫感染的部分保护力,可望为血吸虫疫苗研究增加新的内容.  相似文献   

18.
应用噬菌体十二肽库筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的从噬菌体12肽库中筛选卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。方法将卫氏并殖吸虫病患者血清免疫粗球蛋白(Ig)作为靶分子筛选噬菌体随机12肽库。经过5轮淘筛,随机挑取24个蓝色噬菌斑进行扩增,以ELISA检测其免疫活性并分析其诊断并殖吸虫病的价值。结果24个克隆中有12个可以被卫氏并殖吸虫病患者血清Ig所识别,其中有2个克隆(P5、P6)具有较好的特异性和敏感性,可能为特异性的卫氏并殖吸虫抗原模拟表位。结论应用噬菌体肽库筛选可以获得卫氏并殖吸虫抗原模拟表位,为并殖吸虫病诊断抗原和短肽疫苗的研究提供了新的方法学依据。  相似文献   

19.
目的 目的 采用噬菌体展示肽技术鉴定抗日本血吸虫14?3?3蛋白单克隆抗体5C6的抗原识别表位。 方法 方法 将纯化的抗日本血吸虫14?3?3蛋白单克隆抗体5C6作为固相配基筛选噬菌体随机展示12肽库, 按照吸附?洗脱?扩增的淘洗过程进行3轮生物淘洗, 富集特异性结合的噬菌体颗粒。随机挑取第3轮洗脱的独立噬菌体克隆, 分别依次进行噬菌体扩增、基因组DNA抽提和DNA序列分析。选择外源性插入DNA序列完全相同或高度相似的同源性噬菌体, 采用ELISA及免疫印迹分析对其免疫反应性作进一步鉴定, 以确定单克隆抗体5C6的抗原识别表位。 结果 结果 第3轮淘洗物中33个独立噬菌体克隆的DNA测序结果显示, 其中25个噬菌体编码外源性插入肽的核酸序列均为5′?CCACCTAGTAGCAGACCGATTCT? CAGTCGAAGGAAA?3′, 其对应的演绎氨基酸序列为PPSSRPILSRRK, 该肽与日本血吸虫信号蛋白14?3?3及自然界其他已知蛋白的氨基酸序列均无同源性。免疫印迹试验证实此短肽可被自然感染的日本血吸虫病人血清所识别, 而不与健康人血清反应。 结论 结论 本研究成功鉴定了抗日本血吸虫14?3?3蛋白单克隆抗体5C6所识别的模拟抗原表位, 并证明该表位为空间构像表位。  相似文献   

20.
目的 筛选和鉴定日本血吸虫 (中国大陆株 ) 2 2 .6kDa抗原 (Sj2 2 .6)的表位。  方法 用纯化的抗Sj2 2 .6的多克隆抗体IgG对噬菌体十二肽库进行 5轮免疫学筛选 ,挑取克隆 ;采用Westernblotting免疫识别 ,将获得的阳性克隆免疫小鼠 ,并采用dot ELISA筛选能刺激小鼠产生较高滴度抗Sj2 2 .6抗体的阳性克隆 ;测定核苷酸序列 ,分析其表位与Sj2 2 .6抗原的同源性。 结果 经 5轮免疫学筛选后挑取的 1 4个克隆 ,用Westernblotting方法均能被抗Sj2 2 .6抗体识别。经动物免疫初步实验筛选 ,共获得 6个免疫原性较强的阳性克隆 ,测序结果获得 4种不同表位 ,其中 1种表位与Sj2 2 .6抗原具有较高的同源性 ,其余 3种表位与其无一级结构的同源性。 结论 获得的 4种日本血吸虫中国大陆株抗原表位 ,1种可能为结构表位 ,3种为模拟表位  相似文献   

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