不饱和聚磷酸酯对MC3T3－E1成骨细胞的毒性研究

目的：评价不饱和聚磷酸酯（UPPE）聚合物对小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1成骨细胞的毒性影响。方法：将β－磷酸三钙（β－TCP）、UPPE聚合物分别与小鼠胚胎颅顶骨MC3T3－E1细胞共同培养,细胞培养液作为阴性对照组, AlamarBlue法评价其对MC3T3－E1细胞的体外细胞毒性,对实验结果进行单因素方差分析及Turkey＇s HSD多重比较。结果：各组的MC3T3－E1细胞活性均随培养时间的延长而增长,β－TCP组、UPPE聚合物组的细胞毒性与阴性对照组相比无统计学差异（P＞0．05）。结论：UPPE聚合物对MC3T3－E1细胞的生长无不利影响,具有较好的骨细胞生物相容性。     

高度浓缩生长因子对MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响

目的：观察高度浓缩生长因子（concentrated growth factor,CGF）对成骨细胞生物学性能的影响。方法：将MC3T3-E1细胞在CGF环境下进行培养,并设立空白对照组。扫描电镜观察成骨细胞在CGF表面的附着;培养1、4、7 d后,检测细胞增殖情况以及碱性磷酸酶（ALP）活性;茜素红染色观察矿化结节和成骨相关基因Runx2的表达。CGF浸出液培养细胞24 h后,以鬼笔环肽染色观察细胞骨架的形态变化。采用 SPSS 21.0软件包对数据进行统计学分析。结果：CCK-8比色显示,培养1、4、7 d,在相同时间点,实验组与对照组相比,CGF细胞增殖活性显著增强（P< 0.05）。ALP活性检测显示,培养1 d后,实验组与对照组无显著差异（P>0.05）;培养4、7 d后,实验组与对照组相比,ALP活性具有显著差异（P<0.05)。茜素红染色显示,CGF组钙化结节数量增多且面积较大。鬼笔环肽染色和DAPI染色可见,CGF组中细胞数量增多,细胞铺展面增大,肌动蛋白形态更为清晰。CGF可促进Runx2 mRNA表达（P<0.05）。结论：CGF可促进MC3T3-E1细胞的增殖、分化以及Runx2的表达。     

MC3T3-E1细胞流体剪切力敏感信号通路的基因芯片研究

目的 探讨适宜流体剪切力力值及作用时间下成骨细胞差异表达基因及相关信号通路。方法 通过平行板流室加力装置对盖玻片培养的MC3T3-E1细胞施加流体剪切力,提取总RNA,进行包括44 170个基因的全功能组表达谱基因芯片检测,对差异表达基因进行Pathway和GO分析,并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RTPCR）RTPCR）对芯片结果进行验证。结果 芯片结果显示,差异基因共有884个,其中表达增强基因444个,表达降低基因440个。Pathway分析涉及的信号通路,主要包括Notch信号通路、RIG-Ⅰ样受体信号通路等。GO分析主要涉及前列腺素的生物合成、一氧化氮介导的信号传导、钙介导的信号及细胞免疫反应等不同的功能分类。结论 流体剪切力对MC3T3-E1细胞的保护作用可能与激活促进细胞生存及抑制细胞凋亡相关信号通路及生物学过程相关。     

��ͬ������������-ͭ�Ͻ��MC3T3-E1ϸ���ֻ���Ӱ���о�

??Objective??To explore the effect of different concentration of titanium-copper alloy on the differentiation of MC3T3-E1 cells and to find the best mass fraction of copper promoting cell differentiation. Methods??Different concentrations of titanium-copper alloy were divided into groups. Mark cp Ti with Group1??as control group??mark Ti-2 wt% Cu with Group 2??Ti-5wt% Cu with Group 3??and Ti-10 wt% Cu with Group 4??as experiment groups. The MC3T3-E1 cells were inoculated into a 24-well culture plates with prepared samples for co-culture at a density of 2×104 per well. The expression of ALP activity of osteoblasts was detected by micro-enzyme-labeled method at 3 d??5 d??10 d and 15 d. The expression of type I collagen and osteocalcin in the supernatant of the co-cultured osteoblasts were detected by ELISA at 7 d??14 d and 21 d. All data were analyzed by means of  one-way ANOVA with SPSS 20.0 software package. Results??Ti-2wt% Cu was the most favorable for the expression of alkaline phosphatase activity ??P??0.05??and reached the maximum at the 10th day after co-culture. Ti-5wt% Cu was the most favorable for the expression of type I collagen protein??P??0.05??and reached the maximum at the 7th day after co-culture. Ti-5wt% Cu was the most favorable for the expression of osteocalcin??P??0.05?? and reached the maximum at the 14th day. Conclusion??Compared with cp Ti??low concentration of Ti-Cu ??2wt%??5wt% ?? alloy promotes the differentiation of MC3T3-E1 cells??being time-dependent??and high concentration of Ti-Cu ??10wt%?? alloy inhibits the differentiation of MC3T3-E1cells. Relatively speaking??Ti- 5wt%Cu alloy promotes the differentiation of MC3T3-E1 cells best.     

补肾活血固齿方对MC3T3-E1细胞PDGF表达的影响

目的 研究补肾活血固齿方对小鼠颅顶前成骨细胞(MC3T3-E1细胞)血小板生长因子(platelet derived growth factor,PDGF)表达的影响,探讨该方剂诱导成骨的作用机制.方法 MC3T3-E1细胞分别用10％补肾活血固齿方含药血清、无药血清、胎牛血清,培养24h、48h、72h,ELISA法...     

脂多糖刺激的单核巨噬细胞培养上清液对小鼠MC3T3-E1细胞c-fos表达的影响

目的：研究经牙龈卟啉单胞菌（Porphyromonas gingivalis,P.g）脂多糖（LPS）刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清对小鼠成骨细胞（MC3T3-E1细胞）c-fos表达的影响。方法：收集100μg/L的Pg LPS刺激RAW264.724h后的上清液,以20%稀释浓度分别作用于MC3T3-E1,分别在1、3、6、12、24、48、72h时,采用RT-PCR和Western blot检测ALP mRNA、c-fos mRNA及蛋白表达水平的变化。结果：Pg LPS刺激RAW264.7细胞培养上清作用于MC3T3-E1后,ALP mRNA表达均下降,在6h时表达最低,而c-fos的mRNA和蛋白水平均提高,分别在3h和6h时达最高水平。结论：Pg LPS刺激的小鼠单核巨噬细胞RAW264.7培养上清可通过上调成骨细胞c-fos的表达而抑制其成骨能力。     

MicroRNA-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响

目的:探讨miR-103-3p对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1成骨分化早期的影响。方法:以小鼠前成骨细胞MC3T3-E1为实验对象,对MC3T3-E1细胞进行成骨诱导,分别在0、3、5、7 d应用实时荧光定量PCR（real-time PCR）检测细胞中Runx2、Osx、ALP、miR-103-3p表达水平,Western免疫印迹（Western blotting）检测Runx2、Osx蛋白表达并进行碱性磷酸酶（ALP）染色。通过脂质体lipofectamine2000瞬时转染miR-103-3p模拟物 （miR-103-3p mimics）及模拟物阴性对照进入MC3T3-E1细胞内,Real-time PCR检测2组细胞miR-103-3p的表达水平,CCK-8试剂盒检测细胞增殖。分别对2组细胞进行成骨诱导,在成骨诱导后0、3、7 d,分别使用Real-time PCR和Western免疫印迹检测2组细胞Runx2、Osx等成骨相关基因mRNA和蛋白的表达变化,并对2组细胞进行ALP染色。实验数据采用SPSS19.0软件包进行统计学分析。结果:MC3T3-E1经成骨诱导0、3、5、7 d后,细胞内Runx2、Osx、ALP转录水平持续显著升高;Runx2、Osx蛋白表达升高。ALP染色逐渐加深。在成骨诱导3、5、7 d的MC3T3-E1细胞中,miR-103-3p水平较诱导前受到持续显著抑制(P<0.05)。瞬时转染miR-103-3p mimics后,MC3T3-E1细胞中的miR-103-3p表达水平较对照组显著上调(P<0.05),细胞增殖受到抑制,Runx2、ALP转录水平显著抑制（P<0.05）,Runx2蛋白表达显著抑制。对转染后的细胞进行成骨诱导3、7 d后,miR-103-3p转染组细胞Runx2、Osx、ALP在转录水平的表达较对照组显著降低,Runx2、Osx在蛋白水平的表达较对照组显著降低,且miR-103-3p转染组细胞ALP活性较对照组显著降低。结论:miR-103-3p可能对小鼠前成骨细胞MC3T3-E1的成骨分化早期起抑制作用。     

桂皮醛对高糖环境下MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响

目的:观察桂皮醛对高糖作用下MC3T3-E1成骨细胞增殖与分化的影响。方法:用 0(对照组)、10、20、40 mg/L的桂皮醛分别在葡萄糖(25 mmol/L)的环境下培养MC3T3-E1细胞,培养 1、4、7 d后检测细胞增殖、碱性磷酸酶活性,茜素红染色观察钙化结节,鬼笔环肽染色观察细胞结构框架以及成骨相关基因骨钙蛋白(osteocalcin,OCN) mRNA表达水平。结果:桂皮醛可促进高糖环境下成骨细胞增殖及ALP活性(P<0.05);矿化结节数量增多且体积增大;实验组OCN mRNA表达水平明显上调(P<0.05);细胞骨架染色结果示:当桂皮醛浓度为10、20 mg/L时细胞铺展面积增大且细胞骨架更加清晰。结论:桂皮醛可促进高糖作用下MC3T3-E1成骨细胞的增殖与分化     

葛根素对富血小板纤维蛋白环境下MC3T3-E1成骨细胞生物学性能的影响

使用葛根素干预在PRF环境培养的MC3T3-E1并检测细胞增殖、ALP活性及Runx2 mRNA的表达,激光共聚焦观察细胞形态.实验结果表明,葛根素在PRF环境下可促进MC3T3-E1增殖、伸展及Runx2 mRNA的表达.     

猪釉基质蛋白对MC3T3-E1成骨细胞增殖分化的影响

目的：探索釉基质蛋白（ＥＭＰｓ）促进成骨细胞增殖分化的作用,为进一步研究提供基本数据。方法：选择ＭＣ３Ｔ３－ＥＩ成骨细胞株,利用体外细胞培养方法,分别加入不同浓度的ＥＭＰｓ α－ＭＥＭ培养液,于培养０、１、２、３、４、５、６ｄ进行细胞计数,采用ＳＡＳ软件对细胞计数数据作单因素方差分析。结果：ＥＭＰｓ各组细胞计数均高于阴性对照（Ｃ）组（Ｐ〈０．０１）。第２天,１００μｇ／ｍｌ ＥＭＰｓ组的细胞计数高     

不同根充糊剂根尖封闭性的比较研究

目的　比较不同根充糊剂根管充填后的根尖封闭性。方法　 79颗离体单根牙随机分为阳性对照 (2颗 )、阴性对照 (2颗 )及 5个实验组 (各 15颗 ) ,分别用不同的根充糊剂加牙胶尖以冷侧压法充填根管 ,通过染料渗入法检查根尖微渗漏。结果　所有根充糊剂充填后根尖部位均有微渗漏 ,Vitapex组的微渗漏值低于其他各组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ,而其余各组结果差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　各种根充糊剂充填后都不能完全封闭根尖孔 ,Vitapex的根尖封闭性优于其他各组。     

Dlx2在MC3T3-E1细胞成骨分化过程中的作用

目的:探讨Dlx2(distal-less homeobox 2)基因过表达对体外培养的小鼠前成骨细胞系MC3T3-E1 向成骨方向分化的影响.方法:构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序验证.体外病毒转染MC3T3-E1后,以嘌呤霉素行抗性筛选稳定细胞株,以RT-PCR和Western印迹检测转染后细胞中Dlx2的表达.应用实时定量PCR(RT-PCR)检测Dlx2过表达对部分成骨相关基因(ALP、OCN、Runx2、Msx2)表达的影响.以碱性磷酸酶(ALP)活性测定和茜素红染色法检测Dlx2过表达对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响.采用SAS 6.04软件包对数据进行随机设计的方差分析.结果:本实验成功构建Dlx2过表达的反转录病毒载体,测序正确.体外转染后筛选出Dlx2稳定高表达细胞株MC3T3-E1-Dlx2,其mRNA和蛋白表达量显著高于对照组.在成骨诱导过程中,MC3T3-E1-Dlx2细胞ALP值在第4、7、14d均高于对照组细胞,茜素红染色显示实验组较对照组和空白组染色深.Dlx2过表达在成骨诱导早期能显著促进ALP和Msx2的表达(P<0.05),晚期则上调OCN表达(P<0.05),而Runx2表达无明显变化(P>0.05).结论:Dlx2过表达上调AIP、OCN等成骨相关基因的表达.促进MC3T3-E1细胞的成骨分化.     

RGD多肽修饰的无机小牛骨粉对MC3T3-E1细胞黏附、增殖及分化的影响

目的:研究小鼠前成骨细胞MC3T3-E1在RGD修饰的无机小牛骨粉上的黏附、增殖及分化。方法:浸泡法制备RGD/Bio-Oss复合材料。MTT法检测细胞1 h、2 h、3 h黏附,扫描电镜观察细胞黏附形态,DNA浓度定量分析细胞1 d、3 d、5 d、7 d的增殖。碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测细胞7 d、14 d的分化。结果:1 h、2 h、3 h细胞黏附结果Bio-Oss/RGD组明显高于Bio-Oss组及空白对照组;1 d、3 d、5 d、7 d Bio-Oss/RGD组和Bio-Oss组的DNA浓度差别无统计学意义,但都低于空白对照组;细胞分化第14天时Bio-Oss/RGD组的结果明显高于Bio-Oss组与空白对照组。结论:RGD对细胞黏附及分化有一定的促进作用,但对细胞增殖无显著促进作用。