大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE钙内流的检测方法

目的利用大鼠肝癌细胞系H4-ⅡE建立一种适用于贴壁生长的细胞检测细胞内游离钙离子([Ca2+]i)浓度的方法.原理用荧光染料fluo-3在细胞内能与游离Ca2+结合.在一定波长的光激发下,可发出荧光,根据荧光的强度来检测细胞内游离Ca2+浓度及钙内流的方法.方法以H4-ⅡE细胞系为材料,通过Ca2+回加技术、荧光显微镜技术和UMANS计算机软件或Axon计算机成像系统来记录图像和处理数据.结果可检测、定量细胞内游离Ca2+的浓度,并可用以研究细胞钙信号的传递和传导机制.结论该方法较为简便、易行,相对费用较低,适用于国内实验室.     

钙调蛋白参与Reuber肝癌细胞的池操纵钙内流

目的 通过钙调蛋白抑制剂来研究钙调蛋白在Ｒｅｕｂｅｒ肝癌细胞池操纵钙内流的作用及其机制。方法 以Ｒｅｕｂｅｒ肝癌细胞系为材料，用钙离子回加技术，荧光显微镜技术以及加与不加钙调蛋白抑制剂来检测，定量该细胞系的钙释放、钙内流及钙内流速率。结果钙内蛋白参与Ｒｅｕｂｅｒ肝癌细胞池的钙内流。钙调蛋白抑制剂Ｗ１３、Ｗ７、ｃａｌｍｉｄａｚｏｌｉｕｍ无论加在素胡萝卜素之前或之后，均能抑制由Ｔｇｘｈ ｆｈｎ ｒ     

柴胡皂苷-d对大鼠肝癌细胞H4-ⅡE细胞内Ca2+的影响研究

目的探讨柴胡皂苷-d(saikosaponin-D,SS-D)诱导大鼠肝癌细胞H4-ⅡE细胞内钙离子浓度([Ca2+]cyt)变化的影响研究。方法通过噻唑蓝(MTT)比色实验选择合适的药物浓度、荧光指示剂Fluo-3/AM检测[Ca2+]cyt及钙库中Ca2+的变化。结果 MTT比色结果显示,10、30、50、70、100μmol/L SS-D对细胞的存活率都在90%以上。第一大组中阴性对照组可引起细胞内钙离子浓度升高,其平均荧光强度(MFI)为35.76±1.37;阳性对照组可使其大幅度升高,其MFI值为74.74±1.26。不同浓度的SS-D也可使其不同程度升高,并且与SS-D呈浓度依赖性,其平均荧光强度(MFI)分别为59.95±1.02、73.89±1.35、80.30±0.04、93.30±0.83。阳性对照组及处理组的MFI值明显高于阴性对照组(P<0.05);处理组1、处理组3及处理组4 MFI值与阳性对照组比较差异有统计学意义(P<0.05);石胆酸(LCA)及SS-D、熊脱氧胆酸(UDCA)都能诱导细胞钙库中Ca2+释放。结论 SS-D能诱导细胞内Ca2+内流,增加[Ca2+]cyt,调控细胞内Ca2+的生理活动。     

烧伤大鼠血清对肠上皮细胞E—钙粘附蛋白表达的影响

目的：探讨烧伤血清对肠上皮细胞E－钙粘附蛋白（ECD）表达的影响及其意义。方法：培养大鼠肠上皮细胞株IEC－6；采用激光共聚焦及流式细胞术定量分析等技术，动态观察烧伤血清刺激培养的IEC－6细胞ECD的变化。结果：肠上皮细胞经烧伤血清作用后早期ECD表达呈进行性下降，细胞通透性增加。结论：烧伤后肠上皮细胞细胞ECD表达降低，细胞粘附连接损伤。     

GGT—Ⅱ快速法检测AFP阴性肝癌的探讨

目的：鉴于GGT－Ⅱ以检测AFP表达为阴性的原发性肝癌有较高的诊断率，试图将GGT－Ⅱ和AFP联合应用以期提高AFP阴性肝癌的诊断率。方法：GGT－Ⅱ检测采用快速微量定性法；AFP检测采用酶标参比电泳法和双抗体夹心法。结果：GGT－Ⅱ特异性（阴性率）为92．21％，准确性为90．25％；敏感性（阴性率）为88．94％，AFP阳性率为71．07％，结论：单用AFP检测势必造成AFP表达为阴性的原发性肝癌的漏检（并非AFP检测方法的错误），采用GGT－Ⅱ法联合应用，可明显提高这部分病例的检出率。     

血管紧张素Ⅱ对肝癌细胞系 HEPG2发生上皮间质转化的影响

目的：通过血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激肝癌细胞系HEPG2,探讨其是否可以促进HEPG2发生上皮间质转化（ EMT）。方法使用AngⅡ刺激HEPG2,进而采用蛋白印记法对HEPG2中Vimentin 和 E－cadherin 蛋白表达水平进行检测;探讨其发生EMT的合适时间;并使用AngⅡ的抑制剂Ang1－7和Ang1－7的抑制剂A779进行干预,明确AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用。结果 AngⅡ刺激下,HEPG2中E－cadherin 转录水平下降,Vimentin转录水平升高;最适宜刺激时间是48 h。 AngⅡ诱导HEPG2发生EMT的作用可部分被抑制剂Ang1－7抑制。结论 AngⅡ刺激下,HEPG2可以发生EMT。     

尖叶假龙胆不同提取部位对胰岛素抵抗H4ⅡE细胞葡萄糖消耗的影响

目的:研究尖叶假龙胆不同提取部位对胰岛素抵抗H4ⅡE细胞糖消耗的影响。方法:采用CCK-8法评价H4ⅡE细胞活性;高浓度胰岛素(10-6mol/L)诱导培养H4ⅡE细胞36 h,建立新的胰岛素抵抗细胞模型。葡萄糖氧化酶法检测尖叶假龙胆不同提取部位对胰岛素抵抗H4ⅡE细胞糖消耗的影响。结果:尖叶假龙胆不同提取部位浓度大于150μg/m L时,对H4ⅡE细胞活性均有明显的抑制作用。尖叶假龙胆不同提取部位中乙酸乙酯提取部位对胰岛素抵抗H4ⅡE细胞葡萄糖消耗影响显著,大孔树脂95%提取部位与大孔树脂70%提取部位也不同程度地影响胰岛素抵抗H4ⅡE细胞葡萄糖消耗,大孔树脂30%提取部位效果不明显。结论:尖叶假龙胆乙酸乙酯提取部位改善胰岛素抵抗效果最佳,大孔树脂95%提取部位与大孔树脂70%提取部位也可不同程度地改善胰岛素抵抗作用。     

高糖对H9C2心肌细胞系和乳大鼠心室肌细胞钙库操纵性钙内流及相关蛋白的影响

目的 探究高糖环境对大鼠胚胎心肌细胞系（H9C2）和乳大鼠心室肌细胞（neonatal rat ventricular myocytes,NRVMs）钙库操纵性钙内流（store operated calcium entry,SOCE）功能的影响,对基质相互作用分子1（stromal interaction molecule 1,STIM1）蛋白表达及其激活结构的作用,完善SOCE在糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy,DCM）中的潜在致病机制。方法 将H9C2和NRVMs细胞分为2组,对照组（5.5 mmol/L葡萄糖）和高糖组（25 mmol/L葡萄糖）,分别培养48 h后用激光共聚焦显微镜实时观察各组心肌细胞在毒胡萝卜素（thapsigargin,TG）刺激后Ca²⁺荧光强度值的变化;采用Western blotting技术检测各组细胞STIM1和钙释放激活钙通道调节分子1（calcium release-activated calcium channel modulator 1,Orai1）蛋白表达的变化;借助化学交联技术和免疫荧光法检测NRVMs的STIM1蛋白的聚集变化;免疫共沉淀技术观察NRVMs心肌细胞内源性STIM1和Orai1蛋白的直接相互作用。结果 与对照组相比,高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞钙内流（Ca²⁺ influx）显著增加（P<0.05）;高糖组H9C2和NRVMs心肌细胞STIM1以及Orai1蛋白表达上调（P<0.01）;钙库排空后,高糖组NRVMs心肌细胞STIM1蛋白聚集体显著增多（P<0.01）。结论 体外高糖能诱导大鼠胚胎心肌细胞系H9C2及乳大鼠原代培养心室肌细胞NRVMs的STIM1和Orai1蛋白表达上调,促进STIM1蛋白激活形成聚集体和SOCE激活,Ca²⁺内流增多。该作用提示高糖增加的心肌细胞SOCE可能与糖尿病心肌肥大有关。     

急性胰腺炎大鼠细胞钙—镁ATP酶的变化及维生素E的影响

目的：研究急性胰腺炎（AP）大鼠细胞钙－镁ATP酶的变化及维生素E对其的影响，以进一步探讨维生素E在AP治疗中的作用机制。方法：将56只SD大鼠分为正常组、AP组及AP后维生素E治疗组3组，后两组在制备AP动物模型后分别于1、5、10h活体取材胰、肝组织，通过钙－镁ATP酶的酶组织化学染色检测其活性；同时通过逆转录聚合酶链反应（RT－PCR），测定其组织钙-镁ATP酶的表达。结果：实验大鼠胰、肝组织细胞钙－镁ATP酶酶组织化学染色阳性率AP组低于正常组（P＜0．05），且AP组5h的阳性率低于1h；维生素E治疗组的阳性率高于AP组（P＜0．05）且5h的高于1h。RT－PCR结果显示：胰腺组织钙－镁ATP酶的表达AP组最低，且AP组5h的表达低于1h；维生素E治疗组的钙－镁ATP酶表达高于AP组，且5h的表达高于1h；肝组织钙－镁ATP酶的表达各组均为阳性，各组间无显著性差异。结论：AP时细胞钙-镁ATP酶活性降低，可参与AP时细胞钙超载的发生和发展，由引引起细胞正常结构与功能的破坏，加重AP的病理变化。维生素E通过其抗氧化作用在治疗AP的过程中，提高细胞钙－镁ATP酶活性，减轻细胞钙超载，这可能是其作用机制之一。     

广东肝癌细胞系GHC—1的建立及其特性

用静置培养法已在体外建立了一株人肝癌细胞系,定名 GHC—1.该细胞系来自一位62岁男性病人外科手术切除的标本,至今已传50余代,生长稳定.细胞的形态呈多角形上皮样,染色体数目分布范围较大,主流数集中于54—59之间,为亚三倍体.异种动物接种成瘤(3/3),各种免疫学方法测得细胞和旧培液均含有 AFP.     

人原发性肝癌组织中组胺H4受体基因表达和意义

目的 探讨组胺H4受体在人类原发性肝癌组织中基因表达与肝癌的关系.方法 应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测16例人类正常肝脏组织、32例人原发性肝癌旁组织和32例人原发性肝癌组织新鲜标本中HH4R基因mRNA的表达情况.结果 在肝脏组织中存在大量的组胺H4受体的表达,且正常组织＞癌旁组织＞肝癌组织.结论 肝脏中H4受体的基因表达随肿瘤的发展而变化.     

七氟烷吸入麻醉对大鼠认知功能影响的钙内流机制研究

目的:探讨七氟烷吸入麻醉对大鼠认知功能影响及细胞钙内流增强的参与作用.方法:SD大鼠随机分为4组:对照组、1.5％七氟烷吸入2h组(低剂量组)、3.0％七氟烷吸入2h组(高剂量组)及3.0％七氟烷吸入2h+钙通道阻滞剂硝苯地平组(硝苯地平组).Morris型水迷宫测试各组大鼠认知功能,Western Blotting分析各组大鼠左侧海马IL-6/IL-8、TNF-α、细胞凋亡蛋白Bax/Bcl2及Caspase9的表达.结果:七氟烷组大鼠认知功能明显受到影响,IL-6/IL-8、TNF-α、细胞凋亡蛋白Bax及Caspase9表达明显上调,而Bcl2表达明显降低.硝苯地平组异常的认知功能及细胞凋亡蛋白得到明显恢复.结论:IL-6/8及细胞凋亡蛋异常表达及钙内流增强参与了七氟烷引起的大鼠认知功能障碍,硝苯地平可以明显恢复异常的大鼠认知功能障碍.     

IL—1β和TNF—α对培养的气道上皮细胞E钙粘着蛋白表达的影响

应用酶消化法体外培养猪气道上皮细胞（ＡＥＣ）,加入一定浓度梯度的白细胞介素－１β（ＩＬ－１β）和肿瘤坏死因子β（ＴＮＦ－α）,应用免疫细胞化学染色和原位杂交方法观测ＡＥＣ中Ｅ钙粘着蛋白（ＥＣＤ）表达的变化,结果发现,正常ＡＥＣ中ＥＣＤ表达相邻上皮细胞间的胞膜上,其ｍＲＮＡ也有一定含量。一定浓度样度的ＩＬ－１β和ＴＮＦ－作用２４ｈ后,胞膜上ＥＣＤ表达产,而胞浆内ＥＣＤ表达的在低浓度时升高,高浓度时     

抗转移基因nm23—H1在多发性肝癌中的表达

目的：了解nm23－H1基因的表达与多发肝癌临床病理和预后的关系。方法：30例多发性肝癌选自日本山梨医科大学第一外科的手术病例。组织切片按常规免疫组织化学ABC法染色。结果：13例为阳性染色，17例为阴性染色。两染色组之间，肿瘤大小、包膜形成及浸润、侵及浆膜、肝内血管和胆管以及分化程度等方面没有显著性差异。两组相比有显著性差异的是阴性组的肝癌占据肝两叶者常见（70．6％），肝内转移癌居多（76．5％），3年生存率较低（18．7％）。结论：nn23-H1的表达可预测多发肝癌的恶性程度及预后。     

叶下珠复方Ⅱ号对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用

目的观察叶下珠复方Ⅱ号对小鼠H22肝癌移植瘤生长的抑制作用,并探讨其可能的作用机制。方法取昆明小鼠40只,建立小鼠H22肝癌移植瘤模型,分为模型组、叶下珠复方Ⅱ号高剂量组（37.5g/kg）、低剂量组（18.75g/kg）和环磷酰胺（20mg/kg）治疗组。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组均灌胃给药,环磷酰胺组采用腹腔注射,每日1次,连续8d。末次给药24h后,测定瘤体质量,计算抑瘤率;检测血清IL-2和TNF-а含量。结果叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组瘤重明显低于模型组,差异均有显著性意义（P〈0.01）,但与环磷酰胺组比较,差异均无显著性意义（P〉0.05）。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组的抑瘤率分别为67%和58%,与环磷酰胺组接近。叶下珠复方Ⅱ号高剂量组血清IL-2水平明显高于模型组（P〈0.05）。叶下珠复方Ⅱ号高、低剂量组血清TNF-а水平明显低于模型组,差异有显著性意义（P〈0.05）。结论叶下珠复方Ⅱ号有较好的抑制小鼠H22肝癌移植瘤生长作用,作用机制与调节免疫,升高IL-2水平和抑制TNF-а水平有关。