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反义核酸对人白血病HL—60细胞中c—myc基因表达的抑制 总被引:2,自引:0,他引:2
研究两个反义核酸(18mer,21mer)对人白血病HL-60细胞中c-myc基因表达的抑制作用。用HL-60活细胞计数,RNA含量的RT-PCR测定和c-myc基因蛋白的免疫组化染色检查,结果:两个反义核苷酸都以抑制HL-60细胞的增殖,增殖抑制率为11-75%。反义核酸还抑制c-mycRNA和Myc蛋白的表达,而对c-myc基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖 相似文献
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刘庭波 《福建医科大学学报》1999,33(4):464-464
c-myc基因是调控细胞增殖与分化的癌基因,在急性白血病细胞株及急性白血病、恶性淋巴瘤患者细胞中出现高表达,是影响这些恶性肿瘤发生、发展的重要基因之一。反义核酸治疗恶性肿瘤在技术上具有高效、简便、不需载体等特点,原理是根据碱基互补,将具有特异序列的反义寡核苷酸导入肿瘤细胞与靶基因上的相应部位结合,抑制和阻断相应基因的转录表达。 目的 应用针对c-myc基因的两个反义核酸15m er和18m er作用于急性白血病细胞株和原代细胞,研究反义核酸对白血病细胞的生长、增殖,c-myc m RNA 表达以及P65 c-myc蛋白表达率的改变,以及对细胞凋亡、分化方面的影响。 方法 采用锥虫蓝染色法测定细胞的拒染率,绘制细胞的生长曲线,用0.8% 甲基纤维素半固体培养法进行克隆形成试验;用流式细胞仪检测在反义核酸作用前后的P65 c-myc 蛋白及凋亡率;用RT-PCR 法检测c-mycm RNA 的表达相对水平;电镜观察凋亡细胞的超微结构;DNA 电泳分析凋亡片段;光镜下瑞特染色、NBT染色观察细胞分化水平,流式细胞仪检测分化抗原表达,同时RT-PCR检测分化细胞的m RNA 表达;MTT 法检测反义核酸与化疗药物对细胞联合作用后对 相似文献
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研究两个反义核酸(18mer,21mer)对人白血病HL—60细胞中c-myc基因表达的抑制作用。用HL-60活细胞计数,RNA含量的RT-PCR测定和c-myc基因蛋白的免疫组化染色检查。结果:两个反义寡核苷酸都能抑制HL-60细胞的增殖,增殖抑制率为11%~75%。反义核酸还抑制c-mycmRNA和Myc蛋白的表达,而对c-mcy基因正常表达的红白血病细胞K562的增殖和PHA刺激的人淋巴细胞的增殖没有影响。结论:反义寡核苷酸能抑制c-myc基因的过度表达。 相似文献
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c—myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响 总被引:4,自引:0,他引:4
目的 研究c-myc反义寡核苷酸对白血病细胞凋亡的影响。方法 用针对c-myc mRNA 5'端非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸与HL60细胞、分离的急性粒细胞白血病病人白细胞共培养10h,用凋亡细胞计数、DNA凝胶电泳、ELISA、流式细胞仪等方法测白血病细胞的调亡。结果 c-myc反义寡核苷酸能够诱导HL60细胞凋亡,且此作用随着作用浓度的提高而增加;此反义核酸只诱导白血病患者的白血病细胞凋亡,对正常白细胞的凋亡无影响。结论 c-myc反义核酸可以通过诱导白血病细胞凋亡来治疗急性粒细胞白血症,且该作用的特异性好。 相似文献
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反义寡核苷酸对HL60细胞c—myc基因表达的抑制和诱导分化作用 总被引:3,自引:0,他引:3
研究c-myc反义寡核苷酸对HL60细胞中c-myc基因的表达及HL60细胞分化的影响。方法 采用针对原癌基因c-myc的mRNA5’非翻译区的一个18bp的反义寡核苷酸5‘d(CTT CTC GAG GCA GGA GGG)3「与人早幼粒白血病细胞系HL60细胞共培养5d,检测c-myc mRNA量的变化及其对HL60细胞分化的影响。 相似文献
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目的 观察脂质体技术促进c-myc反义寡核苷酸导入人体肝癌细胞的作用。方法 采用新一代脂质体Lipofect^AMNE(LR)包裹针对肝癌表达基因c-myc反义寡核苷酸(ASODN),借助FITC荧光标记c-myc-ASODN,应用细胞培养方法及荧光分光光度计以及荧光显微镜。结果 LR促进ASON进入靶细胞并增强其对肿瘤细胞基因的特异性封闭作用。结论 脂质体作为一种安全、简便、有效的基因转移载体广 相似文献
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脂质体介导ANG反义核酸对 A549 细胞作用的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
目的:研究脂质体介导ANG反义核酸转染A549细胞后,对其中ANG蛋白表达的影响。探讨其作为抗血管生成与抗肿瘤药物的可行性。方法:用人工合成的人ANG反义寡聚核苷酸,以脂质体为载体转染人肺癌A549细胞,研究A549细胞在基因转染后,其ANG蛋白表达的变化。结果:脂质体转染程序优化后,得到最佳转染效率,免疫组化显示细胞内ANG蛋白表达明显减少,培养基ELISA检测显示每细胞分泌的ANG蛋白量与对照组相比有显著差异。结论:ANG反义寡聚核苷酸抑制A549细胞中ANG的表达,为体内研究提供了基础。 相似文献
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目的:观察重组腺病毒介导反义c-myc基因(Ad-ASmyc)诱导体外培养不同人肝癌细胞凋亡的差异并探讨其分子生物学机制。方法:Ad-ASmyc感染人肝癌细胞系后,观察细胞生长形态变化,通过细胞生长存活率,流式细胞仪分析、RT-PCR、Western Blot分析Ad-Asmyc对人肝癌细胞系BEL-7402、QSG-7701、SMMC-7721和HCC-9204细胞凋亡诱导、c-myc和bcl-2基因表达的影响。结果:Ad-Asmyc可高效转导4种人肝癌细胞系(BEL-7402、QSG-7-1、SMMC-7721和HCC-9204细胞),镜下可见细胞凋亡的形态学变化并出现“凋亡小体”,细胞存活率分别为对照组的(37.7%、49.3%、51.3%和43.1%),诱导肝癌细胞GI期阻滞和凋亡,4种人肝癌细胞系均为c-myc 、bcl-2RNA及c-myc蛋白水平高表达,但表达水平有差异,Ad-ASmyc作用后,其表达水平均明显下降。结论:重组腺病毒介导的反义c-myc基因能够诱导体外培养人肝癌细胞凋亡,引起人肝癌细胞c-myc、bcl-2RNA及c-myc蛋白表达下调和细胞生长抑制,其诱导凋亡的程度与肝癌细胞内的c-myc表达水平密切有关。 相似文献
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应用PCR方法研究了维甲酸(RA)和二甲基亚砜(DMSO)诱导HL-60细胞分化过程中c-myc基因扩增的变化。结果:HL-60细胞内c-myc基因扩增为11,经RA诱导6d后,其扩增程度无明显变化,而DMSO诱导3d后,c-myc基因扩增出现下降,至5d,较未诱导分化前下降约30%。提示了RA和DMSO对HL-60细胞不同的诱导分化机制。 相似文献
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目的:探索脂质体介导的^99mTc标记c-myc mRNA反义寡核苷酸链的生物学特性。方法:合成15bp的c-myc mRNA的反应,正义和无义寡核苷酸链,用三氯乙酸沉淀测定脂质体包裹的99mTc标的上述寡核苷酸链(简称为99mTc-DNA)和未用脂质体包裹的99mTc-DNA的血浆蛋白结合率。用BALB/c小鼠研究不同脂质体包裹的99Tc-DNA的生物学分布,用家兔研究脂质体介导的99mTc-DNA的药代动力学特性。结果:99mTc-DNA血浆蛋白结合率的范围为34.81%-70.53%,脂质体介导的99mTc-DNA的体内分布以网状内皮系统最高,胃,血和肠道其次,其余组织中放射性分 布较少,其药代动力学曲线符合开放二室模型,t1/2a约为2-5分钟,t1/2β约为100-150分钟,血浆清除率小于2ml/min,结论:99mTc-DNA的曲浆蛋白结合率高,脂质体介导的99mTc-DNA具有合适的生物半衰期,血浆清除块,是一种有开发潜力的放射性药物。 相似文献
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反义c—myc对精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖作用的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
反义c┐myc对精氨酸加压素促血管平滑肌细胞增殖作用的影响卢少平赵连友李宏伟(第四军医大学唐都医院心内科西安710038)关键词反义c-myc精氨酸加压素血管平滑肌细胞中图号R453血管平滑肌细胞(VSMC)的异常增殖和肥大在高血压发病中有重要意义.... 相似文献
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目的 探讨c-myc的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法 帖壁法培养血管平滑肌细胞,将不同浓度的反义正义寡核苷酸加入培养液,观察对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果 5μm/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液后第5、7天抑制血管平滑肌细胞增殖,15μg/ml c-myc的反义寡核苷酸加入培养液后第3、5、7天抵制血管平滑肌细胞增殖。各浓度c-myc的正义寡核苷酸未发现其抑制血 相似文献
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目的 了解癌基因c-myc分子中各个区域的作用,找出最佳的反义封闭靶区,为c-myc表达增高相关疾病的基因治疗提供依据。方法 系统地构建了人类3种反义c-myc重组逆转录病毒表达载体(aM1、aM2和aM3),分别载有c-myc和第1、2和3外显子的反义片段,经脂质体转染大鼠主动脉平滑肌细胞,并于转染后48h采用流式细胞仪对细胞进行瞬时表达检测。结果 与对照组相比,aM2使c-myc表达量减少了3 相似文献
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反义c—myc,增殖细胞核抗原基因片断抑制血管平滑细胞相关基因表达 总被引:6,自引:1,他引:5
目的 研究有效的防治血管术后狭窄的方法,以及应用反义c-myc,增殖细胞核抗原(PCNA)基因片断来封闭其相应基因表达的可行性。方法 设计并合成c-myc,PCNA正义,反义及四个碱基错配的反义寡核苷酸,经体外稳定性检测和细胞转染实验证实其有效性后,分别作用于体外培养的血管平滑肌细胞(VSMCs),应用逆转录PCR半定量测定及计算机图像分析的方法,春对c-myc、PCNA基因表达的影响。结果 设计 相似文献
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郑华 《福建医科大学学报》1998,(2)
目的探讨运用反义核酸技术来封闭或阻断原癌基因c-myb的表达的机制。方法利用急性白血病HL-60细胞株,运用人工合成的硫代正义、反义核酸处理5天后及未经处理的细胞,观测细胞生长情况,细胞超微结构及MYb癌基因蛋白表达的变化情况。结果未经处理的HL-60细胞呈指数生长,经过正义核酸处理的细胞生长未受影响;经反义核酸处理的细胞生长被抑制,被抑制达60%,差别显著(P<0.01)。而未处理及正义组无差别(P>0.05),免疫组化示经反义核酸处理后细胞c-myb蛋白表达受抑制,阳性率从66.7%±2.2%下降至23.7%±1.1%。电镜观察,经过正义核酸及未处理的细胞形态无明显改变,经反义核酸处理后的细胞发生不同程度改变,部分损伤性改变,部分诱导凋亡。结论c-myb癌基因蛋白产物对HL-60细胞增殖至关重要,硫代反义核酸抑制癌基因蛋白表达,具有细胞毒及诱导凋亡作用,达到抑制HL-60细胞增殖目的。 相似文献
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应用细胞培养、核酸斑点杂交、H^3-胸腺嘧啶核苷(^3H-TdR)掺入、免疫细胞化学、图像分析等技术观察c-myc反义寡核苷酸(ODNs)对低氧内皮细胞条件培养液(HECCM)诱导的大鼠肺血管周细胞c-myc mRNA表达、增殖细胞核抗原(PCNA)表达及^3H-TdR掺入量的影响。结果表明,HECCM显著促进周细胞c-myc mRNA表达、PCNA表达(P〈0.01)及^3H-TdR掺入量增加( 相似文献
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研究急性非淋巴细胞白血病细胞中原癌基因c-myc的表达及临床意义。方法采用蛋白质免疫印渍和单克隆抗体免疫细胞化学染色方法检测30例ANLL细胞中原癌基因c-myc的表达。结果19例表达阳性,阳性率为63%。ANLL中白血病细胞的阳性细胞百分率为29%-96%,c-myc在不同病人的白血病细胞中表达水平不一样;c-myc的表达和患者骨髓中白血病细胞百分率显著相关,和患者年龄,性别,外周血白细胞计数。 相似文献
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用两种方法制备生物素c-myc癌基因探针,通过RNA-DNA斑点杂交技术,检测了白血病30例和2种白血病细胞株中c-myc原癌基因的RNA表达水平,结果显示,白血病细胞株,急性白血病和慢性粒细胞性白血病急性变患者的c-myc的RNA表达水平明显高于正常人和患其它血液病的患者,提示c-mycRNA水平的判定可提供一些有意义的临床信息,同时探讨了生物素和光敏生物素标记核酸探针的优越性。 相似文献
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目的:观察阳离子脂质体lipofectAMINE介导的反义c-myb寡核苷酸(LipoAON)对肿瘤生长的影响。方法:取雄性Wistar大鼠48只,行脑内C6胶质瘤接种,术后6天,将携瘤大鼠随机分成LiPoAON组,反义c-myb寡核苷酸组(AON组),阳离子脂质体lipofectAMINE组(Lipo组)和生理盐水对照组(NS组),每组各12只,经大鼠右股静脉给药,间隔1天后,再次用同法经大鼠左股静脉等量给药,给药后严密观察各组大鼠饮食,四肢活动及体重变化情况,并于给药后第4天和第10天每组分别处死6只大鼠,进行肿瘤的生长情况的大体形态学观察。结果:LipoAON组在静脉给药期间及停药后的短期内其肿瘤生长被明显抑制,c-myb表达下调,而AON组,Lipo组与NS组相比,其肿瘤生长未见抑制现象,c-myb表达亦未见下调,但随着停药时间的延长,LipoAON对肿瘤的抑制作用下降,结论:(1)阳离子脂质体LipofectAMINE作为c-myb AON转移载体,使水溶性c-myb AON容易透过BBTB进入瘤内发挥治疗作用,且具有操作简单,安全,转染率高等特点;(2)LipoAON对C6胶质瘤生长有明显抑制作用,用反义技术抑制c-myb的表达在胶质瘤的治疗中具有研究前景,(3)LipoAON对胶质瘤生长的抑制作用随时间延长而下降,如何让c-myb AON在瘤内高效,持久,稳定地表达和发挥治疗作用,是值得进一步探讨的课题。 相似文献