气相色谱氮磷检测器法测定人血浆毒鼠强浓度

目的建立测定人体血浆中毒鼠强(TET)浓度的毛细管气相色谱/氮磷检测器(GC/NPD)分析法。方法血浆中TET用乙酸乙酯作液-液提取,以乙酸乙酯为溶媒,载气为氦气,色谱柱为HP-5弹性石英毛细管柱,GC/NPD测定毒鼠强的浓度。结果在100~500 ng.mL-1浓度范围内线性关系良好,r=0.997 2(n=5),最低检测浓度为100ng.mL-1。TET血浆样品的低、中、高3个浓度(100,200和400 ng.mL-1)日内、日间变异系数(RSD)均≤10%,方法回收率均≥80%。结论该法操作简便,结果准确,可用于TET中毒的实验室鉴别和临床救治过程中的体内毒物浓度监测。     

应用血液灌流抢救毒鼠强中毒的疗效观察

目的 探讨血液灌流抢救重度毒鼠强中毒的疗效.方法 重度毒鼠强中毒患儿分两组,血液灌流合并常规内科治疗17例作治疗组,20例常规内科治疗作对照组,比较其治愈率、后遗症发生率、死亡率、症状缓解时间.并测定了10例患儿血液灌流前后和灌流过程中血浆毒鼠强浓度,比较其浓度变化情况.结果 HP组死亡1人,治愈14人,有后遗症2人.对照组死亡8人,治愈5人,有后遗症7人.HP组治愈率（82.35%）比对照组（25.00%）高,而死亡率（5.88%）明显比对照组（40.00%）低,差异有显著性（P＜0.05）; HP组2例（11.76%）而对照组有7例（35%）有后遗症,差异有显著性（P＜0.05）,HP组神志转清时间（14.14±9.33）h明显比对照组（35.55±18.89）h短,差异有显著性（P＜0.05）;17例实施HP的患儿血液灌流术中无寒战发热、低血压、栓塞等不良副作用.10例毒鼠强中毒病人HP前,HP治疗60、120分钟血浆毒鼠强浓度分别是（216.10±59.07）ng/ml,（176.20±47.30）ng/ml和（161.00±31.49）ng/ml,随着灌流的进行血浆毒鼠强浓度逐渐降低,临床症状渐好转.结论 血液灌流是治疗重度毒鼠强中毒行之有效的抢救方法.     

高效液相色谱法测定美林洛尔与人血浆蛋白的结合率

目的建立人标准血浆中美林洛尔(MELE)浓度的测定方法,测定美林洛尔在人标准血浆中的蛋白结合率,并计算相关参数.方法用平衡透析法测定血浆蛋白结合率,用高效液相-荧光检测法测定血浆中药物总浓度及游离药物浓度.结果美林洛尔与人标准血浆的蛋白结合率随药物浓度发生变化约为7.02%～18.75%.MELE与白蛋白结合的表现最大能力βp为0.016μmol·g-1,药物-蛋白复合物的解离常数Kdp为1.734 μmol·L-1,结合常数Kp为1.271 9×103L·mol-1,结合位点n为0.001 6.结论在体外美林洛尔与人标准血浆的蛋白结合率较低,并随着药物浓度的增加结合率下降.     

高效液相色谱法测定间尼索地平不同对映体在血浆中的蛋白结合率

目的:建立间尼索地平不同对映体在大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白中蛋白结合率的测定方法,并计算不同种属血浆蛋白的相关参数。方法:采用平衡透析法测定蛋白结合率,用高效液相色谱法测定血浆中药物总浓度及游离药物浓度。结果:R-与S-间尼索地平的血浆蛋白结合率分别为:大鼠血浆为(97.4±8.2)%、(93.0±13.4)%;人血浆为(90.8±10.5)%、(89.2±9.9)%;牛血清白蛋白为(95.3±8.7)%、(91.0±5.7)%。最低定量下限为0.01ng。结论:在体外间尼索地平不同对映体与大鼠血浆、人血浆和牛血清白蛋白结合率很高,R-间尼索地平的结合率及蛋白结合药物的表观最大能力βp均较S-间尼索地平高。随着药物血浆浓度升高,R-间尼索地平结合率下降,S-间尼索地平结合率升高,均有一定的浓度依赖性。     

柚皮苷的大鼠血浆蛋白结合率研究

目的研究柚皮苷的大鼠血浆蛋白结合率。方法使用平衡透析法模拟柚皮苷在体内与血浆蛋白结合的过程,并建立测定柚皮苷的高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)方法,测定低、中、高3个浓度(100、600、3 600 ng/m L)的柚皮苷在透析袋内血浆中和透析袋外缓冲液中的浓度,计算血浆蛋白结合率。结果低、中、高3个浓度的柚皮苷在体外与大鼠的平均血浆蛋白结合率分别为91.5%、90.5%和96.3%,3个浓度之间的血浆蛋白结合率比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论柚皮苷与大鼠血浆蛋白高度结合。     

HPLC-超滤法测定雷公藤红素与家兔、大鼠、人血浆的蛋白结合率

目的:测定雷公藤红素在家兔、大鼠和人血浆中的血浆蛋白结合率。方法:采用高效液相色谱(HPLC)-超滤法分离测定游离药物和血浆蛋白结合药物。以高效液相色谱法测定离体大鼠、家兔和人血浆中雷公藤红素含量,计算血浆蛋白结合率。色谱柱为Diamonsil C18,流动相为乙腈-0.2%甲酸(80∶20,V/V),检测波长为425 nm,流速为1.0 ml/min,进样量为10μl,柱温为40℃。结果:0.52、2.08、8.32 mg/L雷公藤红素在大鼠、家兔和人血浆中的检测质量浓度线性范围均为0.10~16.64 mg/L(r分别为0.999 5、0.999 6、0.999 5);血浆样品精密度试验的RSD均小于15%,在37、25、4℃下1 440 min内稳定性试验的RSD均小于5%。在0.52、2.08、8.32 mg/L质量浓度下雷公藤红素与人血浆的血浆蛋白结合率分别为84.62%、81.24%、83.14%,与大鼠的血浆蛋白结合率分别为79.44%、78.61%、78.15%,与家兔的血浆蛋白结合率分别为67.86%、68.71%、69.23%。结论:雷公藤红素的血浆蛋白结合率与其质量浓度无关;雷公藤红素与人的血浆蛋白结合率较高,其次为大鼠和家兔。     

酶联免疫吸附试验检测人血浆中纤维蛋白原含量

目的 探讨酶联免疫吸附试验在检测人血浆中纤维蛋白原含量中的应用价值.方法 采用竞争抑制ELISA法测定人血浆中纤维蛋白原含量,并探索凝血酶、第二抗体最佳稀释倍数及适宜反应时间.在最适宜条件下测定人血浆中纤维蛋白原含量.结果 第二抗体稀释1000倍为适宜的稀释倍数,10 IU/ml为最适宜凝血酶作用浓度,室温1.5 h为较理想的作用条件.FPA标准品稀释至60 ng/ml,20 ng/ml,5 ng/ml,回收率分别为107.2%、98%、110%.结论 用建立起来的竞争抑制性ELISA法测定人血浆蛋白原中,纤维蛋白肽A的含量,回收率高,操作简单方便,值得推广应用.     

毛发中度冷丁及其代谢产物的鉴定

目的：为考察度冷丁滥用者毛发中度冷丁及其代谢物的存在状况,建立GC/MS和GC/NPD测定人毛发中度冷丁及代谢产物去甲度冷丁的定性定量分析方法。方法：毛发经酸水解后用乙醚直接提取,GC/MS和GC/NPD测定。结果：度冷丁及去甲度冷丁回收率>80%,最低检出限分别为0.5 ng.mg^-1和1 ng.mg^-1。在度冷丁滥用者毛发中鉴定、确认度冷丁及其代谢物去甲度冷丁、乙酰去甲度冷丁,并测定了50例度冷丁滥用者毛发中度冷丁及去甲度冷丁的浓度,分别为4.8～496 ng.mg^-1和15.5～685 ng.mg^-1。结论：方法简便、可靠、灵敏,可作为法医鉴定和临床诊断的工具。     

超高效液相色谱-串联质谱法测定人血浆中卡巴他赛与血浆蛋白的结合率

目的建立并应用超高效液相色谱-串联质谱法(UPLC-MS/MS)测定人血浆中卡巴他赛与血浆蛋白的结合率。方法以拉洛他赛为内标,样品经叔丁基甲醚液液萃取,采用ACQUITY BEH C18色谱柱(50 mm×2.1 mm,1.7μm);流动相:2 mmol·L-1醋酸铵水溶液-乙腈;流速:0.2 mL·min-1;进样量:5μL;柱温:35℃;采用ESI正离子源,定量分析离子反应分别为m/z 836.36→m/z 555.26(卡巴他赛)和m/z 832.25→m/z 551.08(内标拉洛他赛)。结合平衡透析法,测定了卡巴他赛的人血浆蛋白结合率。结果卡巴他赛浓度在5¹ 000 ng·mL-1范围内线性关系良好,定量下限为5 ng·mL-1,日内和日间精密度均小于15.0%,提取回收率为70.0%1 000 ng·mL-1范围内线性关系良好,定量下限为5 ng·mL-1,日内和日间精密度均小于15.0%,提取回收率为70.0%⁹1.4%,基质效应为87.4%91.4%,基质效应为87.4%¹00.9%,可用于卡巴他赛的血浆蛋白结合率研究。卡巴他赛在低、中、高三个浓度下的人血浆蛋白结合率为(87.8±4.0)%、(76.4±0.8)%和(73.5±6.4)%。结论本方法简单、快速、灵敏,能满足分析要求。卡巴他赛与人血浆蛋白结合率较高,与血浆蛋白结合能力在考察的浓度范围内无浓度依赖性。     

替加色罗大鼠血浆蛋白的结合率测定

目的测定大鼠血浆蛋白结合率。方法血浆样品加入内标后用乙酸乙酯提取,进行HPLC分析。采用平衡透析法测定大鼠血浆中替加色罗的血浆蛋白结合率。结果替加色罗浓度在42.51~235.73 ng.ml-1范围内,药物血浆蛋白结合呈线性关系,替加色罗与大鼠血浆蛋白结合率为92.4%。结论替加色罗与大鼠血浆蛋白结合率较高。     

职业性三氯乙烯中毒的检测分析

目的对本市一家通讯设备公司的作业现场、接触者班末尿及现场工人使用的“洗板水”进行检测分析,旨在为职业病诊断、治疗提供科学依据。方法气相色谱法(GC-FID法)测定车间空气中的三氯乙烯(TCE),顶空气相色谱法(GC-HS)测定尿样中的三氯乙酸(TCA)含量,气相色谱-质谱联用法(GC-MS法)对“洗板水”进行挥发组分分析。结果活性碳管采集的具有代表性的3个作业点共31份空气样本,浓度范围在31.2～120.1mg/m3,平均浓度为72.5mg/m3,超出我国工作场所空气中有害物质容许浓度2.4倍;在工人使用的溶剂“洗板水”中发现含有大量的三氯乙烯成分,含量为93.24%,接触工人班后尿样中TCA含量平均为51.86±24.09mg/L,显著高于对照组(P<0.001)。结论结合临床及流行病学资料,可确定此次职业性损害由三氯乙烯引起。     

豨莶草生品和炮制品中石油醚提取成分的对比研究

目的从石油醚提取成分的角度探讨豨莶草生品和炮制品成分的变化,为豨莶草炮制前后功效差异提供内在成分变化的依据。方法采用GC/MS联用法,对豨莶草炮制前后石油醚提取成分加以比较分析。结果豨莶草经炮制后出现了11种新的石油醚提取成分。结论豨莶草炮制前后石油醚提取成分发生了很大变化。     

正电性多肽copoly(Lys/Tyr)与磷脂膜的相互作用研究

目的 研究正电性多肽copoly(Lys/Tyr)(CPLT)在模拟生物膜上的透过性。方法 ①配制由卵磷脂(EPC)、2-油酰基磷脂酰乙醇胺(DOPE)和大豆磷脂(SBPL)组成的二分子磷脂膜。②Zeta电位测定法(zeta potential method，ZP)测定由上述磷脂组成的脂质体在加入CPLT后的膜表面Zeta电位。③园二色谱法(circular dichroism spectrcvscopy，CD)检测CPLT分子与磷脂膜作用时的构象情况。④电生理学方法(electrophy siology tech—nique，ET)测量CPLT分子在磷脂膜上引起的跨膜电流。⑤荧光光度分析法(fluorescence spectroscopy，FS)检测CPLT分子与磷脂膜的作用过程中的荧光强度变化。⑥共焦点激光扫描显微分析法(confocal laser scanning microscopy，CLSM)研究CPLT在磷脂膜上透过及其相对透过效率。结果①随着CPLT的加入和其浓度的增加，磷脂膜Zeta电位逐渐增加并趋向饱和。②CPLT分子在水相取β-sheet构象，当与磷脂膜结合后，其β-sheet构象的波峰发生红移，但构象基本不变。③CPLT分子能在一定浓度和一定外加电压条件下，透过二分子磷脂膜引起膜电流。④CPLT与磷脂膜的作用可分为三步：第一步，CPLT分子吸附于磷脂膜上；第二步，CPLT分子通过磷脂膜的疏水区；第三步，CPLT分子从二分子膜的内膜解吸，进入膜内水相。⑤CPLT分子在磷脂膜上的透过效率主要决定于磷脂膜的组成，在磷脂膜中存在带负电性的磷脂时可降低CPLT分子在磷脂膜上的透过效率。⑥在最初的CPLT分子与磷脂膜的相互吸附过程中，CPLT分子与磷脂膜间的静电作用力起主要作用。结论copoly(Lys／Tyr)分子能透过二分子磷脂膜，其透过效率主要决定于磷脂膜的组成。在最初的肽一膜吸附过程中，当存在静电作用力时，静电力起主要作用，疏水效应次之。     

慢性阻塞性肺疾病肺心病肺通气功能及一氧化碳弥散功能测定的对比分析

对７８例慢性阻塞性肺疾病（ＣＯＰＤ），３４例慢性肺心病（ＣＰＨＤ）肺通气功能及一氧化碳弥散功能（ＤＬｃｏ）测定，并与４２例正常人对比分析，结果表明：肺通气功能三组两两之间均有差异（Ｐ＜０．００１～０．００５），而ＤＬｃｏ则慢阻肺与正常对照无差异（Ｐ＞０．０５），肺心病与慢阻肺及正常均有显著差异（Ｐ＜０．０１）。提示：肺脏有很强的代偿功能，在慢阻肺时肺通气功能下降，但弥散功能仍正常。当肺通气功能严重受损、残气、残总比值明显增高，此时肺泡壁广泛破坏，使肺毛细血管床减少，通气血液比例失调，致ＤＬｃｏ降低。     

孤啡肽逆转人白血病K562/ADM细胞耐药性的研究

目的 探讨孤啡肽对人白血病K562/ADM细胞对阿霉素耐药性的逆转作用.方法 测定孤啡肽的细胞毒性及其对K562/ADM细胞药物敏感性的影响,计算耐药逆转倍数.瑞士染色观察药物作用后K562/ADM细胞形态的改变;流式细胞仪检测阿霉素单用或与孤啡肽联用K562/ADM细胞凋亡百分率;DNA琼脂糖凝胶电泳观察孤啡肽与阿霉素联用后K562/ADM细胞内DNA的损伤程度.结果 非细胞毒性剂量的孤啡肽(10-7mol/L)作用于K562/ADM细胞时,对阿霉素耐药起到了部分逆转作用,使K562/ADM细胞的IC50由原来的(46.99±0.25)μg/ml降低至(23.11±0.29)μg/ml,其逆转倍数为2.03倍;孤啡肽(10-7mol/L)和阿霉素(20μg/ml)联合处理K562/ADM细胞48h,K562/ADM细胞呈典型的凋亡形态改变;细胞的凋亡率达到(18.73±3.90)%,明显高于两种药物在相同条件下单独作用的效果,P＜0.01;结论 孤啡肽能诱导K562/ADM细胞凋亡,从而能逆转K562/ADM细胞的耐药性,提高阿霉素的敏感性.     

心肌缺血再灌注中TNF动态变化及药物干预

目的探讨肿瘤坏死因子(TNF)、髓过氧化物酶(MPO)在心肌缺血再灌注(MI/R)中的动态变化的临床意义及卡托普利的干预作用。方法将实验兔54只分为MI/R组、卡托普利治疗组及假手术对照组,分别测缺血前、缺血0.5h,再灌注0.5、1.5、6h5个时相点外周血TNF,以及后4个时相点心肌组织TNF、MPO含量,对照组心肌指标只检测最后一个时相点。结果再灌注0.5h外周血TNF即开始升高(P<0.05),再灌注6h更高(P<0.01),心肌组织TNF、MPO含量则于再灌注1.5h升高并持续至再灌注6h,卡托普利干预后上述指标均有明显改善。结论TNF参与再灌注损伤,是再灌注后导致内皮功能紊乱的重要因素之一。卡托普利通过保护内皮,减少致伤因素而减轻再灌注损伤。     

肝硬化患者血中NO、ox-LDL及ET-1的水平

目的　探讨NO、ox LDL及ET 1在肝硬化时的变化及其与肝功能的关系。方法　采用分光光度法和酶联免疫吸附法以及放射免疫分析法分别测定了 5 4例肝硬化患者血中的NO、ox LDL和ET 1水平 ,并与 6 8名正常人进行了对比分析。结果　表明肝硬化组NO、ox LDL、ET 1分别为 (1.34±0 .2 5 ) μmol/L、(0 .48± 0 .0 8)mg/L、(17.5 1± 3.5 6 )ng/L均显著高于正常人组的 (0 .6 6± 0 .18) μmol/L、(0 .32± 0 .0 7)mg/L、(6 .0 7± 1.45 )ng/L(P <0 .0 5 )。且NO、ox LDL及ET 1的含量与肝功能分级相平行。结论　提示NO、ox LDL和ET 1水平的变化可作为评估肝硬化患者病情轻重的指标。     

Establishment and validation of a rabbit model for in vivo pharmacodynamic screening of tachykinin NK(2) antagonists

We attempted to establish and validate an in vivo pharmacodynamic (PD) rabbit model to screen tachykinin NK(2) receptor (NK(2)-R) antagonists using pharmacological and pharmacokinetic (PK)/PD analyses. Under urethane anesthesia, changes in intracolonic pressure associated with intravenous (i.v.) administration of a selective NK(2)-R agonist, βAla(8)-neurokinin A(4-10) (βA-NKA), was monitored as a PD marker. The analgesic effects of NK(2)-R antagonists were evaluated by monitoring visceromotor response (VMR) to colorectal distension in a rabbit model of visceral hypersensitivity induced by intracolonic treatment of acetic acid. Intravenous administration of βA-NKA induced transient colonic contractions dose-dependently, which were inhibited by the selective NK(2)-R antagonists in dose- and/or plasma concentration-dependent manners. The correlation between PD inhibition and plasma concentration normalized with the corresponding in vitro binding affinity was relatively high (r(2) = 0.61). Furthermore, the minimum effective doses on the VMR and ID(50) values calculated in the PD model were highly correlated (r(2) = 0.74). In conclusion, we newly established and validated a rabbit model of agonist-induced colonic contractions as a screening tool for NK(2)-R antagonists. In a drug discovery process, this PD model could enhance the therapeutic candidate selection for irritable bowel syndrome, pharmacologically connecting in vitro affinity for NK(2)-R with in vivo therapeutic efficacy.     

GC-MS测定坎地沙坦酯中微量的N-亚硝基二甲胺和N-亚硝基二乙胺

目的：建立GC/MS直接进样法测定坎地沙坦酯中微量的基因毒性杂质N-亚硝基二甲胺（NDMA）和N-亚硝基二乙胺（NDEA）的含量。方法：采用单四极杆GC/MS,色谱柱Agilent VF-WAX ms（长度30m,内径0.25mm,液膜厚度0.25μm）,程序升温,进样口温度200℃,流速1.0 ml?min-1;质谱采用EI源,电压为70eV,离子源温度230℃、四极杆温度150℃,5-7min检测离子为74(m/z) (NDMA),7-10min检测离子为102(m/z) (NDEA);以0.2mol?L-1氢氧化钠溶液溶解样品,以乙酸乙酯进行萃取。结果：在上述GC/MS条件下,NDMA、 NDEA及相邻色谱峰之间分离效果良好,NDMA和 NDEA分别在2.97～148.5 ng?mL-1和3.00～150.20ng?mL-1浓度范围内线性关系良好,定量限分别为0.06ppm、0.03ppm,检出限分别为0.018ppm、0.009ppm;NDMA低、中、高浓度平均回收率分别为86.3%、88.3%、91.4%,RSD分别为0.9%、0.7%、0.4%,NDEA低、中、高浓度平均回收率分别为88.1%、87.9%、91.7%,RSD分别为0.9%、1.1%、0.2%。结论：建立的GC/MS测定坎地沙坦酯中NDMA和NDEA的方法,准确度好,灵敏度高,简便可靠,对仪器污染小,可用于坎地沙坦酯中这两个基因毒性杂质的质量控制。     

乌贼墨对H_(22)癌细胞内Ca~(2 )、ATP浓度及线粒体Ca~(2 )/Mg~(2 )-ATP酶活性的影响

利用荧光探针和荧光素,研究了乌贼墨对Ｈ_(２２)癌细胞内 Ｃａ~（２＋）、ＡＴＰ浓度及线粒体Ｃａ~（２＋）／Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性的影响。结果发现,乌贼墨使Ｈ_(２２)癌细胞内Ｃａ~（２＋）浓度降低了２．３和３．７倍,线粒体Ｃａ~（２＋）／Ｍｇ~（２＋）－ＡＴＰ酶活性降低了 ２８％和 ５８％,ＡＴＰ浓度升高 Ｔ ７７％和 ８３％。结果提示乌浓墨可能通过降低细胞内Ｃａ~（２＋）浓度,继而影响到线粒体上Ｃａ~（２＋）依赖性Ｃａ~（２＋）／Ｍｇ~（２＋）-ＡＴＰ酶活性,减少了Ｃａ~（２＋）向线粒体内的转运,减轻甚至消除了Ｃａ~（２＋）对ＡＴＰ合成的抑制作用。这可能是乌贼墨抑制肿瘤生长的机制之一。