rhIL-1α/rhTGF-β1诱导下大鼠髁突软骨细胞PRG4的表达

目的:观察rhTGF-β1对rhIL-1α作用下大鼠髁突软骨细胞蛋白多糖4(PRG4)表达的影响.方法:酶消化法获取髁突软骨细胞,甲苯胺蓝染色鉴定.细胞上清液中加入10 ng/ml的rhIL-1α,48 h后加入10 ng/ml的rhTGF-β1.不同时间点应用RT-PCR检测PRG4 mRNA的表达情况,ELISA法检测PRG4蛋白的分泌变化.结果:加入rhIL-1α 24、48、72 h组的PRG4表达量与对照组均有统计学差异(P<0.05),且逐渐降低.48 h组再加入rh TGF-β1 24h后PRG4表达量与对照组无统计学差异(P>0.05),而48 h后与各组均有统计学差异(P<0.05),且最高.结论:rhTGF-β1可以上调髁突软骨细胞PRG4的表达,且可逆转IL-1α的下调作用.     

雌二醇浓度对大鼠髁突软骨细胞中雌激素受体mRNA表达的影响

目的：探讨雌二醇(estradiol,E2)对体外培养的髁突软骨细胞雌激素受体(estrogen recerptor,ER)基因表达的影响。方法：体外培养大鼠髁突软骨细胞,分别加入浓度为10-12、10-9、10-6、10-3 mmol/L的17β E2 24 h,实时定量PCR法检测所培养的髁突软骨细胞 ERα、ERβmRNA的表达。采用SPSS10.0软件包对结果进行统计学分析。结果：ERα和ERβ在体外培养的髁突软骨细胞中均有表达,17β E2能够上调ERα的基因表达,同时下调ERβ表达。在10-9 mmol/L的17β E2作用下,上调ERα基因表达最为明显。结论：E2浓度的改变可上调ERα的表达并下调ERβ的表达,在生理范围的雌激素浓度下,E2上调ERα基因表达的作用最为明显。     

IGF-1对体外培养髁突软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的：：研究IGF-1对IL-1β诱导的颞下颌关节软骨细胞增殖与凋亡的影响。方法：组织块培养法分离培养人髁突软骨细胞,通过细胞形态观察和免疫细胞化学染色进行鉴定。将培养的细胞分为：对照组、IL-1β组(10μg/L)、 IL-1β+IGF-1组(0、1、10、50、100μg/L), MTT法检测各组细胞增殖能力变化,流式细胞仪检测细胞周期分布以及细胞凋亡情况,Western blot检测各组细胞中凋亡相关因子Bcl-2、Bax和Caspase-3以及p38 MAPK/NF-κB蛋白表达变化。结果：人髁突软骨细胞生长状态良好,甲苯胺蓝染色胞质呈深蓝色,II型胶原呈阳性表达。与对照组比较,IL-1β组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值明显降低,早凋与晚凋细胞百分数、Caspase-3、p38 MAPK/NF-κB蛋白表达均明显增加;与IL-1β组比较,1~100μg/L IGF-1预处理组细胞增殖能力、Bcl-2/Bax比值逐渐上升(P<0.05),细胞凋亡率、Caspase-3、p38 MAPK /NF-κB蛋白表达则逐渐下调(P<0.05),均呈现一定的浓度依赖性。结论：IGF-1可抑制IL-1β诱导的髁突软骨细胞凋亡并减轻p38 MAPK/NF-κB的活化。     

雌激素浓度对大鼠髁突软骨细胞中雌激素受体表达的影响

目的:探索有利于原代髁突软骨细胞生长、促进Ⅱ型胶原蛋白(collagen type Ⅱ,Col Ⅱ)表达的有效雌激素浓度.方法:提取4周龄雌性SD大鼠髁突软骨细胞,进行髁突软骨细胞鉴定,并测定细胞生长曲线.应用不同浓度雌激素对软骨细胞进行处理后,CCK-8试剂盒对软骨细胞增殖进行测定,实时定量PCR(RT-PCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot,WB)技术测定软骨细胞雌激素受体(ertrogen receptor,ER)α、β和Col ⅡmRNA和蛋白的表达量.结果:与对照组相比,10-9mol/L的雌激素对软骨细胞增殖和ERα表达的促进作用优于其他组(P＜0.05);10-7mol/L的雌激素对Col Ⅱ的促表达作用优于其他组(P＜0.05);而雌激素浓度的变化会对ERβ的表达产生抑制作用,10-10mol/L较其他组为显著(P＜0.05).结论:雌激素在一定浓度下可促进髁突软骨细胞增殖及ERα和Col Ⅱ表达,抑制ERβ的表达.     

PTH对大鼠髁突发育影响的实验研究

目的：观察不同条件下、不同浓度的PTH对发育期大鼠髁突软骨细胞增殖功能和髁突发育的影响。方法：消化法培养大鼠髁突软骨细胞,PTH不同作用方式下MTT法检测细胞增殖能力。24只SD大鼠,分别在其发育期于左侧髁突关节腔内注射不同浓度（1μg/kg、5μg/kg、10μg/kg）PTH,待发育期结束后,处死,取双侧髁突,通过大体、组织学观察髁突生长情况。结果：低浓度间断PTH培养组的髁突软骨细胞增殖功能明显大于持续作用组和对照组,以含PTH0.001μg/mL培养液间断作用组的细胞增殖功能最强,而含PTH0.01μg/mL培养液持续作用组的细胞增殖最弱。注射PTH侧髁突体积均略大于未注射侧、对照组和空白组。苏木精-伊红染色见各组髁突表面基本完整、光滑,层次清晰。结论：小剂量间断的PTH作用对髁突软骨细胞的增殖有促进作用,局部注射PTH对髁突发育是否有促进或抑制作用有待进一步研究。     

TNF-α刺激髁突软骨细胞产生白细胞介素-34的研究

目的通过观察TNF-α对髁突软骨细胞分泌白细胞介素-34(IL-34)及表达IL-34 mRNA基因的影响,探讨IL-34在颞下颌关节紊乱病中的致病机制。方法取第三代髁突软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度(0、1、10、20、50 ng/m L)的TNF-α培养24 h以及同一浓度(10 ng/m L)TNF-α分别培养1、3、6、10、24 h后,收集培养上清液及细胞,分别用ELISA和RT-PCR方法测定IL-34浓度以及IL-34 mRNA的表达情况。结果 1实验组和对照组髁突软骨细胞上清液中均能检测到IL-34。2TNF-α刺激髁突软骨细胞IL-34mRNA基因表达,并呈正相关关系。结论 TNF-α能刺激髁突软骨细胞产生IL-34。     

静压力对髁突软骨转化生长因子β1表达影响的体外研究

目的:观察静压力对体外培养髁突软骨细胞表达TGF-β1的影响。方法:解剖、培养SD大鼠髁突软骨,应用静压力加载装置对实验组软骨加载强度为10kPa的持续静压力1h。对照组除软骨不加力外,其它培养条件与实验组相同,加力完成后2组同时收集样本。用免疫组化技术检测2-实验组和对照组髁突软骨TGF-β1的含量和分布,用彩色病理图像分析仪检测髁突软骨各层TGF-β1表达的强度。结果:实验组的髁突软骨各层细胞TGF-β1表达均增强,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。其中成软骨细胞层改变最明显(P<0.01)。结论:静压力促进髁突软骨各层细胞TGF-β1表达增强,其中成软骨细胞层表达增强最为明显。     

rhIL—1β及TGF—β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的：探讨rhIL-1β及TGF－β对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL-1β及TGF－β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果：MTT检测，rhIL-1β（10，20ng/ml）处理软骨细胞48h后，可明显抑制软骨细胞增殖，经统计学检验，处理3－6d有显著性差异（P＜0．01,t检验）；加入TGF－β（10，20ng/ml)可明显拮抗rhIL-1β对软骨细胞增殖的抑制作用，并且浓度愈高对rhIL-1β的抑制作用愈强。PCNA检测，rhIL-1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低，随rhIL-1β的刺激浓度增加，阳性率明显降低；加入外源性TGF－β可以使PCNA的阳性率提高。结论：rhIL-1β对髁状突软骨细胞增殖具有报制作用，外源性TGF－β对该作用具有明显的拮抗效应。     

rhIL-1β及TGF-β对髁状突软骨细胞增殖影响的研究

目的 :探讨rhIL 1β及TGF β对髁状突软骨细胞增殖的影响。 方法 :以酶消化法获得兔髁状突软骨细胞。用MTT法及PCNA免疫组化染色检测不同浓度rhIL 1β及TGF β对体外培养的兔髁状突软骨细胞增殖的影响。结果 :MTT检测 ,rhIL 1β( 10、2 0ng/ml)处理软骨细胞 4 8h后 ,可明显抑制软骨细胞增殖 ,经统计学检验 ,处理 3～ 6d有显著性差异 (P <0 .0 1,t检验 ) ;加入TGF β( 10、2 0ng/ml)可明显拮抗rhIL 1β对软骨细胞增殖的抑制作用 ,并且浓度愈高对rhIL 1β的抑制作用愈强。PCNA检测 ,rhIL 1β处理软骨细胞后PCNA阳性细胞率降低 ,随rhIL 1β的刺激浓度增加 ,阳性率明显降低 ;加入外源性TGF β可以使PCNA的阳性率提高。 结论 :rhIL 1β对髁状突软骨细胞增殖具有抑制作用 ,外源性TGF β对该作用具有明显的拮抗效应     

IGF-1信号通路相关蛋白在大鼠髁突软骨细胞增殖分化中的表达

目的:研究胰岛素样生长因子-1(IGF-1)信号转导通路在大鼠髁突软骨细胞增殖分化调控过程中相关基因的表达。方法:体外单层培养并鉴定出生后1、7、14、28 d共4组SD大鼠髁突软骨细胞。免疫组织化学方法检测细胞内IGF-1表达情况,Real-time PCR及Western印迹法检测细胞内IGF-1R、Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达。饥饿培养24 h后,实验组加入质量浓度为100 ng/mL的重组大鼠IGF-1细胞因子(rrIGF-1)继续培养24、48 h,CCK-8检测细胞增殖情况,Real-time PCR技术检测各组髁突软骨细胞内IGF-1R、IGF-2R、Raf1、GSK-3、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、Bax、integrin、TGF-βmRNA表达情况;对照组培养液不加rrIGF-1。结果:各鼠龄组SD大鼠髁突软骨细胞内IGF-1表达均阳性,IGF-1R mRNA及蛋白表达相对平稳,Bcl-2、Bax mRNA及蛋白表达逐渐增强,在出生14 d后表达下降(P<0.05)。加入100 ng/mL rrIGF-1后,髁突软骨细胞增殖速度显著增加,细胞凋亡减少,Real-time PCR结果显示实验组IGF-1R、GSK-3、Bax、integrin mRNA表达整体呈下降趋势;IGF-2R、Raf1、IGFBP3、NF-κB、Bcl-2、TGF-βmRNA表达水平总体呈上调趋势,差异有统计学意义。结论 :IGF-1介导的信号转导途径参与了髁突软骨细胞的增殖、分化以及软骨形成早期的调控,并可能与integrin、TGF-β等其他蛋白相互作用,共同参与髁突发育过程。     

体外rhIL—1β诱导髁状突软骨细胞HSP70的表达及其意义

目的 明确热休克蛋白70（HSP70）在人重组白细胞介素－1（rhIL-1β）刺激下对下颌骨髁状突软骨细胞的保护作用。方法 通过原代细胞培养获得兔髁状突软骨细胞,在生长良好的第三代软骨细胞中分别加入不同浓度的rhIL-1β,并利用原位杂交及免疫组织化学技术检测rhIL-1β处理软骨细胞后HSP70的表达变化。结果 正常髁状突软骨细胞胞浆内有HSP70蛋白弱表达,rhIL-1β（10ng/ml）作用12h后HSP70出现表达升高,部分细胞核内也可见表达,48h后信号开始减弱。HSP70mRNA的表达与蛋白表达基本一致。结论 一定浓度的rhIL-1β刺激髁状突软骨细胞可诱导HSP70的转录及蛋白合成,提示HSP70可能在骨关节炎症损伤中对软骨细胞起到保护作用。     

静张应力与TGF-β_1对大鼠髁突软骨细胞增殖效应调节初步研究

目的：探讨转化生长因子-β(TGF-β1)在静张应力环境下对髁突软骨细胞增殖效应的影响。方法：（1）将传代培养至第4代大鼠下颌髁突软骨细胞在12孔培养板上培养，采用流式细胞仪测定加入不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）0.6、12、18、24h后，对髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。（2）将第4代大鼠下颌髁突软骨细胞增殖活性（PI值）的影响。结果：不同浓度TGF-β1（0.1、1、10ng/ml）在模拟生理环境下以剂量依赖型的方式整体促进了髁突软骨细胞增殖效应，对髁突软骨细胞的增殖活性调节作用主要在12、18h段，增殖峰值在18h左右；在5kPa静张应力联合TGF-β1刺激下培养较TGF-β1的单独效应具有更强的促髁突软骨细胞增殖作用。结论：静张应力联合TGF-β1可以调节髁突软骨细胞的增殖活性。     

IL-1诱导髁状突软骨细胞凋亡的实验研究

观察IL - 1对髁状突软骨 (Mandibularcondylarcartilage ,MCC)细胞增殖及凋亡的影响。 方法下颌骨髁状突软骨取自 6只新生的日本大耳白兔 ,经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶联合消化获得MCC细胞。取第2代软骨细胞 ,培养过程中培养液中加入不同浓度 (0 .1μg/L、10 0 μg/L)的IL - 1,采用相差显微镜、流式细胞术及透射电镜对髁状突软骨细胞生物学行为变化进行研究。结果　IL - 1在 1μg/L～ 10 0 μg/L范围内 ,呈剂量效应关系抑制髁状突软骨细胞增殖 ,流式细胞术结果表明MCC细胞多数阻断于G0 /G1期 ,S期细胞比例显著低于对照组(P <0 .0 5 )。同时 10 μg/L及 10 0 μg/LIL - 1可显著诱导细胞凋亡 (凋亡率分别为5 9.47%及 6 3 .73 % ) ,细胞收缩 ,形态变圆。电镜下观 ,胞浆浓缩 ,染色质边集 ,粗面内质网扩张。结论　IL - 1抑制MCC的细胞增殖 ,诱导细胞凋亡的发生 ,可能是其在骨关节病发病中重要作用途径之一。     

周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞Stress70/GRP75的早期影响

目的:探讨体外周期性单轴压应力对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的早期动态变化影响。方法:利用四点弯曲细胞力学加载仪,对第3代大鼠髁突软骨细胞进行体外周期性单轴压应力加载,力值为4000μstrain,时间分别为0、15、30、60、120、240min;采用Western免疫印迹技术和图像分析技术,研究大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的动态变化,对结果进行单因素方差分析。结果:4000μstrain周期性单轴压应力作用下,大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75的表达发生变化,0min条带灰度值为114.2±5.08;30min时降至最低,为86.1±5.09(P<0.001);60min后有所回升,至104.0±4.41(P<0.01),但仍表达下调;120min后表达开始增强,灰度值为134.5±3.74(P<0.001)。结论:4000μstrain压应力刺激,对大鼠髁突软骨细胞糖调控蛋白Stress70/GRP75存在时间效应性,初期表达下调;随着应力加载时间延长,其表达反馈增强。     

白细胞介素1对髁突软骨细胞NO合成及诱导型NO合酶表达的影响

目的：观察IL－1对髁突软骨细胞一氧化氮（nitric oxide,NO)合成及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS)表达的影响。方法：新生的日本大耳白兔,经机械分离及胰蛋白酶、胶原酶联合消化获得MCC细胞。取第2代软骨细胞,培养过程于培养液中加入不同浓度（0．1－100．0μg/L）的IL－1,采用Griess重氮化反应及原位杂交方法检测一氧化氮合成及一氧化氮合酶的表达。结果：IL－1在0．1－100．0μg/L浓度范围内,呈剂量－效应关系促进髁突软骨细胞合成NO,与对照组比较差异有显著性（P＜0．05）。原位杂交显示,正常软骨细胞仅有轻度iNOS表达,但在IL－1作用后各组细胞均出现不同程度地表达增强。结论：IL－1通过上调iNOS的表达,促进了NO的生成从而达到抑制髁突软骨细胞增殖,诱导细胞凋亡的发生。     

转化生长因子β对白细胞介素1β诱导髁突软骨细胞凋亡的调控作用

关节软骨进行性破坏是骨关节炎 (ｏｓｔｅｏａｒｔｈｏｒｉｔｉｓ,ＯＡ)的主要病理改变之一。近来发现ＯＡ关节软骨有异常的软骨细胞凋亡 ,这可能与ＯＡ关节软骨的破坏有关。我们就ＴＧＦ β在人重组白细胞介素 1β(ｒｈＩＬ 1β)诱导髁突软骨细胞凋亡中的作用进行了研究。1 材料和方法 :( 1)ｒｈＩＬ 1β诱导软骨细胞凋亡 :将髁突软骨细胞接种于培养瓶中 ,密度为 3× 10 4/ｍｌ,培养至对数生长期 ,实验组分别加入含有ｒｈＩＬ 1β( 1、10、2 0ｎｇ/ｍｌ)及二甲基亚砜 (ＤＭＳＯ ,15μｌ/ｍｌ)的ＤＭＥＭ培养液 ,处理 8、16、2 4ｈ后收集细…     

功能矫形前伸下颌后大鼠髁突软骨细胞睾酮的分布变化规律

目的　研究快速生长期大鼠髁突软骨细胞睾酮的表达,并探讨功能矫形对髁突软骨细胞睾酮表达的影响。方法　实验组戴自制模拟的功能矫治器引导大鼠下颌前伸,在实验第3天、1、2、3及4周处死大鼠,应用免疫组织化学SP法检测睾酮在髁突软骨细胞上的表达特点。结果　①实验组、对照组大鼠髁突软骨细胞各层都有睾酮的阳性免疫染色,大鼠各层细胞中以成熟层及移行层阳性强度较高,明显高于生发层及过渡层,其中成熟层染色强度最高;②随着大鼠的青春期生长发育,髁突软骨细胞各层睾酮染色强度出现不同的变化特点;③实验第2及第 3周组大鼠髁突成熟层软骨细胞睾酮染色强度明显高于对照各组,差异具有统计学意义(P<0·05)。结论　睾酮参与了大鼠髁突软骨细胞成熟的调控,并介导了功能矫形的机械刺激作用,使髁突软骨细胞的增生分化功能增强,髁突软骨增生。     

血管内皮生长因子及其受体在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达和意义

目的：研究VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达，探讨其对大鼠下颌骨髁突软骨生长发育的影响。方法：用免疫组化方法，对VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)在大鼠下颌骨髁突软骨细胞中的表达进行检测。结果：大鼠下颌骨髁突软骨的增殖层、肥大层、矿化和钙化层均有表达，而纤维层没有表达。结论：大鼠下颌骨髁突软骨的增殖层、肥大层及矿化和钙化层软骨细胞可产生并分泌VEGF及其受体(Fh—1和Flk—1)，VEGF可能在大鼠下颌骨髁突软骨生长发育中发挥作用。     

功能矫形前伸大鼠下颌后髁突软骨β转化生长因子-1(TGF-β_1)表达变化的研究

目的：检测快速生长期大鼠髁突软骨在功能矫形前伸下颌后β转化生长因子－１（ＴＧＦ－β１）分布的变化，探讨髁突软骨生长代谢的生长因子控制机理。方法：实验组戴模拟临床功能矫治器，引导大鼠下颌前伸，并在实验后不同时期处死大鼠，取下髁突，应用免疫组织化学方法探测ＴＧＦ－β１在髁突中的含量及分布。结果：髁突各层软骨细胞均有ＴＧＦ－β１的分布，以成熟层阳性强度最高；功能矫形前伸下颌后，髁突软骨细胞各层ＴＧＦ－β１的表达均增强。结论：ＴＧＦ－β１介导了功能矫形的机械刺激作用，使软骨细胞增生，分化功能增强，髁突软骨增生     

偏侧咀嚼对生长发育期大鼠髁突软骨细胞热休克蛋白70表达的影响

目的:初步探讨偏侧咀嚼致颞下颌关节病的致病机理。方法:间断磨除大鼠单侧上下颌磨牙至龈缘,建立生长发育期大鼠偏侧咀嚼模型,采用免疫组织化学方法检测正常对照组及实验组大鼠髁突软骨热休克蛋白70(HSP70)的表达。结果:正常组大鼠髁突软骨各带(表面带、增殖带、肥大带、钙化软骨带)均存在HSP70基础表达;实验组大鼠咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达增强,而非咀嚼侧髁突软骨细胞HSP70表达无明显改变。结论:偏侧咀嚼可使生长发育期大鼠髁突软骨细胞HSP70表达增强,其致病机理仍有待进一步研究。