肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原结合位点测定

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒（ＨＦＲＳＶ）大鼠单克隆抗体（ＭｃＡｂ）进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白（ＮＰ）上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

应用单克隆抗体研究日本乙型脑炎病毒的抗原结构

应用抗中山-RFVL株单克隆抗体(NARMA)进行血球凝集抑制试验(HI)和中和试验(NT)分析日本乙型脑炎病毒(JEV)11株的抗原关系。除中山-RFVL株单克隆抗体与显示同质性毒株中和试验反应外,14株对JEV有特异性血凝抑制抗体,但这些血凝抑制试验和中和试验抗体的滴度是不平行的,该14株抗体包括下列特性:NARMA3是抗JEV HI和NT反应     

PEA单抗相对亲和力及抗原结合位点的测定

用绿脓杆菌外毒素Ａ（ＥＰＡ）免疫后的ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠脾细胞，经融合后制备出４株抗ＰＥＡ的单克隆抗体。从５０％最大结合的单克隆抗体浓度分析可知，４株单克隆抗体的相对亲和力为４Ｄ１－４Ｄ３〉１Ｄ１－５Ｆ１１〉１Ｄ７－４Ｃ１０〉４Ｈ５－３Ｅ９。通过ＥＬＩＳＡ相加实验证实：４株单克隆抗体均识别相同的ＰＥＡ抗原位点。     

用单克隆抗体分析日本脑炎病毒的抗原结构

采用对日本脑炎(JE)病毒中山-RFVL株有血凝抑制反应的26株单克隆抗体,分析了JE病毒的抗原结构。 这些抗体均能与JE病毒的E糖蛋白(V_3)反应。采用ELISA竞争法分析了其中21株IgG类抗体所识别的抗原决定簇的位置关系。分析结果表明,JE病毒至少有5个不同的抗原决定簇部位。此外,推测JE病毒种特异性部位与黄病毒属特异性部位是各自独立存在的。 上述抗体对中山-RFVL株的ELISA效价、HI效价及中和抗体效价之间没有明显的关系。     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体介导ADCC效应的研究

以日本乙型脑炎病毒(JEV)感染的BHK_2,细胞为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,测定了6株日本乙型脑炎病毒单克隆抗体(JEV-McAb)介导ADCC效应的活性。结果表明,2H_4、2F_2、nG_2、mG_9等种特异性及属特异性McAb无介导~(51)Cr释放的活性,而mC_3及2D_2两株亚组特异性McAb可介导ADCC效应;但mC_3和2D_2介导ADCC效应的活性也不相同。JEV-McAb的ADCC活性与血凝抑制(HI)、中和(NT)等功能之间无明显的关系,它是JEV-McAb的又一免疫学特征。小鼠感染JEV后,其脾细胞的ADCC活性下降,这可能与JEV的致病性有关。在JEV感染中,ADCC效应具有一定的保护功能。     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的产生及其特性鉴定

我国有日本乙型脑炎、森林脑炎及登革热等病流行,其病原体在抗原性上有明显的交叉反应,长期以来用动物免疫血清不易鉴别。单克隆抗体技术问世提供了新的病毒分析方法,但用于日本乙型脑炎病毒抗原分析方面的研究尚少,且无一致结论。因此,不论为提高检验诊断的准确性或评价现行疫苗的效果,都有必要建立各种分泌日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,以深入研究该病毒的抗原特性。     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体介导ADCC效应的研究

以日本乙型脑炎病毒(JEV)感染的BHK_2细胞为靶细胞,小鼠脾细胞为效应细胞,测定了6株日本乙型脑炎病毒单克隆抗体(JEV-McAb)介导ADCC效应的活性。结果表明,2H_4、2F_2、nG_2、mG_9等种特异性及属特异性McAb无介导~(51)Cr释放的活性,而mC_3及2D_2两株亚组特异性McAb可介导ADCC效应;但mC_3和2D_2介导ADCC效应的活性也不相同。JEV-     

日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的产生及其特性鉴定

我国有日本乙型脑炎、森林脑炎及登革热等病流行,其病原体在抗原性上有明显的交叉反应,长期以来用各种动物血清不易鉴别。单克隆抗体技术问世提供了新的病毒分析方法,但目前用单克隆抗体对日本乙型脑炎病毒进行抗原分析及病株间抗原差异方面的研究尚少且无一致结论。如此,不论为提高检验诊断的准确性或评价现行疫苗的效果,都有必要建立各种分泌日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞系,深入研究该病毒的抗原特性。     

日本脑炎病毒单克隆抗体的研究进展

近年来,抗各种不同日本脑炎病毒(JEV)株的McAb不断产生,并已在JEV的研究中广泛应用,取得了前所末有的进展。在分子病毒学中,McAb为进一步弄清JEV的抗原位点,不同位点之间的关系,不同位点与不同生物学功能之间的关系,以及选择保护性位点,制备亚单位疫苗提供了有力的工具。在乙脑检验诊断中,McAb为检出JEV,阐明JEV不同毒林之间的关系提供了条件。在乙脑实验性治疗以及对临床患者探索性治疗中,McAb为乙脑的特异性防治提供了依据,是一种很有希望的制剂。     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

McAb为传染病的病原研究和临床诊断等提供了新的手段和制剂。由于每一株杂交瘤分泌的McAb的特性可能各不相同,而其中McAb对相应抗原的亲和力高低是决定其用途的重要依据之一,因此有必要及早确定。经典的测定抗体亲和力方法一般是以抗原抗体反应的平衡常数K值表示,但K值的求得需对抗原抗体进行纯化、定量,方法烦琐,不能常规使用。本文采用ELISA法测定,虽不十分精确,但操作简便,无需特殊试剂和设备,能快速而明确地比较出各株McAb对病毒抗原亲和力的相对高低。 测定了32株抗肾综合征出血热(HFRS)     

单克隆抗体对HFRS病毒两种粗制抗原相对亲和力的测定

采用ELISA测定32株抗HFRS病毒McAb对该病毒两种粗制抗原的相对亲和力,发现每一株McAb对两种病毒抗原的亲和力相同或基本相同,而各株McAb对同一病毒抗原的亲和力则有所不同,有些差别很大。按50％最大结合浓度分析,可分为3组。1组13株McAb为0.003～0.8μg/ml,Ⅱ组9株McAb为0.1～8μg/ml,Ⅲ组10株McAb为50～300μg/ml。这一结果为选择应用这些McAb提供了依据。     

肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体亲和力及抗原…

应用非竞争ＥＬＩＳＡ和ＥＬＩＳＡ相加试验对８株抗肾综合征出血热病毒大鼠单克隆抗体进行了抗体亲和力和抗原结合位点的测定。结果提示这些ＭｃＡｂ至少可识别ＨＦＲＳＶ核壳蛋白上６种不同抗原决定簇，并且表明ＮＰ上可能存在ＨＦＲＳＶ组、亚组、型或亚型抗原决定簇。ＭｃＡｂ亲和常数测定的高低排序结果为ＫＦ１２＞ＤＥ１１＞Ｘ１０＞ＣＨ１０＞ＩＧ４。     

乙型脑炎病毒prM蛋白单克隆抗体的制备

目的 克隆日本乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)前膜蛋白(prM)编码基因,原核表达、纯化prM蛋白,以纯化产物为免疫原制备单克隆抗体(mAb);方法从感染JEV病毒的鼠脑中克隆编码JEV prM蛋白的基因并将其克隆入原核表达载体pET32a,转化大肠埃希菌BL21(DE3)LvsS后以IPTG诱导表达.表达产物经Ni-NTA纯化后进行SDS-PAGE分析.用纯化的蛋白免疫BALB/c小鼠,经细胞融合和亚克隆后筛选出能分泌识别prM蛋白的mAb的杂交瘤细胞株.用Western Blot和免疫组化方法检测单克隆抗体的特异性.结果 从鼠脑中克隆出约500 bp的JEV prM基因,将其克隆入原核表达载体中,在大肠埃希菌中获得了较好表达.纯化的prM蛋白免疫BALB/c小鼠,经传统细胞融合及筛选方法制备出单克隆抗体,抗体滴度为105.ELISA、Western Blot和免疫组化检测结果证实该株单抗具有较好的特异性.结论 成功的表达和纯化了日本乙型脑炎病毒的prM蛋白,并完成了单克隆抗体的制备,为乙型脑炎病毒感染的早期诊断及预防的研究奠定了良好的基础.     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PcAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合McAb或其F(ab′)_2,仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎的实验研究

本文应用JEV-McAb对感染JEV的小白鼠及幼山羊进行实验性治疗,并对乙脑免疫机理作一初步探讨。结果表明,JEV-McAb对经不同途径感染各种JEV毒株的小白鼠都有较好的保护作用,其效果明显优于PcAb。小鼠感染后120小时,大部分已发病,个别已濒死,这时给予混合McAb仍可保护约半数存活。McAb对感染JEV的幼羊也有较好的保护作用。羊脑内注入JEV48小时后,出现发热不安等症状,这时由腹腔和椎管两种途径同时给予混合McAb,保护率达100％。但单一腹腔或椎管注射无效,可能与血脑屏障的作用有关。存活实验动物脑组织内未分离出病毒;而死亡实验动物病毒分离阳性,脑组织双PAP及HE染色证实JEV抗原阳性并伴有脑炎的病理学改变。中和活性是JEV-McAb的主要保护方式,中和效价高的McAb保护率也高。     

乙型脑炎病毒单克隆抗体制备及其特性鉴定

目的制备乙脑病毒单克隆抗体并对其各项生物学性质进行鉴定。方法通过免疫、融合、克隆和筛选等方法制备乙脑单抗,使用ELISA、IFA、中和试验和Westernblot等方法鉴定单抗的敏感性、特异性、种内反应广谱性以及中和活性。结果最终获得3株稳定分泌的乙脑单克隆抗体细胞株,其滴度均超过106。3株单抗只与乙脑病毒反应,与其他9种虫媒病毒皆不反应。ELISA相加试验证明3株单抗的作用位点非常相近,选择其中的F12.37与10个代表性乙脑病毒株反应,F12.37能够敏感地检测到所有10个在细胞内复制的病毒株。F12.37还能够中和乙脑P3株(基因Ⅲ型)和SH03-103株(基因Ⅰ型),保护50%细胞不产生病变的稀释度分别为1∶3.2×105和1∶105,Westernblot结果显示F12.37与乙脑病毒E蛋白相互作用。结论本研究获得了3个高滴度、高特异性的乙脑单克隆细胞株,其中F12.37具有较高的敏感性和较好的种内反应广谱性,能够中和两个基因型乙脑病毒,其作用位点位于乙脑病毒E蛋白。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎患者的初步研究

将抗日本乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)的单克隆抗体(McAb)2H_4、2F_2、mC_3三种腹水等量混合后,制备成IgG或其F(ah′)_2。用0.3/0.15μm的微孔滤膜过滤除菌。经小白鼠体内急、慢性毒性试验,家兔体内发热试验,无菌试验,与人体重要脏器的交叉试验以及DNA测定等鉴定证实,该制剂安全可靠,适合于人体内注射应用。在小白鼠。幼山羊及恒河猴实验性治疗研究,证实有效的基础上,对临床症状典型,抗JEV-IgM抗体阳性的两个乙脑患儿,进行了探索性治疗:发现疗效良好,观察三月余,无异常反应。     

单克隆抗体治疗日本乙型脑炎患者的初步观察

将抗日本乙型脑炎(乙脑)病毒(JEV)的单克隆抗体(McAb)2H_4、2F_2、mC_3三种腹水等量混合后,制备成IgG或其F(ad’)_2。用0.3/0.15μm的微孔滤膜过滤除菌。经小白鼠体内急、慢性毒性试验,家兔体内发热试验,无菌试验,与人体重要脏器的交叉试验以及DNA测定等鉴定证实,该制剂安全可靠,适合于人体内注射应用。在小白鼠、幼山羊及恒河猴实验性治疗研究,证实有效的基础上,对临床症状典型,抗JEV-IgM抗体阳性的两名乙脑患儿,进行了探索性治疗;发现疗效良好,观察三月余,无异常反应。