Notch及其配体在血液系统中的作用

Notch是一组普遍存在于造血干／祖细胞、胚胎肝细胞、外周血淋巴细胞等多种细胞表面的跨膜蛋白。Notch在其配体的作用下可直接作为基因转录调节因子,对造血细胞的增殖、分化与抗凋亡能力起重要调节作用,研究证实Notch及其配体的正常表达是机体维持正常造血功能的重要条件,并在部分血液系统恶性疾病包括白血病及淋巴瘤的发生和发展中起重要作用。     

Notch及其配体在血液系统中的作用

Notch是一组普遍存在于造血干／祖细胞、胚胎肝细胞、外周血淋巴细胞等多种细胞表面的跨膜蛋白。Notch在其配体的作用下可直接作为基因转录调节因子，对造血细胞的增殖、分化与抗凋亡能力起重要调节作用，研究证实Notch及其配体的正常表达是机体维持正常造血功能的重要条件，并在部分血液系统恶性疾病包括白血病及淋巴瘤的发生和发展中起重要作用。     

Notch配体δ-1对IL-6/sIL-6R融合蛋白诱导红系祖细胞分化成熟的影响

目的 探讨Notch配体δ-1在红系造血细胞分化过程中对可溶性IL-6受体（sIL-6R）生物效应的影响。方法 用CD34免疫磁珠和FACS Vantage流式细胞仪筛选脐血单个核细胞中的CD34^＋CD38^-细胞；将CD34^＋CD38^-细胞用含SCF、Flt3L、TPO和IL-3四种生长因子组合（4GFs）的培养基培养7d，然后用CD36免疫磁珠分离CD36^＋红系祖细胞，用流式细胞术检测IL-6R和血型糖蛋白（GPA）的表达，并分选CD36^＋GPA—IL-6R^＋和CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞，将这两种表型的细胞分别进行集落分析；将CD36^＋GPA—IL-6R^-细胞用含有4GFs、4GFs＋IL-6或4GFs＋IL-6／sIL-6R融合蛋白（FP6）培养基并在加与不加Notch配体δ-1的情况下培养14d，并对CD36^＋GPA^high成熟红细胞进行计数。结果 CD36^＋GPA^＋细胞中IL-6R^-细胞占95％；CD36^＋GPA^-细胞可分为IL-6R^＋和IL-6R^-两部分，分别占46％和54％；IL-6R^＋细胞形成的粒-单核细胞集落形成单位（CFU—GM）数为2．1±1．8，IL-6R^-细胞形成的红系祖细胞爆式集落形成单位（BFU—E）数为58．2±18．1，明显高于IL-6R^＋细胞形成的CFU—GM数（P〈0．05）；在含有FP6的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（1．400±0．180）×10^6；在含FP6和Notch配体δ-1的培养体系中，CD36^＋GPA^high细胞计数为（2．460±0．190）×10^6，明显高于单独含有FP6的培养体系（P〈0．05）。结论 Notch配体δ-1可增强IL-6-红系细胞分化过程中sIL-6R所介导的生物学效应。     

Notch配体在哮喘气道重塑小鼠中的表达及布地奈德的干预作用

目的探讨哮喘小鼠气道重塑发病过程中Notch配体Jagged1及Jagged2在肺组织的表达变化及布地奈德的干预作用。方法清洁级C57BL/6雄性小鼠30只随机分为对照组、哮喘气道重塑组、布地奈德干预组,每组各10只。建立哮喘气道重塑模型,利用酶联免疫吸附测定、免疫组化、Western blot等方法,检测炎症因子、气道重构和Jagged1及Jagged2表达变化,并分析它们的相关性。结果哮喘气道重塑组小鼠肺组织的炎症因子IL-4/5/13、Jagged1及Jagged2表达明显增加（P < 0.01或0.001）;布地奈德干预后,气道炎症、气道粘液分泌及胶原沉积明显缓解（P < 0.01）,Jagged1及Jagged2表达明显降低（P < 0.05或0.01）;Jagged1及Jagged2表达水平与炎症因子、气道重构呈正相关（P < 0.001）。结论Notch配体Jagged1及Jagged2表达增加可能参与了哮喘小鼠气道炎症反应及气道重塑。布地奈德能抑制哮喘气道炎症反应及气道重塑可能与降低Jagged1及Jagged2的表达有关。     

NKG2D及其配体在肿瘤免疫中的作用

1991年Houehins等人在对NKG2家族cDNA序列分析时，首次分离得到NKG2D。NKG2D是表达于大多数NK细胞、CD8^＋T细胞、γδT细胞及活化的巨噬细胞的活化性受体，通过识别感染细胞及应激细胞表面诱导产生的配体，并与之结合，从而杀伤靶细胞发挥免疫监视的作用。     

Notch信号通路在造血调控和白血病发生中的作用

Notch是最早从果蝇中发现的基因，后来的研究证实Notch广泛存在于各种动物体内。Notch信号通路在生物进化过程中高度保守，是在多种细胞分化发育过程中起关键作用的信号途径^[1]。同时Notch信号通路在胚胎发育、造血细胞自我更新及肿瘤形成等生理病理过程起重要的调节作用。我们就Notch受体（NotchR）、配体、信号转导、对造血干细胞（HSC）分化的影响及其与白血病的关系进行综述。     

Notch信号通路在儿童肿瘤中的作用

哺乳动物Notch蛋白包括四种(Notch1～Notch4),其配体分为Jagged和Delta两个家族.Notch通路由受体、配体及许多下游靶基因组成复杂的网络结构,调控着组织细胞的发育和生理过程,且在不同组织及细胞类型中起着致癌或抑癌作用.本文主要介绍Notch信号通路的调控及其在儿童肿瘤中的作用.     

非病毒载体介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠32D细胞系中的表达

为了观察非病毒载体 pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因在小鼠 32D细胞系中的表达 ,将B结构域缺失(△ 76 0aa - 16 39aa)的人FⅧcDNA(hFⅧBDcDNA)亚克隆至质粒载体pRC/RSV ,构建重组质粒载体 pRC/RSV hFⅧBDcDNA。经SuperFectTransfectionReagent转染小鼠 32D细胞系 ,分别采用一期法、ELISA法和RT PCR检测细胞培养上清液中人FⅧ的促凝活性 (hFⅧ∶C)和抗原含量 (hFⅧ∶Ag)以及细胞中hFⅧBDcDNA的转录。结果表明 :小鼠 32D细胞系培养上清液中的人FⅧ∶Ag最高达到了 4 5 0 .0 8毫微克 /(10 6细胞·2 4小时 ) ,hFⅧ∶C最高达到了 2 .0 1单位 /(10 6细胞·2 4小时 ) ,RT PCR可检测到 32D细胞中hFⅧBDcDNA转录的mRNA。结论 :非病毒质粒载体 pRC/RSV介导的人凝血因子Ⅷ基因能够在小鼠 32D细胞系中表达人FⅧ蛋白 ,所表达的FⅧ与正常人血浆中的野生型FⅧ具有相似的凝血活性。     

miRNA与Notch信号通路在心脏发育中的作用

背景:miRNA具有调控细胞增殖、分化和生物体生长发育等功能.Notch信号通路在细胞增殖、分化和器官组织发育也起重要作用.miRNA与Notch信号通路分别在心脏发育中的作用及两者之间关系的研究可能会为干细胞移植治疗某些心脏疾病提供新思路.目的:综述miRNA和Notch信号通路在心脏发育中作用研究的新进展.方法:应用计算机在Google Scholar、PubMed数据库和ScienceDirect-Home数据库进行检索,英文检索词"miRNA,Notch signaling pathway,cardiac development,stem cells".结果与结论:miRNA通过调节靶基因mRNA或抑制翻译而发挥作用,具有调控细胞增殖、分化等生物学功能,在心脏的发育发挥重要作用.Notch信号通路在决定细胞分化方向和心脏正常发育起重要作用.而miRNA-1可抑制Notch信号中DII1受体表达而促进小鼠胚胎干细胞向心肌细胞分化.深入了解miRNA或Notch信号通路在心脏发育中的机制及两者之间的联系,明确其在调控干细胞分化为心肌细胞的作用,可能会为干细胞移植治疗某些心脏疾病提供新的干预靶点.     

信号转导通路在神经干细胞分化及其修复脊髓损伤过程中的作用

近年来神经干细胞的研究给中枢神经系统损伤患者带来了新的希望，但神经干细胞的分化诱导仍然是医学界的一大难题。文章试对神经干细胞分化发育过程的基因信号转导通路Notch信号途径、螺旋-环-螺旋转录因子家族信号途径及Wnt信号途径等作以综合分析。探讨这些基因信号转导通路对神经干细胞分化的作用及其修复脊髓损伤的前景。神经干细胞的分化发育受多种途径的共同作用，基因水平的调控，局部微环境以及各种生长因子的作用都对其分化发育有重要影响；其对脊髓损伤的修复具有重要作用。     

2-甲氧基雌二醇诱导骨髓瘤细胞系CZ-1细胞分化作用初探

目的　观察2 甲氧基雌二醇对骨髓瘤细胞系CZ 1细胞诱导分化作用。方法　通过细胞形态观察,细胞表面标志分析和细胞分泌轻链蛋白水平的测定,观察2 甲氧基雌二醇对CZ 1细胞的诱导分化作用。结果　CZ 1细胞经0. 1~0. 5μmol/L2 甲氧基雌二醇作用48h后细胞形态向成熟阶段发展,表现为细胞胞核缩小,胞浆丰富,核浆比例下降,核仁减少或消失,核染色质变粗、变密。细胞表面标志CD49e阳性表达率由(12. 20±1. 57)%增加到( 24. 80±1. 26 )%,差异有统计学意义(P<0. 05); CZ 1细胞分泌轻链蛋白由(35. 97±2. 60)μg/ml升高到(79. 67±1. 88)μg/ml,差异有统计学意义(P<0. 05)。结论　较低浓度2 甲氧基雌二醇可诱导骨髓瘤细胞向成熟阶段分化。     

As2O3对K562细胞BCR/ABL蛋白酪氨酸磷酸化的影响

目的　进一步阐明Ａｓ２Ｏ３ 诱导Ｋ５６２ 细胞凋亡和抑制其生长的可能机制,为Ａｓ２Ｏ３ 在临床上的应用提供理论依据。方法　采用免疫沉淀、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ、生物化学及免疫荧光等方法研究了Ａｓ２Ｏ３对ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸磷酸化及其所介导的信号途径和某些凋亡相关蛋白表达的影响。结果　１μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 使细胞内多种蛋白酪氨酸磷酸化减少,而且ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白自身酪氨酸磷酸化亦减少,但０ ．１ μｍｏｌ／ＬＡｓ２Ｏ３ 对蛋白酪氨酸磷酸化的影响不明显;Ａｓ２Ｏ３ 对蛋白酪氨酸磷酸酶（ＰＴＰ） 活性未见明显影响;Ａｓ２Ｏ３ 下调ＪＡＫ２ 蛋白的表达,但对ＳＴＡＴ１ 和ＳＴＡＴ２ 蛋白的表达以及ＳＴＡＴ１ 蛋白酪氨酸磷酸化无影响;Ａｓ２Ｏ３ 亦不影响凋亡相关蛋白Ｂｃｌ２、ＢｃｌｘＬ／Ｓ、Ｂａｘ、ＩＣＨ１Ｌ、ｐ５３、ＰＡＲＰ的表达,Ａｓ２Ｏ３ 亦使Ｋ５６２ 细胞的ＰＭＬ蛋白降解。结论　Ａｓ２Ｏ３ 可能通过减少细胞内某些蛋白,尤其是ＢＣＲ／ＡＢＬ蛋白酪氨酸磷酸化和（ 或）下调ＪＡＫ２ 蛋白的表达而干扰ＢＣＲ／ＡＢＬ致癌信号的传导,引起Ｋ５６２ 细胞凋亡和抑制其生长。     

Notch 配体阳性的成纤维基质细胞体外诱导胸腺细胞发育和凋亡的影响

目的 观察表达Notch 配体的基质细胞在体外诱导对小鼠胸腺T 淋巴细胞表面抗原表达和细胞凋亡的影响.方法 应用Notch 配体(Delta1 和Jagged1)阳性的L 细胞,与胸腺T 淋巴细胞或经过分选纯化的CD4 + CD8 +双阳性T 淋巴细胞进行体外共培养,观察了Notch 配体阳性细胞对T 淋巴细胞表面CD4 和CD8 抗原的表达变化以及T 淋巴细胞向单阳性淋巴细胞转化的影响,同时应用Annexin-V 抗体观察了细胞凋亡的变化.结果 经过与Delta1 和Jagged1 配体阳性细胞共孵育后,CD4+ CD8+双阳性T 淋巴细胞转化率降低5.7%和7.6%,其中向CD4+单阳性淋巴细胞的转化明显受到抑制,分别下降了12.8%和6.7%,而CD8 +单阳性淋巴细胞的比例没有明显改变;淋巴细胞凋亡也明显降低了30%.结论 Notch 和配体相互作用可能参与并抑制T 淋巴细胞的晚期成熟分化.     

WT1基因表达模式改变对NB4细胞分化的影响

目的探讨WT1基因异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4分化的影响及其分子机制。方法用电穿孔法将携带WT1基因异构体WTA(-17AA/-KTS)全长cDNA的重组真核表达载体及其对照质粒pCB6+转导NB4细胞,建立WT1基因异构体表达比例改变的单克隆细胞株。通过形态学观察,细胞周期动力学检测,NBT还原试验,细胞表面分化抗原CD11b的检测了解外源性WT1基因异构体WTA在全反式维甲酸(ATRA)诱导下对NB4细胞分化的影响。用RT-PCR检测细胞中PML/RARα、p21、c-myc基因表达的改变。结果ATRA处理细胞48h,对照组(转染空载体的NB4/CMV和未转导WTA的NB4细胞)细胞分化明显,NB4/WTA细胞只出现部分分化。流式细胞术检测NB4/WTA细胞CD11b相对荧光强度(4.63±1.63)低于对照组(8.15±1.84),ATRA作用24h后CD11b相对荧光强度(31.42±5.65)与对照组(71.95±9.36)相比差异更为明显。NB4/WTA细胞NBT还原能力较对照组下降,经ATRA处理后两组细胞之间的NBT还原能力的差异更加明显。RT-PCR提示NB4/WTA细胞PML/RARα、p21、c-myc基因的表达较对照组升高。结论增加外源性WT1基因异构体WTA的表达从而将WT1基因异构体表达的比例由+17AA/+KTS优势型转变为-17AA/-KTS优势型能部分抑制ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与PML/RARα、p21、c-myc基因表达上调有关。     

转染VEGF-C cDNA对NB4细胞增殖、分化与凋亡的影响

目的探讨转染血管内皮生长因子(VEGF)-C cDNA 对急性早幼粒细胞白血病细胞系NB4细胞增殖、全反式维甲酸(ATRA)诱导分化及化疗药物介导的细胞凋亡作用的影响。方法采用脂质体法将重组表达载体(pcDNA3.1-VEGF-C)和 pcDNA3.1转染 NB4细胞建立稳定细胞株;采用MTT 法及集落形成实验分析转染 VEGF-C cDNA 对 NB4细胞增殖的影响;NB4/VEGF-C 细胞经 ATRA诱导后涂片经瑞特-姬姆萨染色作形态学分析,实时荧光定量 PCR 检测调控粘细胞分化基因 C/EBPα相对表达水平,同时以流式细胞术检测细胞表面的 CD11b 表达量;Annexin V/PI 双染流式细胞术检测NB4/VEGF-C 细胞经鬼闩乙叉甙(Vp16)诱导的细胞凋亡;并以实时荧光定量 PCR 检测 bcl-2基因相对表达水平,均以 NB4/pcDNA3.1细胞为对照。结果成功转染获得稳定表达 VEGF-C 的细胞株 NB4/VEGF-C,其增殖能力显著高于 NB4/pcDNA3.1细胞;NB4/VEGF-C细胞对抗 ATRA 介导的早幼粒细胞分化成熟,CD11b 表达量低于对照组,C/EBPα基因含量仅为对照组的1/32;NB4/VEGF-C 细胞经Vp16介导后 bcl-2基因表达约为 NB4/pcDNA3.1细胞的2.28倍,而凋亡的 NB4/VEGF-C 细胞百分率(7.20±2.52)%明显低于凋亡的 NB4/pcDNA3.1细胞的(16.07±3.58)%(P=0.005)。结论 VEGF-C 通过 VEGF 受体3(VEGFR-3)信号途径促进白血病细胞增殖,抑制分化诱导剂介导的 NB4 细胞分化及化疗药物介导的细胞凋亡,推测 VEGF-C/VEGFR-3信号途径在白血病疾病进展中发挥重要作用并可望作为白血病治疗的靶点。     

人肾细胞癌Notch信号途径相关基因的表达及其意义

目的通过检测人肾细胞癌中Notch信号途径相关基因的表达水平,探讨Notch信号途径分子与人肾细胞癌发生发展的可能关系,为临床治疗肾细胞癌提供一定的理论依据。方法手术获得8例肾细胞癌组织标本,用RT-PCR检测癌旁组织和癌症组织中Notch信号通路受体、配体的表达水平,并对电泳结果的灰度值进行统计学分析。结果与癌旁组织相比,癌症组织中Notch信号的受体Notch-2、Notch-3以及配体Jagged-1的表达水平有明显的上升,差异有统计学意义;但相对于癌旁组织,Notch信号途径的另一个配体Delta-1在癌症组织中的表达不确定。结论肾细胞癌发生发展与Notch信号途径的呈现出一定的相关性,表明Notch信号途径可能参与了肾细胞癌的发生与发展。     

红细胞生成素受体介导的白血病细胞5纱增殖信号传导的研究

目的 检测白血病细胞系红细胞生成素受体（ＥｐｏＲ）的表达并阐明ＥｐｏＲ介导的白血病细胞系ＫＯＣＬ－３３增殖信号传导途径。方法 用生物系酰基化Ｅｐｏ及流式细胞仪检测白血 纱ＫＯＣＬ－３３细胞中几种信号传导蛋白 酷氨酸磷酸化。结果 （１）除Ｔ淋巴细胞系外,其余细胞纱ＥｐｏＲ表达均为阳性,阳性率为１８％～９９％,均值５２％。不同类型的细胞系ＥｐｏＲ阳性率的差异没有统计学意义。（２）９株细胞中７株细胞因受     

缺氧对大鼠成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：探讨缺氧对体外培养成骨细胞的影响。方法：应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察缺氧对体外培养成骨细胞的增殖、碱性磷酸酶（ALP）表达及矿化结节形成的影响。结果：缺氧具有抑制成骨细胞增殖，降低ALP活性及矿化结节形成的数量的作用，并随缺氧时间的增加而更加明显。结论：缺氧具有抑制体外培养成骨细胞增殖、分化成熟及延缓矿化的作用。