骨与钙化组织脱钙方法的改进

制作骨组织及其钙化组织切片时 ,必须经过脱除钙盐的过程[1 ] 。在脱钙过程中 ,常遇到脱钙剂引起组织结构的严重破坏、除酸时间长、染色效果不理想等问题 ,在不同程度上影响了病理诊断的及时性和准确性[2 ] 。作者采用新的脱钙液来进行脱钙 ,取得满意效果。1　材料与方法1 .1　材料　生理盐水、浓盐酸、甲醛、甲酸、氯化铝、冰乙酸等。1 .2　骨和钙化组织的原脱钙方法　将在甲醛中充分固定的骨块或含钙组织先置于硝酸溶液中脱钙 ,硝酸的体积分数为5 % ,每d更换新溶液 ,最好早晚 2次 ,直至可用针刺入组织而无阻力感时为止 ,一般需 1～ 3d ,如…     

骨及钙化组织切片的复方脱钙液的配制及脱钙方法

骨及钙化组织非常坚硬，将其制成几微米薄切片难度较大。常用的方法是先脱钙，使组织变软后再切片，所以脱钙是非常关键的技术。目前使用的脱钙剂多为无机强酸类制剂，虽脱钙效果较好，但常造成组织形态，特别是细胞结构的破坏，影响骨组织形态观察和研究。为此，我们使用复方脱钙液脱钙，不仅能够保持组织形态良好，亦能用于特殊染色及切片，现介绍如下：     

骨及钙化组织快速脱钙与快速除酸法的改进

制作骨及钙化组织切片时,必须经过脱钙除酸过程.在此过程中常遇到脱钙与除酸时间长、常引起组织结构的严重破坏、染色效果不理想等问题,在不同程度上影响了病理诊断与科学研究的及时性和准确性[1].为提高工作效率,我们摸索出一种快速脱钙与快速除酸法的方法,既不破坏骨组织结构、不影响染色效果,又简化了步骤、缩短了时间.现介绍如下.     

脱钙骨制片与传统骨磨片技术的比较

①目的 比较脱钙骨切片法与骨磨片法显示骨组织结构的效果。②方法 应用硫堇-苦味酸染色显示脱钙骨组织结构，甲紫染色显示骨磨片的骨组织结构。③结果 传统的骨磨片较厚而不均匀，骨小管稀少，其结构不够清晰；脱钙骨切片薄而组织结构典型。④结论 采用硫堇-苦味酸染色制作骨组织切片标本其组织结构清晰可辨，易于提高学生对骨组织结构的辨认能力。     

含钙硬组织制片技术及组织化学脱钙法

本文对含钙硬组织制片技术及组织化学脱钙法的原理、改进方法及体会作了介绍。改进法包括:1.酸液脱钙法;2.电解脱钙法;3.离子交换树脂脱钙法;4.螯合剂脱钙法;5.组织化学脱钙法。其中改进了的电解脱钙法及离子交换树脂法,设备简易、脱钙迅速、组织损害小、染色结果满意。改进了的中性EDTA脱钙法及组织化学脱钙法,能保存细胞内显微化学成分及其活性,故用于组织化学(酶、糖原等)研究。     

脱钙骨基质支架构建组织工程骨的实验研究

目的以同种异体骨脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)为支架材料,复合体外诱导培养的人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs),构建组织工程骨并通过裸鼠皮下异位成骨实验及裸鼠皮下致瘤性实验验证其成骨效果及安全性.方法贴壁法培养hMSCs,体外诱导培养扩增,以1.857×106/ml的密度与DBM复合构建组织工程骨,体外培养,并在扫描电镜下观察细胞与材料复合情况,进行组织学观察.同时进行了裸鼠皮下异位成骨实验.结果细胞与支架复合后3 d,细胞与DBM表面及孔隙可实现良好复合;复合后5 d,扫描电镜观察到细胞基质分泌旺盛,充满支架孔隙.裸鼠皮下成骨实验证明其成骨效果良好.结论以本实验中使用的细胞培养方法扩增、诱导分化的种子细胞生物安全性好,自制的DBM具有良好的生物相容性,可为种子细胞生长提供较好的三维空间,按照标准化工艺流程制备的组织工程骨安全、有效.     

同种脱钙骨脊柱融合实验研究

本文用21只兔研究同种脱钙骨的实验性脊柱融合，实验动物分三组：脱钙骨粉组；脱钙骨条组；脱钙骨粉加明胶赋形剂组。手术在胸_(10)～腰_3椎体侧后方施行，作者观察术后1、2、3、5个月的结果表明：X线片及组织学都证明三组均有诱导新生骨形成。     

骨组织快速脱钙法

在外检、教学、科研工作中,对骨组织进行镜下观察,必须脱去钙盐,才能制成切片进行镜检。一般使用的脱钙剂为强酸(如硝酸、盐酸)、有机酸(如甲酸、三氯醋酸等)或为混合液。但是不管使用何种脱钙剂,都必须保证彻底脱钙,如有钙盐残留,会影响切片的完整和损伤切片刀刃。一般骨组织脱钙法需时间较长,酸液致细胞核结构破坏,因而影响病理诊断,所以改进常规脱钙方法,缩短骨组织     

两种组织脱钙法对免疫组织化学染色影响比较

目的：了解1%（体积分数）盐酸和10%（体积分数）硝酸脱钙液对多种抗原免疫组织化学染色效果的影响。方法：选择伴有灶状钙化的软组织标本包括甲状腺乳头状癌、乳腺癌、前列腺癌、结肠癌和淋巴结各3例,骨组织标本包括活检和尸检病例共9例,将样本分为3组,一组分别用10%（体积分数）硝酸处理24、42和48 h, 另一组分别用1%（体积分数）盐酸处理1、2和3 h,还有一组不用酸处理作为对照组,同时进行多种抗原免疫组织化学染色,其中乳腺癌组织作ER、PR和Ki-67染色,甲状腺癌组织作TTF-1染色, 前列腺癌作34βE12和P504s染色,结肠癌作AE1/AE3、P504s和Ki 67染色,淋巴结作CD3、CD20和Ki-67染色,骨组织作CD3、CD20、CD68、CD235a、MPO、Ki-67、AE1/AE3和TTF-1染色。结果：伴有钙化的软组织和骨组织内多种抗原免疫组织化学染色阳性程度均随酸处理时间的延长而有不同程度的下降,骨组织对酸处理的耐受力比软组织强;不同抗原对酸处理的敏感性不同,TTF-1和Ki-67最为敏感,ER、CD3、和CD20耐受性较好。结论：大多数情况下,盐酸和硝酸处理都会降低组织免疫组织化学染色的敏感性,但是对不同抗原的影响程度不同。大块骨组织可以采用10%（体积分数）硝酸脱钙,软组织比例较高的骨组织和骨髓活检组织尽可能使用1%（体积分数）盐酸脱钙。     

三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响

目的探讨三种脱钙液对骨组织免疫组化染色的影响。方法选择12例骨组织,随机分为3组。A组用14%硝酸脱钙液进行处理,B、C组分别用EDTA脱钙液、PLANK脱钙液进行处理,同时对CD3、CD68、Ki-67和TTF-1染色。结果室温条件下,硝酸脱钙液的脱钙时间最短,但对组织损伤最大。PLANK脱钙液和EDTA脱钙液脱钙效果较好,组织结构完整,形态清晰,免疫组化染色较好。结论室温条件下,三种脱钙液中PLANK脱钙液和EDTA脱钙液对骨组织脱钙及免疫组化染色效果较好。但由于EDTA脱钙液脱钙时间过长,PLANK脱钙液脱钙均匀,速度快,更适合用于临床病理检查。硝酸脱钙液脱钙最快,但是免疫组化染色效果较差。     

临床病理检验中不同骨组织脱钙液效果的比较

目的 对两种脱钙方法进行比较,获得简单、便捷、快速适用于临床病理制片的脱钙方法. 方法 观察两种脱钙液:5％硝酸脱钙液(硝酸5ml加入95 ml蒸馏水)和快速脱钙液(含36％-38％盐酸8ml、冰醋酸5ml、水杨酸10 g、蒸馏水87ml),在常温及微波条件下对骨组织脱钙及HE切片染色效果的影响. 结果 常温条件下,5％硝酸使组织结构有些破坏,染色效果不佳.微波条件下,使用快速脱钙液对骨组织结构损伤小,染色效果佳,适合于临床病理的骨组织制片. 结论 标本经快速脱钙液处理后,其切片质量大大提高并远远优于普通脱钙液.     

骨组织病理制片三种脱钙液的比较

目的比较三种文献报道的改良脱钙液的效果,获得简单、便捷、适用于临床病理制片的脱钙液。方法考察在常温及37℃恒温条件下,三种改良脱钙液对骨组织的脱钙及染色效果。结果常温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为72h左右,组织结构损伤小,改良脱钙液Ⅰ、Ⅲ染色效果佳;37℃恒温条件下,三种改良脱钙液的脱钙时间为8—14h,改良脱钙液Ⅰ镜下组织结构破坏,改良脱钙液Ⅱ组织结构破坏且染色效果不佳,改良脱钙液Ⅲ组织结构损伤小,染色效果佳。结论37℃恒温条件下,改良脱钙液Ⅲ是较适合于临床病理制片的脱钙溶液。     

大鼠骨髓间充质干细胞培养方法的比较及细胞鉴定

目的研究大鼠骨髓间充质干细胞（Bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）不同培养方法的差异。方法采用全骨髓法和密度梯度离心法,对 SD大鼠股骨、胫骨骨髓进行分离、纯化和扩增,观察2种方法培养的第0～10代的细胞形态,测定每一代细胞的数量,用流式细胞仪检测第5代细胞 CD29、CD34、CD44、CD45的表达率。结果2种培养方法所获得的细胞形态均呈长梭形,呈特征性的漩涡状生长。全骨髓培养法细胞增殖较快。全骨髓培养法获得的细胞表面标志 CD29、CD34、CD44、CD45的表达率分别为91．0％、4．3％、87．1％、0．1％;密度梯度离心法获得的细胞表面标志 CD29、CD34、CD44、CD45的表达率分别为96．9％、3．6％、89．7％、0．0％。结论2种方法培养的细胞均符合BMSCs的特性。全骨髓培养法更经济,操作简单易行,更容易获得大量的BMSCs。     

骨组织制片中改良脱钙液与传统脱钙液的比较

目的探讨改良脱钙液与传统脱钙液脱钙能力的差异和对HE染色的影响。方法选取36例手术切除的新鲜骨标本,分别使用改良的脱钙液和传统的脱钙液脱钙,比较脱钙效果和HE染色效果。结果改良脱钙液组脱钙时间短于传统脱钙液组(P<0.01);改良脱钙液组切片质量良好率高于传统脱钙液组(P<0.05);改良脱钙液组染色效果良好率高于传统脱钙液组(P<0.01)。结论改良脱钙液脱钙彻底,组织清晰结构完整性更好。     

不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响

目的探讨不同脱钙方法对骨组织切片细胞内mRNA原位杂交表达效果的影响,为研究骨细胞内胶原蛋白等基因的表达效果与骨细胞发育以及骨质疏松的关系提供部分理论依据.方法胶原蛋白-Ⅱ-DNA制备mRNA探针,原位杂交骨组织生长板细胞,观察胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果.结果几种不同脱钙方法中,10?TA ATM溶液对骨组织切片细胞内RNA酶的抑制效果最好,胶原蛋白-Ⅱ原位杂交表达效果最强.结论应用10?TA ATM溶液脱钙能有效防止骨组织细胞内RNA的降解也是提高原位杂交表达效果的方法之一.     

不同检测方法在骨结核诊断中的应用效果比较

目的:比较利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF,简称"Xpert")、荧光PCR熔解曲线法及液体培养方法在骨结核诊断中的应用效果。方法:收集2017年1月至2018年12月期间166例疑似骨结核患者的脓液标本,分别进行分枝杆菌液体培养(MGIT960培养)、Xpert与荧光PCR熔解曲线法检测。以临床综合诊断为标准,对3种检测方法的敏感度和特异度进行比较分析;以液体药敏为金标准,评价Xpert和荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌利福平耐药的敏感度和特异度。结果:Xpert检测的敏感度分别高于荧光PCR熔解曲线法和MGIT960培养法,荧光PCR熔解曲线法的敏感度高于MGIT960培养法,差异有统计学意义(P<0.05);以MGIT960培养为标准,Xpert的敏感度高于荧光PCR熔解曲线法,差异有统计学意义(P<0.05);Xpert与荧光PCR熔解曲线法的特异度比较,差异无统计学意义(P>0.05);以液体药敏为金标准,Xpert和荧光PCR熔解曲线法检测利福平的敏感度和特异度均为80.0%和100%,两种方法与金标准进行一致性检验Kappa值均为0.872。结论:Xpert和荧光PCR熔解曲线法在骨结核诊断中的敏感性和特异度均优于液体培养方法,两种方法各有千秋,可根据实际情况选择。     

骨髓和脂肪源多潜能间充质干细胞的比较研究

①目的比较骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞的生物学特性。②方法分离人的骨髓源间充质干细胞和脂肪源间充质干细胞进行体外培养，通过绘制生长曲线，比较细胞的增殖能力；利用流式细胞仪分析细胞表型，并与诱导培养比较细胞的分化潜能进行比较。③结果脂肪源间充质干细胞与骨髓源间充质干细胞具有相当的生物学特性，且在增殖能力方面优于骨髓源间充质干细胞。④结论人脂肪组织可能成为一种新的间充质干细胞来源。     

骨组织标本脱钙法的改进

骨组织是一种坚硬的结缔组织，骨基质中有机成分和无机盐紧密结合，使骨组织十分坚硬。因此，在制作骨组织切片时，必须经过脱除钙盐的过程，就是通常说的“脱钙”。传统的脱钙方法常常使用硝酸、盐酸等强酸溶液，尽管脱钙效果好，但能引起组织结构的严重破坏，